Розчинний рецептор інтерлейкіну-20

1. Виділений розчинний рецептор IL-20, що включає субодиницю L-20RA та субодиницю IL20RB, ковалентно зв’язані разом поліпептидним лінкером або дисульфідним зв’язком, в якому субодиниця IL-20RA являє собою поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 12, 38, 55, 63 і 65, а субодиниця IL-20RB являє собою поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NO: 15, 59, 61, 67, 68 і 69. 2. Розчинний рецептор за п. 1, в якому субодиниця IL-20RA та субодиниця IL-20RB зв'язані разом поліпептидним лінкером. 3. Розчинний рецептор за п. 2, в якому поліпептидний лінкер має приблизно 100-240 амінокислотних залишків. 2 (19) 1 3 84830 4 10. Розчинний рецептор за п. 1, в якому субодинипослідовністю, вибраною з групи, що складається ці IL-20RA та IL-20RB зв'язані дисульфідним з SEQ ID NO: 21 і 60. зв’язком і в якому перша субодиниця є поліпепти12. Розчинний рецептор за п. 9, в якому константдом з амінокислотною послідовністю, вибраною з на зона важкого ланцюга містить СН1 домен, СН2 групи, що складається з SEQ ID NO: 53 і 54, а друдомен і шарнірну послідовність, яка їх зв’язує. га субодиниця є поліпептидом з амінокислотною 13. Розчинний рецептор за п. 1, який являє собою послідовністю, вибраною з групи, що складається мультимерний, гетеродимерний або гетеротетраз SEQ ID NO: 57 і 58. мерний рецепторний комплекс. 11. Розчинний рецептор за п. 1, в якому субодини14. Розчинний рецептор за п. 1, який є глікозильоці IL-20RA та IL-20RB зв'язані дисульфідним ваним або містить мітку спорідненості. зв’язком і в якому перша субодиниця є поліпепти15. Розчинний рецептор за п. 14, в якому міткою дом з амінокислотною послідовністю, вибраною з спорідненості є білок, зв'язуючий мальтозу, або групи, що складається з SEQ ID NO: 23 і 62, а друдомен імуноглобуліну. га субодиниця є поліпептидом з амінокислотною Цитокіни - це розчинні білки, які впливають на ріст та диференціювання багатьох типів клітин. їхні рецептори складаються з одного або більше білків з цілісною мембраною, які зв'язують високоафінний цитокін та трансдукують цей акт зв'язування до клітини через цитоплазматичні ділянки конкретних субодиниць рецептора. Рецептори цитокіну було згруповано в декілька класів на основі подібностей їхніх позаклітинних доменів зв'язування ліганду. Наприклад, ланцюги рецептора, які відповідають за зв'язування та/або трансдукцію ефекту інтерферонів, є членами сімейства рецепторів цитокіну типу II (СРЦ2), яке базується на позаклітинному домені з характерним залишком 200. Виявлена in vivo активність цих інтерферонів показує величезний клінічний потенціал та необхідність інших цитокінів, речовин, що мають спорідненість до цитокіну та речовин-антагоністів цитокіну. Деякі цитокіни утягнуті в ряд запальних процесів і можуть провокувати такі хвороби, як ревматоїдний артрит, хворобу Крона, псоріаз, порок серця і т.д. Отже, існує необхідність виявлення цитокінів та їхні х рецепторів, які беруть участь у виникненні запалення. Потім можна буде використовувати такі виділені розчинні рецептори цитокіну для інгібування запалення, посередником якого є цитокін. Фіг.1-8 - схематичні зображення різних варіантів розчинного рецептора, запропонованого даним винаходом. Виходячи із згаданої необхідності, даний винахід пропонує нещодавно виявлений розчинний рецептор до інтерлейкіну-20 (IL-20). Цей розчинний рецептор можна застосовувати для знижуючого регулювання IL-20 і, таким чином, лікування хвороб, що протікають із запаленням, наприклад псоріазу та запалення легенів. IL-20 раніше мав назву "Zcyto 10" [міжнародна патентна заявка № WO 99/27103] і містить амінокислотні послідовності SEQ ID NOs: 1-9. Рецептор до IL-20 складається з двох ланцюгів, альфаланцюга і бета-ланцюга. Альфа-ланцюг, надалі іменований IL-20RA, раніше мав назву Zcyto R7 [патент США №5945511]. Бета-ланцюг, надалі іменований Il-20RB, раніше мав назву DIRS1 [міжнародна патентна заявка № PCT/US 99/03735]. Даний винахід пропонує розчинний рецептор, який складається з позаклітинного домену IL-20RA та позаклітинного домену IL-20RB. Даний винахід стосується виділеного розчинного рецептора, що складається з субодиниці "IL20RA" та субодиниці "IL-20RB", де субодиниця IL20RA являє собою поліпептид з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з SEQ ID NOs: 12, 38, 55, 63 і 65, а субодиниця IL20RB являє собою поліпептид з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з SEQ ID NOs: 15, 59, 61, 67, 68 і 69. Субодиниці IL-20RA та IL-20RB зазвичай зв'язані разом за допомогою поліпептидного лінкера. Зв'язування можна здійснювати будь-яким способом, але, як правило, це пептидний зв'язок або дисульфідний зв'язок між поліпептидом, з'єднаним з субодиницею IL-20RA, та поліпептидом, з'єднаним з субодиницею IL-20RB. Об'єктом даного винаходу є також виділені полінуклеотиди, які кодують нові поліпептиди Il-20RA та IL-20RB, запропоновані даним винаходом. В одному варіанті субодиниця IL-20RA злита з константною зоною важкого ланцюга молекули імуноглобуліну (Ig) або з ділянкою константної зони, а субодиниця IL-20RB злита з константною зоною легкого ланцюга молекули Ig таким чином, що константна зона легкого ланцюга дисульфідно зв'язана з константною зоною важкого ланцюга, як правило з цистеїновим залишком в шарнірній зоні важкого ланцюга. Може бути навпаки: субодиниця IL-20RA може бути злитою з константною зоною легкого ланцюга молекули Ig, а субодиниця IL20RB може бути злитою з константною зоною важкого ланцюга молекули Ig. В ще одному варіанті запропонованого розчинного рецептора субодиниця IL-20RA злита з константною зоною важкого ланцюга молекули Ig, являє собою амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NOs: 23, 53, 54 і 62, а субодиниця IL-20RB, злита з константною зоною легкого ланцюга молекули Ig, являє собою амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з SEQ ID NOs: 21, 57, 58 і 60. Заявлено також білок з першим поліпептидом та другим поліпептидом, в якому перший поліпептид являє собою амінокислотну послідовність SEQ ID NO 66, а другий поліпептид - амінокислотну 5 84830 6 послідовність, вибрану з групи, що складається з тид, функціонально зв'язаний з додатковими сегSEQ ID NOs: 70 і 71. Отриманий в результаті білок ментами, що забезпечують його транскрипцію. можна застосовувати для генерації антитіл проти Такі додаткові сегменти включають послідовність субодиниці IL-20RA та субодиниці IL-20RB. промотора і термінатора і можуть також включати Визначення термінів одну або більше точок початку реплікації, один або Перед детальним викладанням даного винабільше селектованих маркерів, енхансер, сигнал ходу для кращого його розуміння корисно визнаполіаденілювання тощо. Вектори експресії, як прачити наступні терміни. вило, походять від плазмідної або вірусної ДНК, Терміни "амінокінцевий" та "карбоксикінцевий" або можуть містити елементи обох. використано в даному описі для позначення полоТермін "виділений" стосовно полінуклеотиду жень в поліпептидах. В контексті, де це можливо, означає, що цей полінуклеотид було видалено з ці терміни використано з посиланням на конкретну його природного генетичного середовища, і він, послідовність або ділянку поліпептиду для познатаким чином, є вільним від інших посторонніх або чення просторової близькості або відносного понебажаних кодуючих послідовностей і перебуває у ложення. Наприклад, певна послідовність, розтаформі, придатній для використання в створених шована карбоксикінцево до контрольної шляхом генної інженерії білоксинтезуючих систепослідовності в поліпептиді, знаходиться найблимах. Такі виділені молекули є відокремленими від жче до місця прикріплення до карбоксильного кінїхнього природного середовища і включають кДНК ця контрольної послідовності, але необов'язково і геномні клони. Згідно з даним винаходом виділені на карбоксильному кінці повного поліпептиду. молекули ДНК вільні від інших генів, з якими вони В даному описі термін "білок, злитий з антитізазвичай асоційовані, але можуть включати прилом" означає рекомбінантну молекулу, яка вклюродно існуючі нетрансльовані 5'- і 3'-зони, напричає компонент антитіла та терапевтичний агент. клад промотори і термінатори. Ідентифікація асоПрикладами терапевтичних агентів, що підходять ційованих зон очевидна для фіхівців в цій галузі для таких злитих білків, є імуномодулятори (зли[див., наприклад, Dynan and Tijan, Nature 316: 774тий білок "антитіло-імуномодулятор") та токсини 78 (1985)]. (злитий білок "антитіло-токсин"). "Виділений" поліпептид або білок перебувають Термін "пара комплемент-антикомплемент" у стані, відмінному від його природного середовиозначає неідентичні частини, які утворюють некоща, наприклад окремо від крові та тканини тваривалентно зв'язану стабільну пару за відповідних ни. У кращій формі виділений поліпептид є вільумов. Наприклад, біотин та авідин (або стрептовіним від інших поліпептидів, зокрема інших дин) є прототипними членами пари комплементполіпептидів тваринного походження. Краще заантикомплемент. Іншими прикладами пар комплебезпечити високочисту форму поліпептидів, тобто мент-антикомплемент є: пари рецептор-ліганд, більш ніж 95% чистоти, ще краще більш ніж 99% пари антитіло-антиген (або гаптен, або епітоп), чистоти. При використанні в даному контексті терпари смисловий-антисмисловий полінуклеотид і мін "виділений" не включає наявності цього самого т.п. У тих випадках, коли потрібна подальша дисополіпептиду в альтернативних фізичних формах, ціація пари комплемент-антикомплемент, краще наприклад у вигляді димеру або, навпаки, у вигляякщо ця пара має афінність зв'язування