Очні краплі антикатарактної дії з водорозчинним білково-полісахаридним комплексом pleurotus ostreatus

Реферат: Винахід належить до фармації та медицини, стосується очних крапель антикатарактної дії з водорозчинним білково-полісахаридним комплексом, який одержано з грибу Pleurotus ostreatus. UA 99551 C2 (12) UA 99551 C2 UA 99551 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Винахід відноситься до фармації та медицини, а саме до засобів фармакокорекції з біологічно активними сполуками, зокрема до очних крапель антикатарактної дії з водорозчинним білково-полісахаридним комплексом, який одержано з грибу Pleurotus ostreatus. Проблема лікування вікової катаракти є дуже актуальною. На теперішній час основним методом відновлення зору хворих є хірургічне видалення мутного кришталика, як правило, з наступною імплантацією інтраокулярної лінзи (ІОЛ) [1-3]. Серед методів хірургічного втручання найбільш поширеними є екстракапсулярна та інтракапсулярна екстракція, ультразвукова та лазерна факоемульсифікація катаракти. Однак, незважаючи на постійне вдосконалення хірургічної техніки, навіть при відсутності ускладнень під час операції, при використанні однакової методики і техніки операцій, у багатьох хворих виникає підвищена запальна реакція, причини якої до теперішнього часу не відомі [1-3]. При цьому різко посилюється утворення активних форм кисню клітинами кон'юнктиви і рогівки, нейтрофілами та макрофагами, що мігрують у слізну рідину (СР), підвищується інтенсивність окислювальних реакцій. Вільні радикали та продукти перекісного окислення ліпідів (ПОЛ) є одними з головних пошкоджуючих факторів, які викликають деструкцію тканин ока при запаленні, що призводить до порушення зорових функцій [1-3]. Серед засобів консервативного лікування катаракти найчастіше використовують квінакс, діюча субстанція якого - азапентацен (синтетичне похідне феноксазону) - пригнічує реакцію між похідним хінолу і розчинними протеїнами, тим самим уповільнює дегенерацію кришталика. Для зменшення дистрофічних уражень сітківки ока використовують препарати амінокислот (тауфон, віта-йодурол, офтан-катахром) [4-5]. Проте, існуючі лікарські препарати лише уповільнюють розвиток катаракти, а не виліковують хворобу. До теперішнього часу патогенез вікової катаракти вивчений недостатньо і не є однотиповим у різних хворих, тому універсального препарату для лікування цієї патології не може існувати [6]. Проте, аналізуючи комплекс процесів, що відбуваються в організмі в цілому і в тканинах ока, можна відзначити провідну роль гемодинамічних порушень у розвитку вікової катаракти [7]. В результаті недостатнього кровопостачання (при значущому зниженні регіонарного кровообігу) в центральній нервовій системі і зоровому аналізаторі відбувається накопичення токсичних продуктів аутогенного походження, що викликає розвиток різноманітних патологічних змін, в тому числі й затемнення кришталика [7]. У хворих на катаракту виявляються атеросклеротичні ураження судин ока, при чому об'ємні показники гемодинаміки у дільниці органу зору є значно зниженими, що свідчить про дефіцит крові, що надходить очною артерією [7]. Тому, субстанції, які впливають на метаболізм субстрату атерогенного процесу (атерогенні ліпопротеїни крові) і чинять гіполіпідемічну дію, є потенційними засобами для покращення показників гемодинаміки судин ока і сприяють покращенню прозорості кришталика. Як прототип заявленого засобу фармакокорекції катаракти вибраний засіб корекції ліпідного статусу крові з використанням водорозчинного білково-полісахаридного комплексу (ВБПСК) біологічно-активної субстанції, яка отримана з грибу Pleurotus ostreatus. Субстанція знижує рівень загального холестерину крові, рівні ліпопротеїнів низької і дуже низької щільності та підвищує рівень ліпопротеїнів високої щільності, тобто виявляє гіполіпідемічну дію [8-9]. Гіполіпідемічна дія ВБПСК у прототипі проявлялася при внутрішньошлунковому введенні субстанції щурам. Таким чином була встановлена її системна дія. Задачею винаходу є створення засобу фармакокорекції вікової (кортикальної) катаракти з водорозчинним білково-полісахаридним комплексом Pleurotus ostreatus при місцевому лікуванні. Поставлена задача вирішується наступним чином. Із субстанції ВБПСК [9] шляхом розчинення у стерильній воді очищеній in bulk готують очні краплі у 3 % масооб'ємній концентрації. Розчин фільтрують крізь беззольний фільтрувальний папір, або скляний фільтр № 2. Розчин не ізотонують і не піддають стабілізації. Винахід ілюструється прикладом. Приклад Загальновідомим методом [11] у білих нелінійних щурів моделювали експериментальну катаракту, яка за ознаками відповідала кортикальній катаракті людини. Протягом 5 тижнів на фоні катаракти, що розвивалася, здійснювали лікування щурів шляхом закапування в очі розчину ВБПСК. Після закінчення експерименту встановлювали ступінь прозорості кришталиків очей тварин і рівень глутатіонтрансферази у сироватці крові щурів. Дослідження проводили на щурах - самцях масою 160,0-180,0 г віком близько 4 місяців відповідно до рекомендацій Державного фармакологічного центру (ДФЦ) МОЗ України [10]. 1 UA 99551 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Моделювання катаракти здійснювали протягом 9 тижнів. В дослідженнях були використані: 21 тварина (42 ока). Щури були розділені на 3 групи: 1 - контрольна (7 тварин, 14 очей) і дві дослідні (по 7 щурів у кожній, 28 очей). Усі тварини утримувались на стандартному раціоні віварію протягом усього експерименту. Доступ до води у щурів був вільним. В ході експерименту один раз на тиждень проводили контрольне зважування тварин. Дослідні групи додатково піддавали дії хімічних речовин. Експериментальною моделлю була метаболічна катаракта, що формувалася у щурів дослідних груп шляхом уведення з питною водою 3-амінотріазолу у вигляді 0,2 % розчину протягом 9 тижнів (63 доби), а також внутрішньом'язового уведення щурам 10 % розчину чотирихлористого карбону у стерильній персиковій олії під фасцію черевних м'язів (з розрахунку 1 мл/кг маси тварини 1 раз на день, 5 ін'єкцій через 7 діб кожна) [11]. У третій дослідній групі тварин паралельно з моделюванням катаракти, починаючи з 4 тижня експерименту, проводилось лікування катаракти розчином ВБПСК у 3 % концентрації на стерильній воді очищеній. Розчин ВБПСК вводили щурам щоденно по 1 краплі 2 рази на день шляхом інстиляції в очі. З експерименту тварин виводили шляхом швидкої декапітації після введення барбамілу. Для приготування мікропрепаратів кришталиків використовували метод гомогенатів [12]. В результаті моделювання у тварин дослідних груп розвинулась катаракта на всіх 28 очах. Експериментальна катаракта, що викликана шляхом уведення 3-амінотріазолу і чотирихлористого карбону, за своїми клінічними проявами імітує вікову кортикальну катаракту людини. Мікрофотографії зрізів кришталиків очей щурів усіх груп представлені на рис. 1-3 (Креслення). Мікропрепарат, представлений на рис. 1, являє собою мікроскопічний зріз кришталика ока щура контрольної (інтактної) групи. Кришталик має прозору структуру без будь-яких морфологічних змін. На рис. 2 представлений мікроскопічний зріз кришталика ока щура з другої дослідної групи (модельна катаракта). Біомікроскопічна картина характеризується затемненням кришталика різної інтенсивності, що перемежається з прозорими ділянками у вигляді диска неправильної форми, що розташований під задньою капсулою кришталика. Війчастий пасок кришталика значно потовщений і затемнений у порівнянні зі зразком із контрольної групи, де війчастого паска кришталика практично не видно. Стадія незрілої катаракти характеризується обводненням речовини кришталика, прогресуванням затемнення, поступовим зниженням гостроти зору. При звичайному зовнішньому огляді зіниця може бути чорною або сіруватою за рахунок того, що поверхневі субкапсулярні шари ще зберігають прозорість. При боковому освітленні утворюється напівмісячна «тінь» від райдужки до того боку, відкіля падає світло. Біомікроскопічна картина зрізу кришталика ока щура з третьої дослідної групи (лікування катаракти паралельно з моделюванням патології) представлена на рис. 3. Кришталик характеризується значно меншим затемненням слабкої інтенсивності. Війчастий пасок кришталика значно менше потовщений і затемнений у порівнянні зі зразком із дослідної групи № 2. Стосовно самого кришталика можна відзначити його більшу прозорість, практично таку саму, як в контрольній групі щурів. Таким чином, застосування розчину ВБПСК у третій групі лабораторних тварин значно уповільнило розвиток метаболічної катаракти. Біохімічними маркерами розвитку катаракти є глутатіонзалежні ферменти [11]. Для визначення рівню глутатіонтрансферази (ГТ) в контрольній групі щурів, в групі тварин з модельною катарактою і в групі, в якій було застосовано лікування, використовували кров, взяту зразу після декапітації тварин. Матеріал для дослідження готували наступним чином: брали венозну кров зі стегнової вени в центрифужну пробірку, в яку попередньо був доданий 3,8 % розчин цитрату натрію у співвідношенні 10:1. Суміш центрифугували протягом 15 хвилин при 3000 об/хв. Плазму видаляли, а еритроцити відмивали фізіологічним розчином. Для дослідження використовували гемолізат у розведенні 1:40. Для визначення активності ГТ готували суміш наступного складу: 3,75 мл фосфатного буферу (0,1 М рН 6,5), 0,5 мл 10 мМ відновленого глутатіону, 0,25 мл гемолізату, 0,05 мл 0,1 М 2,4-дінітро-1-хлорбензолу. Активність ферменту визначали протягом 3 хвилин при довжині хвилі 346 нм по накопиченню кон'югату і відображали у мікромолях останнього на 1 г гемоглобіну в 1 хвилину. Під впливом хімічного фактору (3-амінотріазолу і чотирихлористого карбону) в крові дослідних тварин відбулося помітне змінення активності ГТ (табл.). 2 UA 99551 C2 Таблиця Рівень активності глутатіонтрансферази Параметр Середнє значення активності (n=7) 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Позначення, розмірність ГТ Інтактні щури І група мкмоль * 1 г Hb/хв. 0,16421±0,152 Патологія II група Патологія + лікування III група 0,15849±0,147 0,21719±0,201 Таким чином, можна зробити висновок, що заявлений засіб - очні краплі з водорозчинним білково-полісахаридним комплексом Pleurotus ostreatus - зменшує прояви метаболічної катаракти, тобто виявляє антикатарактну активність: відновлює прозорість кришталика ока і збільшує активність глутатіонтрансферази плазми крові, що свідчить про значне поліпшення стану антиоксидантного статусу організму тварини в цілому за рахунок суттєвого зменшення токсичних метаболітів. Заявлений засіб є перспективним для лікування вікової (кортикальної) катаракти людини. Засіб передбачає використання поширеної в Україні доступної сировини і може бути виготовлений в умовах хіміко-фармацевтичних підприємств з використанням стандартного обладнання. Джерела інформації: 1. Антиокислительная активность сыворотки крови и слезной жидкости у больных после экстракции катаракты и возможности ее коррекции ксимедоном / А. Х. Пикуза, М. В. Кузнецова, Л. Е. Зиганшина и др. // Казанский медицинский журнал. - 2007. - Т. 88, № 4. - С. 370-373. 2. Журавок Ю. А. Противовоспалительное действие водорастворимых антиоксидантов при экстракапсулярной экстракции возрастной катаракты с имплантацией ИОЛ // Офтальмологический журнал. -2004. - № 3. - С. 36-40. 3. Клиническое значение местных показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у больных после экстракции катаракты / А. Х. Пикуза, М. В. Кузнецова, Л. Е. Зиганшина и др. // Вестник офтальмологии. - 2008. - № 1. - С. 19-22. 4. Компендиум 2005 - лекарственные препараты / Под ред. В. Н. Коваленко, А. П. Викторова. - К.: МОРИОН, 2005. - 1920 с. 5. Кучеренко Н. В. Перспективи створення нових лікарських засобів для лікування дегенеративних і дистрофічних захворювань очей / Н. В. Кучеренко, О. В. Черних // Фармація України. Погляд у майбутнє: матеріали VII Національного з'їзду фармацевтів України (Харків, 15-17 вересня 2010 p.). У 2 т. / М-во охорони здоров'я України, Нац. фармац. ун-т; ред. кол.: В. П. Черних (голова) та ін.; уклад.: Н. А. Третьякова та ін. - X.: НФаУ, 2010. - Т. 1. - С. 506. 6. Леус Н. Ф. Уровень свободных аминокислот в хрусталике и камерной влаге глаза при развитии экспериментальной катаракты / Н. Ф. Леус, Набиль Аслам, А. А. Путиенко // Офтальмологический журнал. - 2007. - № 3. - С. 50-54. 7. Завгородняя Н. Г. Закономерности гемодинамических изменений глаза и качественно количественного состава слезы у больных катарактой / Н. Г. Завгородняя, О. А. Исакова // Офтальмологический журнал. - 2006. - № 1. - С. 40-43. 8. Кучеренко Н. В. Розробка складу і технології гіполіпідемічного засобу з Плевроту черепичастого: Дис... канд. фарм. наук: 15.00.01; Захищена 19.12.2008; Затв. 27.05.2009. Харків, 2008. -151 с; іл. Бібліогр.: с. 124-149. 9. Патент України на винахід № 83530 від 25.07.2008 р. «Спосіб одержання білковополІсахаридного комплексу гіполіпідемічної дії» (Н. В. Кучеренко, В. Г. Дем'яненко, Ю. В. Столетов). 10. Доклінічні дослідження лікарських засобів: Методичні рекомендації / Під ред. член. кор. АМН України О. В. Стефанова. - К.: Авіценна, 2002. - 567 с 11. Взаимосвязь между показателями активности глутатионзависимых ферментов и скоростью прогрессирования возрастной катаракты / Н. А. Пучковская, И.П. Метелицына, Т.А. Красновид и др. // Офтальмологический журнал. - 1993. - № 2. - С. 88-90. 12. Микроскопическая техника: руководство для врачей и лаборантов / Под ред. Д. С. Саркисова и Ю. Л. Перова - М.: Медицина, 1996. - 544 с. 50 3 UA 99551 C2 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 Очні краплі антикатарактної дії з водорозчинним білково-полісахаридним комплексом Pleurotus ostreatus, які відрізняються тим, що їх готують із субстанції шляхом розчинення у стерильній воді очищеній in bulk при наступному співвідношенні компонентів (мас./об. %): водорозчиннийбілково-полісахаридний комплекс Pleurotus ostreatus 3,0 вода очищена стерильна in bulk до 100 мл. 4 UA 99551 C2 Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5