Спосіб застосування оксирезвератролу як протипухлинного засобу

Спосіб застосування оксирезвератролу як протипухлинного засобу на основі поліфенольних сполук рослинного походження класу стильбенів, який відрізняється тим, що водний розчин оксирезвератролу застосовують метрономно перорально в нецитотоксичних дозах. Заявка належить до галузі медицини, а саме фармакології та онкології, і може бути використана для виробництва протипухлинних та антиметастатичних лікарських засобів. Низька специфічність фармакологічної дії протипухлинних препаратів та висока їх токсичність відносно нормальних органів та тканин організму гостро ставить питання щодо розробки нових ефективних протипухлинних засобів, спрямованих, в першу чергу, на пригнічення метастазування як основної причини загибелі онкологічних хворих. Рослини є традиційним джерелом фармакологічно активних агентів, в тому числі і таких, які проявляють протипухлинну активність [1]. Серед засобів рослинного походження велику увагу в останній час привертають стильбени, які належать до поліфенольних сполук [2,3]. Вважається, що стильбени виявляють антиоксидантну, протизапальну, кардіотропну та протипухлинну активність [47]. До одних з найбільш відомих у фармакології стильбенів належать резвератрол та оксирезвера трол (OXY) [8]. На відміну від резвератролу, протипухлинна активність якого широко досліджувалась, вивчення фармакологічної активності OXY було незначним, а спектр досліджень обмежувався патологіями, не пов'язаними з онкологічним процесом [9,10]. Між тим, в порівнянні з резвератролом, OXY характеризується високою розчинністю у воді, суттєво вищою біодоступністю та меншою цитотоксичністю щодо нормальних тканин. Найбільш близьким аналогом є поліфенольна сполука рослинного походження з класу стильбенів резвератрол, який здатен суттєво пригнічувати ріст та метастазування злоякісних новоутворень в порівнянні з багатьма іншими стильбенами, протипухлинна активність яких досліджувалась [A. Bishayee. Cancer Prevention and Treatment with Resveratrol: From Rodent Studies to Clinical Trials // Cancer Prevention Research. - 2009. - V.2. - P.409 418]. Позитивним у найближчого аналога є те, що при низькій токсичності щодо нормальних органів (19) UA (11) 94504 (13) (21) a200909558 (22) 18.09.2009 (24) 10.05.2011 (46) 10.05.2011, Бюл.№ 9, 2011 р. (72) СОЛЯНИК ГАЛИНА ІВАНІВНА, СЛАСТЯ ЄВГЕН АНАТОЛІЙОВИЧ, ФЕДОРЧУК ОЛЕКСАНДР ГРИГОРОВИЧ, ПЯСКОВСЬКА ОЛЬГА МИКОЛАЇВНА, ДАСЮКЕВИЧ ОЛЬГА ЙОСИПІВНА, ГОРБИК ГРИГОРІЙ ВАСИЛЬОВИЧ, КОЛЕСНИК ДЕНИС ЛЕОНІДОВИЧ (73) ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ ПАТОЛОГІЇ, ОНКОЛОГІЇ ТА РАДІОБІОЛОГІЇ ІМ. Р.Є. КАВЕЦЬКОГО НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ (56) DE 10230961 A1, 12.02.2004 US 6 414 038 B2, 02.07.2002 US 5 747 536 A, 05.05.1998 Горбик Г.В., Федорчук О.Г, Соляник Г.І. ДОСЛІДЖЕННЯ ВПЛИВУ ОКСИРЕЗВЕРАТРОЛУ НА C2 1 3 та тканин він здатен пригнічувати ріст та метастазування деяких злоякісних пухлин. Недоліком аналогу є нерозчинність у воді та неконтрольовано низька біодоступність, що створює труднощі в дозуванні резвератролу, обумовлює значну варіабельність його протипухлинної дії і, практично, унеможливлює впровадження в клінічну онкологічну практику. В основу винаходу поставлено задачу створити спосіб застосування оксирезвератролу як протипухлинного засобу шляхом метрономного перорального введення його водного розчину в не цитотоксичних по відношенню до нормальних тканин дозах, що дасть можливість інгібувати ріст та метастазування злоякісних новоутворень. Поставлена задача вирішується наступним чином. OXY отримують шляхом екстракції подрібненої деревини маклюри (Madura pomifera) та білої шовковиці (Morus alba), вміст OXY в яких складає 2 % від сухої ваги. Як екстрагент використовують ацетонітрил, який дає найкращі результати. Подрібнену сировину мацерують в екстрагенті при 50 °С протягом 24 годин та відділяють екстрагент. Упарений в вакуумі екстракт наносять на силікагель для колонкової хроматографії та проводять розділення в градієнтній системі, яка складається з полярного розчинника (діетиловий ефір, етилацетат, тетрагідрофуран, етанол, ацетонітрил) та неполярного (гексан, бензол, толуол). Найкращі результати дає використання системи ацетонітрилбензол (1:1). Така система розчинників відрізняється від описаних раніше та забезпечує більш високу ефективність розділення та дозволяє отримувати безводний кристалічний OXY за рахунок видалення слідів води за допомогою азеотропної відгонки з бензолом при концентруванні. Контроль чистоти отриманого OXY проводять методом високоефективної рідинної хроматографії на колонці Nucleosil C18 2*250 мм із зернінням сорбенту 5 мкм у градієнтному режимі елюювання в системі вода-ацетонітрил. Пік OXY ідентифікують за характерним спектром в ультрафіолетовому діапазоні. Структура виділеного OXY підтверджується ЯМР-С13 та МАСС-спектрометрією. Ефективність протипухлинної та антиметастатичної дії OXY досліджувалась: - на мишах-самцях лінії С57/В16 з перещепленими внутрішньом'язово пухлинними клітинами двох варіантів карциноми легень Льюїса (вихідним варіантом LLC та ангіогенез-незалежним LLC/R9); - на білих безпородних мишах з перещепленою асцитною формою карциноми Ерліха; - на щурах лінії Wistar з перещепленою інтрацеребрально гліомою. Миші - віком 2- 2,5 міс., вагою 18-23 г. Щури віком 1-1,5 міс., вагою 95-105 г. Терапія мишей та щурів з експериментальних груп включає щоденне пероральне введення (метрономне введення) OXY в сумарній дозі 0,2 мг/грам ваги тіла тварин в 0,4 мл та 3 мл дистильованої води (для мишей та щурів, відповідно). Контрольні тварини отримують по відповідній схемі дистильовану воду. Кількість введень - 15. 94504 4 Кожну третю добу росту пухлин LLC та LLC/R9 у кожної миші вимірювали об'єм пухлини. На 5-6 добу після закінчення терапії тварин з LLC та LLC/R9 декапітували під легким ефірним наркозом, видаляли легені та підраховували кількість метастазів (з урахуванням їх розміру). Для мишей з асцитною формою карциноми Ерліха та для щурів з гліомою щоденно фіксували виживаність тварин. Протипухлинну дію OXY оцінювали за відсотком гальмування росту первинної пухлини та по збільшенню середньої тривалості життя тварин. Антиметастатичну дію OXY оцінювали за відсотком гальмування метастазування (як за кількістю метастазів, так і за об'ємом метастатичного ураження). Антиметастатична активність OXY проявляється в значному зменшенні як кількості метастазів, так і об'єму метастатичного ураження легень. Так, у мишей з LLC кількість метастазів зменшується у середньому на 42 %, а об'єм метастатичного ураження легень - на 70 % (р