Метаболіти (r)-3-(4-(7н-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1н-піразол-1-іл)-3-циклопентилпропаннітрилу, інгібітору janus кіназ

Реферат: Даний винахід пропонує активні метаболіти 3-(4-(7Н-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1Н-піразол-1іл)-3-циклопентилпропаннітрилу, які модулюють активність Janus-кіназ і які використовують для лікування захворювань, пов'язаних з активністю Janus-кіназ, включаючи, наприклад, пов'язані з імунною системою хвороби, шкірні захворювання, мієлоїдні проліферативні порушення, рак і інші хвороби. UA 99465 C2 (12) UA 99465 C2 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Даний винахід пропонує активні метаболіти (R)-3-(4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1Hпіразол-1-іл)-3-циклопентилпропаннітрилу, які модулюють активність Janus кіназ і які використовують для лікування захворювань, пов'язаних з активністю Janus кіназ, включаючи, наприклад, імунопатологічні захворювання, шкірні захворювання, мієлоїдні проліферативні порушення, рак і інші хвороби. Попередній рівень техніки Протеїнкінази (PK) являють собою групу ферментів, які регулюють різноманітні біологічні процеси, включаючи серед інших ріст, виживання і диференціацію клітин, утворення і морфогенез органів, неоваскуляризацію, репарацію і регенерацію тканини. Протеїнкінази здійснюють свої фізіологічні функції через каталізування фосфорилування білків (або субстратів) і за допомогою цього модулюючи клітинну активність субстратів в різних біологічних середовищах. Крім функцій в нормальних тканинах/органі, багато які протеїнкінази грають більш спеціалізовані ролі в хазяїні-носії захворювань людини, включаючи рак. Підмножина протеїнкіназ (які також називаються онкогенними протеїнкіназами), при порушенні регуляції, можуть спричинити утворення і зростання пухлин, і надалі сприяти підтримці і прогресуванню пухлини (Blume-Jensen Р et al., Nature 2001, 411(6835):355-365). Досі онкогенні протеїнкінази являють собою одну з найбільш великих і найбільш привабливих груп мішеней-білків для впливу на рак і розробки лікарських засобів. Сімейство Janus кіназ (JAK) грає роль в цитокін-залежній регуляції проліферації і функціонуванні клітин, залучених до імунної реакції. У цей час для ссавців відомо чотири представники сімейства JAK: JAK1 (також відома як Janus кіназа-1), JAK2 (також відома як Janus кіназа-2), JAK3 (також відома як Janus кіназа, лейкоцит; JAKL; L-JAK і Janus кіназа-3) і TYK2 (також відома як протеїнтирозинова кіназа 2). Розмір білків JAK коливається в діапазоні від 120 до 140 кДа, і ці білки JAK містять сім консервативних доменів JAK гомології (JH); один з них являє собою функціональний каталітичний кіназний домен, і інший являє собою псевдокіназний домен, який потенційно виконує регуляторні функції і/або служить як стикувальний сайт для STATs (Scott, Godshall et al. 2002, supra). Блокування сигнальної трансдукції на рівні JAK кіназ являє собою перспективний підхід для вдосконалення лікування ракових захворювань людини. Інгібування JAK кіназ, як очікується, також може привести до сприятливого наслідку лікування для пацієнтів, страждаючих шкірними імунопатологічними захворюваннями, такими як псоріаз і шкірна сенсибілізація. Таким чином, існує потреба в інгібіторах Janus кіназ і родинних кіназ, і в деяких публікаціях повідомляється про ефективні класи сполук подібного типу. Наприклад, про деякі інгібіториJAK, включаючи (R)3-(4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл)-3-циклопентилпропаннітрил, формула якого представлена нижче повідомляється в заявці на патент США № 11/637545, поданій 12 грудня 2006 року. Таким чином, постійно існує потреба в нових і поліпшених засобах, які інгібують кінази, такі як Janus кінази, для розробки на їх основі нових і більш ефективних фармацевтичних препаратів для лікування раку і інших захворювань. Метаболіти, композиції і способи, описані в даному описі, спрямовані на задоволення цих потреб і інших цілей. Короткий виклад суті винаходу Даний винахід пропонує сполуку, вибрану з 3-(4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл])-1H-піразол-1-іл)-3-(3гідроксициклопентил)пропаннітрилу; 3-(4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл)-3-(2гідроксициклопентил)пропаннітрилу і 3-(4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл)-3-(3-оксоциклопентил)пропаннітрилу; 1 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 або її фармацевтично прийнятну сіль. Крім того, даний винахід пропонує одну або декілька з вищезазначених сполук, або їх фармацевтично прийнятні солі, в по суті ізольованій формі. Крім того, даний винахід пропонує композиції, що містять сполуку за даним винаходом, або її фармацевтично прийнятну сіль, і, щонайменше, один фармацевтично прийнятний носій. Далі даний винахід пропонує способи модуляції активності JAK, що включають контактування JAK із сполукою за даним винаходом або її фармацевтично прийнятною сіллю. Даний винахід, крім того, пропонує способи лікування хвороби у пацієнта, що включають введення пацієнту терапевтично ефективної кількості сполуки за даним винаходом або її фармацевтично прийнятної солі. Даний винахід, крім того, пропонує сполуки за даним винаходом або їх фармацевтично прийнятні солі для застосування в способі лікування людини або тварини (терапевтичним шляхом). Даний винахід, крім того, пропонує сполуки за даним винаходом або їх фармацевтично прийнятні солі для застосування в способі лікування одного або декількох захворювань, описаного в даному описі. Крім того, даний винахід також пропонує застосування сполук за даним винаходом або їх фармацевтично прийнятних солей для одержання лікарського засобу для застосування в способі лікування одного або декількох захворювань, описаного в даному контексті. Докладний опис винаходу Даний винахід пропонує сполуки, які є активними метаболітами (R)-3-(4-(7H-піроло[2,3d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл)-3-циклопентилпропаннітрилу, інгібітору JAK. Ці метаболіти модулюють активність однієї або декількох JAK і їх використовують, наприклад, для лікування хвороб, пов'язаних з експресією або активністю JAK. Метаболіти за даним винаходом представлені в таблиці 1 нижче. Приведені структури, як передбачають, охоплюють всі можливі стереоізомери. Таблиця 1 Посилання (на сполуку) Назва Метаболіт 1 3-(4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол1-іл)-3-(3-гідроксициклопентил) пропаннітрил Метаболіт 2 3-(4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол1-іл)-3-(2-гідроксициклопентил) пропаннітрил 2 Структура UA 99465 C2 Продовження таблиці Метаболіт 3 5 10 15 20 25 30 35 40 3-(4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол1-іл)-3-(3-оксоциклопентил) пропаннітрил Метаболіти за даним винаходом виділяють із зразків сечі щурів або собак, зібраних при фармакокінетичних і токсикокінетичних дослідженнях інгібітора JAK, (R)-3-(4-(7H-піроло[2,3d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл)-3-циклопентилпропаннітрилу (сполука 1). Як видно з таблиці 2 і детального розгляду прикладу А, метаболіти є активними і сильнодіючими інгібіторами JAK і мають переважні властивості, які пов'язані з істотно більшими вільними фракціями і більш високою метаболічною стабільністю в мікросомах людини, в порівнянні із сполукою 1. Ці дані дають можливість передбачити, що метаболіти за даним винаходом можуть, відповідно до бажання, мати більш тривалий період напіввиведення у людей, чим має сполука 1. У деяких варіантах метаболіти за даним винаходом знаходяться по суті в ізольованій формі. Під виразом "по суті ізольована" мається на увазі, що сполука, щонайменше, частково або по суті виділена з середовища, в якій вона одержана або виявлена. Часткове розділення може включати, наприклад, склад, збагачений частково сполукою за даним винаходом. Істотне розділення може включати склади, що містять, щонайменше, близько 50 %, щонайменше, близько 60 %, щонайменше, близько 70 %, щонайменше, близько 80 %, щонайменше, близько 90 %, щонайменше, близько 95 %, щонайменше, близько 97 %, або, щонайменше, близько 99 % мас. метаболіту. Даний винахід також включає фармацевтично прийнятні солі сполук, описаних в даному контексті. Термін "фармацевтично прийнятні солі", що використовується в даному контексті, стосується похідних розкритих сполук, в яких батьківська сполука модифікована шляхом перетворення існуючої кислотної або основної частини в її сольову форму. Приклади фармацевтично прийнятних солей включають, але не обмежуючись цим, солі неорганічних або органічних кислот основних залишків, таких як аміни; лужні або органічні солі кислотних залишків, таких як карбонові кислоти, і т.п. Фармацевтично прийнятні солі за даним винаходом включають звичайні нетоксичні солі батьківської сполуки, одержані, наприклад, з нетоксичних неорганічних або органічних кислот. Фармацевтично прийнятні солі за даним винаходом можуть бути синтезовані з батьківської сполуки, яка містить основну або кислотну частину, звичайними хімічними способами. Загалом, такі солі можна одержати шляхом взаємодії вільних кислотних або основних форм цих сполук зі стехіометричною кількістю відповідної основи або кислоти у воді або в органічному розчиннику, або в суміші обох; як правило, переважне використання неводного середовища, такого як простий ефір, етилацетат, етанол, ізопропанол або ацетонітрил. Перелік відповідних солей є в Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, р. 1418 і Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), зміст кожної з яких входить в даний опис в повному об'ємі у вигляді посилання. Вираз "фармацевтично прийнятний" використовують в даному описі при посиланні на сполуки, матеріали, композиції і/або лікарські форми, які, в рамках розумної медичної оцінки, є відповідними для використання в контакті з тканинами людини і тварин без вияву надмірної токсичності, подразнення, алергічної реакції або виникнення іншої проблеми або ускладнення, з відповідним розумним відношенням користь/ризик. Метаболіти асиметричні (наприклад, що мають один або декілька стереоцентрів). Якщо не обумовлено інакше, то маються на увазі всі стереоізомери, такі як енантіомери і діастереомери. Способи одержання оптично активних форм з оптично активних вихідних продуктів відомі в даній галузі, як наприклад, шляхом розділення рацеміних сумішей або шляхом стереоселективного синтезу. 3 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Сполуки за даним винаходом також включають всі ізотопи атомів, що зустрічаються в метаболітах. Ізотопи включають атоми, що мають однаковий атомний номер, але різні масові числа. Наприклад, ізотопи водню включають тритій і дейтерій. Термін "сполука", що використовується в даному описі, як вважають, включає всі стереоізомери, геометричні ізомери, таутомери і ізотопи зображених структур. Синтез Сполуки за даним винаходом, включаючи їх солі, можуть бути одержані, використовуючи відомі способи органічного синтезу, і вони можуть бути синтезовані відповідно до будь-якого з багатьох можливих шляхів синтезу. Реакції одержання сполук за даним винаходом можна здійснювати у відповідних розчинниках, які можуть бути легко підібрані фахівцем середньої кваліфікації в галузі органічного синтезу. Відповідні розчинники можуть бути, по суті, хімічно не активні по відношенню до початкових продуктів (реагуючих речовин), проміжних продуктів або продуктів при температурах, при яких протікають реакції, наприклад, температурах, які можуть коливатися в діапазоні від температури замерзання розчинника до температури кипіння розчинника. Дана реакція може здійснюватися в одному розчиннику або суміші з більш ніж одного розчинника. У залежності від конкретної стадії реакції відповідні розчинники для конкретної стадії реакції можуть бути вибрані фахівцем в даній галузі. Одержання сполук за даним винаходом може включати реакції здійснення захисту різних хімічних груп і видалення захисних груп. Необхідність здійснення захисту і зняття захисту і вибір відповідних захисних груп може бути легко визначені фахівцем в даній галузі. Хімію захисних груп можна знайти, наприклад, в T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd. Ed., Wiley & Sons, Inc., New York (1999), яка включена в даний опис в повному об'ємі у вигляді посилання. Реакції можуть контролюватися за допомогою будь-якого відповідного методу, відомого в даній галузі. Наприклад, утворення продукту можна контролювати, використовуючи різні методи 1 13 , спектроскопії, такі як спектроскопія ядерного магнітного резонансу (наприклад, H або C) інфрачервона спектроскопія, спектрофотометрія (наприклад, ультрафіолетова-видима), або мас-спектрометрія, або хроматографічні методи, такі як високоефективна рідинна хроматографія (ВЕРХ) або тонкошарова хроматографія. Сполуки за даним винаходом можна одержати згідно з численними препаративними способами, відомими в літературі. Ілюстративні синтетичні способи одержання сполук за даним винаходом приводяться на нижченаведених схемах. Як показано на схемі 1, синтез діастереомерної суміші цис-спиртів I починається з циклопентенкарбонової кислоти 1. Циклопентенкарбонову кислоту 1 піддають бромолактонізації, відповідно до способу, описаного раніше (Hodgson, David M.; Witherington, Jason; Moloney, Brian А., Journal of the Chemical Society, Perkin Transactions 1: Organic and BioOrganic Chemistry, 1994, 23, 3950), одержуючи відповідний бромлактон 2. Бромлактон 2 дебромують, використовуючи дегалогенуючий агент, такий як (Me 3Si)3SiH, одержуючи 3. Лактон 3 відновлюють до відповідного гемікеталю, використовуючи відновник, такий як DIBAL-H; одержаний гемікеталь обробляють безпосередньо ілідом 3a, одержуючи похідне кротонітрилу 4. Потім нітрил 4 піддають взаємодії з піразолом 5 в присутності основи, такої як DBU, одержуючи 6 у вигляді суміші діастереомерів, яку перетворюють в спирти I після видалення групи SEM. Індивідуальні стереоізомери цієї суміші (I) можуть бути розділені хіральною хроматографією, з одержанням енантіомерно чистих спиртів (4 результуючих стереоізомери). 4 UA 99465 C2 Схема 1 1:1 суміш діастереомерів 5 10 Як показано на схемі 2, синтез транс-спиртів II починається з діастереомерної суміші спиртів 6. Діастереомерну суміш спиртів 6 обробляють бензойною кислотою в умовах реакції Міцунобу, одержуючи суміш транс-бензоатів 7 при повній інверсії. Суміш бензоатів 7 гідролізують обробкою основою, такою як LiOH, одержуючи суміш транс-спиртів 8. Потім видаляють групу SEM в спиртах 8, одержуючи діастереомерну суміш транс-спиртів II, яку розділяють хіральною хроматографією, одержуючи індивідуальні стереоізомери (4 результуючих стереоізомери). 5 UA 99465 C2 Схема 2 5 Синтез кетонів III представлений на схемі 3. Суміш цис-спиртів 6 може бути окислена в умовах реакції Сверна з одержанням відповідної суміші кетонів 9. Видаляють групу SEM в кетонах 9, одержуючи суміш кетонів III, яку розділяють хіральною хроматографією, одержуючи індивідуальні стереоізомери (4 результуючих стереоізомери). Схема 3 10 15 20 Способи Сполуки за даним винаходом можуть модулювати активність однієї або декількох Janus кіназ (JAK). Термін "модулювати", як вважають, стосується здатності збільшувати або знижувати активність одного або декількох представників JAK сімейства кіназ. Таким чином, сполуки за даним винаходом можуть бути використані в способах модуляції JAK шляхом контактування JAK з будь-яким одним або декількома із сполук або композицій, описаних в даному описі. У деяких варіантах сполуки за даним винаходом можуть діяти як інгібітори однієї або декількох JAK. У деяких варіантах сполуки за даним винаходом можуть діяти, стимулюючи активність однієї або декількох JAK. В інших варіантах сполуки за даним винаходом можуть бути використані для модуляції активності JAK в індивідуума при необхідності модуляції рецептора шляхом введення модулюючої кількості сполуки за даним винаходом. JAK, з якими сполуки за даним винаходом зв'язуються і/або які модулюються сполуки за даним винаходом, включають будь-якого представника сімейства JAK. У деяких варіантах JAK 6 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 являє собою JAK1, JAK2, JAK3 або TYK2. У деяких варіантах JAK являє собою JAK1 або JAK2. У деяких варіантах JAK являє собою JAK2. У деяких варіантах JAK являє собою JAK3. Сполуки за даним винаходом можуть бути селективними. Під "селективною" мається на увазі, що сполука зв'язується з або інгібує JAK з більш високою спорідненістю або ефективністю, відповідно, в порівнянні з, щонайменше, однією іншою JAK. У деяких варіантах сполуки за даним винаходом є селективними інгібіторами JAK1 або JAK2 в порівнянні з JAK3 і/або TYK2. У деяких варіантах сполуки за даним винаходом є селективними інгібіторами JAK2 (наприклад, в порівнянні з JAK1, JAK3 і TYK2). Не торкаючись ніяких теоретичних обгрунтувань, оскільки інгібітори JAK3 можуть привести до імунодепресивних дій, сполука, яка є селективною у відношенні JAK2 в порівнянні з JAK3 і яку використовують для лікування раку (такого як множинна мієлома, наприклад), може запропонувати додаткову перевагу, що полягає в меншому вияві імунодепресивних побічних дій. Селективність може бути більшою, щонайменше, приблизно в 5 разів, щонайменше, приблизно в 10 разів, щонайменше, приблизно в 20 разів, щонайменше, приблизно в 50 разів, щонайменше, приблизно в 100 разів, щонайменше, приблизно в 200 разів, щонайменше, приблизно в 500 разів або щонайменше, приблизно в 1000 разів. Селективність можна виміряти способами, загальноприйнятими в даній галузі. У деяких варіантах селективність може бути тестована, визначаючи Km кожного ферменту. У деяких варіантах селективність сполук за даним винаходом у відношенні JAK2 в порівнянні з JAK3 може бути визначена по клітинній концентрації АТФ (ATP). Інший аспект даного винаходу стосується способів лікування пов'язаного з JAK захворювання або порушення у індивідуума (наприклад, пацієнта) шляхом введення індивідууму, потребуючому такого лікування, терапевтично ефективної кількості або дози сполуки за даним винаходом або фармацевтичної композиції на її основі. Пов'язана з JAK хвороба може включати будь-яку хворобу, порушення або стан, який безпосередньо або непрямо пов'язаний з експресією або активністю JAK, включаючи надекспресію і/або патологічні рівні активності. Пов'язана з JAK хвороба може також включати будь-яку хворобу, порушення або стан, яким можна запобігти, полегшити або вилікувати шляхом модуляції активності JAK. Приклади JAK-пов'язаних захворювань включають хвороби за участю імунної системи, включаючи, наприклад, відторгнення трансплантату (органу) (наприклад, відторгнення алотрансплантату і хворобу "трансплантат проти хазяїна"). Інші приклади пов'язаних з JAK хвороб включають аутоімунні захворювання, такі як розсіяний склероз, ревматоїдний артрит, ювенільний артрит, діабет I типу, звичайний вовчак, псоріаз, запальне захворювання кишечнику, неспецифічний виразковий коліт, хвороба Крона,міастенія важка, імуноглобулінові нефропатії, аутоімунні порушення щитовидної залози, і т.п. В деяких варіантах аутоімунна хвороба являє собою аутоімунне булезне шкірне порушення, таке як звичайна [вульгарна] пухирчатка (PV) або булезний пемфігоїд (BP). Інші приклади пов'язаних з JAK хвороб включають алергічні стани, такі як астма, харчові алергії, дифузний нейродерміт і риніт. Інші приклади пов'язаних з JAK хвороб включають вірусні захворювання, такі як вірус Епштейна-Бар (EBV), гепатит В, гепатит С, вірус імунодефіциту людини (HIV), Т-клітинний лімфотропний вірус людини 1 типу (HTLV 1), вірус вітряної віспи (VZV) і вірус папіломи людини (HPV). Інші приклади пов'язаних з JAK хвороб або станів включають шкірні захворювання, такі як псоріаз (наприклад, псоріаз звичайний), дифузний нейродерміт, шкірний висип, подразнення шкіри, шкірна сенсибілізація (наприклад, контактний дерматит або алергічний контактний дерматит). Наприклад, деякі речовини, включаючи фармацевтичні препарати, при місцевому застосуванні, можуть викликати шкірну сенсибілізацію. У деяких варіантах спільне введення або послідовне введення, щонайменше, одного інгібітору JAK за даним винаходом разом із засобом, що викликає небажану сенсибілізацію, може бути корисним в лікуванні такої небажаної сенсибілізації або дерматиту. У деяких варіантах шкірне захворювання лікують місцевим нанесенням, щонайменше, одного інгібітору JAK за даним винаходом. В інших варіантах пов'язана з JAK хвороба являє собою рак, включаючи типи раку, що характеризуються утворенням солідних пухлин (наприклад, рак передміхурової залози, рак нирки, рак печінки, рак підшлункової залози, рак шлунка, рак молочної залози, рак легені, рак голови і рак шиї, рак щитовидної залози, гліобластома, саркома Капоші, хвороба Кастлемана, меланома і т.д.), злоякісні захворювання крові (наприклад, лімфома, лейкоз, такий як гострий лімфобластний лейкоз, гострий мієлоїдний лейкоз (AML) або множинна мієлома), і рак шкіри, такий як Т-клітинна лімфома шкіри (CTCL) і В-клітинна лімфома шкіри. Ілюстративні Т-клітинні лімфоми включають Сезарі ретикульоз і грибоподібний мікоз. 7 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Пов'язані з JAK хвороби можуть, крім того, включати хвороби, що характеризуються експресією мутантної JAK2, такою як мутантні JAK2, що мають, щонайменше, одну мутацію в псевдокіназному домені (наприклад, JAK2V617F). Пов'язані з JAK захворювання можуть, крім того, включати мієлопроліферативні порушення (MPD), такі як червона або істинна поліцитемія (PV), есенціальна тромбоцитемія (ET), мієлоїдна метаплазія з мієлофіброзом (MMM), хронічний мієлоїдний лейкоз (CML), хронічний мієломоноцитарний лейкоз (CMML), синдром гіпереозинофілії (HES), системний мастоцитоз (SMCD), і т.п. Інші пов'язані з JAK хвороби включають запалення і запальні захворювання. Ілюстративні запальні хвороби включають запальні захворювання ока (наприклад, ірит, увеїт, склерит, кон'юнктивіт або супутня хвороба), запальні захворювання дихальних шляхів (наприклад, верхніх дихальних шляхів, включаючи ніс і синуси, такий як риніт або синусит, або нижніх дихальних шляхів, включаючи бронхіт, хронічну обструктивну хвороба легенів, і т.п.), запальну міопатію, таку як міокардит, і інші запальні захворювання. Інші запальні захворювання, що піддаються лікуванню сполуками за даним винаходом, включають синдром системної запальної реакції (SIRS) і септичний шок. Інгібітори JAK, описані в даному описі, можуть, крім того, використовуватися для лікування пошкоджень, викликаних ішемічною реперфузією, або хвороб або станів, пов'язаних із запальним ішемічним ускладненням, таким як удар або зупинка серця. Інгібітори JAK, описані в даному описі, можуть бути, крім того, використані для лікування анорексії, кахексії або стомлення, такого як втома, що є наслідком, або, що асоціюється з прогресуванням раку. Інгібітори JAK, описані в даному контексті, можуть бути, крім того, використані для лікування рестенозу, склеродерміту або фіброзу. Інгібітори JAK, описані в даному контексті, можуть, крім того, використовуватися для лікування станів, пов'язаних з гіпоксією або астрогліозом, таких як, наприклад, діабетична ретинопатія, рак або нейродегенерація. Див., наприклад, Dudley, A.C. et al. Biochem. J. 2005, 390(Pt 2):427-36 і Sriram, K. et al. J. Biol. Chem. 2004, 279(19): 19936-47. Epub 2004 Mar 2. Інгібітори JAK, описані в даному описі, можна, крім того, використовувати для лікування подагри і збільшення розміру простати, зумовленого, наприклад, доброякісною гіпертрофією передміхурової залози або доброякісною гіперплазією передміхурової залози. Термін "контактування", що використовується в даному описі, стосується зведення разом вказаних частин в системі in vitro або системі in vivo. Наприклад, "контактування" JAK із сполукою за даним винаходом включає введення сполуки за даним винаходом індивідууму або пацієнту, такому як людина, що має JAK, а також, наприклад, введення сполуки за даним винаходом в зразок, що містить клітинний або очищений препарат, що містить JAK. Термін "індивідуум" або "пацієнт", що використовується в даному описі взаємозамінно, стосується будь-якої тварини, включаючи ссавців, переважно мишей, щурів, інших гризунів, кроликів, собак, кішок, свиней, великої рогатої худоби, овець, коней або приматів, і найбільш переважно людини. Вираз "терапевтично ефективна кількість", що використовується в даному контексті, стосується кількості активної сполуки або фармацевтичного засобу, яка викликає біологічну реакцію або реакцію на лікарський засіб, до вияву якої в тканині, системі, тварині, індивідуумі або людині прагне дослідник, ветеринарний лікар, лікуючий лікар або інший клініцист. Термін "лікування" або "терапія", що використовується в даному описі, стосується одного або декількох з нижченаведеного: (1) запобігання розвитку захворювання; наприклад, запобігання хвороби, стану або порушенню в індивідуума, який може бути схильний до розвитку захворювання, стану або порушення, але ще не відчуває або в якого немає на даний момент вияву патології або симптоматики, що стосується даного захворювання; (2) придушення розвитку захворювання; наприклад, придушення захворювання, стану або порушення в індивідуума, який відчуває або в якого на даний момент є ознаки вияву патології або симптоматики даного захворювання, стану або порушення; і (3) полегшення захворювання; наприклад, зменшення інтенсивності симптомів захворювання, стану або порушення в індивідуума, який відчуває або в якого на даний момент є ознаки вияву патології або симптоматики даного захворювання, стану або порушення (тобто реверсія патології і/або симптоматики), а саме, зниження тяжкості захворювання. Комбіновані лікування (комплексні терапії) Один або декілька додаткових фармацевтичних засобів, таких як, наприклад, хіміотерапевтичні засоби, протизапальні засоби, стероїди, імунодепресивні засоби, а також інгібітори Bcr-Abl, Flt-3, RAF і FAK, такі як, наприклад, інгібітори кіназ, описані в WO 2006/056399, або інші засоби, можуть бути використані в комбінації із сполуками за даним 8 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 винаходом для лікування JAK-пов'язаних хвороб, порушень або станів. Один або декілька додаткових фармацевтичних засобів можуть вводитися пацієнту одночасно або послідовно. Ілюстративні хіміотерапевтичні засоби включають інгібітори протеосом (наприклад, бортезоміб), талідомід, ревлимід, і ДНК-вражаючі засоби, такі як мелфалан, доксорубіцин, циклофосфамід, вінкристин, етопозид, кармустин, і т.п. Приклади стероїдів включають кортикостероїди, такі як дексаметазон або преднізон. Приклади інгібіторів Bcr-Abl включають сполуки, і їх фармацевтично прийнятні солі, типів і різновидів, розкритих в патенті США 5521184, WO 04/005281, EP2005/009967, EP2005/010408 і U.S. № 60/578491. Приклади відповідних інгібіторів Flt-3 включають сполуки і їх фармацевтично прийнятні солі, розкриті в WO 03/037347, WO 03/099771 і WO 04/046120. Приклади відповідних інгібіторів RAF включають сполуки і їх фармацевтично прийнятні солі, розкриті в WO 00/09495 і WO 05/028444. Приклади відповідних інгібіторів FAK включають сполуки і їх фармацевтично прийнятні солі, розкриті в WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595 і WO 01/014402. У деяких варіантах один або декілька з метаболітів за даним винаходом можуть бути використані в комбінації з одним або декількома іншими інгібіторами кіназ, включаючи іматиніб, зокрема, для лікування пацієнтів, резистентних до іматинібу або інших інгібіторів кіназ. У деяких варіантах один або декілька інгібіторів JAK за даним винаходом можуть бути використані в комбінації з хіміотерапевтичним засобом для лікування раку, такого як множинна мієлома, і ця комбінація може посилити реакцію на лікування в порівнянні з реакцією на лікування тільки одним хіміотерапевтичним засобом, без загострення його токсичних впливів. Приклади додаткових фармацевтичних засобів, що використовуються для лікування множинної мієломи, наприклад, можуть включати, без обмеження, мелфалан, мелфалан плюс преднізон [MP], доксорубіцин, дексаметазон і Velcade (бортезоміб). Інші додаткові засоби, що використовуються для лікування множинної мієломи, включають інгібітори кіназ Bcr-Abl, Flt-3, RAF і FAK. Вияв адитивної або синергічної дії - бажаний наслідок об'єднання інгібітору JAK за даним винаходом з додатковим засобом. Крім того, резистентність клітин множинної мієломи до засобів, таких як дексаметазон, може бути оборотною при лікуванні інгібітором JAK за даним винаходом. Засоби можуть бути об'єднані із сполуками за даним винаходом в одній або безперервній лікарській формі, або засоби можуть вводитися одночасно або послідовно у вигляді роздільних лікарських форм. У деяких варіантах кортикостероїд, такий як дексаметазон, вводять пацієнту в комбінації з, щонайменше, одним інгібітором JAK, і в цьому випадку дексаметазон, в протилежність безперервному введенню, вводять з перервами. У деяких додаткових варіантах комбінації одного або декількох інгібіторів JAK за даним винаходом з іншими терапевтичними засобами можуть бути введені пацієнту до, під час і/або після трансплантації кісткового мозку або трансплантації стовбурових клітин. Фармацевтичні препарати і лікарські форми При використанні як фармацевтичні препарати сполуки за даним винаходом можуть вводиться в формі фармацевтичних композицій. Ці композиції можна одержати способом, добре відомим в фармацевтичній галузі, і їх можна вводити різними способами, в залежності від того, яке потрібне лікування, місцеве або системне, і від того яка ділянка (тіла) підлягає лікуванню. Введення може бути місцевим (включаючи трансдермальне, епідермальне, очне і застосовно до слизових оболонок, включаючи інтраназальну, вагінальну і ректальну доставку), легеневим (наприклад, за допомогою інгаляції або інсуфляції порошків або аерозолів, включаючи шлях за допомогою розпилювача, інтратрахеально або інтраназально), пероральним або парентеральним. Парентеральне введення включає внутрішньовенну, внутрішньоартеріальну, підшкірну, інтраперитонеальну, внутрішньом'язову ін'єкцію або інфузію; або інтракраніальне, наприклад, інтратекальне або інтравентрикулярне введення. Парентеральне введення може здійснюватися в формі разової болюсної дози або може здійснюватися, наприклад, за допомогою перфузійного насоса безперервної дії. Фармацевтичні композиції і препарати для місцевого застосування можуть включати трансдермальні пластири, мазі, лосьйони, креми, гелі, краплі, супозиторії, спреї, рідини і порошки. При цьому може виникнути необхідність або потреба у використанні звичайних фармацевтичних носіїв, водних, порошкоподібних або маслянистих основ, загусників і т.п. Можуть бути також використані забезпечені покриттям презервативи, рукавички і т.п. Даний винахід також включає фармацевтичні композиції, які містять як активний інгредієнт одну або декілька з вищезазначених сполук за даним винаходом в комбінації з одним або 9 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 декількома фармацевтично прийнятними носіями (наповнювачами). При приготуванні композицій за даним винаходом активний інгредієнт звичайно змішують з наповнювачем, розбавляють наповнювачем або вміщують всередину такого носія в формі, наприклад, капсули, пакетика, паперового або іншого контейнера. У тих випадках коли наповнювач служить як розчинник, він може являти собою твердий, напівтвердий або рідкий матеріал, який діє як наповнювач, носій або середовище для активного інгредієнта. Відповідно, композиції можуть знаходитися в формі таблеток, пілюль, порошків, пастилок, саше, облаток, еліксирів, суспензій, емульсій, розчинів, сиропів, аерозолів (у вигляді твердої речовини або в рідкому середовищі), мазей, що містять, наприклад, аж до 10 % мас. активної сполуки, м'яких і твердих желатинових капсул, супозиторіїв, стерильних розчинів для ін'єкції і стерильних порошків в упаковці. При одержанні кінцевого складу композиції активна сполука може бути піддана подрібненню з одержанням частинок відповідного розміру до змішування її з іншими інгредієнтами. Якщо активна споулка, по суті, є нерозчинною, її можна подрібнити до розміру частинок менше ніж 200 меш. Якщо активна сполука є значною мірою розчинною у воді, розмір частинок може бути відрегульований за допомогою подрібнення таким чином, щоб одержати по суті рівномірний розподіл частинок активної сполуки в кінцевому складі композиції, наприклад, близько 40 меш. Сполуки за даним винаходом можуть бути піддані подрібненню, використовуючи відомі способи подрібнення, таке як мокре подрібнення, одержуючи розмір частинок, відповідний для одержання таблеток і інших типів препаратів. Препарати в формі тонкоподрібнених частинок (наночастинок) сполук за даним винаходом можна одержати способами, відомими в даній галузі, наприклад, див. міжнародну патентну заявку WO 2002/000196. Деякі приклади відповідних наповнювачів включають лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбіт, маніт, крохмаль, аравійську камедь, фосфат кальцію, альгінати, трагакант, желатин, силікат кальцію, мікрокристалічну целюлозу, полівінілпіролідон, целюлозу, воду, сироп і метилцелюлозу. Кінцеві склади композицій можуть додатково включати мастила, такі як тальк, стеарат магнію і мінеральне масло; зволожуючі засоби; емульгуючі і суспендуючі засоби; консерванти, такі як метил- і пропілоксибензоати; підсолоджуючі засоби; і ароматизуючі речовини. Композиції за даним винаходом можуть бути складені таким чином, щоб забезпечити швидке, довготривале або пролонговане вивільнення активного інгредієнта після введення пацієнту, використовуючи способи, відомі в даній галузі. Композиції за даним винаходом можуть бути одержані у вигляді разової лікарської форми, при цьому кожна лікарська форма містить від близько 5 до близько 1000 мг (1 г), частіше за все від близько 100 до близько 500 мг, активного інгредієнта. Термін "разові лікарські форми" стосується фізично дискретних одиниць, придатних як одиничні дози для людини і інших ссавців, причому кожна одиниця містить визначену кількість активної речовини, з розрахунку, що забезпечує вияв бажаної терапевтичної дії, в зв'язку з відповідним фармацевтичним наповнювачем. Активна сполука може бути ефективною в межах широкого діапазону доз і звичайно її вводять в фармацевтично ефективній кількості. Потрібно мати на увазі, однак, що кількість сполуки, що фактично вводиться звичайно визначається лікарем, відповідно до існуючих обставин, включаючи стан, що підлягає лікуванню; вибраний спосіб введення, тип сполуки, що реально вводиться, вік, масу тіла і реакцію окремого пацієнта, тяжкість симптомів (захворювання), що виявляються у пацієнта, і т.п. Для одержання твердих композицій, таких як таблетки, основний активний інгредієнт змішують з фармацевтичним наповнювачем, одержуючи попередній склад твердої композиції, що містить гомогенну суміш сполуки за даним винаходом. Посилаючись на ці попередні склади композицій як на гомогенні, мають на увазі, що активний інгредієнт практично рівномірно диспергований по всьому об'єму композиції так, що ця композиція може бути легко поділена на рівноефективні разові лікарські форми, такі як таблетки, пілюлі і капсули. Потім цей попередній склад твердої композиції поділяють на разові лікарські форми описаного вище типу, що містять, наприклад, від близько 0,1 до близько 1000 мг активного інгредієнта за даним винаходом. Таблетки або пілюлі за даним винаходом можуть бути покриті оболонкою або компаундовані іншим чином з метою одержання лікарської форми, що володіє перевагою пролонгованої дії. Наприклад, таблетка або пілюля може включати внутрішній дозований і зовнішній дозований компонент, при цьому останній знаходиться в формі оболонки над першим (з двох). Два компоненти можуть бути розділені ентеросолюбільним шаром, який служить для протидії дезінтеграції в шлунку і дає можливість внутрішньому компоненту проникнути непошкодженим в дванадцятипалу кишку або дозволяє сповільнити його вивільнення. Для одержання таких ентеросолюбільних шарів або покриттів можуть бути використані різні матеріали, і ці матеріали 10 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 включають ряд полімерних кислот і суміші полімерних кислот з такими речовинами як шелак, цетиловий спирт і ацетат целюлози. Рідкі форми, в які сполуки і композиції за даним винаходом можуть бути включені для введення пероральним шляхом або за допомогою ін'єкції, включають водні розчини, відповідним чином ароматизовані сиропи, водні і маслянисті суспензії і ароматні емульсії з харчовою олією, такою як бавовняна олія, кунжутна олія, кокосова олія або арахісова олія, а також еліксири і аналогічні фармацевтичні наповнювачі. Композиції для інгаляції або інсуфляції включають розчини і суспензії в фармацевтично прийнятних, водних або органічних розчинниках або їх сумішах, і порошки. Рідкі або тверді композиції можуть містити відповідні фармацевтично прийнятні наповнювачі, описані вище. У деяких варіантах композиції вводять пероральним шляхом або респіраторним шляхом через ніс для здійснення їх місцевої або системної дії. Композиції можуть розпилюватися шляхом використання інертних газів. Розпилені розчини можна вдихати безпосередньо з розпилюючого пристрою або розпилюючий пристрій може бути приєднаний до тенту, що покриває голову, або дихального апарату, працюючим в режимі позитивного тиску, що перемежається на вдиху. Розчин, суспензія або порошкоподібні композиції можна вводити перорально або назально з пристроїв, які доставляють препарат відповідним чином. Кількість сполуки або композиції, що вводиться пацієнту, звичайно варіюється в залежності від того, яка сполука або яка композиція підлягає введенню, меті введення, як наприклад, профілактика або лікування, стану пацієнта, способу введення, і т.п. При терапевтичному застосуванні композиції можуть вводитися пацієнту, вже страждаючому хворобою, в кількості, достатній для лікування або, щонайменше, часткового придушення симптомів хвороби і її ускладнень. Ефективні дози звичайно залежать від стану хвороби, що підлягає лікуванню, а також розсуду лікаря-консультанта в залежності від ряду факторів, таких як тяжкість захворювання, вік, маса тіла і загальний стан пацієнта, і т.п. Композиції, що вводяться пацієнту, можуть бути в формі фармацевтичних композицій, описаних вище. Ці композиції можуть бути стерилізовані за допомогою звичайних методів стерилізації або можуть бути стерилізовані за допомогою фільтрації. Водні розчини можуть бути упаковані для використання в тому вигляді, як вони є, або ліофілізовані, при цьому ліофілізований препарат об'єднують зі стерильним водним носієм перед введенням. рН препаратів на основі сполуки звичайно знаходиться в діапазоні від 3 до 11, більш переважно від 5 до 9 і найбільш переважно від 7 до 8. Слід мати на увазі, що використання деяких з вищезазначених наповнювачів, носіїв або стабілізаторів може привести до утворення фармацевтичних солей. Терапевтична доза сполук за даним винаходом може варіюватися відповідно до, наприклад, конкретного використання, для якого створюється лікування, способом введення сполуки, здоров'я і стану пацієнта і розсуду лікаря, що прописує вказаний лікарський засіб. Пропорція або концентрація споулки за даним винаходом в фармацевтичній композиції може мінятися в залежності від ряду факторів, включаючи дозу, хімічні властивості (наприклад, гідрофобність), і способу введення. Наприклад, у випадку парентерального введення сполуки за даним винаходом можуть бути представлені у водному фізіологічному буферному розчині, що містить від близько 0,1 до близько 10 % мас./мас. сполуки. Деякі типові діапазони доз складають від близько 1 мкг/кг до близько 1 г/кг маси тіла на день. У деяких варіантах діапазон дози складає від близько 0,01 мг/кг до близько 100 мг/кг маси тіла на день. Ймовірно, що доза залежить від таких змінних як тип і міра прогресування хвороби або порушення, загального стану здоров'я конкретного пацієнта, відносної біологічної ефективності вибраної сполуки, рецептури наповнювача і способу введення лікарського засобу. Ефективні дози можуть бути одержані екстраполяцією кривої залежності доза-ефект, одержаної з in vitro систем для випробувань або модельних тест-систем на тваринах. Композиції за даним винаходом можуть, крім того, містити один або декілька додаткових фармацевтичних засобів, таких як хіміотерапевтичний засіб, стероїд, протизапальний засіб або імунодепресивний засіб, приклади яких перераховані тут вище. Мічені сполуки і методи аналізу Інший аспект даного винаходу стосується мічених сполук за даним винаходом (мічених радіоактивним ізотопом, мічених флуоресцентною речовиною, і т.д.), які можуть бути використані не тільки в способах візуалізації, але також в аналізах, як in vitro, так і in vivo, для визначення місцезнаходження і кількісного визначення JAK в зразках тканини, включаючи людину, і для ідентифікування лігандів JAK шляхом інгібуючого зв'язування міченої сполуки. Таким чином, даний винахід включає аналізи JAK з використанням таких мічених сполук. 11 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Даний винахід, крім того, включає ізотопічно мічені сполуки за даним винаходом. "Ізотопічно" або "мічена радіоактивним ізотопом" сполука являє собою сполуку за даним винаходом, в якій один або декілька атомів замінені або заміщені атомом, що має атомну масу або масове число, відмінне від атомної маси або масового числа, що звичайно зустрічається в природі (тобто природного походження). Відповідні радіонукліди, які можуть бути введені в 2 сполуку за даним винаходом, включають, але ними не обмежуючись, H (що також 3 позначається в письмовій формі як D для дейтерію), H (що також позначається в письмовій 11 13 14 13 15 15 17 18 18 35 36 82 75 76 77 I формі як Т для тритію), C, C, C, N, N, O, O, O, F, S, Cl, Br, Br, Br, Br, 23I, 124 125 131 I, I і I. Вибір радіонукліда, який підлягає введенню в мічені радіоізотопом сполуки за даним винаходом, звичайно залежить від конкретного застосування міченої радіоактивним ізотопом сполуки, що розглядається. Наприклад, для in vitro мічення металопротеази і конкурентно-зв'язуючих аналізів, в більшості випадків звичайно використовують сполуки, які 3 14 82 125 131 35 включають H, C, Br, I, I, S. У випадку застосувань для радіонуклидної візуалізації, 11 18 125 123 124 131 75 76 Br звичайно частіше за все використовують C, F, I, I, I, I, Br, Br або 77 . Зрозуміло, що "мічена радіоактивним ізотопом" або "мічена сполука" являє собою сполуку, яка містить, щонайменше, один радіонуклід. У деяких варіантах радіонуклід вибраний з групи, 3 14 125 35 82 що складається з H, C, I, S і Br. Даний винахід може, крім того, включати синтетичні способи введення радіоактивних ізотопів в сполуки за даним винаходом. Синтетичні способи введення радіоактивних ізотопів в органічні сполуки добре відомі в даній галузі, і фахівцеві середнього рівня компетентності в даній галузі очевидні способи, які можуть бути використані для сполук за даним винаходом. Мічена сполука за даним винаходом може бути використана в скринінг-аналізі для ідентифікування/оцінки сполук. Наприклад, знову синтезована або ідентифікована сполука (тобто випробувана сполука), яку мітять, може бути оцінена на її здатність зв'язувати JAK, контролюючи зміну її концентрації при контактуванні з JAK, через відстеження мічення (введеної мітки). Наприклад, випробувана сполука (мічена) може бути оцінене по її здатності знижувати зв'язування іншої сполуки, яка, як відомо, зв'язується з JAK (тобто стандартна сполука). Таким чином, здатність випробуваної сполуки конкурувати зі стандартною сполукою за зв'язування з JAK безпосередньо корелює з її спорідненістю до зв'язування. Навпаки, в деяких інших скринінг-аналізах мітять стандартну сполуку, а випробувані сполуки є неміченими. Відповідно, для оцінки конкуренції між стандартною сполукою і випробуваною сполукою контролюють концентрацію міченої стандартної сполуки, і таким чином встановлюють відносну спорідненість до зв'язування випробуваної сполуки. Набори Даний винахід також включає фармацевтичні набори, що використовуються, наприклад, для лікування або запобігання пов'язаним з JAK захворюванням або порушенням, таких як рак, і ці набори включають один або декілька контейнерів, що містять фармацевтичну композицію, яка містить терапевтично ефективну кількість сполуку за даним винаходом. Такі набори можуть, крім того, включати, якщо це необхідно, один або декілька з різних звичайних компонентів фармацевтичного набору, таких як, наприклад, контейнери з одним або декількома фармацевтичними прийнятними носіями, додаткові контейнери, і т.д., як це очевидно фахівцям в даній галузі. Крім того, в набір можуть бути включені інструкції або у вигляді вкладишів, або у вигляді етикеток, які вказують на кількість компонентів, що підлягають введенню; рекомендації для введення і/або рекомендації для змішування компонентів. Надалі даний винахід пояснюється більш детально при розгляді конкретних прикладів. Нижченаведені приклади приводяться з ілюстративною метою, і при цьому мається на увазі, що вони жодним чином не обмежують об'єм даного винаходу. Для фахівців в даній галузі очевидна наявність різних невизначальних параметрів, які можуть бути змінені або модифіковані, приводячи, зрештою, до одержання по суті аналогічних результатів. Приклади Приклад 1: 3-[(1S, 3R)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1іл]пропаннітрил і 3-[(1R, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1Hпіразол-1-іл]пропан нітрил 55 12 UA 99465 C2 Стадія 1. 6-бром-2-оксабіцикло[2.2.1]гептан-3-он 5 10 15 20 25 30 35 Бромтриметилсилан (3,1 мл, 0,023 моль) додають по краплях до розчину диметилсульфоксиду (1,6 мл, 0,023 моль) в хлороформі (38,0 мл) в круглодонній колбі при 0 °C. Одержану суміш перемішують при 0 °C протягом 2 годин. До реакційної суміші додають по краплях розчин циклопент-3-ен-1-карбонової кислоти (2,00 г, 0,0178 моль) в хлороформі (12 мл) протягом періоду часу 15 хвилин і реакційну суміш перемішують при 0 °C протягом 10 хвилин. Потім додають N, N-діізопропілетиламін (4,0 мл, 0,023 моль) і одержану суміш перемішують при 0 °C. Через 15 хвилин суміш нагрівають при температурі кипіння із зворотним холодильником протягом 16 годин. Реакційну суміш розбавляють хлороформом, промивають водою, насиченим розчином солі, сушать (MgSО4) і упарюють у вакуумі. Залишок очищають хроматографією на 1 силікагелі, використовуючи як елюент суміш 30 % EtOAc/гексани, з одержанням продукту. H ЯМР (400 МГц, CDCl3):  4,88 (ушир.с, 1H), 4,34 (м, 1H), 2,90 (м, 1H), 2,66 (м, 1H), 2,31 (м, 1H), 1,93 (м, 1H), 1,83 (м, 1H). Стадія 2. 2-оксабіцикло[2.2.1]гептан-3-он Трис(триметилсиліл)силан (4,7 мл, 15 ммоль) додають по краплях до розчину 6-бром-2оксабіцикло[2.2.1]гептан-3-ону (1,96 г, 10,3 ммоль) і 2,2'-азо-біс-ізобутиронітрилу (0,2 г, 1 ммоль) в толуолі (100 мл) в круглодонній колбі і одержану суміш перемішують при 80 °C протягом 5 годин. Реакційну суміш концентрують роторним випаровуванням і залишок розбавляють етилацетатом, промивають насиченим NH4Cl, сушать (MgSО4) і упарюють у вакуумі. Залишок очищають хроматографією на силікагелі, використовуючи як елюенти спочатку 100 % гексани, потім суміш EtOAc/гексани, поступово змінюючи її склад до 25 % EtOAc/гексани, потім 33 % 1 EtOAc/гексани, з одержанням продукту. H ЯМР (300 МГц, CDCl3):  4,93 (м, 1H), 2,91 (м, 1H), 2,19 (м, 1H), 1,60-1,99 (м, 5H). Стадія 3. (2E)- і (2Z)-3-[(1S, 3R)-3-гідроксициклопентил]акрилонітрил і (2E)- і (2Z)-3-[(1R, 3S)3-гідроксициклопентил]акрилонітрил 1,00 M діізобутилалюмінійгідриду в толуолі (8,0 мл) додають по краплях до розчину 2оксабіцикло[2.2.1]гептан-3-ону (600 мг, 5 ммоль) в метиленхлориді (20 мл) в круглодонній колбі при -78 °C. Одержану суміш перемішують при -78 °C протягом 45 хвилин. Реакційну суміш обробляють насиченим розчином сегнетової солі. Після перемішування протягом 15 хвилин реакційну суміш екстрагують етилацетатом і об'єднані органічні екстракти промивають водою, насиченим NaCl, сушать (MgSO4) і упарюють у вакуумі. Неочищений продукт використовують на наступній реакції без додаткового очищення. 13 UA 99465 C2 5 10 Розчин неочищеного 2-оксабіцикло[2.2.1]гептан-3-олу (400 мг, 4 ммоль) і (трифенілфосфораніліден)ацетонітрилу (1,2 г, 3,8 ммоль) в толуолі (12 мл) в круглодонній колбі нагрівають при 80 °C протягом 2 годин. Потім реакційну суміш очищають хроматографією на силікагелі, використовуючи як елюент суміш 40 % EtOAc/гексани, одержуючи рацемічні 1 продукти. H ЯМР (400 МГц, CDCl3):  6,78 (дд, 1H), 5,30 (д, 1H), 5,20 (м, 1H), 2,67 (м, 1H), 2,20 (м, 1H), 1,40-1,90 (м, 6H). Стадія 4. 3-[(1S, 3R)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2-(триметилсиліл) етокси]метил-7Hпіроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрил і 3-[(1R, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропан нітрил і 15 20 25 30 35 40 45 1,8-Діазабіцикло[5.4.0]ундец-7-ен (0,54 мл, 3,6 ммоль) додають до розчину суміші (2E)- і (2Z)-3-[(1S, 3R)-3-гідроксициклопентил]акрилонітрилу і (2E)і (2Z)-3-[(1R, 3S)-3гідроксициклопентил]акрилонітрилу (0,250 г, 1,82 ммоль) і 4-(1H-піразол-4-іл)-7-[2(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідину (0,57 г, 1,8 ммоль) в ацетонітрилі (5 мл) в круглодонній колбі. Одержану суміш перемішують при 25 °C протягом 2 днів, і після закінчення цього часу аналіз методом РХМС показує витрачання ~80 % початкових продуктів. Реакційну суміш очищають хроматографією на силікагелі, використовуючи як елюент суміш 1:1 1 EtOAc/гексани, з одержанням продукту. H ЯМР (400 МГц, CDCl3):  8,90 (д, 1H), 8,39 (м, 2H), 7,46 (м, 1H), 6,86 (м, 1H), 5,73 (с, 2H), 4,52 (м, 2H), 3,59 (м, 2H), 3,2 (м, 1H), 3,02 (м, 1H), 2,78 (м, 1H), 2,3 (м, 1H), 1,30-1,90 (м, 6H), 0,99 (м, 2H), 0,08 (с, 9H). РХ/МС: 453 (M+Н)+. Стадія 5. 3-[(1S, 3R)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3-d] піримідин-4-іл)-1Hпіразол-1-іл]пропаннітрил і 3-[(1R, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрил Тетрафторборат літію (0,176 г, 1,88 ммоль) додають до розчину 3-[(1S, 3R)-3гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1Hпіразол-1-іл]пропаннітрилу і 3-[(1R, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрилу (85,0 мг, 0,188 ммоль) в ацетонітрилі (1,5 мл) і води (0,135 мл) в пробірці. Одержану суміш нагрівають при 85 °C протягом 26 годин. Після надання реакційній суміші можливості охолодитися до 25 °C, до неї додають етилендіамін (63 мкл, 0,94 ммоль) і одержану суміш перемішують при 25 °C протягом 3 годин. Реакційну суміш очищають препаративною РХ, одержуючи продукт у вигляді солі трифтороцтової кислоти. Одержану сіль розчиняють в метанолі і додають Amberlyst 26. Одержану суміш перемішують протягом 10 хвилин, фільтрують і концентрують. Залишок очищають хіральною хроматографією, одержуючи 4 основних піки і 4 другорядних піки (колонка: ChiralPak IA, 4,6×250 мм, розмір частинок 5 мікронів. Рухома фаза: суміш 30 % етанолу в гексанах. Швидкість потоку: 0,8 мл/хв-аналітична; колонка: ChiralPak IA, 20×250 мм, розмір частинок 5 мікронів. Рухома фаза: суміш 30 % етанолу в гексанах. Швидкість потоку: 12 мл/хв-препаративна). Другорядні піки стосуються трифторацетатних ефірів, які дуже рухомі і гідролізуються при стоянні в метанолі до утворення відповідних спиртів. Основний пік 1 [Час втримання: 18,56 хвилин]: 1 H ЯМР (400 МГц, CD3OD):  8,66 (ушир.с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 7,51 (м, 1H), 6,97 (м, 1H), 4,57 (м, 1H), 4,20 (м, 1H), 3,16 (м, 2H), 2,65 (м, 1H), 1,64-2,00 (м, 5H), 1,28 (м, 1H). РХ/МС: + 323 (M+Н) . Основний пік 2 [Час втримання: 25,88 хвилин]: 14 UA 99465 C2 H ЯМР (400 МГц, CD3OD):  8,66 (ушир.с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 7,50 (м, 1H), 6,96 (м, 1H), 4,60 (м, 1H), 4,30 (м, 1H), 3,18 (м, 2H), 2,61 (м, 1H), 2,23 (м, 1H), 1,40-1,80 (м, 5H). РХ/МС: + 323 (M+Н) . Основний пік 3 [Час втримання: 39,84 хвилин]: 1 H ЯМР (400 МГц, CD3OD):  8,66 (ушир.с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 7,50 (м, 1H), 6,96 (м, 1H), 4,60 (м, 1H), 4,30 (м, 1H), 3,18 (м, 2H), 2,61 (м, 1H), 2,23 (м, 1H), 1,40-1,80 (м, 5H). РХ/МС: + 323 (M+Н) . Основний пік 4 [Час втримання: 51,48 хвилин]: 1 H ЯМР (400 МГц, CD3OD):  8,66 (ушир.с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 7,51 (м, 1H), 6,97 (м, 1H), 4,57 (м, 1H), 4,20 (м, 1H), 3,16 (м, 2H), 2,65 (м, 1H), 1,64-2,00 (м, 5H), 1,28 (м, 1H). РХ/МС: + 323 (M+Н) . Приклад 2: Сіль трифтороцтової кислоти 3-[(1S, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрил і сіль трифтороцтової кислоти 3-[(1R, 3R)-3гідроксициклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропан нітрил 1 5 10 15 і 20 25 30 35 40 45 50 Стадія 1: (1S, 3S)-3-{2-ціано-1-[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3d]піримідин-4-іла)-1H-піразол-1-іл]етил}циклопентилбензоат і (1R, 3R)-3-{2-ціано-1-[4-(7-[2(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1іл]етил}циклопентилбензоат Діізопропілазодикарбоксилат (0,38 мл, 1,9 ммоль) додають до розчину 3-[(1S, 3R)-3гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1Hпіразол-1-іл]пропаннітрилу і 3-[(1R, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрилу (0,51 г, 1,9 ммоль) в тетрагідрофурані (5,3 мл) в круглодонній колбі при 0 °C. Одержану суміш перемішують протягом 10 хвилин і додають бензойну кислоту (0,24 г, 1,9 ммоль). Реакційну суміш перемішують при 0 °C протягом 2 годин, і після закінчення цього часу аналіз методом ТШХ вказує на відсутність початкового продукту. Реакційну суміш розбавляють етилацетатом, промивають насиченим NaHСО3, водою, насиченим NaCl, сушать (MgSО4) і упарюють у вакуумі. Залишок піддають хроматографії на силікагелі, використовуючи як елюент суміш 20 % 1 EtOAc/гексани, з одержанням продукту. H ЯМР (300 МГц, CDCl3):  8,91 (д, 1H), 8,39 (м, 2H), 8,08 (м, 2H), 7,75 (м, 1H), 7,61 (м, 1H), 7,48 (м, 2H), 7,46 (м, 1H), 6,87 (м, 1H), 5,74 (с, 2H), 5,405,50 (м, 1H), 4,40 (м, 1H), 3,60 (м, 2H), 3,25 (м, 1H), 3,07 (м, 1H), 2,27 (м, 2H), 1,30-1,90 (м, 6H), + 0,99 (м, 2H), 0,08 (с, 9H). РХ/МС: 557 (M+Н) . Стадія 2: 3-[(1S, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2-(триметилсиліл) етокси]метил-7Hпіроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрил і 3-[(1R, 3R)-3-гідроксициклопентил]-3[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1іл]пропаннітрил Гідроксид літію (22,7 мг, 0,000948 моль) додають до розчину (1S, 3S)-3-{2-ціано-1-[4-(7-[2(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1іл]етил}циклопентилбензоата і (1R, 3R)-3-{2-ціано-1-[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7Hпіроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл] етил}циклопентилбензоата (440 мг, 0,00079 моль), розчинені в суміші 1,4-діоксану (10,0 мл, 0,128 моль), метанолу (4,0 мл, 0,099 моль) і води (4,0 мл, 0,22 моль) в круглодонній колбі. Одержану суміш перемішують протягом 20 годин, і після закінчення цього часу аналіз методом РХМС вказує на відсутність початкового продукту. Реакційну суміш екстрагують етилацетатом і органічні екстракти промивають насиченим NaHCО3, водою, насиченим NaCl, сушать (MgSО4) і упарюють у вакуумі. Залишок + використовують на наступній реакції без додаткового очищення. РХ/МС: 453 (M+Н) . 15 UA 99465 C2 5 10 15 20 25 Стадія 3: Сіль трифтороцтової кислоти 3-[(1S, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7Hпіроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл] пропаннітрил і сіль трифтороцтової кислоти 3-[(1R, 3R)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл] пропаннітрил З компонентів суміші, 3-[(1S, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл] пропаннітрилу і 3[(1R, 3R)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл] пропаннітрилу, знімають захист в таких же умовах, як описані в прикладі 1, стадія 5. Суміш розділяють, використовуючи хіральну РХ, і потім очищають з допомогою РХ, одержуючи ізомери у вигляді солей трифтороцтової кислоти. Колонка: ChiralPak IA, 4,6250 мм, розмір частинок 5 мікронів. Рухома фаза: суміш 30 % етанолу в гексанах. Швидкість потоку: 0,8 мл/хв.-аналітична; колонка: ChiralPak IA, 20250 мм, розмір частинок 5 мікронів. Рухома фаза: суміш 30 % етанолу в гексанах. Швидкість потоку: 12 мл/хв. препаративна). Pk1 [Час втримання: 16,98 хвилини]: 1 H (500 МГц, DMSO-d6:  8,11 (ушир.с, 1H), 8,07 (ушир.с, 1H), 7,70 (с, 1H), 7,03 (д, 1H), 6,46 (м, 1H), 3,80 (м, 1H), 3,43 (м, 1H), 2,20 (м, 2H), 2,08 (м, 1H), 1,29 (м, 1H), 1,20 (м, 1H), 0,60-0,90 + (м, 4H). РХ/МС: 323 (M+Н) . Pk2 [Час втримання: 18,68 хвилини]: 1 H (500 МГц, CD3OD):  8,91 (с, 1H), 8,087 (с, 1H), 8,51 (с, 1H), 7,84 (д, 1H), 7,28 (м, 1H), 4,60 (м, 1H), 4,34 (м, 1H), 3,20 (м, 2H), 2,91 (м, 1H), 1,92 (м, 2H), 1,60 (м, 3H), 1,35 (м, 1H). РХ/МС: 323 + (M+Н) . Pk3 і Pk4, елюювання разом (23,13 хвилини). Приклад 3: Трифторацетатна сіль 3-[(1S)-3-оксоциклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1Hпіразол-1-іл]пропаннітрилу і трифторацетатна сіль 3-[(1R)-3-оксоциклопентил]-3-[4-(7Hпіроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл] пропаннітрила і 30 35 40 45 50 Стадія 1: 3-[(1S)-3-оксоциклопентил]-3-[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси] метил-7H-піроло[2,3d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрил і 3-[(1R)-3-оксоциклопентил]-3-[4-(7-[2(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d] піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрил Диметилсульфоксид (0,340 мл, 4,79 ммоль) додають до розчину оксалілхлориду (0,20 мл, 2,4 ммоль) в метиленхлориді (25 мл) при -78 °C в круглодонній колбі. Одержану суміш перемішують при -78 °C протягом 15 хвилин і по краплях додають розчин 3-[(1S, 3R)-3гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1Hпіразол-1-іл]пропаннітрилу і 3-[(1R, 3S)-3-гідроксициклопентил]-3-[4-(7-[2(триметилсиліл)етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл] пропаннітрилу (0,84 г, 1,8 ммоль) в метиленхлориді (17 мл). Одержану суміш перемішують при -78 °C протягом 60 хвилин і додають триетиламін (0,722 мл, 5,18 ммоль). Після перемішування при -78 °C протягом 60 хвилин реакційну суміш нагрівають до 0 °C і перемішують протягом 1 години. Реакційну суміш розбавляють етилацетатом, промивають водою, насиченим NaCl, сушать (MgSO4) і упарюють у вакуумі. Залишок очищають хроматографією на силікагелі, 1 використовуючи як елюент суміш 40 % EtOAc/гексани, з одержанням продукту. H ЯМР (300 МГц, CDCl3):  8,91 (м, 1H), 8,40 (д, 1H), 8,38 (с, 1H), 7,47 (м, 1H), 6,85 (т, 1H), 5,74 (с, 2H), 4,51 (м, 1H), 3,60 (т, 2H), 3,00-3,30 (м, 3H), 1,50-2,70 (м, 6H), 0,98 (т, 2H), 0,00 (с, 9H). РХ/МС: 451 + (M+Н) . Стадія 2: Трифторацетатна сіль 3-[(1S)-3-оксоциклопентил]-3-[4-(7H-піроло[2,3-d]піримідин4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрилу і трифторацетатна сіль 3-[(1R)-3-оксоциклопентил]-3-[4-(7Hпіроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрила 16 UA 99465 C2 5 10 15 20 З компонентів суміші, 3-[(1S)-3-оксоциклопентил]-3-[4-(7-[2-(триметилсиліл)етокси]метил-7Hпіроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл] пропаннітрилу і 3-[(1R)-3-оксоциклопентил]-3-[4-(7[2-(триметилсиліл) етокси]метил-7H-піроло[2,3-d]піримідин-4-іл)-1H-піразол-1-іл]пропаннітрилу, знімають захист в умовах, аналогічних прикладу 1, стадія 5, одержуючи два діастереомерних кетони, які розділяють хіральною хроматографією і очищають з допомогою РХ, одержуючи діастереомери і енантіомери у вигляді трифторацетатних солей. Колонка: ChiralPak IA, 4,6×250 мм, розмір частинок 5 мікронів. Рухома фаза: суміш 30 % етанолу в гексанах. Швидкість потоку: 0,8 мл/хв.-аналітична; колонка: ChiralPak IA, 20×250 мм, розмір частинок 5 мікронів. Рухома фаза: суміш 30 % етанолу в гексанах. Швидкість потоку: 12 мл/хв. препаративна). Pkl [Час втримання: 11,82 хвилини]. Pk2[Час втримання: 13,94 хвилини]: 1 H (500 МГц, CDCl3):  10,07 (ушир.с, 1H), 8,79 (ушир.с, 1H), 8,27 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 7,32 (д, 1H), 6,71 (м, 1H), 4,40 (м, 1H), 3,12 (м, 1H), 2,97 (м, 2H), 2,00-2,32 (м, 5H), 1,61 (м, 1H). РХ/МС: + 321 (M+Н) . Pk3 [Час втримання: 17,61 хвилини]: 1 H (500 МГц, CDCl3):  10,70 (ушир.с, 1H), 8,83 (ушир.с, 1H), 8,34 (с, 1H), 8,30 (с, 1H), 7,35 (д, 1H), 6,73 (м, 1H), 4,37 (м, 1H), 3,10 (м, 1H), 2,90 (м, 2H), 2,51 (м, 1H), 2,27 (м, 1H), 2,15 (м, 1H), + 1,91 (м, 1H), 1,84 (м, 1H), 1,60 (м, 1H). РХ/МС: 321 (M+Н) . Pk4 [Час втримання: 20,31 хвилини]. Приклад А Таблиця 2 Сполука Сполука 1 Метаболіт 1 Метаболіт 2 Метаболіт 3 25 30 35 40 45 50 JAK1 IC50 (нМ) JAK2 IC50 (нМ) JAK3 IC50 (нМ)