Спосіб проведення аналізу на приховану присутність крові

Спосіб про ведення аналіз у на при хо ван у присутність крові шля хом обробки досліджувано го предме та чи матеріа лу ре акти вом, що місти ть гі дразид 3-аміно фтале во ї кисло ти в розчині гі дроксиду на трію та пероксид водн ю, з наступ ним спостереженням за зміною забарвлення реакти ву, який від різняє ться тим, що реак ти в до датко во місти ть 0,0 2 -0,1 мас.% пір о фосфа ту н атрію і/а бо 0,005 - 0,1 мас.% комплексон у III і/а бо 0,0005 -0,05 ма с.% оксиети лендіаміно трио цтово ї кисло ти, а спостереження за зміною забарвлення реакти ву з дійсн юють че рез 10-15 сек ун д після обробки пре дмета чи матер іалу реак ти вом. Ю (13) 39110 (11) UA тат аналі зу на прихо ва ну присутність крові (Заявка peг. № 93010078 на видачу патенту України від 21.12.92 p.). Недоліком даного способу є його мала вибірковість. Так, при аналізі на приховану присутність крові предметів чи матеріалів, забруднених значною кількістю солей важких металів (Си /II/, Fe /III/, Mn /II/, Ni /II/, Cr /III/ та ін.), іржі чи хлорвмісних речовин, наприклад, хло раміном Б, гіпохлоритами чи трихлорізоціануровою кислотою і її солями, можливе одержання неправдиво-позитивних результатів. В основу ви находу поставлено задачу створення способу аналізу на прихова ну присутність крові шляхом обробки предмету чи матеріалу реактивом, що містить гідразид 3-амінофта левої кислоти в розчині їдкого натрію та пероксид водню, з наступним спостереженням зміни забарвлення реактиву, в якому шляхом уведення до складу реактиву 0,02-0,1% (мас.) пірофосфата натрію і/або 0,005-0,02% (мас.) комплексону III і/а бо 0,005-0,02% (мас.) оксіетилендіамінотриоцтової кислоти забезпечуєть ся висока вибірковість аналізу і, як наслідок, - одержання нового технічного результату - відсутність неправдиво-позитивних результатів аналізу у ви падку дійсної відсутності крові. Поставлена задача вирішуєть ся таким чином. Спосіб аналізу на прихова ну присутність крові шляхом обробки предмету чи матеріалу реактивом, що містить гідразид 3-амінофта левої кислоти в розчині гідроксиду натрію і пероксид водню, з наступ ним спосте реженням зміни забарвлення (19) Винахід стосується сфери медицини і може бути ви користаний для проведення аналізу на прихова ну присутність крові поверхні предметів чи матеріалів. Відомий спосіб здійснення аналізу на прихова ну присутність крові, підготовлених до стерилізації виробів медичного призначення шляхом проведення хімічної реакції на пероксидазу гемоглобіну (Контроль качества предстерилизационной очистки изделий медицинского назначения с помощью реактива азопирам. Методические указания. Л., 1988. - С.7). Досліджуваний виріб обробляють сумішшю реактиву азопірам складу: 10% (мас.) амідопірину, 0,1-0,15% (мас.) солянокислого аніліну, решта - 95%-ний етанол із 3%-ним розчином пероксиду водню, взятий в рівних співвідношеннях за об'ємом. Появу фіо летового забарвлення, що переходить протягом декількох секунд в рожево-бузкове, - розцінюють як позитивний результат аналізу на прихова ну присутність крові. Проте даний спосіб недостатньо чутливий та маловибірковий, а засто сування в якості реактиву амідопірину - ре човини, що утворює в да ній реакції канцерогенні нітрозоаміни, - створює шкідливі умови праці та небезпеку для здоров'я людей. Найбільш близьким за технічною сутністю та до сягаємим результа том є спо сіб проведен ня аналізу на прихо ва ну при сутність крові шля хом обробки предмета чи матеріа лу реакти вом, який місти ть 0,00708% (мас.) гідразиду 3-амінофталево ї кислоти в 0,18%-но му розчи ні гідрокси ду натрію 0,06% (мас.) пероксиду водню. Появу фіо лето во-голубо го забарвлення реакти ву роз цінюють як позитивний резуль C2 ______________________________ 39110 реактиву, останній додатково містить 0,02-0,1% (мас.) пірофосфа та натрію і/або 0,005-0,02% (мас.) комплексону III, і/або 0,005-0,02% (мас.) оксіетилетилендіамінотриоцтової кислоти. Крім того, у випадку виконання аналізу на прихова ну присутність крові предметів чи матеріалів, сильно забруднених хлорвмісними дезінфектантами, спостереження за зміною забарвлення реактиву зачинають здійснювати лише через 10-15 секунд після обробки досліджуваних предметів чи матеріалів. Суттєвою відмінністю запропонованого способу, у порівнянні до відомого - прототи пу, є зміна складу реактива, котрий використовується безпосередньо для обробки досліджуваного предмету чи матеріалу при аналізі на прихо вану присутність крові, а та кож, у ва ріанті, при забрудненні об'єктів дослідження хлорвмісними речовинами, здійснюють диференційоване спостереження за зміною забарвлення реактиву після проведення обробки. Реактив, згідно винаходу, відрізняється від відомого тим, що додатково містить 0,02-0,1% (мас.) пірофосфата натрію і/або 0,005-0,02% (мас.) комплексону III, і/а бо 0,005-0,02% (мас.) оксіетилендіамінотриоцтової кислоти. Ці добавки являють собою гостовані хімічні реактиви, що серійно виробляються вітчизняною промисловістю. Для підвищення вибірковості способу використаний сильний інгібіторний ефект пірофосфата натрію і/або комплексонів - комплексону III і/а бо оксіетилетилендіамінотриоцтової кислоти щодо каталітичної дії перехідних металів в хемілюмінесцентній реакції гідразиду 3-амінофталевої кислоти з пероксидом водню на відміну від практично індиферентного відношення названих добавок до аналогічної реакції зі слідами крові чи ге моглобіну. Крім того, шляхом диференційованого спостереження зміни забарвлення реактиву після обробки ним досліджуваного об'єкту, - а са ме, - через 10-15 секунд після обробки - додатково забезпечується виключення неправдиво-позитивних результатів у випадку проведення аналізу предмету чи матеріалу, забруднених значною кількістю хлорвмісних речовин. Ця вибіркова інгі бітор на дія пірофо сфа та натрію і/або комплексонів - комплексону III і/а бо оксіе тиле тилендіа мінотриоцтово ї кислоти на хемілюмінесценцію в реакції гідразиду 3-а мінофталевої кислоти з пе роксидом водню в присутності слідів кро ві і солей важких металів що до останніх, на ми знайдена експериментально вперше , є неочевидною для спеціаліста і явним чином не ви тікає із рівня те хніки, що свідчить про ви нахідницький рівень да ного те хнічного рі шення. Серед чисельного загалу апробованих комплексонів лише названі вище окремо чи разом забезпечували вибірковість способу аналізу на приховану присутність крові предметів чи матеріалів в умовах їх значного забруднення. Даний якісний та кількісний склад реактиву, заявляємого способу аналізу на приховану присутність крові є оптимальним і забезпечує одержання технічного результату - вибірковість аналізу і, як наслідок, відсутність неправдиво-позитивних результатів, що значно перевищує такий, одержаний в прототипі (див. приклади). Проведені автором дослідження дозволяють стверджувати, що запропоноване технічне рішення є новим, оскільки воно невідоме із рівня техніки. Перевагою, що вигідно відрізняє запропонований спосіб від відомого прототипу, є відсутність неправдивих ре зульта тів при аналізі сильно забруднених поверхонь предметів чи матеріалів солями перехідних металів та хлорвмісними речовинами, наприклад, дезинфектантами. Додаткове уведення до складу реактиву запропонованого способу добавок - пірофосфа та натрію і/або комплексонів забезпечує збереження придатності го тового розчину реактиву протягом 10 днів (термін спосте реження), що перевищує у 3 рази термін придатності готового до засто сування розчину реактиву способу-прототипу. Збільшення вмісту пірофосфата натрію і/або комплексонів - комплексону III, оксіетилетилендіамінотриоцтової кислоти у реактиві на прихова ну присутність крові приводить до зниження чутливості аналізу і, як наслідок, - до одержання неправдиво-негативних результатів, а зменшення його нижче як 0,02% (мас.) і 0,005% (мас.) для пірофосфа ту і комплексонів відповідно - призводить до втрати е фективності способу - можливості одержання неправдиво-позитивних результатів. Готовий розчин реактиву заявляємого способу го тують розчиненням 0,00708 г натрієвої солі гідразиду 3-амінофталевої кислоти в 0,18% (мас.) розчині гідроксиду натрію, який містить 0,02-0,1% (мас.) пірофосфата натрію і/або 0,005-0,02% (мас.) комплексону III і/а бо 0,005-0,02% (мас.) оксіетилетилендіамінотриоцтової кислоти. Цей розчин придатний для застосування не менше 3 років (термін спостереження). Безпосередньо перед проведенням аналізу розчиняють пероксид водню, наприклад, у вигляді гідропериту, до вмісту його в готовому розчині 0,06% (мас.). Термін придатності готового розчину разом з пероксидом водню не менший 10 діб. Вміст композиції гідразиду 3-амінофталевої кислоти, гідроксиду натрію і пероксиду водню є оптимальним, при якому спостерігається найвища чутливість аналізу, що знайдено експериментально. Результа ти дослідження увійшли в приклади, котрі пояснюють суть ви находу. У всіх ви падках вміст компонентів реактиву виражено в масових процентах. Приклад 1. Готовий розчин реактиву, який містить 0,00708% (мас.) натрієвої солі гідразиду 3амінофталевої кислоти, 0,18% (мас.) їдкого натрію, 0,06% (мас.) пероксиду водню і 0,1% (мас.) пірофосфата натрію і 0,02% (мас.) комплексону ІІІ і 0,02% (мас.) оксіетилетилендіамінотриоцтової кислоти, наносять на шматок батисту, який забруднений іржею. Відсутність зміни забарвлення реактиву після обробки батисту свідчить про негативний результат аналізу на прихова ну присутність крові. Приклад 2. Аналогічно до прикладу 1, з тією різницею, що реактивом обробляли шматок батисту, який був забруднений іржею із слідами крові (10 мкг). Зміна забарвлення реактиву після обробки свідчить про позитивний результат аналізу на прихова ну присутність крові. Приклад 3. Го товий роз чин реактиву, який містить 0,00708% (мас.) натрієвої со лі гідразиду 3-амінофталево ї кислоти, 0 ,18% (мас.) їдкого натрію, 0,06% (мас.) пе роксиду во дню і 0,02% пі 2 39110 рофосфа та натрію, 0,005% комплексону III і 0,005% оксіе тиле тилендіа мінтриоцтово ї кислоти, на носять на шматок батисту, забр уднений іржею. Відсутність зміни забарвлення реактиву після обробки ним шматка батисту свідчить про негативний результат проведення аналізу на прихова ну присутність крові. При обробці реакти вом способу-прототипу шматка батисту, забрудненого іржею, спостерігається зміна забарвлення - виникає слабко фіолетово-блакитне забарвлення і свідчить про неправдиво-позитивний результат аналізу на прихова ну присутність крові. Приклад 4. Готовий розчин реактиву складу: 0,00708% (мас.) натрієвої солі гідразиду 3-амінофталевої кислоти, 0,18% (мас.) їдкого натрію, 0,06% (мас.) пероксиду водню і 0,1% (мас.) пірофосфата натрію і 0,02% (мас.) оксіетилетилендіамінотриоцторої кислоти наносять на шпатель двосторонній гістологічний, забруднений 5%-ним розчином хлораміну Б та іржею. Відсутність зміни забарвлення реактиву, яке спостерігалося протягом 15 сек після обробки шпателя реакти вом свідчить про негативний результат проведення аналізу на приховану присутність крові. При обробці шматка батисту, забрудненого 5%-ним розчином хлораміну Б та іржею реактивом способа-прототи пу виникає сильне фіолетово-блакитне забарвлення, що свідчить про неправдивопозитивний результат проведення аналізу на прихова ну присутність крові. Приклад 5. Готовий розчин реактиву складу: 0,00708% (мас.) натрієвої солі гідразиду 3-амінофталевої кислоти, 0,18% (мас.) їдкого натрію, 0,06% (мас.) пероксиду водню і 0,1% (мас.) пірофосфата натрію наносять на шматок батисту, забруднений іржею, солями водопровідної води та хло раміном Б (темно-коричневі плями). Спостерігається слабке фіолетово-блакитне забарвлення реактиву, що свідчить про неправдиво-позитивний результат проведення аналізу на прихо вану присутність крові при дійсній її відсутності на шматку ба тиста. Результа ти аналізу на прихова ну присутність крові за заявляємим способом і способом-прототипом Предмет чи матеріал, забруднення Склад реактиву за заявляємим способом Результати аналізу Склад реактиву за Результати аналізу відомим способомпрототипом Нержавна сталь, батист, 1 см 2, 10 мг іржі А+ А+ А+ А+ 0,02% ЕДТО + 0,02% ОЕДТО 0,02% ПФ + 0,005% ОЕДТО 0,1% ПФ + 0,02% ОЕДТО 0,02% ОЕДТО А А А А + + + + Скло, батист, 1см 2, 10-20 мг солей водопровідної води,сухий залишок А+ А+ А+ А+ А+ 0,02% ЕДТО + 0,02% ОЕДТО 0,1% ПФ + 0,02% ОЕДТО + 0,02% ЕДТО 0,005% ЕДТО + 0,005% ОЕДТО 0,02% ПФ + 0,02% ЕДТО + 0,02% ОЕДТО 0,02% ПФ + 0,005% ЕДТО А А А А А + + + + + Кафель, батист, 1 см 2, 10 мг хлораміну Б* А + 0,02% ПФ А+0,1% ПФ А + 0,005% ЕДТО А + 0,005% ОЕДТО А + 0,02% ЕДТО А + 0,1% ПФ + 0,02% ЕДТО А+0,1% ЕДТО А А А А А А А + + + + + + + А А + + Кафель, скло, А + 0,1% ПФ + 0,005% ЕДТО + 0,005% батист, 1 см 2, ОЕДТО А + 0,02% ПФ + 0,02% ЕДТО 10 мг хлорамін Б + 10 мг іржі* А - 0,00708% (мас.) натрієвої со лі гідразиду 3-амінофталевої кислоти, гідроксиду натрію - 0,18% (мас.), 0,06% (мас.) пероксиду водню; ЕДТО - комплексон III (ди натрієва сіль етилендіамінотетраоцтової кислоти); ОЕДТО - оксіетилетилендіамінотриоцтова кислота; ПФ - пірофосфат натрію; * - спостереження за зміною забарвлення зачинають через 10-15 с після обробки реактивом предмету чи матеріалу; "+" - позитивний результат; "-" - негативний результат. Порівняльний аналіз результатів на прихова ну присутність крові за заявляємим та ві домим способами (приведених в прикладах та таблиці) свідчить про однозначність одержання заяв 3 39110 ляємим способом правдивих результатів аналізу при забрудненні предметів чи матеріалів значною кількістю со лей важких металів, іржі чи хлорвмісних речовин. Таким чином, результа том передбачува ного винаходу є новий спосіб аналізу на приховану присутність крові - високовибірковий та з високим терміном зберігання готового розчину, що перевищує термін зберігання аналогічного розчину способапрототипу у 3 ра зи. Засто суван ня ново го спо собу про веден ня аналі зу на при хова ну при сутність кро ві в медичній практи ці за безпечи ть на дій ну пр о філакти ку за раження та по ширен ня вн утрілікарняних інфек цій, зокрема вик ли каних ві р уса ми ге патиту В та ВІЛ . Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 – 72 – 89 (03122) 2 – 57 – 03 4