Циклопептиди, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція та спосіб її одержання

1 Циклопептиды формулы I cyclo-(Arg-Gly-Asp-X-Y), (I) где X означает Phe, гомо-Phe, Prig, Phe(4-F) или Phe(4-CI), Y означает hPro, Ahds, Aos, Nhdg, Acha, Aib, Acpa или Tie, причем в случае остатков оптически активных аминокислот и производных аминокислот включены обе D- и L-формы, а также производные, в особенности сложные р-эфиры аспарагиновой кислоты или N-гуанидинацильные производные аргинина, пролекарства и их физиологически приемлемые соли 2 Энантиомер или диастереомер соединения формулы I по п 1 3 Соединения по п 1, которые представляют собой (а) MHmo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Nle), (б) u,HKno-(Arg-Gly-Asp-DPhe-hPro), (в) MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Tle), (г) u,HKno-(Arg-Gly-Asp-Phe-DAhds), (д) L|Hmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Nhdg), (е) 4Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Acha), (ж) 4Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe(4-CI)-Tle), (з) MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe(4-F)-Tle), а также их физиологически приемлемые соли КОМПОЗИЦІЯ ТА СПОСІБ 4 Соединения формулы І по п 1 или их физиологически приемлемые соли для получения лекарственного средства для борьбы с заболеваниями 5 Соединения формулы І по п 1 или их физиологически приемлемые соли для борьбы с заболеваниями 6 Соединения формулы І по п 1 для получения иммобилизованных лигандов для афинноколоночной хроматографии 7 Соединения формулы I по п 1 для очистки интегринов путем афинной хроматографии 8 Способ получения соединения формулы I по п 1 или одной из его солей, отличающийся тем, что его высвобождают из одного из его функциональных производных путем обработки сольволизирующим или гидрогенолизирующим способом или обрабатывают пептид формулы II H-Z-OH, (II), где Z означает -Arg-Gly-Asp-X-Y-Gly-Asp-X-Y-Arg-Asp-X-Y-Arg-Gly-X-Y-Arg-Gly-Asp- или -Y-Arg-Gly-Asp-X-, или реакционноспособное производное такого пептида обрабатывают циклизирующим средством, или циклопептид, соответствующий формуле I, но содержащий одну или несколько свободных аминогрупп, кислотных групп и/или активированных ОС -С-атомов, переводят в производное путем алкилирования, ацилирования или этерификации, и/или основное или кислотное соединение формулы I переводят в одну из его солей путем обработки кислотой или основанием 9 Способ получения фармацевтических композиций, отличающийся тем, что соединение формулы І по п 1 и/или одну из его физиологически приемлемых солей вместе с по крайней мере одним твердым, жидким или полужидким наполнителем или вспомогательным веществом переводят в пригодную дозированную форму 10 Фармацевтическая композиция, отличающаяся тем, что содержит по крайней мере одно соединение общей формулы І по п 1 и/или одну из его физиологически приемлемых солей о о (О 61071 Изобретение относится к новым циклопептидам формулы I Cyclo-(Arg-Gly-Asp-X-Y) (I), Г Д Є і і X означает Cha, Nal, Phe, 2-R -Phe, 3-R -Phe, 4R1-Phe, гомо-Phe, Phg, Thi, Trp, Туг или производные Туг, причем группа ОН может быть этерифицирована алкильным остатком с 1-18 атомами углерода, и указанные аминокислотные остатки могут быть дополнительно переведены в производные, R1 означает NH2, NO2, I, Br, Cl, F, алкил с 1-18 атомами углерода, Аг, Аг-0 или 3 Н, Y означает Gly, причем a-N-атом может быть замещен R2 и/или a-C-атом замещен R3 и/или R4 при условии, что Gly по меньшей мере однократно замещен указанным образом, Аг означает фенил, который при необходимости одно- или двукратно замещен NH2, NO2, I, Br, СІ, F, алкилом с 1-6 атомами углерода или 3 Н, R2, R3, или R4 означают независимо друг от друга алкил с 1-18 атомами углерода или 3 R H R или R и R вместе образуют также разветвленную или неразветвленную алкиленовую цепь с 3-18 атомами углерода так, что при этом образуют кольцо либо a-N-атом и a-C-атом вместе с алкиленовой цепью, либо один a-C-атом вместе с алкиленовой цепью, при этом, если речь идет об остатках оптически активных аминокислот и производных аминокислот, то изобретение включает D- и L-формы, а также производные, в особенности р-эфир аспарагиновой кислоты, или N-гуанидин-ацильные производные аргинина, пролекарства и их физиологически совместимые соли Аналогичные соединения известны, например, из ЕР 0406428 и FEBS Lett, №291, 1991г, стр 5054 Задачей изобретения является создание новых соединений с ценными свойствами, в особенности таких, которые могут применяться при получении лекарственных средств Неожиданно было показано, что соединения формулы I и их соли обладают очень ценными свойствами Прежде всего они являются ингибиторами интегрина, причем в особенности они ингибируют взаимодействие между рецепторами рз- или Рб-интегрина и лигандами Особую активность проявляют СОеДИНеНИЯ В Случае ИНТегрИНОВ ОуРз, «VP5 И апРз а также по отношению к OvPi, о^Рє и OvPsрецепторам Эта активность может быть подтверждена, например, методом, описанным J W Smith и др в ж Biol Спет №265, 1990г, стр 12267-12271 Дополнительно они оказывают противовоспалительное действие 2 Зависимость происхождения ангиогенеза от взаимодействия между сосудистыми интегринами и внеклеточными протеинами мат-рикса описана Р С Brooks, R A Clark и D A Cheresh в Science, №264, 1994г, стр 569-571 Возможность ингибирования такого взаимодействия и вызываемое им начало апотоза (запрограммированной гибели) ангиогенных сосудистых клеток под действием циклического пептида описаны Р С Brooks, А М Montgomery, М Rosenfeld, R А Reisfeld, T-Hu, G Kher и DA Cheresh в Cell, №79, 1994г, стр 1157-1164 Соединения формулы I, блокирующие взаимодействие между рецепторами интегринов и лигандами, как например/ между фибриногеном и рецептором фибриногена (гликопротеин llb/llla), в качестве GPIIb/llla-антагонистов препятствуют распространению опухолевых клеток путем метастаз Это подтверждено следующими наблюдениями Распространение опухолевых клеток из одной локальной опухоли в сосудистую систему происходит в результате образования микроагрегатов (микротромбов) путем взаимодействия между опухолевыми клетками и тромбоцитами Опухолевые клетки экранированы защитой в микроагрегате и не распознаются клетками иммунной системы Микроагрегаты способны осаждаться на стенках сосудов, чем дополнительно облегчается проникновение опухолевых клеток в ткань Поскольку образование микротромбов вызывается связыванием фибриногена с рецепторами фибриногена на активированных тромбоцитах, то GPIIa/lllbантагонисты могут рассматриваться как эффективные ингибиторы метастаза Соединения формулы I могут также применяться в качестве противомикробных средств при операциях, когда используются биоматериалы, имплантаты, катетеры и стимуляторы сердца В этом случае они оказывают антисептическое действие Эффективность противомикробной активности может быть подтверждена способом, описанным Р Valentin-Weigund и др в Infection and Immunity (Инфекция и иммунитет), 1988г, стр 28512855 Так как соединения формулы I представляют собой ингибиторы связывания фибриногена и следовательно лигандов рецепторов фибриногена на тромбоцитах, они могут использоваться in vivo в качестве диагностических средств для определения и локализации тромбов в сосудистых системах в том случае, когда они замещаются, например, радиоактивным или УФ-детектируемым остатком Соединения формулы I как ингибиторы связывания фибриногена могут применяться также в качестве эффективных вспомогательных средств при исследовании метаболизма тромбоцитов на различных стадиях активации или в виде межклеточных сигнальных механизмов рецептора фибриногена Детектируемая единица встраиваемой "метки", например, изотопная маркировка с помо3 щью Н, позволяет по связыванию с рецептором исследовать упомянутые механизмы Следовательно соединения обладают свойством ингибирования связывания естественных или 61071 искусственных лигандов интегринами, в особенности интегринами о^Рз, OA-PS и апРз, а также otvPi, ctvPe и OvPs Кроме того, по сравнению с уровнем техники они обладают преимуществом, что блАгодаря a-Nалкилированию или а-С-алкилированию аминокислотного остатка Y обеспечивается метаболическая стабилизация и повышенная растворимость жиров В результате уменьшения количества возможных водородных мостиков, так как N-алкил не может быть донором Н для группы СО, повышается проникающая способность через мембраны, вследствие чего можно достигнуть повышенную оральную всасываемость, что может способствовать усилению связывания протеинов плазмы a-N-Алкилирование или а-С-алкилирование аминокислотного остатка Y повышает ингибирующую способность соединений и повышает селективность при ингибировании определенных интегринов В особенности N-алкильными группами можно влиять на селективность Соединения можно использовать в качестве активных веществ лекарственных средств в медицине и ветеринарии, в особенности для профилактики и лечения заболеваний кровообращения, тромбоза, инфаркта миокарда, артериосклероза, воспалений, апоплексии, стенокардии, опухолевых заболеваний, остеолитических заболеваний, в частности, остеопороза, ангиогенеза и вызванных им болезней, как например, диабетическая ретинопатия глаза, офтальмологические заболевания, дегенеративные изменения в области желтого пятна, близорукость, глазной гистоплазмоз, ревматический артрит, остеоартрит, краснушная глаукома, а также язвенный колит, болезнь Крона, множественный склероз, псориаз, а также рестеноз после ангиопластики Кроме того, соединения могут применяться для улучшения и поддержания процессов заживления ран при микробных инфекциях и острой почечной недостаточности Такие эффекты могут быть подтверждены, например, с помощью известных из литературы методов, например, описанных Р С Brooks и др в Cell №79, 1994г, стр 1157-1164, или Science №264, 1994г, стр 569-571 Приведенные ниже сокращения аминокислотных остатков означают остатки следующих аминокислот Abu 4-аминомасляная кислота Аспа а-аминоциклогексанкарбоновая кислота Асра а-аминоциклопентанкарбоновая кислота Aha 6-аминогексановая кислота Ahds 16-аминогексадекановая кислота Aib 3-аминоизомасляная кислота Ala аланин Aos 8-аминооктановая кислота Asn аспарагин Asp аспарагиновая кислота Asp(OR) аспарагиновая кислота (сложный рэфир) Arg аргинин N-Ac-Arg N-гуанидиноациларгинин Cha 3-циклогексилаланин Dab 2,4-диаминомасляная кислота Dap 2,3-диаминопропионовая кислота Deg диэтилглицин Gin тутамин Glu глутаминовая кислота Gly глицин hPro пипеколиновая кислота His ГИСТИДИН Не изолейцин Leu лейцин Lysлизин Nal 3-(2-нафтил)-аланин Nhdg N-гексадецилглицин Nle норлейцин Phe фенилаланин homoPhe гомо-фенилаланин 4-Hal-Phe 4-галоген-фенилаланин Phg фенилглицин Pro пролий Багсаркозин (N-метилглицин) Тіа 3-(2-тиенил)-аланин Tic тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота Thrтреонин Tie трет, лейцин(Са-трет -бутилглицин) Тгр триптофан Туг тирозин Val валин Кроме того, приводимые ниже сокращения означают ВОС трет-бутокси карбон ил Bzl бензил DCCI дициклогексилкарбодиимид DMF диметилформамид EDCI 1\1-этил-Н'-(3-диметиламинопропил)карбодиимид х HCI Et этил Fmoc 9-фторфенилметоксикарбонил HOBt 1-гидроксибензотриазол Me метил Mtr 4-метокси-2,3,6-триметилфенил-сульфонил NMe N-метилированная а-аминогруппа OBut сложный трет-бутиловый эфир ОМе сложный метиловый эфир OEt сложный этиловый эфир РОА феноксиацетил TBTU 2-(1 Н-бензотриазол-1 -ил)-1,1,3,3тетраметилуроний- тетрафторборат TFA три фтору ксусная кислота Если приведенные выше аминокислоты могут обладать несколькими энантиомерными формами, то они также включают указанные выше и ниже по тексту, например, в качестве составных частей соединений формулы I, все эти формы, а также их смеси (например, формы DL) Кроме того, аминокислоты, например, в качестве составной части соединений формулы I, могут включать соответствующие известные защитные группы Кроме того, изобретение включает и такие пептиды, аминокислотные остатки которых частично или полностью превращены в производные Под понятием "превращение в производные" следует понимать, что изобретение включает и так называемые пролекарства, например, N-гуанидиноацильные производные Arg, р-сложные эфиры Asp, |\15-алканоильные-, аминоалканоильные-, меркаптоалканоильные производные лизина Кроме того, аминокислотные остатки могут быть частично Сальфа-алкилированы или, например, помечены 61071 изотопами для диАгностических целей Далее изобретение включает такие соединения формулы I, которые в боковых цепях остатков X и Y дополнительно превращены в производные в виде амино-, карбокси- или меркаптогрупп, так как такие производные являются важными исходными соединениями при получении высокомолекулярных конъюгатов, предназначенных, например, для иммунизации и получения антител Возможно также применять функциональные группы в боковой цепи определенных аминокислотных остатков или аминокислотных остатков, переведенных в производные, при иммобилизации пептидов на полимерных материалах при изготовлении колонок для афинной хроматографии или использовать функциональные группы для превращения в производные с помощью диагностических вспомогательных реактивов, таких как флюоресцирующие заместители Предметом изобретения является также способ получения соединения формулы І по п 1 формулы изобретения или одной из его солей, отличающийся тем, что соединение высвобождают из одного из его функциональных производных обработкой сольволизирующим или гидрогенизирующим средством, или тем, что пептид формулы II H-Z-OH (II), где Z означает -Arg-Gly-Asp-X-Y-Gly-Asp-X-Y-Arg-Asp-X-Y-Arg-Gly-X-Y-Arg-Gly-Asp- или -Y-Arg-Gly-Asp-X-, или реакционыоспособное производное такого пептида обрабатывают циклизирующим веществом, или тем, что циклопептид, соответствующий формуле I, содержащий одну или несколько свободных аминогрупп, карбоксильных групп и/или активированных а-С-атомов, переводят в производное алкилированием, ацилированием или этерификацией, и/или тем, что основное или кислотное соединение формулы I переводят в одну из его солей путем обработки кислотой или основанием Остатки X и Y, приводимые выше и ниже по тексту, имеют указанные для формул I и II обозначения, если не оговорено иначе Использованные буквенные обозначения соответствующих остатков не связаны с кодовыми заглавными буквами аминокислот В приведенных выше формулах алкил означает преимущественно метил, этил,изопропил, н-бутил, втор-бутил или трет-бутил Кроме того, алкил означает также преимущественно нпентил, изопентил, неопентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил или н-гексадецил Группа X означает преимущественно Phe, также преимущественно D-Phe, а также Phe(4-Hal), в частности Phe(4-F) или Phe(4-CI), а также гомо-Рпе или Phg, при этом в одинаковой степени предпочтительны и формы D Y означает предпочтительно гидрофобный аминокислотный остаток, в частности Gly, Ala, Val, Leu, Nle или he В соответствии с этим предметом изобретения являются в особенности такие соединения формулы І, в которых по меньшей мере один из указанных остатков имеет приведенные выше предпочтитель 8 ные значения Предпочтительная группа соединений может быть выражена частичной формулой la, соответствующей обычно формуле I, но в которой X означает D-Phe, Phe, D-гомоРпе, гомоРпе, DPhg, Phg, Phe(4-F), D-Phe(4-F), D-Phe(4-CI) или Phe(4-CI) и Y означает Nle, hPro, Ahds, Aos, Nhdg, Acha, Aib, Acpa, Tie, Ala, Leu или he, причем в одинаковой степени предпочтительны и форма D, и форма L Далее предпочтительная группа соединений может быть выражена частичной формулой Ib, соответствующей обычно формуле I, но в которой X означает D-Phe или Phe и Y означает Ahds, hPro, Aos, Nhdg, Acha, Aib, Acpa или Tie, причем в одинаковой степени предпочтительны и форма D, и форма L, и все аминокислотные остатки Arg, Gly или Asp находятся в естественной L-конфигурации Еще одна предпочтительная группа соединений может быть выражена частичной формулой Ic, соответствующей частичным формулам la и Ib, a также формуле I, но где находится в D-форме только один из аминокислотных остатков X или Y, в то время как все остальные остатки имеют конфигурацию L Кроме того, все физиологически приемлемые соли соединений, соответствующие частичным формулам la, Ib и Ic, являются наиболее предпочтительными Соединения формулы I, а также исходные вещества для этих соединений получают известными методами, описанными в литературе (например, в сборниках стандартов, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie (Методы органической химии), изд Georg-Thieme-Verlag, г Штуттгарт), в частности в условиях реакции, которые известны и пригодны для названных взаимодействий При этом могут также применяться известные, не рассматриваемые здесь подробно варианты При необходимости исходные вещества можно получать in situ, так что не требуется их выделение из реакционной смеси и их можно далее подвергать взаимодействию до соединений формулы I Соединения формулы I можно получать и тем, что их высвобождают из их функциональных производных посредством сольволиза, гидролиза или гидрогенолиза Предпочтительными исходными веществами для сольволиза или гидрогенолиза являются такие вещества, которые вместо одной или нескольких свободных амино- и/или гидроксильных групп содержат соответственно защищенные амино- и/или гидроксильные группы,- предпочтительно такие группы, которые вместо атома водорода, связанного с N-атомом, содержат аминозащитную группу, например, такие, которые соответствуют формуле I, но вместо группы NH2 содержат группу NHR' (где R' означает аминозащитную группу, например, ВОС или CBZ), Кроме того, предпочтительными являются исходные вещества, которые вместо атома водорода гидроксильной группы содержат гидроксизащитную группу, например, такую, которая соответствует формуле I, но которая вместо гидроксифенильной группы содержит R''O-фенильную группу (где R" 61071 10 означает гидроксизащитную группу) ках стандартов и патентных заявках, например, также твердофазным методом Mernfield (В F Gysin Также могут присутствовать в молекуле исходи R В Mernfield, ж Am Chem Soc (Американское ного вещества и несколько одинаковых или разных химическое общество), №94, 1972г, стр 3102 и защитных амино- и/или гидроксильных групп В том последующие)) случае, когда присутствующие защитные группы различаются между собой, их можно в большинстВысвобождение соединений формулы I из их ве случаев селективно отщеплять функциональных производных обеспечивается - в зависимости от применяемой защитной группы Выражение "аминозащитная группа" общеизнапример, сильными кислотами, целесообразно вестно и означает группы, способные защищать посредством три фтору ксусн ой кислоты или пер(блокировать) аминогруппу от химических взаимохлорной кислоты, а также и другими сильными недействий, но которые легко удаляемы после протеорганическими кислотами, такими как соляная или кания необходимой химической реакции на других серная кислота, сильными органическими карбоноучастках молекулы Типичными защитными групвыми кислотами, такими как трихл ору ксусн ая или пами являются в частности незамещенные или сульфокислоти, такие как бензол- или пзамещенные ацильные, арильные, аралкоксиметолуолсульфокислота Возможно присутствие дотильные или аралкильные группы Поскольку после полнительного инертного растворителя, но это не реакции (или серии реакций) аминозащитные групвсегда необходимо В качестве инертного раствопы удаляются, то их природа и размер не являются рителя пригодны преимущественно, например, оркритическими, однако предпочтительными являютганические-карбоновые кислоты, такие как уксусная ся такие, которые содержат 1-20, в особенности 1-8 кислота, простые эфиры, как тетрагидрофуран или атомов углерода Выражение "ацильная группа" диоксан, амиды, такие как диметилформамид следует понимать в связи с настоящим изобрете(DMF), галогениро-ванные углеводороды, такие как нием в самом широком смысле Оно включает в дихлорметан, а также спирты, такие как метанол, себя ацильные группы на основе алифатических, этанол или изопропанол, и вода Кроме того, приаралифатических, ароматических или гетероциклигодны смеси указанных растворителей Трифторукческих карбоновых кислот или сульфокислот, а сусная кислота применяется преимущественно в также в частности алкоксикарбонильные, арилокизбытке без добавления дополнительного раствосикарбонильные и прежде всего а рал кокс и карборителя, перхлорная кислота - в виде смеси уксуснильные группы Примерами таких ацильных групп ной кислоты и 70%-ной перхлорной кислоты в соявляются алканоил, такой как ацетил, пропионил, отношении 9 1 Оптимальная температура реакции бутирил, аралканоил, такой как фенилацетил, аропри расщеплении составляет от около 0 до около ил, такой как беызоил или толуил, арилоксиалкано50°С, преимущественно от 15 до 30°С (комнатная ил, такой как РОА, алкоксикарбонил, такой как метемпература) токси карбон ил, этокси-карбонил, 2,2,2трихлорэтоксикарбонил, ВОС, 2-иодГруппы ВОС, OBut и Mtr отщепляют предпочтиэтоксикарбонил, аралкилоксикарбонил, такой как тельно с помощью трифтору ксусн ой кислоты в диCBZ (карбобензокси), 4хлорметане или с помощью приблизительно 3-5 н HCI в диоксане при 15-30°С, группу FMOC - с пометоксибензилоксикарбонил, FMOC, арилмощью около 5-50%-ного раствора диметиламина, сульфонил, такой как Mtr Предпочтительными диэтиламина или пиперидина в диметилформамиаминозащитными группами являются ВОС и Mtr, депри 15-30°С далее CBZ, Fmoc, бензил и ацетил Выражение "гидроксизащитная группа" также Защитные группы (например, CBZ или бензил), общеизвестно и означает группы, способные заудаляемые гидрогенизацией, могут отщепляться, щищать гидроксильные группы от химического например, в результате обработки водородом в взаимодействия, но которые легко удаляемы по присутствии катализатора (например, катализатора окончании реакции на других участках молекулы из благородного металла, такого как палладий, цеТипичными группами являются приведенные выше лесообразно, чтобы он применялся на носителе, незамещенные или замещенные арильные, аралтаком как уголь) При этом в качестве растворитекильные или ацильные группы, а также алкильные ля пригодны указанные выше растворителя, в чагруппы Природа и размер гидроксизащитыых групп стности, например, спирты, такие как метанол или не являются критическими, поскольку по окончании этанол, или амиды, такие как диметилформамид необходимой химической реакции или серии реакГидрогенизация проводится, как правило, при темций их можно снова удалить, предпочтительными пературе от около 0 до 100°С и давлении от около являются группы с 1-20 атомами углерода, в осо1 до 200бар, предпочтительно при 20-30°С и 1-10 бенности с 1-10 атомами углерода Примерами барах Гидрогенизация группы CBZ хорошо провогидроксизащитных групп являются в числе прочего дится, например, на 5-10%-ном Pd/C в метаноле бензил, п-нитробензоил, трет-бутил и ацетил, при или с формиатом аммония (вместо ЬЬ) на Pd/C в этом бензил и трет-бутил наиболее предпочтисмеси метанол/ДМФ при 20-30°С тельны Группы СООН в аспарагиновой и глутамиСоединения формулы I можно получать и пуновой кислотах защищены преимущественно в витем циклизации соединений формулы II в условиях де их трет-бугиловых эфиров (например, синтеза пептидов В этом случае целесообразно Asp(OBut)) Используемые в качестве исходных применять традиционные методы синтеза пептивеществ функциональные производные соединедов, такие как например, описанные в Houben-Weyl, ний формулы I можно получать традиционными 1 с , т 15/11, 1974г, стр 1-806 методами синтеза аминокислот и пептидов, как это Реакция протекает преимущественно в присутописано, например, в уже упоминавшихся сборниствии дегидра-тирующего средства, например, кар 61071 12 11 бодиимида, такого как DCCI или EDCI, а также анкорбиновая, никотиновая, изон и коти новая кислоты, гидрида пропанфосфоновой кислоты (см Angew метан- или этансульфокислота, этандисульфокисChemie (Прикладная химия), №92, 1980г, стр129)), лота, 2-гидроксиэтансульфокислота, бензолсульдифенилфосфорилазида или 2-этокси-Нфокислота, п-толуол-сульфокислота, нафталинмоэтоксикарбонил-1,2-дигидрохинолина, в среде но- и нафталиндисульфокислоты, лаурилсерная инертного растворителя, например, галогенирокислота Соли с физиологически неприемлемыми ванного углеводорода, такого как дихлорметан, кислотами, например, пикраты, могут применяться простых эфиров, таких как тетрагидрофуран или для выделения и/или очистки соединений формулы диоксан, амида, такого как диметилформамид или I диметилацетамид, нитрила, такого как ацетонитС другой же стороны, кислоту формулы I взаирил, или в смесях этих растворителей при темперамодействием с основанием можно перевести в одтуре от около -10 до 40, предпочтительно от 0 до ну из ее физиологически приемлемых солей ме30°С Для того чтобы провести внутримолекулярталла или аммония В качестве солей принимают ную циклизацию перед межмолекулярным связыво внимание в частности соли натрия, калия, магванием пептидов, целесообразно работать в разния, кальция и аммония, а также замещенные соли бавленных растворах (принцип разбавления) аммония, например, соли диметил-, диэтил- или диизопропиламмония, соли моноэтанол-, диэтанолВместо соединений формулы II в реакции можили триэтаноламмония, соли циклогексил-, дицикно использовать также пригодные реакционноспологексиламмония, соли дибензилэтилендиаммособные производные этих веществ, например, тания, а также, например, соли Ы-метил-О-глюкамина кие, в которых реакционные группы промежуточно или аргинина или лизина блокированы защитными группами Производные II аминокислот могут применяться, например, в виде Новые соединения формулы I и их физиологиактивированных сложных эфиров, которые предчески приемлемые соли могут использоваться для почтительно- образовывать in situ, например, путем получения фармацевтических препаратов, приводя добавления НОЕКили N-гидроксисукцинимида их в пригодную дозированную форму вместе по меньшей мере с одним наполнителем или вспомоИсходные вещества формулы II являются, как гательным веществом и, при необходимости, вмеправило, новыми Их можно получать известными сте с одним или несколькими другими активными способами, например, приведенными выше метовеществами Получаемые таким образом композидами синтеза пептидов, с отщеплением защитных ции могут использоваться в качестве лекарственгрупп ных средств в медицине или ветеринарии В качеВначале синтезируют, как правило, защищенстве наполнителей пригодны органические или ные сложные эфиры пентапептидов формулы R'-Zнеорганические вещества, которые пригодны для OR", например, BOC-Z-OMe или BOC-Z-OEt, котоэнтерального (орального или ректального), паренрые сначала омыляют с получением кислот фортерального (например, внутривенная инъекция) или мулы R'-Z-OH, например, BOC-Z-OH, от этих кислот локального (например, топическое, накожное, офотщепляют защитную группу R', в результате чего тальмическое или назальное) применения или для получают свободные пептиды формулы H-Z-OH (II) применения в виде аэрозольной ингаляции и котоПревращение в производные циклопептида, рые не реагируют с новыми соединениями, наприсоответствующего соединению формулы I, провомер, вода или водный изотонический раствор повадится также известными методами, которые изренной соли, низшие спирты, растительные масла, вестны для алкилирования аминов, этерификации бензильные спирты, полиэтиленгликоли, глицеринкарбоновых кислот или нуклеофильного замещения триацетат и другие глицериды жирных кислот, жеалифатических атомов углерода и описаны в кажлатина, соевый лецитин, углеводы, такие как лактодом учебнике по органической химии, например, в за или крахмал, стеарат магния, тальк, целлюлоза, J March, Adv Org Chem , John Wiley & Sons N Y , вазелины Для орального применения пригодны в 1985г частности таблетки, драже, капсулы, сиропы, соки и Основание формулы I можно перевести с покапли, особый интерес представляют таблетки и мощью кислоты в соответствующую аддитивную капсулы с устойчивыми к воздействию желудочного кислую соль Для такого взаимодействия испольсока покрытиями или капсульные оболочки Для зуют в особенности кислоты, которые образуют ректального применения предназначены свечи, для физиологически приемлемые соли Так, например, парентерального - растворы, предпочтительно можно применять такие неорганические кислоты, масляные или водные/ а также суспензии, эмулькак, например, серная кислота, азотная кислота, сии и имплантаты Для топического применения галоген водородные кислоты, такие как хлористовопригодны, например, растворы, которые могут придородная кислота или бромистоводородная кисломеняться в виде глазных капель, а также, наприта, фосфорные кислоты, такие как ортофосфорная мер, суспензии, эмульсии, кремы, мази или выжимкислота, сульфаминовая кислота, а также органики Для аэрозольной ингаляции могут применяться ческие кислоты, в частности алифатические, алиаэрозоли, в которых активное начало содержится в циклические, а рал и фати чески е, ароматические или растворенном или суспендированном виде в рабогетероциклические одно- или многоосновные карчем газе или в смеси рабочих газов (например, ССЬ боновые, сульфо- или серные кислоты, например, или фторхлорзамещенные углеводороды) Целемуравьиная кислота, уксусная, пропионовая, пивасообразно применять активное вещество в микролиновая, диэтилуксусная, малоновая, янтарная, низированной форме, причем могут присутствовать пимелиновая, фумаровая, малеиновая, молочная, дополнительно один или несколько физиологичевинная, яблочная, бензойная, салициловая, 2- или ски приемлемых растворителей, например, этанол 3-фенилпропионовая, лимонная, глюконовая, ас 61071 14 13 Ингаляционные растворы могут применяться с посвоих боковых цепях могут модифицироваться тамощью обычных ингаляторов Новые соединения ким образом, что их можно использовать для сомогут также применяться в лиофилизированном единения с анкером полимера, например, через виде, а получаемые лиофилизаты могут примеSH-, ОН-, І\ІН2-или СООН-группы няться, например, для приготовления препаратов При этом возможно использовать необычные для инъекций Инъекции можно осуществлять отаминокислоты, как например, производные фенидельной порцией или в виде непрерывной инфузии лаланина, которые в 4-положении фенильного (например, внутривенно, внутримышечно, подкожкольца содержат меркапто-, гидрокси-, амино- или но или интратекально) Указанные композиции мокарбоксиалкильную цепь, причем функциональная гут быть стерилизованы и/или содержать в себе группа располагается на конце цепи вспомогательные вещества, такие как консерванты, Примерами аминокислотных остатков, боковая стабилизаторы и/или смачиватели, эмульгаторы, цепь которых может служить непосредственно в соли для воздействия на осмотическое давление, качестве анкерной функции, являются, например, буферные вещества, красители и/или ароматизаLys, Arg, Asp, Asn, Glu, Gin, Ser, Thr, Cys или Туг тори При необходимости они могут содержать такПримерами N-терминальных анкеров служат же один или несколько активных веществ, наприостатки, как например, -CO-CnH2n-NH2, -CO-CnH2nмер, один или несколько витаминов ОН, -CO-CnH2n-SH или -СО-СпНгп-СООН при п=2-12, причем длина алкиленовой цепи не критична, и она Соединения согласно изобретению можно исможет быть при необходимости заменена, наприпользовать, как правило, аналогично известным, мер, соответствующими арильными или алкилареализуемым через торговую сеть пептидам, в чарильными остатками стности аналогично описанным в патенте США 4472305 соединениям, преимущественно в дозах от С-терминальными анкерами могут служить, наоколо 0,05 до 500, в особенности от 0,5 до 100мг на пример, -O-CnH2n-SH-, -O-CnH2n-OH, -O-CnH2n-NH2, дозированную форму Суточная доза составляет O-CnH2n-COOH, -NH-CnH2n-SH, -NH-CnH2n-OH, -NHпреимущественно от около 0,01 до 2мг/кг веса тела CnH2n-NH2 или -NH-CnH2n-COO, при этом n и алкиСпециальная доза для определенного пациента леновая цепь соответствуют вышеизложенному зависит однако от самых разнообразных факторов, N- и С-терминальные анкеры могут служить например, активности применяемого специального также в качестве анкерного элемента для функциосоединения, возраста, веса тела, общего состояния нал изированной боковой цепи аминокислотного здоровья, пола, питания, времени и способа приеостатка Имеются в виду, например, аминокислотма, скорости выведения, комбинации лекарственные остатки, такие как Lys (CO-CsHio-NH2), Asp (NHного вещества и тяжести заболевания, по которому СзНб-СООН) или Cys (СзНб-г\ІН2), причем анкер оспроводится терапия Предпочтительно парентетается постоянно связанным с функциональной ральное применение группой боковой цепи Наряду с этим новые соединения формулы I Получение материалов для афиннои хроматомогут применяться в качестве лигандов интегрина графии для очистки интегрина осуществляют в успри изготовлении колонок для проведения афиннои ловиях, которые обычны при конденсации аминохроматографии с целью очистки интегринов кислот и которые известны и были уже описаны в разделе о получении соединений формулы I Лиганд, т е производное пептида формулы I, ковалентне связывается при этом благодаря анНаряду с применением циклопептидов для имкерной функции с полимерным наполнителем мобилизации на полимерных материалах с целью изготовления колонок для афиннои хроматографии В качестве полимерных наполнителей пригодможно использовать соединения с их функционалины известные в химии пептидов полимерные тверзированными боковыми цепями для последующего дые фазы преимущественно с гидрофильными получения производных посредством диагностичесвойствами, например, поперечно сшитые полисаских вспомогательных реактивов, таких как, наприхариды, такие как целлюлоза, сефароза или мер, флюоресцирующие заместители Sephadex®, акриламиды, полимеры на основе полиэтиленгликоля или Tentakelpolymere® Также возможно ввести в боковые цепи остатков X и Y дополнительно функциональные группы, В качестве анкерных функций, которые связытакие как амино-, меркапто- или карбоксигруппы, ваются с полимерными наполнителями, пригодны посредством которых затем можно будет получить преимущественно линейные алки-леновые цепи с конъюгаты с протеинами или другими высокомоле2-12 атомами углерода, которые одним концом свякулярными веществами, например, для иммобилизаны непосредственно с полимером, а на другом зации и/или для получения антител конце содержат функциональную группу, как например, гидрокси-, амино-, меркапто-, малеинимиВыше и ниже все температуры приводятся в до- или -СООН-группу, и которые обладают спо°С В последующих примерах выражение "обычная собностью связываться с С- или N-терминальным переработка" означает, что, при необходимости, участком соответствующего пептида добавляют воду, нейтрализуют, экстрагируют простым эфиром или дихлорметаном, отделяют, сушат При этом возможно, что пептид свяжется с анорганическую фазу сульфатом натрия, фильтруют, кером полимера непосредственно или через втовыпаривают, очищают хроматографией на силикарую анкерную функцию Также возможно, что пепгеле и/или кристаллизацией RZ означает продолтиды, содержащие аминокислотные остатки с жительность ретенции (в минутах) Аналитическое функциональными боковыми цепями, связываются исследование проводилось путем высокоэффекчерез последние с анкерной функцией полимера тивной жидкостной хроматографии на Lichrosorb® Кроме того, определенные аминокислотные осRP select В (7 мкм) , колонка 250х4мм, элюент А татки, входящие в состав пептидов формулы I, в 61071 16 15 0,3% трифторуксусной кислоты в воде, элюент В MS(M+H) 575, 0,3% трифторуксусной кислоты в смеси 2MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-DAib), FAB-MS(M+H) пропанол/вода (8 2), градиент 1-99% В за 50мин 575, при 1 мл/мин Поток и детектирование при 215нм MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-DAib), FAB-MS(M+H) М + - молекулярному пику в масс-спектре, получае575, мом по методу "Fast Atom Bombardment" (бомбарMHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Acpa), RZ=17,1, FABдирование быстрыми атомами) (FAB) MS(M+H) 587, Пример 1 MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Acpa), FAB-MS(M+H) 587, Раствор 1,1 г H-Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-D-PhehPro-ONa [например, приготовленный из FmocMHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-DAcpa), FABNMe-Arg (Mtr) -Gly-Asp(OBut)-D-Phe-hPro-O-Wang, MS(M+H) 587, причем -O-Wang означает используемый в модиMHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-DAcpa), FAB-MS(M+H) фицированных способах Mernfield остаток 4587, оксиметил-феноксметил-полистирольной смолы, MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Tle), RZ=19,1, FABпутем отщепления группы Fmoc с помощью смеси MS(M+H) 589, пиперидин/диметилформамид и отщепления смоMHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Tle), FAB-MS(M+H) лы с помощью смеси трифторуксусная кисло589, та/СНгСЬ (1 1)], в 15мл диметилформамида раз4Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-DTIe), FAB-MS(M+H) бавляют 85мл дихлорметана и смешивают с 50мг 589, НаНСОз После охлаждения в смеси из сухого льда 4Hmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-DTIe), FAB-MS(M+H) и ацетона добавляют 40мкл дифенилфосфорила589, зида После выдерживания в течение 16 часов при 4Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe(4-CI)-Tle), RZ=23,2, комнатной температуре раствор сгущают КонценFAB-MS(M+H) 623, трат фильтруют (колонка Sephadex G10 в смеси MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe(4-CI)-Tle), FABизо-пропанол/вода, 8 2), после чего очищают, как MS(M+H) 623, обычно, высокоэффективной жидкостной хроматоMHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe(4-CI)-DTIe), FABграфией (HPLC) После обработки смесью трифтоMS(M+H) 623, руксусная кислота/НгО (98 2) получают цикло-(АгдMHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe(4-CI)-DTIe), FABGly-Asp-D-Phe-hPro), RZ=18,5, FAB-MS (M+H) 587 MS(M+H) 623, Аналогично получили путем циклизации соот4Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe(4-F)-Tle), RZ=20,2, ветствующих линейных пептидов и отщеплением FAB-MS(M+H) 607, защитных групп MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe(4-F)-Tle), FAB4Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Nle), RZ=25,3, FABMS(M+H) 607, MS(M+H) 589, MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe(4-F)-DTIe), FAB4HKno-(Arg-Gly-Asp-Phe-Ahds), RZ=35,1, FABMS(M+H) 607, MS(M+H) 730, MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe(4-F)-DTIe), FAB4HKno-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Ahds), RZ=35,4, FABMS(M+H) 607 MS(M+H) 730, Пример 2 4HKno-(Arg-Gly-Asp-Phe-DAhds), RZ=35,7, FABРаствор 0,28г qHKno-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-DPheMS(M+H) 730, DhPro) (полученного циклизацией согласно примеру 1) в 8,4мл трифтор-уксусной кислоты, 1,7мл диi_(HKno-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Aos), хлорметана и 0,9мл тиофенола выдерживают в 4Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-DAos), течение 4 часов при комнатной температуре, затем i_(HKno-(Arg-Gly-Asp-Phe-Aos), сгущают и после разбавления водой сушат вымо4Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Nhdg), RZ=36,7, FABраживанием Гель-фильтрованием на Sephadex G MS(M+H) 758, 10 (уксусная кислота/вода, 1 1) с последующей 4Hmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Nhdg), RZ=36,5, FABочисткой препаративной ВЭЖХ при указанных усMS(M+H) 758, ловиях получают цикло-(Агд-СІу-А5р-ОРпе-ОпРго), MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-DNhdg), FABFAB-MS(M+H) 587 MS(M+H) 758, MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-DNhdg), FAB-MS (M+H) Аналогично получили 758, из 4HKno-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Phe-DhPro) MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhg-Nhdg), MHKno-(Arg-Gly-Asp-Phe-DhPro), FAB-MS(M+H) 587, L|Hmo-(Arg-Gly-Asp-Phg-Nridg), MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhg-DNhdg), из MHKno-(Arg(Mtr)-Gly-Asp(OBut)-DPhg-Tle) MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phg-DNhdg), MHmo-(D-Arg-NMeGly-Asp-DPhg-Tle), MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Acha), RZ=25,2, FABиз MHKno-(Arg(Mtr)-Gly-Asp(OEt)-DPhg-hPro) MS(M+H) 601, MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhg-hPro), MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Acha), FAB-MS(M+H) из MHKno-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-Phg-DAhgs) 601, MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phg-DAhgs) MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-DAcha), FABиз qHKno-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-DPhg-Acpa) MS(M+H) 601, L|Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhg-Acpa), MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-DAcha), FAB-MS(M+H) из MHKno-(Arg(Mtr)-Gly-Asp-DPhg-Aos) 601, L|Hmo-(Arg-Gly-Asp-DPhg-Aos) MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Aib), FAB-MS(M+H) Пример 3 575, 80мг L|HKno-(Arg-Gly-Asp-DPhe-hPro) [полученного согласно примеру 1] растворяют от пяти- до MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Aib), RZ=36,5, FAB 61071 18 17 шестикратно в 0,01 М HCI и после каждого этапа чения рН, равного 6,5, стерильно фильтруют, разрастворения сушат вымораживанием После поливают по ампулам для инъекций, лиофилизируют следующей очистки посредством ВЭЖХ получают в стерильных условиях и стерильно укупоривают В MHmo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-hPro)xHCI каждой ампуле содержится 5мг активного вещества Аналогично получали из i_(HKno-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Nle) Пример Б свечи Расплавляют смесь 20г активного вещества 4HKno-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Nle)xHCI, формулы I, ЮОг соевого лецитина и 1400г масла из i_(HKno-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Ahds) какао, заливают в формы и охлаждают Каждый 4HKno-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Ahds)xHCI, суппозиторий содержит 20мг активного вещества из L(HKno-(Arg-Gly-Asp-Phe-Ahds) MHmo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Ahds)xHCI Пример В раствор Пример 4 Готовят раствор, содержащий 1г активного вещества формулы I, 9,38г NaH2PO4 х 2Н2О, 28,48г Для получения афинной фазы 0,9г NNa2HPO4 х 12Н2О и 0,1 г бензалконийхлорида в малеинимидо-(СН2)5-СО-МН-(СН2)з-полимера [по940мл дважды дистиллированной воды Доводят лученного конденсацией І\І-малеинимидо-(СН2)5рН до значения 6,8, доводят до объема 1л и стериСООН Н2Г\І-(СН2)з-полимером] суспендируют в лизуют облучением Данный раствор пригоден для 10мл 0,1М натрийфосфатного буфера при рН 7 и использования в качестве глазных капель добавляют при 4°С эквивалент i_(HKno-(Arg-Gly-AspDPhe(4-N-CO(CH2)2SH)-hPro) [полученного циклиПример Г мазь зацией H-DPhe(4-NH-BOC)-hPro-Arg(Mtr)-Gly-AspВ асептических условиях 500мг активного веОН, отщеплением защитных групп и ацилированищества формулы I смешивают с 99,5г вазелина ем, например, посредством CI-COfCbbhSH] РеакПример Д таблетки ционную смесь перемешивают в течение 4 часов Из смеси, содержащей 100г циклопептида при одновременном нагреве при комнатной темпеформулы I, 1кг лактозы, 600г микрокристалличературе, фильтруют твердый остаток и дважды проской целлюлозы, 600г кукурузного крахмала, ЮОг мывают каждый раз в 10мл буферного раствора поливинилпирролидона, 80г талька и Юг стеарата (рН 7), затем промывают трижды, каждый раз в магния прессуют обычным способом таблетки, ка10мл воды Получают цикло-(Агд-С1у-А5р-ОРпе(4-г\1ждая из которых содержит Юг активного вещества CO(CH2)2S-3-(N-ManeHHHMHflo-(CH2)5-CONH-(CH2)3Пример Е драже полимер)-пРго)) Прессуют таблетки, как указано в примере Д, и наносят на них обычным способом покрытие из Пример 5 сахарозы, кукурузного крахмала, талька, траганта и Аналогично описанному в примере 4 получают красителя путем конденсации полимер -O-fCbbb-Nbb [имеется в торговле] и цикло-(Агд-С1у-А5р-ОРпе(4-г\1Пример Ж капсулы CO(CH2)4-COOH)-hPro) [полученный путем конденКапсулы из твердого желатина наполняют сации адипиновой кислоты с цикло-(Агд(М1т)-С1уобычным способом активным веществом формулы Asp-DPhe(4-NH-BOC)-hPro) в указанных в примере I с таким расчетом, чтобы в каждой из них содер4 условиях] следующую полимерную фазу цикложалось 5мг активного вещества (Arg-Gly-Asp-DPhe(4-N-CO-(CH2)4-CO-NH-(CH2)3-OПример 3, аэрозоль для ингаляции полимер)-пРго) 14г активного вещества формулы I растворяют в Юл изотонического раствора NaCI и разливают Приводимые далее примеры относятся к фарраствор по стандартным аэрозольным емкостям, мацевтическим композициям снабженным насосным механизмом Раствор можПример А ампулы для инъекций но распылять в полость рта или носа При одном ЮОг раствора циклопептида формулы I и 5г нажатии (около 0,1мл) выделяется доза около динатриигид-рофосфата в Зл дважды дистиллиро0,14мг ванной воды доводят 2н соляной кислотой до зна Комп'ютерна верстка О Воробей Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119