Спосіб одержання біологічно активної добавки

Реферат: UA 73804 U UA 73804 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології, зокрема до технології одержання біологічно активної добавки (БАД) з клітинних стінок хлібопекарських дріжджів роду Saccharomyces cerevisiae, який призначений для підвищення імунного стану здоров'я людини. Відомий спосіб одержання біологічно активної добавки з клітинних стінок дріжджів [див. Басс-Шадхан Х.Ф. Зимозан: методы получения. Биохимическая характеристика и перспективы применения. Рига: "Зинатне" 1970; С. 32-44.], який передбачає оброблення 1 кг пресованих 3 хлібопекарських дріжджів 4 дм розчину 0,5 М Na2HPO4 та кип'ятіння протягом трьох годин, охолоджування суспензії до 37 °C. Потім рН середовища суміші доводять до 7,7-8,0 та проводять ферментативний гідроліз протягом шістнадцяти діб з додаванням на першу, третю, шосту та десяту добу 0,5 г трипсину або панкреатину (у перерахунок на активність трипсину), а 3 також 5 см толуолу на першу, третю, сьому, одинадцяту та п'ятнадцяту добу. Після гідролізу 3 суміш центрифугують, отриманий осад суспендують в 4 дм води при кімнатній температурі протягом 1 години, отриману суміш центрифугують та проводять процес сушіння. Отриманий препарат являє собою нерозчинний у воді дрібний порошок світло-сірого кольору. Вихід препарату складає 1-2 % від маси свіжих дріжджів. Даний спосіб вибрано за прототип. Прототип і спосіб, що заявляється, мають наступні спільні ознаки: - обробка пресованих хлібопекарських дріжджів хімічним реагентом; - відокремлення цільового продукту; - сушіння цільового продукту. Але отриманий таким чином препарат має низький вихід цільового продукту та великі затрати на проведення ферментативного гідролізу. В основу корисної моделі поставлена задача розробити ефективний спосіб одержання біологічно активної добавки з клітинних стінок хлібопекарських дріжджів роду Saccharomyces cerevisiae, в якому шляхом попередньої руйнації клітинної оболонки дріжджів та розроблення оптимальних умов видалення білка забезпечити отримання препарату з високим ступенем чистоти економічно вигідним способом. Поставлену задачу вирішують в способі одержання біологічно активної добавки, що передбачає оброблення пресованих хлібопекарських дріжджів хімічним реагентом, відокремлення цільового продукту і наступне його сушіння. Згідно з корисною моделлю хлібопекарські дріжджі обробляють 3 %-им розчином Н2О2 при гідромодулі 1:(2-3) протягом 1-24 годин, після чого осад відокремлюють і промивають водою, а відокремлення проводять в два етапи, причому на першому етапі видаляють білок шляхом оброблення осаду 3-6 %-им розчином NaOH при гідромодулі 1:(2-5) при 45-65 °C протягом 0,5-3,0 годин, а на другому етапі видаляють глікоген шляхом оброблення осаду 0,5 н розчином оцтової кислоти при гідромодулі 1:(1-3) і нагріванні реакційної суміші до температури не більш 75 °C, осад відокремлюють від супернатанту, промивають гарячою водою, знову відокремлюють від супернатанту і висушують спочатку етиловим спиртом, а після - ефіром. Режими руйнування клітинної оболонки дріжджів, видалення білка та глікогену підібрано експериментально. Отриманий препарат являє собою біополімерний комплекс полісахаридної природи, виділений з клітинних стінок дріжджів роду Saccharomyces cerevisiae. Хімічний склад комплексу представлено у таблиці 1. У результаті проведення хроматографічного аналізу продуктів кислотного гідролізу комплексу було встановлено наявність в ній глюкози і манози в співвідношенні 7:3 відповідно. Це відповідає вкладу -глюкановій та манановій складовій в інтегральний полісахаридний комплекс. Таким чином, препарат, одержаний таким способом, дає можливість отримати полісахаридний комплекс не тільки з високим виходом цільового продукту, але і з високим ступенем очищення, що є не менш значущим для отримання БАД, в основі якої лежить глюкан, який призначений для підвищення імунного стану здоров'я людини [Беседнова Н.Н., Иванушко Л.А., Звягинцева Т.Н. и др. (2000) Иммунотропные свойства 1,3/1,6--D-глюканов. Антибиотики и химиотерапия, 2:37-44.]. Співвідношення полісахаридів коливаються в залежності від режимів культивування хлібопекарських дріжджів. Спосіб одержання біологічно активної добавки здійснюють у наступному порядку. Пресовані хлібопекарських дріжджів роду Saccharomyces cerevisiae обробляють перекисом водню масовою долею 3 % протягом 1-24 годин при гідромодулі 1:(2-3) з періодичним перемішуванням, після чого суміш центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин при кімнатній температурі для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин при кімнатній температурі для відділення 1 UA 73804 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 осаду від супернатанту. Осад обробляють розчином натрію гідроксидом з масовою долею 3-6 % протягом 0,5-3 годин при гідромодулі 1:(2-5) з періодичним перемішуванням при температурі 4565 °C для максимального видалення білка, після чого суміш центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин при кімнатній температурі для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин при кімнатній температурі для відділення осаду від супернатанту. Осад обробляють 0,5 н розчином оцтової кислоти при гідромодулі 1:(1-3) нагрівають до 75 °C для видалення глікогену, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин при кімнатній температурі для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою, нагрітою до 75 °C, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин при кімнатній температурі для відділення осаду від супернатанту. Осад висушують спочатку етиловим спиртом, а після - ефіром. Отриманий препарат уявляє собою дрібний порошок світлого кольору. Вихід препарату складає 2,7-4,6 % від маси свіжих дріжджів. Приклад № 1 При одержанні заявленої БАД 100 г свіжих пресованих хлібопекарських дріжджів роду 3 Saccharomyces cerevisiae обробляють 300 см розчином перекису водню масовою долею 3 % протягом 3 годин з періодичним перемішуванням, після чого суміш центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. 3 Отриманий осад заливають 200 см розчином гідроксиду натрію масовою долею 3 % протягом 1 години з періодичним перемішуванням при температурі 65 °C, потім суспензію центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Одержаний осад змішують з 0,5 н розчином оцтової кислоти при гідромодулі 1:1 та нагрівають до температури 75 °C для видалення глікогену, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою, нагрітою до 75 °C, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Осад висушують поступово етанолом, а потім ефіром та розтирають у ступці. Отриманий препарат являє собою дрібний порошок світлого кольору. Характеристика і вихід цільового продукту наведено в таблиці 2. Приклад № 2 При одержанні заявленої БАД 100 г свіжих пресованих хлібопекарських дріжджів роду 3 Saccharomyces cerevisiae обробляють 500 см розчином перекису водню масовою долею 3 % протягом 24 годин з періодичним перемішуванням, після чого суміш центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. 3 Отриманий осад заливають 200 см розчином гідроксиду натрію масовою долею 6 % протягом 30 хвилин з періодичним перемішуванням при температурі 45 °C, потім суспензію центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Одержаний осад змішують з 0,5 н розчином оцтової кислоти при гідромодулі 1:3 та нагрівають до температури 75 °C для видалення глікогену, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою, нагрітою до 75 °C, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Осад висушують поступово етанолом, а потім ефіром та розтирають у ступці. Отриманий препарат являє собою дрібний порошок світлого кольору. Характеристика і вихід цільового продукту наведено в таблиці 2. Приклад № 3 При одержанні заявленої БАД 100 г свіжих пресованих хлібопекарських дріжджів роду 3 Saccharomyces cerevisiae обробляють 250 см розчином перекису водню масовою долею 3 % протягом 24 годин з періодичним перемішуванням, після чого суміш центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. 3 Отриманий осад заливають 500 см розчином гідроксиду натрію масовою долею 3 % протягом 30 хвилин з періодичним перемішуванням при температурі 50 °C, потім суспензію центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Одержаний осад змішують з 0,5 н розчином оцтової кислоти при гідромодулі 1:2 та нагрівають до температури 75 °C для видалення глікогену, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою, нагрітою до 75 °C, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Осад висушують поступово етанолом, а потім ефіром та розтирають у ступці. Отриманий препарат являє собою дрібний порошок світлого кольору. Характеристика і вихід цільового продукту наведено в таблиці 2. Приклад № 4 При одержанні заявленої БАД 100 г свіжих пресованих хлібопекарських дріжджів роду 3 Saccharomyces cerevisiae обробляють 200 см розчином перекису водню масовою долею 3 % 2 UA 73804 U 5 10 15 20 25 протягом 2 годин з періодичним перемішуванням, після чого суміш центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. 3 Отриманий осад заливають 250 см розчином гідроксиду натрію масовою долею 3 % протягом 1 годину з періодичним перемішуванням при температурі 65 °C, потім суспензію центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Одержаний осад змішують з 0,5 н розчином оцтової кислоти при гідромодулі 1:1 та нагрівають до температури 75 °C для видалення глікогену, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою, нагрітою до 75 °C, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Осад висушують поступово етанолом, а потім ефіром та розтирають у ступці. Отриманий препарат являє собою дрібний порошок світлого кольору. Характеристика і вихід цільового продукту наведено в таблиці 2. Приклад № 5 При одержанні заявленої БАД 100 г свіжих пресованих хлібопекарських дріжджів роду 3 Saccharomyces cerevisiae обробляють 400 см розчином перекис водню масовою долею 3 % протягом 6 годин з періодичним перемішуванням, після чого суміш центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. 3 Отриманий осад заливають 500 см розчином гідроксиду натрію масовою долею 3 % протягом 1 годину з періодичним перемішуванням при температурі 55 °C, потім суспензію центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою та знову центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин. Одержаний осад змішують з 0,5 н розчином оцтової кислоти при гідромодулі 1:3 та нагрівають до температури 75 °C для видалення глікогену, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Отриманий осад промивають водою, нагрітою до 75 °C, центрифугують при 8000 об/год. 15 хвилин для відділення осаду від супернатанту. Осад висушують поступово етанолом, а потім ефіром та розтирають у ступці. Отриманий препарат являє собою дрібний порошок світлого кольору. Характеристика і вихід цільового продукту наведено в таблиці 2. Таблиця 1 Хімічний склад препарату Показники Легкогідролізовані полісахариди (ЛГП) Важкогідролізовані полісахариди (ВГП) Білок Ліпіди Глікоген Вміст, % 0,5-3,0 76,7-89,9 4,7-19,7 0,8-1,6 відсутній Таблиця 2 Характеристика і вихід цільового продукту, отриманого за прикладами № 1-5 № прикладу 1 2 3 4 5 Вихід комплексу, % від маси свіжих дріжджів 4,1 2,7 3,1 3,7 3,5 Вміст ВГП, % Вміст білка, % 76,7 84,2 89,3 79,8 82,6 15,9 7,0 4,7 13,4 9,4 30 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 Спосіб одержання біологічно активної добавки, що включає обробку пресованих хлібопекарських дріжджів хімічним реагентом, відокремлення цільового продукту і наступне його сушіння, який відрізняється тим, що пресовані хлібопекарські дріжджі обробляють 3 %-им розчином Н2О2 при гідромодулі 1:(2-3) протягом 1-24 годин, після чого осад відокремлюють і промивають водою, а відокремлення цільового продукту проводять в два етапи, причому на першому етапі видаляють білок шляхом обробки осаду 3-6 %-им розчином NaOH при гідромодулі 1:(2-5) при 45-65 °C протягом 0,5-3,0 годин, а на другому етапі видаляють глікоген 3 UA 73804 U шляхом обробки осаду 0,5 н розчином оцтової кислоти при гідромодулі 1:(1-3) і нагрівають реакційну суміш до температури не більш 75 °C, осад відокремлюють від супернатанту, промивають гарячою водою, знову відокремлюють від супернатанту і висушують спочатку етиловим спиртом, а після - ефіром. 5 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4