Застосування бактерійної комбінованої композиції для отримання дієтичної або фармацевтичної композиції для профілактики або лікування гіпероксалурії

1. Застосування бактерійної комбінованої композиції, що включає штами бактерій (a) Streptococcus thermophilus в суміші з (b) щонайменше одним штамом бактерій, вибраним з групи, що складається з Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum і Bifidobacterium breve або їх сумішей, для отримання дієтичної, фармацевтичної або ветеринарної композиції для профілактики і/або лікування гіпероксалурії і порушень, пов'язаних з нею. 2. Застосування за п.1, де штамом Lactobacillus brevis є штам Lactobacilius brevis CD2, що зберігається за Будапештською угодою в DSM - Німецькій колекції мікроорганізмів і клітинних культур Gmbh, Брауншвейг, Німеччина, з 6 лютого 1998 року під інвентарним номером DSM 11988, або його мутанти або похідні. 3. Застосування за п.1, де співвідношення концентрацій Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium C2 2 (19) 1 3 71621 4 Гіпероксалурія виражається в надмірній присалурія пов'язана з мірою стеатореї і є незвичайсутності оксалатів в сечі (рівень оксалатів в сечі ною при резекціях клубової кишки 40мг/день). Вона може виникати внаслідок генечисло бактерій, які метаболізують оксалати в оботичного дефекту, який змінює метаболізм гліоксидовій кишці (Oxaiobacter formigenes), а також їх лової кислоти з утворенням оксалату замість гліінгібування жовчними солями, що слабо всмоктуцину, також вона може бути побічним ефектом ються, може, ймовірно, вносити свій внесок в рознадмірного споживання багатої оксалатами їжі, виток ЕНО. Нарешті, гіпероксалурію можна спотакої, як шпинат, какао, фундук, перець і чай, або стерігати при тривалому парентеральному лікування, наприклад, препаратами проти ожирінхарчуванні, а також у пацієнтів з колектомією і при ня (наприклад, ORLISTAT). Отже, очевидна корисмінімальному пероральному прийомі їжі, можливо, ність забезпечення харчовою добавкою, здатною за рахунок підвищеного синтезу ендогенного окзнижувати або регулювати присутність оксалатів в салату. сечі. Оксалати слабо розчинні у воді, але сеча моГіпероксалурія представляє переважаючий же стати супернасиченою за рахунок присутності чинник ризику відносно утворення конкрементів в інгібіторів кристалізації. Гіпероксалурія в поєднанні нирках і може викликатися підвищеним всмоктуіз зниженим об'ємом сечі і зниженими рівнями цих ванням оксалатів з ободової кишки або переванінгібіторів, призводить до утворення конкрементів таженням нирок, викликаного гіпероксалурією, як в нирках. це має місце при первинній гіпероксалурії (PH). Відкладення оксалатів в паренхімі нирок може Рівень оксалатів в сечі, мабуть, представляє викликати інтерстиціальний нефрит і нефрокальвирішальний чинник відносно утворення оксалатциноз з гострою або хронічною нирковою недостаних конкрементів у пацієнтів з нормальним видітністю. ленням кальцію з сечею, і оксалатні конкременти Лікування пацієнтів з кальцієвими оксалатними можуть іноді також утворюватися у пацієнтів при конкрементами є комплексним і описується нижче. діалізі при вираженій олігурії і без нирковокам'яній Стадія 1 хвороби в анамнезі, що в рамках даної роботи Підвищене споживання рідин для виділення означає, що може мати місце супернасичення оксечі 3л/день; салатами навіть у разі мінімальної кількості сечі. Харчовий раціон з низьким вмістом оксалатів Добове виділення оксалатів прямо пов'язане з (уникати шпинату, ревеню, буряка, фундука, чаю, об'ємом сечі, споживанням вітаміну С, масою тіла коли, шоколаду, пшеничних висівок, полуниці); і, навпаки, з поглинанням кальцію. Харчовий раціон з низьким рівнем жирів У дослідженні Sutton і Walker на групі людей з (50г/день); ідіопатичним утворенням оксалатних конкрементів Добавки кальцію (1-2г/день); при незначній гіпероксалурії неможливо було поХолестирамін (по 4г чотири рази на день). казати наявність якої-небудь значної зміни ниркоСтадія 2 (якщо конкременти виникають знову, вої регуляції рівня оксалатів, і був зроблений винезважаючи на лікування по стадії 1) сновок про те, що було підвищене харчове Підлужування сечі і добавки цитратів (напринавантаження оксалатами з можливим механізклад, цитрату калію, цитрату натрію = по 30мекв мом підвищеного всмоктування. основи чотири рази на день); Отже, у пацієнтів не з первинною гіпероксалуДобавки магнію (для корекції рівнів в сечі); рією найбільшу увагу необхідно приділяти підвиАлопуринол 300мг/день (якщо конкременти міщеному всмоктуванню оксалатів в кишечнику, яке стять сечову кислоту). створює клінічну картину кишкової гіпероксалурії і Можливість шлунково-кишкової біологічної речасто рецидивуючого утворення конкрементів в гуляції рівня оксалатів відома з 1955 року з даних нирках. Фактично з 1968 року визнається, що нирпо розкладанню оксалатів вмістом рубця корів, і ковокам'яна хвороба представляє ускладнення пізніше, змішаною бактерійною флорою товстого при захворюванні або резекції кишечнику. кишечнику інших травоїдних. Підвищене всмоктування оксалатів в кишечниAllison в 1985 році відніс специфічне розклаку, яке називається кишковою гіпероксалурією дання оксалатів за рахунок Oxalobacter fonaigenes, (ЕНО), залежить щонайменше від двох механізмів. які заселяють товстий кишечник людини, а також Перший пов'язаний з порушенням всмоктування інших тварин. жовчних солей при захворюванні або резекції клуПізніше Ito показав розкладання оксалатів в бової кишки, що приводить до нестачі жовчних продуктах харчування в умовах in vitro за допомосолей і порушення всмоктування жирів. Велика гою Eubacterium. lentum WIH-1. частина оксалатів в харчовому раціоні пов'язана з Згодом було висловлене припущення про те, кальцієм і всмоктується погано, але жири, що слащо відсутність Oxaiobacter formigenes є чинником бо всмоктуються зв'язують кальцій в просвіті киризику відносно виникнення гіпероксалурії у пацієшечнику, знижуючи його кількість, пов'язану з окнтів з кістозним фіброзом. салатом, і приводять до підвищеного Отже, кишкова гіпероксалурія є результатом всмоктування оксалатів. Другий механізм ЕНО підвищеного всмоктування оксалатів в кишечнику пов'язаний з підвищеною проникністю ободової за рахунок підвищеної проникності слизової або кишки для оксалатів, викликаної жирними кислопідвищеної розчинності і біодоступності оксалатів тами, що слабо всмоктуються і жовчними солями, в фекаліях, коли вміст кальцію в харчовому раціоні можливо погіршеної варіаціями епітеліальних знижений. Відсутність Oxalobacter formigenes може оклюзивних сполук ободової кишки, викликаних представляти новий патофізіологічний механізм, зниженням рівня кальцію в просвіті. Дана гіперокякий важливий з точки зору терапії. 5 71621 6 У цей час несподівано було встановлено, що ня між концентраціями Streptococcus thermophilus і наступні бактерії: Streptococcus thermophilus, Lacбактерією роду Lactobacillus, виражені в КОЕ/г tobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactobaкомпозиції, рівно від 1000:1 до 1:1000, в той час, як cillus plantarum, Bifidobacterium infantia, Bifidobacteспіввідношення між концентраціями Streptococcus rium longum і Bifidobacterium breve здатні до theraophilus і бактерією роду Bifidobacterium або зростання в присутності оксалату і/або оксалату, сумішшю бактерій роду Bifidobacterium, виражені в що розкладається. КОЕ/г композиції, дорівнює від 1000:1 до 1:1000. Отже, даний винахід забезпечує застосування Загальна концентрація бактерій переважно щонайменше одного штаму наступних бактерій: складає від 106 до 1012 КОЕ/г композиції. Streptococcus thermophilus, Lactobacillus rbrevis, Згідно з винаходом, композиція може додаткоLactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, во включати або вводитися в комбінації з: Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum і речовинами, здатними зв'язувати оксалати в Bifidobacterium breve для отримання дієтичної просвіті кишечнику, зокрема, холестираміном (наі/або фармацевтичної композиції для профілактики приклад, 0,5-4г/день) і органічними гідроколоїдами і/або лікування гіпероксалурії і порушень, пов'язаморського походження; них з нею. вітамінами, зокрема, В6 (наприклад, 20Переважно штамом Lactobacillus brevis є штам 200мг/день) і С (наприклад, 0,1-2г/день); Lactobacillus brevis CD2, що зберігається за Будаокислом магнію (наприклад, 50-600мг/день); пештською угодою в DSM - Німецькій колекції міккальцієм (наприклад, 0,5-2г/день); роорганізмів і клітинних культур Gmbh, Braunалопуринолом (наприклад, 50-300мг/день); schweig, Німеччина, з 6 лютого 1998 року під ферментами, молочнокислими бактеріями, гоінвентарним номером DSM 11988, або його мутанрмонами і діуретиками, імуномодуляторами, проти або похідні. типухлинними препаратами, ліпідами, підлужуваКонкретніше, гіпероксалурія і порушення, почами сечі, підкислювачами сечі, насиченими і в'язані з нею, включають кишкову гіпероксалурію, ненасиченими жирними кислотами і фосфоліпідаутворення кальцієвих оксалатних каменів в нирми; ках, гіпероксалурію внаслідок запальних захворюпрепаратами, що приводять до гіпероксалурії вань кишечнику, ниркову недостатність, везикуляяк побічної дії, наприклад, препаратами проти рний калькулез, кардіопатію в результаті ожиріння (наприклад, ORLISTAT). гіпероксалурії, кістозний фіброз і вульводинію. В основному композицію можна вводити пероЗастосування винаходу включає застосування рально або в просвіт кишечнику, або субаквально, в області ветеринарії. у вигляді гранул, таблеток, капсул, супозиторіїв Згідно з винаходом дієтична і/або фармацевабо клізми для кишечнику. тична композиції здатна заселяти вказаними бакВинахід також забезпечує продукт харчування теріями кишечник суб'єктів при ризику виникнення на основі шоколаду, какао, спаржі, томата, напоїв гіпероксалурії або порушень в результаті гіперокдля питва/рідин, шпинату, волоських горіхів, фунсалурії, або порушень внаслідок утворення кальцідука, клітковини, злакових, картоплі, чаю і арахісоєвих оксалатних конкрементів. вого масла, що містить щонайменше один штам Винахід також забезпечує дієтичн у або фарбактерій, вибраний з Streptococcus thermophilus, мацевтичну композицію, що включає щонайменше Lactobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus, Lactoодин штам наступних бактерії: Streptococcus therbacillus plantarum, Bifidobacterium infantis, Bifidomophilus, Lactobacillus brevis, Lactobacillus acibacterium longum і Bifidobacterium breve, в кількості dophilus, Lactobacillus plantarum, Bifidobacterium достатній для заселення кишечнику суб'єктів при infantis, Bifidobacterium longum і Bifidobacterium ризику виникнення гіпероксалурії або порушень, breve. виникаючих в результаті гіпероксалурії. Згідно з одним з втілень винаходу штам StrepНарешті, винахід забезпечує спосіб профілакtococcus thermophilus змішується з штамом Lactoтики і/або лікування гіпероксалурії і порушень, поbacillus, вибраним з групи, що складається з Lacв'язаних з нею, введенням суб'єкту при ризику виtobacillus brevis, Lactobacillus acidophilus i никнення гіпероксалурії або порушення, Lactobacillus plantarum або їх сумішей. Переважно виникаючого в результаті гіпероксалурії, від 0,5 до штамом Lactobacillus brevis є штам Lactobacillus 4г/день композиції згідно з винаходом. brevis CD2, що зберігається за Будапештською «Суб'єкти» в тому значенні, в якому цей термін угодою в DSM - Німецької колекції мікроорганізмів і тут використовується, включає людей і тварин клітинних культур Gmbh, Braunschweig, Німеччина, загалом, і, зокрема, сільськогосподарських тварин, з 6 лютого 1998 року під інвентарний номером спортивних тварин і домашніх тварин. DSM 11988, або його мутанти і похідні. Приклад 1. Чисті культури Згідно з іншим втіленням винаходу штам Для наступного досліду використовували BifiStreptococcus thermophilus змішується з штамом dobacterium infantis, Lactobacillus acidophilus, LacBifidobacterium, вибраним з групи, що складається tobacillus plantarum, Lactobacillus brevis і Streptoз Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium longum. i coccus thermophilus. Bifidobacterium breve або їх сумішей. У цьому виВсі штами зберігали ліофілізованими в холопадку переважно, щоб співвідношення між концендильнику. Bifidobacterium infantis культивували в траціями Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium бульйоні MRS (Difco)+0,5% глюкози, інкубували в longum і Bifidobacterium breve в суміші, виражені в анаеробних умовах при 37°С протягом 18год. в КОЕ/г композиції, переважно дорівнювали 1:1:1. Gas Раk в атмосфері СО2 і Н2, Lactobacillus aciЗгідно з переважним втіленням співвідношенdophilus і Lactobacillus plantamm в бульйоні MRS 7 71621 8 (Difco), інкубували при 37°С протягом 18год., LacMannheim), специфічного для даної кислоти. Анаtobacillus brevis в бульйоні MRS (Difco), інкубували ліз проводили на спектрофотометрі (Perkin Elmer при 30°С протягом 18год., і Streptococcus themoLambda 5) при 340нм. philus в бульйоні Ml7 (Difco)+0,5% лактози і інкубуРезультати вали при 37°С протягом 18год. Як випливає з таблиці 1, приведеної нижче, Середовища все штами в основному ростуть в присутності Для приготування культуральних середовищ, 10мМ оксалату амонію, в той час, як концентрація що містять 10мМ і 20мМ оксалату амонію (BDH), 20мМ частково інгібує зростання мікробів, особлидо 10мл основного середовища (складеного таким во у випадку L.acidophilus і S.thermophilus. чином; 10г протеозного пептону №3 (Difco)+5г дріОднак, ймовірно, кореляція між зростанням жджового екстракту (Difco)+1мл Твіну-80 (Difco)+2г бактерій і розкладанням оксалату відсутня. Так, КН2РО4 (BDH)+5г ацетату натрію (BDH)+2г дигідL.plantarum і L.brevis викликають незначне, якщо рогенцитрату амонію (MERCK)+0,05г MgSO4. 7H2O взагалі таке є, розкладання оксалату, навіть якщо (MERCK)+0,05г MnSO 4 (MERCK)+вода до 500мл і вони показують значне зростання. стерилізованого при 121°С протягом 15хв.) додаЗ іншого боку, L.acidophilus і S.thermophilus вали 10мл розчинів наступних цукрів і оксалату розкладають оксалат при обох концентраціях, неамонію, стерилізованих пропусканням через зважаючи на знижене зростання в присутності фільтр 0,45мкм, а саме: 20мМ оксалату амонію. Нарешті, В.infantis виявляє для L. acidophilus, L. plantarum і L. brevis дуже хорошу активність відносно деградації і не 1Α: 20мМ оксалату амонію+40г/л глюкози інгібується під дією оксалату в будь-якій концент(BDH) рації. 1В: 40мМ оксалату амонію+40г/л глюкози для Таблиця 1 S.thermophilus 2А: 20мМ оксалату амонію+40г/л глюко10мМ 20мМ зи+10г/л лактози (Difco) РозВміст мікро бів кла- Вміст мікро бів 2В: 40мМ оксалату амонію+40г/л глюкоРоз6 6 (КОЕ/мл´10 ) дан- (КОЕ/мл´10 ) зи+10г/л лактози кланя % дан-ня для В.infantis Кінцев е % Кінцев е 3А: 20мМ оксалату амонію +50г/л глюкози t0 T0 зросзрос-тання Щав лев а кислота тання 3В: 40мМ оксалату амонію +50г/л глюкози. L.brev is 0,94 27 130 0,73 27 120 Після змішування проби, помічені А, містили L.acidophilus 11,79 25 130 3,41 25 52 10мМ оксалату амонію, в той час, як проби, поміL.plantarum 1,42 32 270 0,00 32 230 чені В, містили 20мМ оксалату амонію. S.thermophilus 2,31, 2,5 28 3,06 2,5 9 Культуральні бульйони потім засівали 10% В.inf antis 5,26 36 300 2,18 36 230 свіжою культурою і інкубували у відповідних для кожного описаного вище штаму умовах. Приклад 2. Випадки У кожній зростаючій бульйонний культурі підПісля отриманої згоди 7 пацієнтам з гіперокраховували число мікроорганізмів, що знаходяться салурією вводили Streptococcus thennophilus пев культуральних середовищах у відповідних уморорально по 6г в день протягом 3 тижнів, і оксалувах і, зокрема: рію оцінювали протягом 24год. на нульовий В.infantis на агарі HHD (HI Media Laboratories) момент часу і через 3 тижні. інкубували в анаеробних умовах при 37°С протяОксалати в сечі визначали стандартними мегом 3 діб; тодами, що використовуються в клінічній біохімії, і L.acidophilus на агарі MRS (Difco) інкубували в виражали в мг оксалатів в сечі, зібраній протягом анаеробних умовах при 37°С протягом 3 діб; 24год. L.plantarum і L.brevis на агарі MRS (Difco) інкуЧерез 3 тижні результати по оксалемії були бували в анаеробних умовах при 37°С протягом 3 наступними: діб; S.themophilus на агарі МІ 7 (Difco) інкубували Пацієнт До Після 1 50 7 при 37°С протягом 2 діб. 2 47 30 Визначення щавлевої кислоти 3 41 31 Підготовка проб 4 95 56 5 62 14 Бульйонні культури пастеризували при 90°С 6 58 34 протягом 15хв., потім центрифугували при 7 49 12 5000об./хв. протягом 10хв. і нарешті супернатант фільтрували через фільтр 0,45мкм. Абсолютно очевидно, що у пацієнтів з високиМетод ми рівнями оксалатів в сечі, лікування привело до Концентрацію щавлевої кислоти визначали за помітного зниження концентрацій оксалатів. допомогою набору «Щавлева кислота» (Boehringer Комп’ютерна в ерстка Т. Чепелев а Підписне Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601