Спосіб одержання засівного матеріалу у виробництві мікробіологічного бета-каротину

Спосіб одержання засівного матеріалу у виробництві мікробіологічного бета-каротину, що вклю 3 51531 ченко, И.М. Зубарева, И.С. Федорова /Деп. в НПО Медбиоэкономика 14.03.91, №554] (прототип), що передбачає поверхневе культивування (+) і (-) форм Blakeslea trispora на поживному середовищі, яке містить кукурудзяний екстракт, агар-агар, арабінозу, як джерело вуглецю та енергії для мікроорганізму на стадії отримання засівного матеріалу з подальшою стерилізацією поживного середовища при 100 – 120 С на протязі 40 - 45 хвилин. Недоліком прототипу є перемінний рівень спороутворення, як у (+), так і у (-) штамів гриба - продуцента. Пояснюється така нестабільність тим, що термічну обробку поживного середовища проводять в доволі жорстких умовах автоклавірування при 120 С на протязі 45 хвилин. При таких умовах арабіноза, як і багато інших вуглеводів підлягає карамелізації. Ступінь карамелізації залежить від рівня дегідратації арабінози, на який в свою чергу впливає температурний режим та його тривалість. Карамелі не утилізуються мікроорганізмами. Таким чином, при заданому режимі стерилізації кількість арабінози в середовищі значно зменшується, що негативно впливає на подальший розвиток продуцента та його спороутворення. Задачею запропонованої корисної моделі є розробка оптимізованого поживного середовища для поверхневого культивування гетероталлічного продуцента бета-каротину Blakeslea trispora на стадії отримання спороміцеліального засівного матеріалу. Поставлена задача досягається тим, що у відомому способі одержання засівного матеріалу у виробництві мікробіологічного бета-каротину, який включає поверхневе культивування (+), (-) Blakeslea trispora на поживному середовищі з кукурудзяним екстрактом, агар-агаром та арабінозою, як джерелом вуглецю та енергії для мікроорганізму з подальшою стерилізацією середовища при 4 100 – 120 С на протязі 40 - 45 хвилин, відповідно до корисної моделі перед культивуванням продуцента арабінозу окремо термічно обробляють при 85 – 90 С на протязі 25 - 30 хвилин. Наводимо приклад конкретного виконання запропонованої корисної моделі. Приклад. Для приготування агаризованого поживного середовища використовують 2% кукурудзяного екстракту (відход крохмальопатокового виробництва), 2,5% агар-агару для затвердіння середовища. Стерилізують середовище при 100 120 С на протязі 40 - 45 хвилин. Указані компоненти вносяться в середовище в однакових кількостях для вирощування як (+), так і (-) штамів продуцента. Кількість арабінози різна. Так середовище для (+) форми містить 1,5% арабінози, а для (-) форми – 2% цього ж вуглеводу. Перед внесенням в середовище розчини арабінози термічно обробляють окремо від основного середовища при температурі 90 С на протязі 30 хвилин. Окремо оброблені розчини вуглеводу додають до основного стерильного середовища. Повноцінне середовище розливають у великі мікробіологічні пробірки по 20мл. Після охолодження та затвердіння середовища його перевіряють на стерильність. Після чого інокулюють музейними культурами продуцента роздільно (+), (-) штамами і культивують при температурі 24 С на протязі 7 діб. В табл. 1 показано вплив концентрації арабінози на рівень спороутворення продуцента. В табл. 2 показано вплив умов термічної обробки розчинів арабінози на спороутворення у (+) та (-) форм гриба. Таблиця 1 Вплив концентрації арабінози на спороутворюючу здібність Blakeslea trispora Концентрація вуглеводу, % 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 Контроль: сусло-агарове середовище Кількість спор, шт. 106/см2 (+) штам (-) штам 0,8 0,5 2,9 2,8 7,1 5,1 3,1 7,9 3,7 3,0 3,3 4,5 2,0 3,2 1,8 5,2 1,8 4,5 Як видно із таблиці 1 при оптимальній концентрації арабінози (1,5 - 2,0%) в поживному середовищі спороутворююча здібність продуцента підви 1,1 1,8 щується для (+) і (-) форми, в середньому, в 6,5 і 4,1 рази відповідно в порівнянні з контрольним сусло-агаровим середовищем. 5 51531 6 Таблиця 2 Вплив умов стерилізації арабінози на рівень спороутворення продуцента Температура стерилізації; С Кількість спор, шт. Термін стерилізації, (хвилини) 90 120 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський (-) штам (+) штам 7,0 1,5 30 45 Таблиця 2 свідчить про те, що в присутності попередньо обробленої арабінози в поживному середовищі кількість спор у (+) штама продуцента підвищується в 4,5 раз, а у (-) штама - в 2,8 раз порівняно з прототипом. Корисна модель відноситься до мікробіологічної промисловості і може бути використана для 106/см2 7,7 2,7 інтенсифікації мікробіологічного виробництва бетакаротину за допомогою продуцента Blakeslea trispora, а також у виробництві каротин містких препаратів медичного, харчового та сільськогосподарського призначення. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601