Тартратна сіль заміщеного дипептиду, спосіб її одержання, проміжні сполуки та спосіб їх одержання, фармацевтична композиція (варіанти), спосіб підвищення рівнів ендогенного гормону росту та спосіб лікування або

1 Сіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки формули (Е) н який полягає у взаємодії сполуки формули (D) /—CF3 (D) Н з (D)-BHHHOHD к и с л о т о ю а б о (І_)-винною кислотою у суміші ацетон вода із співвідношенням від приблизно 8 1 до приблизно 9 1 при температурі у межах від приблизно 0°С до кімнатної температури 7 Спосіб згідно з п 6, в якому (О)-винна кислота взаємодіє зі сполукою формули (D) і сполука формули (Е) має R-конфігурацію 8 Спосіб одержання сполуки формули (J) ,F q (О 1 ГО 2 Сіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки формули І згідно з п 1, яка має стереохімічну конфігурацію За-S, 1-R 3 Сіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки формули І згідно з п 1, яка має стереохімічну конфігурацію За-S, 1-S 4 Сіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки формули І згідно з п 1, яка має стереохімічну конфігурацію За-R, 1-S 5 Сіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки формули І згідно з п 1, яка має стереохімічну конфігурацію За-R, 1-R 6 Спосіб одержання солі (D)-BHHHOI КИСЛОТИ або (І_)-винноі кислоти сполуки формули (Е) (J) F,C який полягає у взаємодії сполуки формули (Е) -CF, (Е) зі сполукою формули (X) Ю 53716 (X) H Me (K) NH-Prt Me в якій Pit являє собою амінозахисну групу і X є ОН, -О(Сі-С4)алкілом або галогеном, в присутності органічної основи та пептидзв'язуючого реагенту при температурі від приблизно -78°С до приблизно -20°С 9 Спосіб згідно з п 8, в якому пептидзв'язуючий реагент являє собою циклічний ангідрид 1 пропанфосфонової кислоти і сполука формули X має R-конфігурацію і сполука формули Е має Rконфігурацію 10 Спосіб згідно з п 9, в якому Pit являє собою трет-бутоксикарбоніл 11 Спосіб одержання солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І взаємодії сполуки формули (К) з (І_)-(+)-винною кислотою в реакційно інертному розчиннику з одержанням солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І 12 Спосіб згідно з п 11, в якому Pit являє собою трет-бутоксикарбоніл 13 Спосіб згідно з п 12, в якому пептидзв'язуючий реагент являє собою циклічний ангідрид 1 пропанфосфонової кислоти і сполука формули І має абсолютну і відносну кофігурацію 3a-(R), 1-(R) 14 Спосіб підвищення рівнів ендогенного гормону росту у людини або тварини, який полягає в уведенні такій людині або тварині ефективної КІЛЬКОСТІ СОЛІ (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І ЗГІДНО З П 1 який полягає у взаємодії сполуки формули (Е) /-CF, (Е) зі сполукою формули (X) -F (X) в якій Pit являє собою амінозахисну групу і X є ОН, -О(Сі-С4)алкілом або галогеном, в присутності органічної основи та пептидзв'язуючого реагенту при температурі від приблизно -78°С до приблизно -20°С, з одержанням сполуки формули (J) (J) знятті захисту зі сполуки формули (J) при прийнятних для цього умовах з одержанням сполуки формули (К) 15 Фармацевтична композиція, яка містить фармацевтично прийнятний носій та сіль (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І згідно з п 1 16 Фармацевтична композиція, що придатна для підвищення ендогенного продукування або вивільнення гормону росту у людини або тварини, яка містить фармацевтично прийнятний носій та ефективну КІЛЬКІСТЬ солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І згідно з п 1 та засіб, що підсилює секрецію гормону росту, вибраний з групи, що складається з GHRP-6, Гексареліну, GHRP-1, фактор вивільнення гормону росту (GRF), IGF-1, IGF-2 та В-НТ920 або їх аналогів 17 Спосіб лікування або профілактики остеопорозу, який полягає в уведенні людині або тварині, що потребує такого лікування або профілактики, солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І згідно з п 1 в КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування або профілактики остеопорозу 18 Спосіб лікування або профілактики захворювань або станів, які можуть бути виліковані або яким можна запобігти за допомогою гормону росту, який полягає в уведенні людині або тварині, що потребує такого лікування або профілактики, солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І згідно з п 1 в КІЛЬКОСТІ, ефективній для стимулювання вивільнення ендогенного гормону росту 19 Спосіб згідно з п 18, в якому захворюванням або станом є застійна серцева недостатність, ожиріння або виснаження, пов'язані з віком 20 Спосіб згідно з п 19, в якому захворюванням або станом є застійна серцева недостатність 21 Спосіб згідно з п 19, в якому захворюванням або станом є виснаження, пов'язане з віком 22 Спосіб прискорення зростання кісток після перелому, послаблення катаболізму протеїну після великої операції, зменшення кахексії та втрати протеїну внаслідок хронічних захворювань, прискорення загоювання ран або прискорення одужання пацієнтів з опіками або пацієнтів, що потерпіли внаслідок значного хірургічного втручання, який полягає в уведенні ссавцю, що потребує такого лікування, солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки 53716 формули І згідно з п 1 в КІЛЬКОСТІ, ефективній для лікування, ефективної КІЛЬКОСТІ СОЛІ (І_)-(+)-ВИННОІ стимулювання вивільнення ендогенного гормону кислоти сполуки формули І згідно з п 1 росту 36 Спосіб стимулювання росту у дітей, що мають 23 Спосіб згідно з п 22, який призначений для дефіцит гормону росту, який полягає в уведенні прискорення одужання пацієнтів, що потерпіли дитині з дефіцитом гормону росту ефективної КІЛЬвнаслідок значного хірургічного втручання КОСТІ солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І 24 Спосіб згідно з п 22, який призначений для ЗГІДНО З П 1 прискорення зростання кісток після перелому 37 Спосіб лікування резистентності до інсуліну у ссавця, який полягає в уведенні згаданому ссавцю 25 Спосіб покращення м'язової сили, рухомості, ефективної КІЛЬКОСТІ солі (І_)-(+)-винноі кислоти підтримання пружності шкіри, метаболічного госполуки формули І згідно з п 1 меостазу або ниркового гомеостазу, який полягає в уведенні людині або тварині, що потребує такого 38 Спосіб згідно з п 37, в якому станом, пов'язалікування, солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки фоним з резистентністю до інсуліну, є діабет І типу, рмули І згідно з п 1 в КІЛЬКОСТІ, ефективній для діабет II типу, гіперглікемія, послаблена толерантстимулювання вивільнення ендогенного гормону ність до глюкози або інсулін-резистентний синдросту ром 26 Спосіб лікування або профілактики остеопоро39 Спосіб згідно з п 37, в якому станом, зу, який полягає в уведенні людині або тварині з пов'язаним з резистентністю до інсуліну є стан, остеопорозом ефективної КІЛЬКОСТІ бісфосфонатобумовлений ожирінням або похилим віком ноі сполуки та солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки 40 Спосіб підвищення рівнів ендогенного гормону формули І згідно з п 1 росту, який полягає в уведенні людині або тварині, яка має потребу в цьому, ефективних кількос27 Спосіб лікування остеопорозу згідно з п 26, в тей антагоніста функціонального соматостатину та якому бісфосфонатною сполукою є ібандронат солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 згі28 Спосіб лікування остеопорозу згідно з п 26, в дно з п 1 якому бісфосфонатною сполукою є алендронат 29 Спосіб лікування або профілактики остеопоро41 Спосіб згідно з п 40, в якому антагоністом зу, який полягає в уведенні людині або тварині з функціонального соматостатину є агоніст альфа-2остеопорозом ефективної КІЛЬКОСТІ естрогену або адренерпчного рецептору Премарину®та солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки 42 Спосіб лікування або профілактики застійної формули І згідно з п 1,1, необов'язково, прогестесерцевої недостатності, ожиріння або виснаження, рону пов'язаних з віком, який полягає в уведенні людині або тварині, яка цього потребує, ефективних кіль30 Спосіб лікування остеопорозу, який полягає в костей антагоніста функціонального соматостатиуведенні людині або тварині з остеопорозом ефекну та солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І тивної КІЛЬКОСТІ кальцитоніну та солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули І згідно з п 1 ЗГІДНО З П 1 31 Спосіб підвищення рівнів IGF-1 у людини або 43 R.S-енантюмерна суміш, R-енантюмер або Sтварини, у якої спостерігається дефіцит IGF-1, енантюмер сполуки формули який полягає в уведенні людині або тварині з дефіцитом IGF-1 ефективної КІЛЬКОСТІ солі (!_)-(+)винної кислоти сполуки формули І згідно з п 1 32 Спосіб лікування остеопорозу, який полягає в уведенні людині або тварині з остеопорозом ефективної КІЛЬКОСТІ агоніста або антагоніста естрогену Н та солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 згідно з п 1 44 Сіль (D)-BHHHOI КИСЛОТИ або (І_)-винноі кислоти 33 Спосіб згідно з п 32, в якому агоністом або сполуки згідно з п 43 антагоністом естрогену є тамоксифен, дролокси45 3a-(R,S),1-(R) діастереомерна суміш, 3a-(R),1фен, ралоксифен або ідоксифен (R) діастереомер або 3a-(S),1-(R) діастереомер сполуки формули 34 Спосіб згідно з п 32, в якому агоністом або антагоністом естрогену є цис-6-(4-фторфеніл)-5-[4(2-піперидин-1-ілетокси)феніл]-5,6,7,8тетрапдронафтален-2-ол, (-)-цис-6-феніл-5-[4-(2піролідин-1-ілетокси)феніл]-5,6,7,8тетрапдронафтален-2-ол, цис-6-феніл-5-[4-(2піролідин-1-ілетокси)феніл]-5,6,7,8F,C тетрапдронафтален-2-ол, цис-1-[6'піролідиноетокси-3'-піридил]-2-феніл-6-пдрокси1,2,3,4-тетрапдронафтален, 1-(4'піролідиноетоксифеніл)-2-(4"-фторфеніл)-6пдрокси-1,2,3,4-тетрапдроізохінолін, цис-6-(4в якій Pit ЯВЛЯЄ собою амінозахисну групу, вибрану пдроксифеніл)-5-[4-(2-піперидин-1-ілетокси)феніл]з групи, що складається з t-BOC, FMOC та CBZ 5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-ол, 46 R.S-енантюмерна суміш, R-енантюмер або Sенантюмер сполуки формули або 1-(4'-піролідинолетоксифеніл)-2-феніл-6пдрокси-1,2,3,4-тетрапдроізохінолін 35 Спосіб збільшення м'язової маси, який полягає в уведенні людині або тварині, яка потребує такого 53716 47 R.S-енантюмерна суміш, R-енантюмер або Sенантюмер сполуки формули 8 ген і Pit. являє собою амінозахисну групу 48 Сполука згідно з п 47, в якій X являє собою ОН, Pit ЯВЛЯЄ собою ВОС та хіральний центр має R-конфігурацію 49 Спосіб лікування розладів сну у ссавця, що страждає від розладів сну, який полягає в уведенні згаданому ссавцю ефективної КІЛЬКОСТІ СОЛІ (!_)-(+)винної кислоти сполуки формули 1 згідно з п 1 в якій X являє собою ОН, -О(Сі-С4)алкіл або гало Винахід стосується солі (І_)-(+)-винноі кислоти 2-аміно-І\І-{1-(Р)-(2,4-дифторбензил-оксиметил)-2оксо-2-[3-оксо-За-(Р)-піридин-2-ілметил-2-(2,2,2трифторетил)-2,3,3а,4,6,7-гексапдропіразоло[4,3с]піридин-5-іл]етил}-метилпропюнаміду, яка являє собою засіб, що стимулює секрецію гормону росту Гормон росту (ГР), що продукується гіпофізом, стимулює ріст усіх тканин тіла, що здатні до росту Зокрема, відомо, що гормон росту проявляє наступну дію на метаболічні процеси організму 1 Підвищує швидкість синтезу протеїну у всіх клітинах організму, 2 Зменшує швидкість використання вуглеводнів у клітинах організму, 3 Підвищує мобілізацію вільних жирних кислот і використання жирних кислот для одержання енергії Дефіцит гормону росту приводить до різноманітних медичних розладів У дітей це викликає карликовість У ПОВНОЛІТНІХ, Наслідком набутого дефіциту ГР є глобальне зменшення ваги тіла, наслідком якого є збільшення ваги жирових відкладень, особливо в тулубній частині тіла Зменшення кісткової маси і маси серцевого м'язу та сили м'язів приводить до суттєвого зменшення рухливості Також зменшується ЩІЛЬНІСТЬ КІСТОК Призначення екзогенного гормону росту показало обернення багатьох з метаболічних змін Додатковими перевагами терапії є зменшення LDL холестеролу і покращення психологічного стану У випадку, коли підвищення рівню гормону росту є бажаним, проблема вирішувалась шляхом введення екзогенного гормону росту або уведенням агенту, що стимулював продукування гормону росту і/або його вивільнення В будь-якому випадку пептидна природа сполуки потребує її уведення за допомогою ін'єкції Спочатку джерелом гормону росту був екстракт з гіпофізу трупів Результатом цього є досить висока ціна продукту і разом з цим велика доля ризику, що хвороба пов'язана з джерелом гіпофізу могла бути передана реципієнту, якому призначили гормон росту (наприклад, хвороба Якоба-Крейтцфелда) Нещодавно, став доступним рекомбінатний гормон росту, для якого відсутній будь-який ризик передачі захворювання, але який все ще залишається досить дорогим продуктом і який потрібно вводити шляхом ін'єкції або за допомогою назального аерозолю БІЛЬШІСТЬ дефіцитів ГР викликано дефектами вивільнення ГР, не первинними дефектами синтезу гіпофізом ГР Таким чином, альтернативною стратегією для нормалізації рівня ГР у сироватці є стимулювання його вивільнення з соматотропних клітин Підвищення секреції ГР може бути досягнуто шляхом стимулювання або інгібування різних нейротрансмітерних систем у мозку і гіпоталамусі Результатом цього є одержання синтетичних гормон росту-вивільняючих агентів, що стимулюють секрецію гіпофізом ГР і можуть мати деякі переваги, стосовно ціни і незручностей ГР-заміщувальної терапії Діючи через фізіологічні регуляторні механізми, найбільш бажані агенти будуть стимулювати секрецію ГР гіпофізом, а надлишкових рівнів ГР, що пов'язані з небажаними сторонніми ефектами уведення екзогенного ГР, можна уникнути дією контурів негативного зворотного зв'язку ФІЗІОЛОГІЧНИМИ І фармакологічними стимуляторами секреції ГР є - аргінін, L-3,4дипдроксифенілаланш (L-ДОФА), глюкагон, вазопресин і інсулін-викликана гіпоглікемія, а також як такі дії, як сон і фізичні вправи, що опосередковано викликають вивільнення гормону росту з гіпофізу, діючи певним чином на гіпоталамус, можливо, або щоб зменшити секрецію соматостатину, або щоб підвищити секрецію відомого гормон ростувивільнюючого фактору (ГРВФ) чи невідомого ендогенного гормон росту-вивільнюючого гормону, або усіх їх Винахід також стосується способу лікування інсулін-резистентних станів, таких як інсуліннезалежні діабети (ІНД) та послаблення контролю рівня глюкози в крові, пов'язане з ожирінням та старінням у ссавців, який полягає в уведенні згаданому ссавцю ефективної КІЛЬКОСТІ L-(+)тартратної солі сполуки формули 1, представленої нижче Були одержані ІНШІ сполуки, що стимулюють вивільнення ендогенного гормону росту, такі як, аналоги пептидних сполук подібних до ГРФ або пептидів, описанихв патенті US 4,411,890 Ці пептиди хоча і значно менші, ніж гормони росту, все ж залишаються чутливими до дії протеаз Як і для більшості пептидів їх потенціал оральної бюдосяЖНОСТІ ДОСИТЬ НИЗЬКИЙ WO 94/13696 стосується деяких спіропептидів і гомологів, що стимулюють вивільнення гормону 9 53716 10 росту Переважні сполуки загальної структури на(І_)-винноі кислоти сполуки формули (Е), ведено нижче (Е) який полягає у взаємодії сполуки формули (D), (D) WO 94/11012 стосується певних дипептидів, що стимулюють вивільнення гормону росту Такі дипептиди мають загальну структуру RS 1 А—N. \ Сполуки WO 94/11012 і WO 94/13696, як вказується в цих публікаціях, є корисними при лікуванні остеопорозу в комбінації з гормоном паращитовидної залози або бісфосфонату Фармацевтичне прийнятні солі сполуки формули 1 даної заявки та вільна основа сполуки формули 1 даного винаходу розкриті та заявлені у заявці РСТ, діловодство за якою ще закінчено, № РСТ/ІВ96/01353 з міжнародною датою подання 4 грудня 1996, продовженням якої є дана заявка Було виявлено, що І_-(+)-тартратна сіль сполуки формули 1, наведеної нижче, може виділена в кристалічній формі, яка має корисні властивості, такі як зручність при виготовленні рецептур, висока розчинність, достатня стабільність та легке очищення у порівнянні з некристалічною формою Даним винаходом забезпечується L-(+)тартратна сіль сполуки формули 1 (1) Позначка * вказує на стереохімічний центр Переважна сполука формули 1 являє собою стереохімічну суміш або окремі ізомери, що мають конфігурацію 3a-(S),1-(R), 3a-(S),1-(S), 3a-(R),1-(S), та/або 3a-(R), 1-(R) ізомери Даний винахід також забезпечує спосіб одержання солі (D)-BHHHOI КИСЛОТИ або з (D)-BHHHOHD кислотою або (І_)-винною кислотою у суміші ацетон вода у співвідношенні від приблизно 8 1 до приблизно 9 1 при температурі у межах від приблизно 0°С до кімнатної температури Переважним процесом є процес, в якому (D)винна кислота взаємодіє зі сполукою формули (D), а сполука формули (Е) має R-конфігурацію, спосіб одержання сполуки формули (J), FX Ж А . А 'Не' ,NH-Prt (J) 'Me який полягає у взаємодії сполуки формули (Е), (Е) зі сполукою формули (X), (X) в якій Pit ЯВЛЯЄ собою амін-захисну групу і X є ОН, -О(Сі-С4)алкіл або гало, в присутності органічної основи та зв'язуючого пептид реагенту при температурі від приблизно -78°С до приблизно 20°С Переважним процесом, про який йде мова, є процес, в якому зв'язуючий пептид реагент являє собою циклічний ангідрид 1-пропанфосфоновоі кислоти і сполука формули X має R-конфігурацію і сполука формули Е має R-конфігурацію Ще більш переважним є випадок, коли в процесі, про який йде мова, Pit. являє собою трет-бутоксикарбоніл, спосіб одержання солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1, 53716 12 В іншому аспекті даний винахід стосується R.S-енантюмерноі суміші, R-енантюмеру або S-енантюмеру сполуки формули (1) Н який полягає у взаємодії сполуки формули (Е), (Е) в якій сіль (D)-BHHHOI кислоти або (І_)-винноі кислоти є переважною, 3a-(R,S),1-(R) діастереомерної суміші, За(R),1-(R) діастереомеру або 3a-(S),1-(R) діастереомеру сполуки формули, зі сполукою формули (X), F,C (X) в якій Pit ЯВЛЯЄ собою амін-захисну групу і X є ОН, -О(Сі-С4)алкіл або гало, в присутності органічної основи та зв'язуючого пептид реагенту при температурі від приблизно -78°С до приблизно 20°С, з одержанням сполуки формули (J), в якій Pit ЯВЛЯЄ собою амін-захисну групу, вибрану з групи, що складається з t-BOC, FMOC та CBZ, та P.S-енантюмерноі суміші, R-енантюмеру або S-енантюмеру сполуки формули, О О OEt (J) P.S-енантюмерноі суміші, R-енантюмеру або S-енантюмеру сполуки формули, знятті захисту зі сполуки формули (J) при прийнятних умовах для цього умовах з одержанням сполуки формули (К), (К) F,C взаємодії сполуки формули (К) з (!_)-(+)винною кислотою в реакційне інертному розчиннику з одержанням солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 Переважним випадком процесу, про який йде мова, є випадок, коли Pit являє собою трет-бутоксикарбоніл, ще більш переважним випадком даного процесу є такий, в якому зв'язуючий пептид реагент являє собою циклічний ангідрид 1-пропанфосфоновоі кислоти і сполука формули І має абсолютну і відносну конфігурацію За(R), 1-(R) Me Me в якій X являє собою ОН, -О(Сі-С4)алкіл або гало і Pit. являє собою амін-захисну групу, і в якій переважним є коли X являє собою ОН, Pit являє собою ВОС та оптичний центр має Rконфігурацію Ще в одному аспекті даний винахід передбачує (де сполука формули (1) представлена вище) спосіб підвищення рівнів ендогенного гормону росту у людини або інших тварин, який полягає в уведенні такій людині або тварині ефективної КІЛЬКОСТІ СОЛІ (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1, фармацевтичні композиції, які містять фармацевтичне прийнятний носій та КІЛЬКІСТЬ СОЛІ (!_)-(+)ВИННОІ кислоти сполуки формули 1, фармацевтичні композиції, що придатні для підвищення ендогенного продукування або вивільнення гормону росту у людини або інших тварин, які містять фармацевтичне прийнятний носій та 14 13 53716 ефективну КІЛЬКІСТЬ солі (І_)-(+)-винноі кислоти зом ефективної КІЛЬКОСТІ кальцитоншу та солі (L)сполуки формули 1 згідно з п 1 та засіб, що підси(+)-винноі кислоти сполуки формули 1, лює секрецію гормону росту, вибраний з групи, що способи підвищення рівнів IGF-1 у людини або складається з GHRF-6, Гексареліну, GHRF-1, горіншої тварини, у якої спостерігається дефіцит IGFмон росту вивільнюючи фактор (ФГР), IGF-1, IGF-2 1, які полягають в уведенні людині або ІНШІЙ твата В-НТ920 або їх аналог, рині з дефіцитом IGF-1 ефективної КІЛЬКОСТІ СОЛІ (І_)-(+)-ВИННОІ кислоти сполуки формули 1, способи лікування або попередження остеопорозу, які полягають в уведенні людині або ІНШІЙ способи лікування остеопорозу, які полягають тварині, що потребує такого лікування або попев уведенні людині або ІНШІЙ тварині з остеопороредження КІЛЬКОСТІ солі (І_-(+)-винноі кислоти спозом ефективної КІЛЬКОСТІ агоніста або антагоніста луки формули 1, яка є ефективною в лікуванні або естрогену та солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки попередженні остеопорозу, формули 1, переважним є спосіб, в якому агоністом або антагоністом естрогену є тамоксифен, способи лікування або попередження захводролоксифен, ралоксифен або ідоксифен, також рювань або станів, які можуть бути вилікувані або переважним є спосіб, в якому агоністом або антапопереджені гормоном росту, які полягають в увегоністом естрогену є цис-6-(4-фторофеніл)-5-[4-(2денні людині або ІНШІЙ тварині, що потребує такопіперидин-1-іл-етокси)феніл]-5,6,7,8го лікування або попередження КІЛЬКОСТІ СОЛІ (L)тетрапдронафтален-2-ол, (-)-цис-6-феніл-5-[4-(2(+)-винноі кислоти сполуки формули 1, яка є ефекпіролідин-1-ілетокси)феніл]-5,6,7,8тивною в сприянні вивільненню ендогенного гортетрапдронафтален-2-ол, цис-6-феніл-5-[4-(2мону росту, переважним є спосіб, в якому захвопіролідин-1-ілетокси)феніл]-5,6,7,8рюванням або станом є застійна серцева недостатетрапдронафтален-2-ол, цис-1-[6'тність, ожиріння або виснаження, пов'язані з віком, також переважним є спосіб, в якому захворюванпіролідинетокси-3'-піридил]-2-феніл-6-пдроксиням або станом є застійна серцева недостатність, 1,2,3,4-тетрапдронафтален, 1-(4'більш переважним є спосіб, в якому захворюванпіролідинетоксифеніл)-2-(4"-фторофеніл)-6ням або станом є виснаження, пов'язане з віком, пдрокси-1,2,3,4-тетрапдроізохінолін, цис-6-(4пдроксифеніл)-5-[4-(2-піперидин-1-ілспособи прискорення відновлення перелому етокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-ол, кісток, послаблення катаболізму протеїну після або 1-(4'-піролідинолетоксифеніл)-2-феніл-6великої операції, зменшення кахексії та втрати пдрокси-1,2,3,4-тетрапдроізохінолін, протеїну внаслідок хронічних захворювань, прискорення загоювання ран або прискорення одуспособи збільшення мускульної маси, які поляжання пацієнтів з опіками або пацієнтів, що потергають в уведенні людині або ІНШІЙ тварині, яка піли внаслідок значного хірургічного втручання, які потребує такого лікування ефективної КІЛЬКОСТІ полягають в уведенні ссавцю, який потребує такоСОЛІ (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1, го лікування КІЛЬКОСТІ солі (І_)-(+)-винноі кислоти способи стимулювання росту у дітей, що масполуки формули 1, яка є ефективною в сприянні ють дефіцит гормону росту, які полягають в увевивільненню ендогенного гормону росту, переважденні дитині з дефіцитом гормону росту ефективним є спосіб, що стосується прискорення одужанної КІЛЬКОСТІ солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки ня пацієнтів, що потерпіли внаслідок значного хіформули 1, рургічного втручання, також переважним є спосіб, способи лікування резистентності до інсуліну у що стосується прискорення відновлення перелому ссавця, які полягають в уведенні згаданому ссавцю ефективної КІЛЬКОСТІ солі (І_)-(+)-винноі кислоти КІСТОК, сполуки формули 1, переважним є спосіб, в якому способи покращення мускульної сили, рухомостаном, пов'язаним з резистентністю до інсуліну, є сті, підтримання пружності шкіри, метаболічного діабет І типу, діабет II типу, гіперглікемія, послабгомеостазу або ниркового гомеостазу, які полягалена толерантність до глюкози або інсулінють в уведенні людині або ІНШІЙ тварині, що порезистентний синдром, також переважним є спотребує такого лікування КІЛЬКОСТІ СОЛІ (І_)-(+)-ВИННОІ сіб, в якому станом, пов'язаним з резистентністю кислоти сполуки формули 1, яка є ефективною в до інсуліну є стан, пов'язаний з ожирінням або сприянні вивільненню ендогенного гормону росту, виснаженням, пов'язаних з віком, способи лікування або попередження остеопорозу, які полягають в уведенні людині або ІНШІЙ способи підвищення рівнів ендогенного гормотварині з остеопорозом ефективної КІЛЬКОСТІ бісну росту, які полягають в уведенні людині або ІНфосфонатної сполуки та солі (І_)-(+)-винноі кислоШІЙ тварині, яка має потребу в ньому, ефективних ти сполуки формули 1, переважним способом лікількостей антагоністу функціонального соматокування остеопорозу є спосіб, в якому бісфосфостатинута солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки фонатною сполукою є ібандронат, переважним спормули 1, переважним є спосіб, в якому антагоніссобом лікування остеопорозу є спосіб, в якому том функціонального соматостатину є агоніст бісфосфонатною сполукою є алендронат, альфа-2-адренерпчних рецепторів, та способи лікування або попередження остеоспособи лікування або попередження застійної порозу, які полягають в уведенні людині або ІНШІЙ серцевої недостатності, ожиріння або виснаження, тварині з остеопорозом ефективної КІЛЬКОСТІ естпов'язаних з віком, які полягають в уведенні людирогену або Премарину® та солі (І_)-(+)-винноі кисні або ІНШІЙ тварині, яка має потребу в них, ефеклоти сполуки формули 1 і, необов'язково, прогестивних кількостей антагоністу функціонального терону, соматостатину та солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 способи лікування остеопорозу, які полягають в уведенні людині або ІНШІЙ тварині з остеопороРозчинна сполука формули 1, що стимулює 16 15 53716 вивільнення гормону росту, є стабільною при різності гіпофізу вивільняти гормон росту Наприклад, них фізіологічних умовах і може бути уведена пасіль (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 морентерально, назально або оральним шляхом же бути уведена in vivo дітям Зразки сироватки, взяті перед та після такого уведення, можуть бути (!_)-(+)-тартратна сіль сполуки формулі 1 може випробувані на гормон росту Порівняння КІЛЬКОСТІ одержана наступними процесами, які включають гормону росту в кожному з цих зразків повинні бупроцеси, ВІДОМІ в галузі хімії для одержання споти засобом безпосереднього визначення здатності лук Певні процеси виробництва солі (І_)-(+)-винноі гіпофізу пацієнта вивільняти гормон росту кислоти сполуки формули 1 передбачають подальші ознаки винаходу та ілюструються схемою Таким чином, даний винахід включає в свій реакції, наведеною нижче об'єм також фармацевтичні композиції, що містять активний інгредієнт, сіль (І_)-(+)-винноі кислоти Сполука даного винаходу має абсолютну та сполуки формули 1 у сполученні з фармацевтично відносну конфігурацію, наведену нижче прийнятним носієм Необов'язково фармацевтичні композиції можуть в подальшому містити анаболічний агент на додаток до солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 або іншу сполуку, яка проявляє різну активність, наприклад, сполуку, що дозволяє ріст антибіотика, або агент, що лікує ос(1) теопороз, або ІНШІ фармацевтичне активні речовини, комбінація яких підвищує ефективність та мінімізує побічні ефекти Стимулятори росту та анаболічні агенти добре ВІДОМІ з рівня техніки і включають, але не обмежуються ними, TRH, РТН, дієтилстільбестерол, естяка вказується як 3a-(R),1-(R) конфігурація рогени, р-агоністи, теофілін, анаболічні стероїди, Вона може бути одержана способом, описаним тут енкефаліни, Е серії простагландинів, сполуки, опинижче сані в патенті US № 3,239,345, розкриття яких Вивільняюча гормон росту сіль (І_)-(+)-винноі включено тут посиланням, наприклад, зеранол, кислоти сполуки формули 1 корисна in vitro як унісполуки описані в патенті US № 4,036,979, розкальний інструмент для розуміння як регулюється криття яких включено тут посиланням, наприклад, секреція гормону росту на рівні гіпофізу Це вклюсульбенокс, та пептиди, описані в патенті US № чає використання в ОЦІНЦІ багатьох факторів, про 4,411,890, розкриття яких включено тут посиланякі відомо і вважається, що вони впливають на ням секрецію гормону росту, таких як вік, секс, фактори Сіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки формули 11 харчування, глюкоза, амінокислоти, жирні кислоти, у комбінації з іншими засобами, що підсилюють а також періоди посту та непосту Крім того, сіль секрецію гормону росту, такими як вивільняючи (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 може гормон росту пептиди ГРВФ-6 та ГРВФ-1, що опибути використана для визначення того, як ІНШІ сані в патенті US № 4,411,890, розкриття яких гормони змінюють активність вивільнення гормону включено тут посиланням, та в публікаціях міжнаросту Наприклад, вже встановлено, що соматородних заявок WO 89/07110, WO 89/07111, та Встатин інгібує вивільнення гормону росту НТ920, так само як гексарелін, і нещодавно відСіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки формули 1 критий ГРВФ-2, описаний в WO 93/04081, або горможе бути уведена тваринам, у тому числі людям, мон, що вивільняє гормон росту (ГРВФ, також вкадля вивільнення гормону росту in vivo Сіль (!_)-(+)заний як ГРФ) та їх аналоги, або адренергічні аговинної кислоти сполуки формули 1 корисна в лікуністи, такі як клонідин, ксилазин, детомідин та меванні симптомів, пов'язаних з дефіцитом ГР, для детомідин (клонідин описаний в патенті US № стимулювання росту або підвищення ефективності 3,202,660, розкриття якого включено посиланням, харчування тварин для збільшення виробництва ксилазин описаний в патенті US № 3,235,550, розм'яса з метою покращання якості, для підвищення криття якого включено посиланням, та медетоміпродуктивності молока у великої рогатої худоби, дин описаний в патенті US № 4,544,664, розкриття для покращання кісток або загоювання ран та для якого включено посиланням) або агоністи 5HTID покращання функціонування життєво важливих серотоніну, такі як сумітриптан або агенти, які інгіорганів Сіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки форбують соматостатин або його вивільнення, такі як мули 1, викликаючи секрецію ендогенного ГР, буде фізостигмін та піридостигмін, є корисними для підзмінювати внутрішнє середовище тіла та змінювавищення ендогенних рівнів ГР у ссавців Комбінати ІНШІ ГР-залежні метаболічні, імунологічні та ція солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 з пов'язані з розвитком процеси Наприклад, сполуГРФ приводить до синергічного підвищення ендоки даного винаходу можна давати курчатам, індичгенного гормону росту кам, худобі (такій як ВІВЦІ, свині, коні, велика рогаЯк добре відомо фахівцю в даній галузі, відота худоба і т д ), домашнім тваринам (наприклад, ме та потенційне використання гормону росту є собакам) або вони можуть бути корисними у водрізним і баготочисельним [Див «Human Growth ному господарстві для прискорення росту та поHormone», Strobel and Thomas, Pharmacological ліпшення співвідношення білок/жир у риби Крім Reviews, 46, pp 1-34 (1994), T Rosen et al , Horm того, сіль (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки формули Res, 1995, 43, pp,93-99, M Degerblad et al, Euro1 може бути уведена людям in vivo як діагностичpean Journal of Endocrinology, 1995, 133, pp180ний засіб для безпосереднього визначення здат188, J О Jorgensen, European Journal of Endocn 18 17 53716 nology, 1994, 130, pp 224-228, К С Copeland et al , росту хрящів, лікування неврологічних захворюJournal of Clinical Endocrinology and Metabolism, вань, таких як периферична та викликана ліками Vol 78 №5, pp 1040-1047, J A Aloi et al , Journal of невропатія, синдром Джуліана-Барре, амютрофічClinical Endocrinology and Metabolism, Vol 79 №4, ний латеральний склероз, множинний склероз, pp 943-949, F Cordido et al, Metab Clm Exp, цереброваскулярні нещасний випадки та демієлі(1995), 44(6), pp 745-748, К M Fairhall et al , J Enнізаційні захворювання, стимулювання імунної docnnol, (1995), 145(3), pp 417-426, R M Fneboes системи у домашніх тварин і лікування захворюetal , Neuroendocnnology, (1995), 61(5), pp 584-589, вань у домашніх тварин, пов'язаних зі старінням, and Llovera et al , Int J Cancer, (1995), 61(1), стимулювання росту домашніх тварин та стимуpp 138-141] Таким чином, уведення солі (!_)-(+)лювання росту вовни у ВІВЦІВ винної кислоти сполуки формули 1 з метою стимуФахівцю добре відомо, що існують численні лювання вивільнення ендогенного гормону росту сполуки, які зараз використовуються для лікування може мати такий же ефект або користь, як і сам захворювань або терапевтичних показань, вказагормон росту Такі різні використання гормону росних вище Комбінація цих терапевтичних агентів, ту можна підсумувати як наступні стимулювання деякі з яких також згадувались вище, зі стимулявивільнення гормону росту у людей похилого віку, тором росту, проявляє анаболічні та необхідні лікування дефіциту гормону росту у дорослих лювластивості цих різних терапевтичних агентів В дей, попередження побічних катаболічних ефектів таких комбінаціях терапевтичні агенти та сіль (L)глюкокортикоідів, лікування остеопорозу, стиму(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 можуть бути лювання імунної системи, прискорення загоєння незалежно та послідовно уведені або одночасно ран, прискорення зростання переломів кісток, лікууведені в дозах, еквівалентних або в 1,01 рази вання відставання в рості, лікування застійної сервищих, ніж рівні дози, які є ефективними, коли ці цевої недостатності як це описано в РСТ публікасполуки та підсилювач секреції використовується ціях WO 95/28173 та WO 95/28174 (приклад метоокремо Комбінована терапія для інгібування кістдики випробування впливу засобу, що посилює кової резорбції, попередження остеопорозу, змесекрецію гормону росту, на ефективність лікування ншення переломів скелету, прискорення зрощузастійної серцевої недостатності описано в роботі вання переломів кісток, стимулювання утворення R Yang et al , Circulation, Vol 92, №2, p 262, 1995), кісткової маси та збільшення мінеральної питомої лікування гострої та хронічної ниркової недостатваги кісток може бути здійснено комбінуванням ності, лікування фізіологічного низького росту, у бісфосфонатів та солі (І_)-(+)-винноі кислоти спотому числі, дефіциту гормону росту у дітей, лікулуки формули 1 Див РСТ публікацію WO вання низького росту, пов'язаного з хронічними 95/11029 для обговорювання комбінованої терапії захворюваннями, лікування ожиріння, лікування з використанням бісфосфонатів та засобу, що позатримки росту, пов'язаної з синдромом Прадерасилює секрецію ГР Використання бісфосфонатів ВІЛЛІ та синдромом Тюрнера, прискорення одудля цих цілей раніше обговорювалась, наприклад, жання та зменшення знаходження в стаціонарі в роботах Hamdy, N A T , Role of Bisphosphonates хворих з опіками або після радикальної хірурги, in Metabolic Bone Diseases, Trends in Endocrmol такої як гастроштестинальна хірургія, лікування Metab , 1993, 4, pages 19-25 Бісфосфонати такого затримки росту внутрішньоматкової слизової обовикористання включають, але не обмежуються лонки, скелетної дисплазм, пперкортисонізму та ними, алендронат, тілудронат, диметил-APD, рисиндрому Кушинга, заміщуюча гормон-росту теразедронат, етидронат, YM-175, клодронат, памідропія у хворих, що перенесли стрес, лікування оснатта ВМ-210995 (ібандронат) Згідно з їх потенцітеохондродисплазм, синдрому Нунанса, безсоння, алом рівні оральних денних доз в межах між 0,1 мг хвороби Альцгеймера, затримки загоювання ран і 5г, та рівні оральних денних доз для солі (!_)-(+)та психосоціальних втрат, лікування легеневої винної кислоти сполуки формули 1 - між 0,01мг/кг дисфункції та вентиляторної залежності, послабта 20мг/кг ваги тіла, призначаються пацієнтам з лена протеш-катаболічна ВІДПОВІДЬ ПІСЛЯ радикаметою отримання ефективного лікування остеопольної операції, лікування синдрому малабсорбцм, розу зменшення кахексії та втрати протеїну внаслідок хронічних захворювань, таких як рак або СНІД, Сіль (І_)-(+)-ВИННОІ КИСЛОТИ сполуки формули 1 прискорення збільшення ваги та протеїну у пацієнможе бути скомбінована з агоністом/антагоністом тів, що знаходяться на TNP (загальному парентеестрогену ссавця В цьому аспекті даного винахоральному харчуванні), лікування пперінсулінемм, у ду як друга сполука може бути використаний будьтому числі, незидюбластозу, допоміжне лікування який агоніст/антагоніст естрогену Термін агодля індукування овуляції та попередження і лікуніст/антагоніст естрогену стосується сполук, які вання шлункової та дуоденальної виразок, стимузв'язуються з рецептором естрогену інгібують розлювання розвитку тимусу та попередження пов'ярідження кісток та попереджують втрату кісткової заного з віком відхилень у функції тимусу, допомімаси Особливо, агоністи естрогену визначені тут, жна терапія для пацієнтів, що знаходяться на хрояк ХІМІЧНІ сполуки, здатні зв'язуватися з місцем нічному гемодіалізі, лікування пацієнтів з рецептору естрогену в тканині ссавців та імітувати імуносупресією та посилення ВІДПОВІДІ антитіл пісдію естрогену в одній або більше тканинах Анталя вакцинації, покращання мускульної сили, збігоністи естрогену визначені тут, як ХІМІЧНІ сполуки, льшення мускульної маси, рухомості, підтримання здатні зв'язуватися з місцем рецептору естрогену пружності шкіри, метаболічного гомеостазу, нирков тканині ссавців та блокувати дію естрогену в вого гомеостазу у хворобливих ЛІТНІХ людей, стиодній або більше тканинах Такі активності легко мулювання остеобластів, реконструкції кісток та визначаються фахівцем згідно зі стандартними випробуваннями, включаючи тести на зв'язування 20 19 53716 рецептору естрогену, стандартну пстоморфометті в рію кісток та методи денситометрії [дів Enksen E КІЛЬКІСТЬ антирезорптивного агенту, яка повиF et al , Bone Histomorphometry, Raven Press, New нна бути використана, визначається за його активYork, 1994, pp 1-74, Gner S J et al , The Use of ністю як агенту, що інгібує втрату кісткової маси Dual-Energy X-Ray Absorptionmetry in Animals, Inv Ця активність визначається засобами фармакокіRadiol , 1996, 31(1) 50-62, Wanner H W and нетики індивідуальних сполук та їх мінімальної Fogelman I , The Evaluation of Osteoporosis Dualмаксимально ефективної дози, що інгібує втрату Energy X-Ray Absorptionmetry in Clinical Practice , кісткової маси, з використанням процедури, такої Martin Dumtz Ltd, London, 1994, pages 1-296] БІяк згадано вище ЛЬШІСТЬ цих сполук описано і згадується нижче, Загалом ефективна доза для показників згідно хоча, й ІНШІ агоністи/антагоністи естрогену будуть даного винаходу, наприклад, для лікування остеоВІДОМІ фахівцю в даній галузі Переважним агоніспорозу, для агоністів/антагоністів естрогену (коли том/антагоністом естрогену є дролоксифен (февони використовуються в комбінації с сіллю (L)-(+)нол, 3-[1-[4[2-(диметиламшо)етокси]феніл]-2винної кислоти сполуки формули 1 даного винахофеніл-1-бутеніл]-,(Е)-) та споріднені сполуки, які ду) лежить в межах від 0,01 до 200мг/кг/день, пеописані в патенті US № 5,047,43, розкриття якого реважно від 0,5 до 100мг/кг/день включено тут посиланням Зокрема, ефективна доза для дролоксифену лежить в межах від 0,1 до 40мг/кг/день, переважно Іншим переважним агоністом/антагоністом есвід 0,1 до 5мг/кг/день трогену є тамоксифен (етанамш,2-[4-(1,2-дифеніл1-бутеніл)фенокси]-М,М-диметил,(2)-2-,2-гідроксиЗокрема, ефективна доза для ралоксифену 1,2,3-пропантрикарбоксилат (1 1)) та споріднені лежить в межах від 0,1 до 100мг/кг/день, переважсполуки, які описані в патенті US № 4,536,516, но від 0,1 до 10мг/кг/день розкриття якого включено тут посиланням Іншою Зокрема, ефективна доза для тамоксифену спорідненою сполукою є 4-пдрокситамоксифен лежить в межах від 0,1 до 100мг/кг/день, переважЯкий описано в патенті US № 4,623,660, розкриття но від 0,1 до 5мг/кг/день якого включено тут посиланням Зокрема, ефективні дози для Іншим переважним агоністом/антагоністом есцис-6-(фторофеніл)-5-[4-(2-піперидин-1-ілтрогену є ралоксифен (метанон, [6-пдрокси-2-(4етокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-олу, пдроксифеніл)бензо[Ь]тієн-3-іл][4-[2-(1(-)-цис-6-фент-5-[4-(2-піролідин-1-ілпіперидиніл)етокси]феніл]-, пдрохлорид) та споріетокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-олу, днені сполуки, які розкриті в патенті US № цис-6-феніл-5-[4-(2-піролідин-1-іл4,418,068, розкриття якого включено тут посиланетокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-олу, ням цис-1-[6'-піролідиноетокси-3'-піридил]-2-феніл6-пдрокси-1,2,3,4-тетрапдронафталену, Іншим переважним агоністом/антагоністом естрогену є ідоксифен піролідин, 1 -[-[4-[[1 -(41-(4'-піролідиноетоксифеніл)-2-(4"йодофеніл)-2-феніл-1-бутеніл]фенокси]етил] та фторофеніл)-6-пдрокси-1,2,3,4споріднені сполуки, які описані в патенті US № тетрапдроізохінолшу, 4,839,155, розкриття якого включено тут посиланцис-6-(4-пдроксифеніл)-5-[4-(2-піперидин-1-ілням етокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-олу, або Інші переважні агоністи/антагоністи естрогену включають сполуки, що загалом описані в патенті 1-(4'-піролідиноетоксифеніл)-2-феніл-6US № 5,552,155, розкриття яких включено тут попдрокси-1,2,3,4-тетрапдроізохіноліну лежать в силанням Особливо переважними сполуками, що межах від 0,0001 до 100мг/кг/день, переважно від описані тут, є 0,001 до 10мг/кг/день цис-6-(фторофеніл)-5-[4-(2-піперидин-1-ілЗокрема, ефективна доза для 4етокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-ол, пдрокситамоксифену лежить в межах від 0,0001 до 100мг/кг/день, переважно від 0,001 до (-)-цис-6-феніл-5-[4-(2-піролідин-1-іл10мг/кг/день етокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-ол, цис-6-феніл-5-[4-(2-піролідин-1-тВипробування стимулювання вивільнення ГР з етокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-ол, пітуїцитів щурів цис-1-[6'-піролідиноетокси-3'-піридил]-2-фенілСполуки, що мають здатність стимулювати се6-пдрокси-1,2,3,4-тетрапдронафтален, крецію ГР з культури пітуїтарних клітин щурів ідентифікували з використанням наступної процедури 1-(4'-піролідиноетоксифеніл)-2-(4"Даний текст також корисний для порівняння зі стафторофеніл)-6-пдрокси-1,2,3,4ндартами для визначення рівнів доз Клітини видітетрапдроізохінолш, ляли з пітуїтармв 6-тижневих самців щурів лінії цис-6-(4-пдроксифеніл)-5-[4-(2-піперидин-1-ілВістар Після декапітацм передні пітуїтарні долі етокси)феніл]-5,6,7,8-тетрапдронафтален-2-ол, та поміщали в холодний, стерильний збалансований 1-(4'-піролідиноетоксифеніл)-2-феніл-6сольовий розчин Хенкса без кальцію або магнію пдрокси-1,2,3,4-тетрапдроізохінолін, (HBSS) Тканини гомогенізували і потім проводили Інші агоністи/антагоністи естрогену описані в у два цикли ензиматичне диспергування за допопатенті US № 4,133,814 (розкриття яких включено могою механічних пристроїв з використанням 10 тут посиланням) В патенті US № 4,133,814 описаод/мл бактеріальної протеази (EC 3 4724 4, Sigma но ПОХІДНІ 2-феніл-З-ароілбензотюфену та 2Р-6141, Si LOUIS, Missouri) в HBSS Суміш тканинафеніл-З-ароілбензотюфен-1-оксиду ензим перемішували в колбі зі швидкістю Зоб/хв в В наступних абзацах наведено інтервали пеатмосфері 5% СОг при 37°С протягом приблизно реважних доз для різних антирезорптивних аген 22 21 53716 ЗО хвилин , розтирали вручну через приблизно 15 Двадцяти одноденних самок щурів Spragueхвилин і через приблизно ЗО хвилин з використанDawley (Charles River Laboratory, Wilmington, MA) ням Юмл-піпетки Суміш центрифугували при 200 акліматизували до місцевих умов віварію (24°С, х g протягом 5 хвилин Кінську сироватку (35% цикл 12-годинне світло, 12-годинна темрява) прикінцева концентрація) додавали до надосадової близно 1 тиждень перед випробуванням сполуки рідини для нейтралізації надлишку протеази ГраВсі щури мали доступ до води та гранульоване нули ресуспендували в СВІЖІЙ протеазі (10од/мл), комерційне харчування (Agway Country Food, перемішували додатково протягом ЗОхв при поSyracuse NY) ad libitum Експерименти проводили передніх умовах, та розтирали вручну і зрештою у ВІДПОВІДНОСТІ до NIH Посібника по утриманню та пропускали через отвір голки 23-калібру Знову використанню лабораторних тварин додавали кінську сироватку (з 35% кінцевою конВ день експерименту тестові сполуки розчиняцентрацією), потім клітини з обох збірників об'єдли у носи, що містив 1% етанолу, 1мМ оцтову киснували, гранулювали (200 х g протягом 15 хвилин), лоту та 0,1% альбумін з бичачої сироватки в розресуспендували в культуральному середовищі чині солі Кожний тест проводили на трьох щурах (модифіковане Dulbecco Eagle середовище (DЩурів зважували та анестезували шляхом інтраМЕМ) з додаванням 4,5г/л глюкози, 10% кінської перітональної ін'єкції пентобарбіталу натрію (Nemсироватки, 2,5% ембріональної бичачої сироватки, butol®, 50мг/кг ваги тіла) Через чотирнадцять 1% незамінних амінокислот, 100од/мл ністатину та хвилин після анестезії брали зразки крові шляхом 50мг/мл гентаміцину сульфату, Gibbco, Grand Isнадрізу кінчика хвоста, даючи можливість крові land, New York) та підраховували Клітини висівали капати у пробірку мікроцентрифуги (базисний зрапри густині 6,0 - 6,5 х 104 клітин на см 2 в 48-лункові зок крові, приблизно ЮОмкл) Через 15 хвилин Costar™ (Cambridge, Massachusetts) кювети і інкупісля анестезії тестову сполуку вводили у вену бували протягом 3 - 4 днів в культуральному серехвоста у загальному ін'єкційному об'ємі 1мл/кг мадовищі си тіла) Додаткові зразки крові брали з хвоста через 5, 10 та 15 хвилин після уведення сполуки Як раз перед тестом на секрецію ГР лунки з До відокремлення сироватки центрифугуваннямкультурою ДВІЧІ промивали вивільняючим середозразки крові зберігали на льоду (1430 х g протягом вищем, потім врівноважували протягом ЗОхвилин у 10 хвилин при 10°С) Сироватку зберігали при вивільняючому середовищі (D-MEM, забуферене 80°С до визначення гормону росту у сироватці 25 мМ Hepes, pH 7,4 з вмістом 0,5% альбуміну з радюімунолопчним методом, як описувалось вибичачої сироватки при 37°С) Тестові сполуки розще чиняли в ДМСО, потім розбавляли в попередньо нагрітому вивільняючому середовищі ВипробуОцінка екзогенно-стимульованого вивільнення вання проводили в чотирьох серіях Випробування гормону росту у собаки після орального уведення ініціювали додаванням 0,5мл вивільняючого сереВ день уведення дози зважували необхідну довища (з розчинником або тестовою сполукою) дозу тестової сполуки та розчиняли її у воді Дози до кожної лунки з культурою Інкубацію проводили уводили з розрахунку за об'ємом 0,5 - Змл/кг шляпри 37,°С протягом приблизно 15 хвилин, яку потім хом згодовування 2 - 4 собакам для кожного дозозакінчували видаленням вивільняючого середованого харчування Зразки крові (5мл) брали з вища шляхом, яке центрифугували при 2000 х g яремної вени шляхом безпосереднього уколу у протягом приблизно 15 хвилин для видалення вену перед дозуванням та через 0,17, 0,33, 0,5, клітинного матеріалу Концентрації гормону росту 0,75, 1, 2, 4, 6, 8 та 24 години після дозування, щурів в супернатантах визначали стандартними використовуючи вакутейнери, що містили ЛІТІЙрадюімунотестовими процедурами, описаними гепарин Одержану плазму зберігали при -20°С до нижче аналізу Вимірювання гормону росту щурів Вимірювання собачого гормону росту Концентрації гормону росту щурів визначали Концентрації собачого гормону росту визначаза допомогою подвійного радюімунолопчного теслись стандартними радюімунолопчними методами ту на антитіла з використанням згаданого препаз використанням собачого гормону росту (антиген рату гормону росту щурів (NiDDK-rGH-RP-2) та для йодування та згаданого препарату AFP-1983B) антисироватки гормону росту щурів, вирощеної у та антисироватки собачого гормону росту, який мавпи (NiDDK-anti-rGH-S-5), взятої від Dr A Parвирощували у мавпи (AFP-2145257 В), одержаних low (Harbor-UCLA Medical Center, Torrence, CA) від Dr F Parlow (Harbor-UCLA Medical Center, Torrence, CA) Мітку отримували шляхом хлорамш-ТДодатковий гормон росту щурів (1,5од/мг, йодуванням собачого гормону росту до специфіч#G2414, Scnpps Labs, San Diego, CA) йодували до ної активності 20 - 40мкСі/мкг Імунні комплекси специфічної активності приблизно ЗОмкСІ/мкг меотримували додаванням козиної сироватки до матодом хлораміну Т для використання як мітки Імувп'ячої IgG (ICN/Cappel, Aurora, ОН) плюс поліетинні комплекси одержували додаванням козиної ленгліколь з м в 10,000 - 20,000 до кінцевої конантисироватки до мавп'ячого IgG (ICN/Cappel, центрації 4,3%, видалення проводили центрифуAurora, ОН) плюс поліетиленгліколь з м в 10,000гуванням Цей тест мав робочий інтервал 0,08 20,000 до кінцевої концентрації 4,3%, вилучення 2,5 мкг собачого ГР на пробірку проводили шляхом центрифугування У цьому тесті робочий інтервал становив 0,08 - 2,5мкг горОцінка рівнів собачого гормону росту та інсумону росту щурів на пробірку вище нижчого рівня лінподібного фактору росту-1 у собак після хронічного орального уведення Випробування на екзогенно-стимульоване вивільнення гормону росту у щура після внутрішньоСобаки отримували тестову сполуку щодня венного уведення тестових сполук протягом 7 або 14 днів Кожного дня зважували 24 23 53716 необхідну дозу тестової сполуки та розчиняли м у MA) Кінцевий зразок крові збирали шляхом серводі Дози уводили з розрахунку за об'ємом 0,5 цевої пункції в пробірки з гепарином Плазму відоЗмл/кг шляхом згодовування 5 собакам для кожнокремлювали центрифугуванням і зберігали в заго дозованого харчування Зразки крові брали у мороженому стані, як було описано вище дні 0, 3, 7, 10 та 14 Зразки крові (5мл) брали з Інсулін плазми визначали радюімунолопчним яремної вени шляхом безпосереднього уколу у шляхом, використовуючи набір від Binax Corp вену перед дозуванням та через 0,17, 0,33, 0,5, (Portland, Maine) Середній коефіцієнт відхилення 0,75, 1, 2, 3, 6, 8, 12 та 24 години після дозування у в дослідах був ^10% РІВНІ тригліцеридів, загальдні 0, 7 та 14, використовуючи 5мл - вакутейнери, ного холестеролу, глюкози та лактату в плазмі що містили літій-гепарин Крім того, кров брали вимірювали, використовуючи Abbott VP™ та VP перед дозуванням та через 8 годин та на 3 і 10 Super System® Autoanalyzer (Abbott Laboratories, день Одержану плазму зберігали при -20°С до Irving, Texas), використовуючи A-Gent™ тригліцеаналізу ридні, холестерольні та глюкозні тестові системи та лактатний набір від Sigma, ВІДПОВІДНО ВМІСТ Дослідження самок щурів інсуліну, тригліцеридів, загального холестеролу та Це дослідження оцінює вплив хронічного лікулактату в плазмі, що знижують активність вивільвання ГРВФ міметику на вагу, конституцію тіла та няючого гормон росту пептиду (ВГРП) або ВГРП концентрацію в плазмі натщесерце глюкози, інсуміметика, такого як сполука формули 1, визначали ліну, лактату та ЛІПІДІВ у самок щурів з дефіцитом статистичним аналізом (неспарений t-тест) у поріестрогену та надлишком естрогену Швидкість ВІДвнянні з контрольною групою, якій призначали ноПОВІДІ рівнів ГР в сироватці на внутрішньовенне сій уведення агенту, вивільняючого гормон росту визначали наступного дня після дозування Вагу тіла Сіль (L)-(+)-BHHHOI КИСЛОТИ сполуки формули 1 контролювали щотижня протягом всього періоду може бути уведена оральним, парентеральним лікування, додатково контролювали конституцію (наприклад, внутрішньом'язовою, внутрішньоочетіла та рівні в плазмі глюкози, інсуліну, лактату, ревинною, внутрішньовенною або підшкірною ІН'Єхолестеролутатригліцеридів в КІНЦІ лікування КЦІЄЮ або імплантацією), назальним, вапнальним, сублінгвальним або місцевим шляхом і може бути Чистокровні самки Sprague-Dawley щурів були уведена в рецептуру з фармацевтичне прийнятодержані від Charles River Laboratories (Wilmington, ними носіями для одержання лікарських форм, MA) та піддані білатеральній оваріектомм (Ovx) прийнятних для різних шляхів уведення або модельній хірурги (Sham) приблизно у 12тижневому ВІЦІ При модельній хірурги яєчники Тверді лікарські форми для орального уведенвилучали і потім повертали в черевну порожнину ня включають капсули, таблетки, ПІЛЮЛІ, порошки Після хірургічного втручання щурів тримали поабо гранули В таких твердих лікарських формах одинці в клітках розміром 20см х 32см х 20см при сіль (L)-(+)-BHHHOI кислоти сполуки формули 1 стандартних умовах віварію (близько 24°С з призмішується з, принаймні, одним інертним фармаблизно 12-годинним світловим/12-годинним темцевтичне прийнятним носієм, таким як цукроза, повим циклом) Усі щурі мали вільний доступ до лактоза або крохмаль Такі лікарські форми моводи та гранульованого комерційного корму (Аджуть також містити, як у звичайній практиці, додатway ProLab 3000, Agway Country Food, Inc , Syraкові речовини, ІНШІ ніж такі інертні розбавники, cuse, NY) Експерименти проводили у ВІДПОВІДНОСнаприклад, змащуючі агенти, такі як стеарат магТІ до МІН посібника з утримання та використання нію У випадку капсул, таблеток та пілюль лікарські лабораторних тварин формі можуть також містити буферні агенти Таблетки та ПІЛЮЛІ можуть бути виготовлені додаткоПриблизно через сім МІСЯЦІВ після хірургічного во з кишковим покриттям втручання, Sham та Ovx щурів зважували і довільно розподіляли на групи Щурам щоденно орально РІДКІ лікарські форми для орального уведення уводили дозу 1мл носія (1% етанол в дистильовавключають фармацевтичне прийнятні емульсії, ній деюнізованій воді), 0,5МГ/КГ або 5мг/кг вивільрозчини, суспензії, сиропи, еліксири, що містять няючого гормон росту агенту протягом 90 днів інертні розбавники, які зазвичай використовуються Щурів зважували з інтервалом в тиждень протягом в цій галузі, такі як воду Крім таких інертних розвсього дослідження Через двадцять чотири годибавників композиції також включають адьюванти, ни після останньої оральної дози, ВІДПОВІДЬ гормотакі як зволожуючі агенти, емульгуючі та суспенну росту (ГР) в сироватці з метою дослідження дуючі агенти, і підсолоджуючі та ароматизуючі тестованого агенту вимірювали наступним чином агенти Анестезованих щурів зважували і збирали базовий Згідно З даним винаходом, препарати для пазразок крові (~100мкл) з вени хвоста Потім тесторентерального уведення включають стерильні ваний агент (вивільняючий гормон росту агент або водні або неводні розчини, суспензії або емульсії носій) уводили внутрішньовенне у дозі 1мл у вену Прикладами неводних розчинників або носив є хвоста Давали крові можливість згорнутися при пропіленгліколь, поліетиленгліколь, рослинні масприблизно 4°С, потім центрифугували при 2000хд ла, такі як олива та кукурудзяне масло, желатин та протягом 10 хвилин Сироватку зберігали при приорганічні ефіри, придатні для ІН'ЄКЦІЙ, такі як етиблизно -70°С Концентрацію гормону росту в сирололеат Такі лікарські форми можуть також містити ватці визначали радюіммунолопчним методом, як адьюванти, такі як консерванти, зволожувачі, емуописувалося раніше Після цієї процедури тіло льсифікатори та диспергатори їх можна стерилікожного анестезованого щура піддавали сканузувати, наприклад, фільтрацією через утримуючий ванню подвійною енергією Х-променевої абсорббактерії фільтр, уведенням стерилізуючих агентів ціометри (DEXA, Hologic QDR 1000/W, Waltham у композиції, опромінюванням композицій або на 26 25 53716 гріванням композицій Вони можуть також бути ську форму Вибір доз залежить від бажаного тезроблені у формі стерильних твердих композицій, рапевтичного ефекту, шляху уведення та тривалоякі можуть бути розчинені у стерильній воді або сті лікування Загалом рівні доз, що лежать у меінших стерильних придатних для ІН'ЄКЦІЙ середожах від 0,0001 до 100мг/кг ваги тіла призначають вищах безпосередньо перед використанням щоденно людям або іншим тваринам, наприклад, ссавцям, для одержання ефективного вивільнення Композиції для ректального або вапнального гормону росту уведення являють собою переважно суппозиторм, які можуть містити на додаток до активної речовиПереважним інтервалом доз є інтервал від ни, екціпіенти, такі як масло какао або суппозито0,01 до 5,0мг/кг ваги тіла, який може бути уведерійний віск ний у вигляді одиничної дози або розподіленої на декілька доз Композиції для назального або сублінгвального уведення також виготовляють зі стандартними Наступна схема ілюструє синтез солі (!_)-(+)екціпієнтами, добре відомими в даній галузі винної кислоти сполуки формули 1 Позначка ** вказує на стереохімічний центр В схемі скороченДози солі (І_)-(+)-винноі кислоти сполуки форня Pit використовується для того, щоб позначити мули 1 в композиціях, згідно з даним винаходом, будь-яку амін-захисну групу, відому для фахівця в можуть варіюватися, однак, необхідно, щоб КІЛЬданій галузі КІСТЬ її була такою, щоб отримати необхідну лікар * (D}-iiSo{t}-винна кислота o H - / M( A-NH-Prt .х,. 27 В подальшому описуються стадії реакцій, показаних на попередній схемі В подальшому описі амін-захисна група Pit ілюструється переважною амін-захисною групою ВОС Стадія а До розчину сполуки А в реакційне інертному полярному апротонному розчиннику, такому як ацетон, метилетилкетон або, приблизно, ДМФА (диметилформамід) при температурі від приблизно 0°С до кімнатної, переважно при 0°С, додавали піколілхлориду пдрохлорид, карбонат, такий як L12CO3, СБСОЗ або, переважно, карбонат калію, та йодид калію або тетрабутиламоніййодид Після перемішування при температурі від приблизно -20°С до приблизно 70°С, переважно, при 0°С, протягом від 2 до 16 годин, переважно, протягом 2 годин, льодяну баню прибирали та додавали DABCO (1,4-діазобіцикло[2 2 2]октан) Реакційну суміш перемішували приблизно 15 - ЗО хвилин і виливали у суміш води та неполярного органічного розчинника, такого толуол, діетиловий ефір або, переважно, ІРЕ (ізопропіловий ефір) Органічний відокремлювали і обробляли стандартними методами, відомими фахівцю в даній галузі, для одержання сполуки В Стадія b 70% Водний розчин CF2CH2NHNH2 використовували як водний розчин у етанолі, воді або толуолі, переважно 70% водний розчин CF2CH2NHNH2 екстрагували толуолом До розчину сполуки В в органічному розчиннику, такому як етанол або, переважно, толуол спочатку додавали толуольний екстракт, що містив безводний 2,2,2трифторетилгідразин, з наступним додаванням оцтової кислоти Реакційну суміш нагрівали при приблизно 60 - 100°С, переважно, при 70°С протягом приблизно від ЗО хвилин до 12 годин, переважно, 2 години Реакційну суміш охолоджували до кімнатної температури та нейтралізували водною основою МаНСОз Органічний шар відокремлювали і обробляли стандартними методами, відомими фахівцю в даній галузі, для одержання сполуки С Стадія с Кислоту, таку як НСІ або ІРЕ або етанол, кислоту або алкілсульфокислоту, таку як метансульфокислота додавали до розчину сполуки С в реакційне інертному органічному розчиннику, такому як ЕЮН, ІРЕ або, переважно, СН2СН2 Суміш перемішували приблизно 1 - 2 години, потім охолоджували до температури від приблизно 0°С до кімнатної температури, переважно, 0°С і потім до суміші додавали змінну основу, таку як триетиламін або ІЧЬЦОН Суміш залишали нагріватися до кімнатної температури, розбавляли додатковою КІЛЬКІСТЮ розчинника та обробляли стандартними методами, відомими фахівцю в даній галузі, для одержання сполуки D Стадія d (D)- або (І_)-винну кислоту, переважно (DJ-винну кислоту, додавали до сполуки D в суміші ацетон/вода (від приблизно 8 1 до приблизно 9 1) при кімнатній температурі Суміш перемішували при кімнатній температурі від приблизно 15 хвилин до цілої ночі, переважно, цілу ніч, тверду речовину відфільтровували, збирали та промивали холодним ацетоном з одержанням сполуки формули Е, переважно, сполуки Е як (DJ-тартрату у вигляді одного енантюмеру Стадія є До розчину N-ВОС-серину, переваж 53716 28 но, N-BOC-(D)-cepHHy (сполука F) в ТГФ/ДМФА (від приблизно 1 1 до приблизно 2 1) при 0°С додавали розчин n-BuLi або калію трет-бутоксиду Реакційну суміш перемішували при приблизно 0°С протягом приблизно 10 - ЗО хвилин, переважно, 20 хвилин, потім додавали 2,4-дифторобензилбромід Після нагрівання до кімнатної температури і перемішування приблизно 6 - 24 години, реакційну суміш концентрували під вакуумом для видалення ТГФ і додавали водну кислоту, таку як 1N НСІ до встановлення рН суміші на рівні приблизно 3 Реакційну суміш потім розподіляли між водою та органічним розчинником, таким як СН2СІ2 або ІРЕ Органічний розчин обробляли стандартними методами, відомими фахівцю в даній галузі, для одержання сполуки G, що переважно мала Rконфігурацію при стереоцентрі, також відому як (О)-енантюмер Стадія f До розчину сполуки G в органічному розчиннику, такому як ТГФ, СН2СІ2, ІРЕ або їх суміші переважно, СН2СІ2/ІРЕ (близько 1 1) додавали алкілсульфокислоту, таку як метансульфокислота Тверду речовину відфільтровували та промивали сумішшю СН2СІ2/ІРЕ (1 1) для одержання речовини Н, яка переважно має R-конфігурацію при стереоцентрі, також відомої як (О)-енантюмер Стадія д До розчину сполуки Н в суміші ТГФ/вода (приблизно 4 1) додавали 2,5дюксопіролідин-1-іловий ефір 2-третбутоксикарбоніламіно-2-метилпропюновоі кислоти та алкіламш, такий як триетиламш Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі приблизно 1 - 24 години та заливали водною кислотою, такою як 10% водний розчин лимонної кислоти Суміш екстрагували органічним розчинником, таким як етилацетат, і органічний шар відокремлювали та обробляли стандартними методами, відомими фахівцю в даній галузі, для одержання сполуки X, що переважно мала R-конфігурацію при стереоцентрі, також відомої як (О)-енантюмер Сполука X може бути кислотою, алкіловим ефіром або галоіданпдридом (X являє собою ОН, -О(Сг С^алкіл або гало), але кислота є переважною Стадія h (а) Сполуку Е, переважно (DJ-тартрат як єдиний енантюмер, додавали при приблизно від -35 °С до 0°С, переважно при приблизно -6 °С до етилацетату Розчин охолоджували до приблизно -ЗО до -50°С і потім додавали алкіламін, такий як триетиламш Реакційну суміш перемішували протягом приблизно ЗО - 90 хвилин при температурі між приблизно -78°С та приблизно -20°С, та фільтрували з одержанням розчину вільної основи сполуки Е (Ь) Коли X в сполуці X являє собою ОН, сполуку X, що переважно має R-конфігурацію при стереоцентрі, додавали при від приблизно -78°С до 20°С, переважно при -35°С, до реакційне інертного органічного розчинника, такого як розчин етилацетату, що містив вільну основу сполуки Е зі стадії п(а), алкіламін, такий як триетиламш та РРАА (1пропанфосфонової кислоти циклічний ангідрид) (50% в етилацетаті) Реакційну суміш перемішували протягом приблизно 1 - 24 години, та обробляли стандартними методами, відомими фахівцю в даній галузі, для одержання сполуки J, що має ЗО 29 53716 абсолютну та відносну 3a-(R), 1-(R) конфігурацію 2-Аміно-І\І-(1-(2,4-дифторбензилоксиметил)-2оксо-2-[3-оксо-За-піридин-2-ілметил-2-(2,2,2Коли X в сполуці X є СІ, сполуку X додавали трифторетил)-2,3,3а,4,6,7-гексапдропіразол[4,3при -78°С до реакційно інертного розчинника, такос]піридин-5-іл]-етил}2-метил-пропюнамід(І_)го як розчин дихлорметану, що містив вільну оснотартрат ву сполуки Е і алкіламш, такий як триетиламш Реакційну суміш перемішували протягом приблизА 1-Третбутиловий естер 3-етиловий естер 4но 1 - 24 годин при приблизно 0 - 30°С і потім обоксо-3-піридин-2-ілметилпіперидин-1,3робляли стандартними методами, відомими фахідикарбонової кислоти вцю в даній галузі, для одержання сполуки J, що До розчину 1-третбутилового естеру 3має абсолютну та відносну 3a-(R), 1-(R) конфігуетилового естеру 4-оксопіперидин-1,3рацію дикарбонової кислоти (10,34г, 38,2ммоль) в ДМФА (40мл) приблизно при 0°С додавали пдрохлорид Коли X в сполуці X являє собою -О(Сг піколілхлориду (5,7г, 34,7ммоль), карбонат калію С^алкіл, де метил є переважним, сполуку X дода(14,4г, 104,1 ммоль) і йодид калію (5,76г, вали до розчину вільної або кон'югованої основи Е 34,7ммоль) Після перемішування приблизно при (кон'югат основи сполуки Е (-NM, де М = Li, Na, K, 0°С приблизно 2 години льодяну баню прибирали і Mg або АІ, переважно алюміній) одержували взаєдодавали DABCO (973мг, 8,68ммоль) Реакційну модією вільної змінної основи з придатним реагенсуміш перемішували приблизно ЗОхв і виливали в том (тобто М = Li, бутиллітій або LDA, М = Na, NaH суміш води і ІРЕ Органічний шар ВІДДІЛЯЛИ, проабо NaH(SiMe3)2 або М = К, КН або KN(SiMe3)2, мивали насиченим водним ІЧаНСОз і насиченим або М = Mg, реактив Гріньяра з будь-яким алкілом, водним NaCI, сушили над Na2SO4 і концентрували переважно діетилмагнійбромід, або М = АІ, будьпід вакуумом Неочищений залишок кристалізуваякий триалкілалюмінієвий реагент, переважно, ли з гексану одержуючи білу тверду речовину триметилалюміній)), переважно алюміній, в реак(8,19г, вихід 65%) 1Н-ЯМР (CDCI3) 5 1,17 (т, ЗН), ційне інертному розчиннику, такому як дихлорме1,48 (с, 9Н), 1,55 (с, 2Н), 2,61 (м, 1Н) 2,71 (м, 1Н), тан, та одержану реакційну суміш перемішували 3,31 - 3,50 (м, ЗН), 4,11 (д, 2Н), 4,49 (д, 1Н), 7,06 протягом приблизно 1 - 24 годин при приблизно (шс, 1Н), 7,17 (д, 1Н), 7,54 (м, 1Н), 8,40 (с, 1Н) 20 - 100°С та обробляли стандартними методами, відомими фахівцю в даній галузі, для одержання В Третбутиловий естер З-оксо-За-піридин-2сполуки J, що переважно має абсолютну та відноілметил-2-(2,2,2-трифторетил)-2,3,За,4,6,7сну 3a-(R), 1-^-конфігурацію гексапдропіразол[4,3-с]піридин-5-карбоновоі кисСтадія і Кислоту, таку як НСІ в ЕЮН, метансульфокислоту або трифлетову кислоту в СН2СІ2 додавали при приблизно від 0°С до кімнатної температури до сполуки J в СН2СІ2, IPE або ТГФ Суміш перемішували протягом приблизно від 40 хвилин до приблизно 4 годин при кімнатній температурі, потім додавали насичений водний розчин основи, такою як ІЧаНСОз, до досягнення розчином нейтрального рН Органічний шар відокремлювали та обробляли стандартними методами, відомими фахівцю в даній галузі, для одержання сполуки К, що переважно має абсолютну та відносну 3a-(R), 1-^-конфігурацію Стадія j До розчину сполуки К в спирті, переважно метанолі, додавали І_-(+)-винну кислоту Реакційну суміш перемішували протягом приблизно 1 - 12 годин, фільтрували та концентрували Сирий залишок розбавляли органічним розчинником, таким як етилацетат, нагрівали та залишали повільно охолоджуватися до кімнатної температури Тверду речовину відфільтровували та висушували з одержанням солі І_-(+)-винноі кислоти сполуки формули 1 у вигляді білих кристалів, що переважно мали абсолютну та відносну 3a-(R), 1-(R)конфігурацію Наступні приклади наводяться лише з метою ілюстрації винаходу, але не мають на меті обмежувати розкриття суті винаходу Для колонкової хроматографії використовували силікагель Точки плавлення визначали на апараті Buchi 510 і не корегувалися Протонні ЯМРспектри знімали на Vanan XL-300, Bruker AC-300, Vanan Unity 400 або Bruker АС-250 при 25°С ХІМІЧНІ зсуви визначали в мільйонних частках відносно тетраметилсилану Приклад 1 лоти 70% водний розчин CF3CH2NHNH2 (325мл, 1,986моль) (одержали від Aldnch) екстрагували толуолом (3 х 1200мл) До розчину продукту стадії А (600г, 1,655моль) в толуолі (900мл) спочатку додавали об'єднані толуольні екстракти, що містили безводний 2,2,2-триіфторетилпдразин і потім оцтову кислоту (121,4г, 1,986моль) Реакційну суміш нагрівали приблизно при 70°С приблизно 2 годин, і потім додавали інший толуольний екстракт 70% водного 2,2,2-трифторетилпдразину (50г) Реакційну суміш нагрівали приблизно при 80°С приблизно 3,5 години, охолоджували до кімнатної температури і розводили насиченим водним NaНСО3 (2л) Толуольний шар ВІДДІЛЯЛИ І промивали насиченим водним NaCI, сушили над Na2SO4 і концентрували під вакуумом одержуючи масло (754,8г) Кристалізацією з суміші метанол/вода одержували бажаний продукт у вигляді білої твердої речовини (609,5г) 1Н-ЯМР (CDCI3) 5 1,50 (с, 9Н), 2,53 (д, 1Н), 2,70 (шс, 2Н), 2,88 (шс, 1Н), 3,31 (м, 2Н), 3,97 (м, 1Н), 4,19 (м, 1Н), 4,46 (шс, 1Н), 4,63 (шс, 1Н), 7,06 (м, 2Н), 7,51 (м, 1Н), 8,34 (м, 1Н) С За-Піридин-2-ілметил-2-(2,2,2трифторетил)-2,За,4,5,6,7-гексапдропіразол [4,3с]піридин-3-он Метансульфонову кислоту (11,6г, 121 ммоль) додавали по краплям до розчину продукту стадії В (Юг, 24,2ммоль) в СН2СІ2 (ЮОмл) приблизно ЗО хвилин Реакційну суміш перемішували приблизно 1 годину, потім охолоджували до приблизно 0°С, і потім через лійку додавали триетиламін (18,6мл, 133,1ммоль) Суміш нагрівали до кімнатної температури приблизно 1 годину, розводили додаючи СН2СІ2 і промивали насиченим водним NaCI, су 32 31 53716 шили над Na2SO4, фільтрували і концентрували Н Третбутиловий естер (1 -{1 -[2,4під вакуумом одержуючи продукт у вигляді білої дифторбензилоксиметил)-2-оксо-2-[3-оксо-За1 твердої речовини (7,2г) Н-ЯМР (CDCI3) 5 2,51 піридин-2-ілметил-2-(2,2,2-трифторетил)2,72 (м, 4Н), 3,35 (м, 2Н), 3,49 (м, 2Н), 4,03 (м, 1Н), 2,3,За,4,6,7-гексапдропіразол[4,3-с]піридин-5-іл]4,25 (м, 1Н), 7,08 (д, 2Н), 7,51 (т, 1Н), 8,37 (д, 1Н) етилкарбамоіл}метилетил)карбамшовоі кислоти D За-Піридин-2-ілметил-2-(2,2,2(a) Продукт стадії D (517г, 1,12моль) додавали приблизно при -6°С до етилацетату (5170мл) що трифторетил)2,За,4,5,6,7-гексапдропіразол [4,3знаходиться в сухій промитій азотом 12л круглос]піридин-3-он, (DJ-тартрат донній колбі спорядженій механічною мішалкою У суху і очищену азотом 5л круглодонну колбу Розчин охолоджували до приблизно -40°С, потім споряджену механічною мішалкою, до продукту приблизно 45 хвилин додавали триетиламш стадії С (243г, 0,78 моль) в суміші ацетон/вода (9 (398мл, 2,86моль) Реакційну суміш перемішували 1, 2430мл) додавали Ь-(-)-винну кислоту (129г, приблизно 90хв При температурі від приблизно 0,86моль) приблизно при 17°С Суміш перемішу50°С до приблизно -40°С, фільтрували у 22л кругвали при кімнатній температурі протягом ночі, філодонну колбу промиту азотом і промивали етильтрували, тверду речовину збирали і промивали лацетатом (2068мл, охолодженим до приблизно холодним ацетоном і сушили під вакуумом Одер50°С) одержуючи вільну основу у вигляді білої жаний продукт мав вигляд жовтої твердої речовитвердої речовини ни (284г, вихід 78,8%) Е 2-Третбутоксикарбоніламшо-3-(2,4(b) Продукт стадії G (425г, 1,02моль) додавали дифторбензилокси)пропюнова кислота приблизно при -30°С до етилацетати о го розчину, що містить продукт стадії Н(а), триетиламш До розчину N-Boc-(D)-cepHHy (452г, (654мл, 4,69моль) і РРАА (50% в етилацетаті, 2,2026моль) в суміші ТГФ (7л) і ДМФА (Зл) при916мл, 1,53моль) Реакційну суміш перемішували близно при 0°С додавали розчин третбутоксиду приблизно 1 годину, промивали водою і насиченим калію (515,8г, 4,5963моль) Реакційну суміш переводним NaCI, сушили над Na2SO4 і концентрували мішували приблизно при 0°С приблизно ЗОхв, під вакуумом одержуючи продукт у вигляді масла потім додавали 2,4-дифторбензилбромід (456,5г, (636г, вихід 87,8%) 2,2051 моль) Після нагрівання до кімнатної температури, реакційну суміш концентрували під вакуу1 2-Амшо-І\І-{1-(2,4-дифторбензилоксиметил)мом видаляючи ТГФ Реакційну суміш розділяли 2-оксо-2-[3-оксо-За-піридин-2-іл-метил-2-(2,2,2між 4,5л НгО і 4,5л ІРЕ Шари розділяли і рН водтрифторетил)-2,3,3а,4,6,7-гексапдропіразол[4,3ного шару доводили до приблизно 3 використовус]піридин-5-іл]етил}-2-метилпропюнамід ючи 1 N розчин НСІ Водний шар ДВІЧІ екстрагуваМетансульфонову кислоту (258,3мл, 3,98моль) ли по 4л ІРЕ Органічний розчин сушили над по краплям приблизно при 15°С приблизно 55 Na2SO4 і концентрували під вакуумом одержуючи хвилин додавали до продукту стадії Н (566г, жовту воскоподібну тверду речовину (518,0г, вихід 0,796моль) в СН2СІ2 (11,320мл) в сухій промитій 1 70,9%) Н-ЯМР (CDCI3) 5 1,44 (с, 9Н), 3,73 (м, 1Н), азотом 22л круглодонній колбі спорядженій меха3,94 (д, 1Н), 4,44 (шс, 1Н), 4,54 (с, 2Н), 5,34 (м, 1Н), нічної мішалкою Суміш перемішували приблизно 6,78 (м, 1Н), 6,84 (м,1Н), 7,30 (м,1Н) 40 хвилин приблизно при 20°С, потім додавали насичений водний ІЧаНСОз (8,490мл) до одержанF Метансульфоново кислотна сіль 2-амшо-Зня рН приблизно 7,8 Органічний шар ВІДДІЛЯЛИ, (2,4-дифторбензилокси)пропюновоі кислоти промивали водою і насиченим водним NaCI, суДо розчину продукту стадія Е (1,19г, шили над Na2S04 і концентрували під вакуумом 3,59ммоль) в СН2СІ2/ІРЕ (1 1, 12мл) за допомоодержуючи маслоподібний продукт (388,8г, вихід гою шприця приблизно 10 хвилин додавали мета80%) нсульфонову кислоту (1,72г, 17,95ммоль) Твердий продукт негайно випадав з розчину Через 1 годиJ 2-Амшо-^{1-(2,4-дифторбензилоксиметил)ну, тверду речовину фільтрували і промивали су2-оксо-2-[3-оксо-За-піридин-2-іл-метил-2-[2,2,2мішшю СН2СІ2/ІРЕ (1 1) одержуючи 939мг продукту трифторетил)-2,3,3а,4,6,7-гексапдропіразол[4,3(вихід 80%) с]піридин-5-іл]етил}2-метил-пропюнамід, (L)-(+)тартрат G 2-(2-Третбутоксикарбоніламшо-2метилпропюніламшо)-3-(2,4До розчину продукту стадії І (370г, О.бмоль) в дифторбензилокси)пропюнова кислота метанолі (4,070мл) в 12л круглодонній колбі спорядженій механічної мішалкою додавали (!_)-(+)До розчину продукт стадії F (520мг, винну кислоту (90г, О.бмоль) Реакційну суміш пе1,46ммоль) в ТГФ/вода (4 1, Юмл) додавали 2,5ремішували приблизно 90хв приблизно при 22°С, дюксопіролідин-1-іловий естер 2фільтрували і концентрували Неочищений залитретбутоксикарбоніламіно-2-метилпропюновоі шок розводили етилацетатом (4,560мл), нагрівали кислоти (438мг, 1,46ммоль) і триетиламш (369мг, приблизно до 70°С і повільно охолоджували до 3,65ммоль) Реакційну суміш перемішували при кімнатної температури приблизно 17 годин Тверкімнатній температурі приблизно 1 годину і гасили ду речовину фільтрували і сушили одержуючи білі 10% водним розчином лимонної кислоти (Юмл) кристали, Т пл 188 - 189°С (348,46г, вихід 76%) Через 15хв додавали етилацетат (50мл) і органіч1 Н ЯМР (МеОН, d4) 5 8,28 (д, 1Н), 7,59 (т, 1Н), ний шар ВІДДІЛЯЛИ, промивали насиченим водним 7,41 - 7,39 (м, 1Н), 7,18 - 7,13 (м, 1Н), 6,92 (т, 1Н), NaCI, сушили над Na2SO4 і концентрували під ва5,2 (т, 1Н), 4,56 (шс, ЗН), 4,36 (с, 2Н), 4,31-4,25 (м, куумом одержуючи піну (534,1мг, вихід 88%) 1 Н1Н), 4,13 - 4,06 (м, 1Н), 3,78 (д, 2Н), 3,21 (т, 1Н), ЯМР (CD3OD) 5 1,38 (шс, 15Н), 3,77 (д, 1Н), 3,92 3,18 - 2,96 (м, 2Н), 2,65 - 2,55 (м, 2Н), 1,57 (д, 6Н), (д, 1Н), 4,52 (м, ЗН) 6,92 (м, 1Н), 7,41 (м 1Н), 7,58 МС МН+611 [af 8 9 + 22,03 (с = 11,9, МеОН) (Д, 1Н) 33 53716 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24 34