Спосіб одержання гідролізату з молюсків

1 Спосіб одержання гідролізату з молюсків, що включає їхнє подрібнення, змішування з розчином лугу, проведення гідролізу протягом 3-х годин, відділення стулок від гідролізату і додаткову їхню обробку розчином лугу, об'єднання отриманих гідролізатів, їхню нейтралізацію концентрованою соляною кислотою, розпарювання и пастеризацію, який відрізняється тим, що після подрібнення молюсків відокремлюють штерстиціальну рідину, що виділилася, заморожують і вводять її в об'єднаний гідролізат перед пастеризацією, крім того, процес гідролізу починають після розміщення подрібнених молюсків у реактор з гарячою водою в співвідношенні 1 0,75, нагрівання до 60°С і введення розчину лугу з кінцевою концентрацією 0,5% 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що додаткову обробку стулок проводять протягом ЗО хв 3 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що гарячі гідролізати нейтралізують концентрованою соляною кислотою до об'єднання Передбачуваний винахід відноситься до області біотехнологм, а точніше, до способів одержання білково-вуглеводних гідролізатів з молюсків, наприклад МІДІЙ, і може бути використаний для одержання харчових добавок лікувальнопрофілактичної дії і сировини для фармакологічних і косметичних препаратів ВІДОМІ різні способи виготовлення гідролізату з молюсків кислотні, ферментативні, лужні При кислотному способі, очищене від стулки м'ясо мідії гідролізується соляною кислотою протягом 18-24 годин при температурі кипіння суміші При ферментативному способу гідроліз свіжої мідії проводиться з застосуванням ферментів протеолітичної й амілолітичної дм в м'яких умовах протягом 5,5-6 годин При лужному способі СВІЖІ чи морожені подроблені молюски гідролізуються гідроокисом натрію при температурі 85-90° С протягом 4-5 годин Найбільш близьким з аналогів є (див Крутченский Г В , Кулясова В Е К вопросу получения белковых гидролизатов из моллюска леды // Известия ТИНГО —1976 — 9 9 — С 102-104) двоступеневий спосіб одержання гідролізату з молюска леди, при якому подрібнені молюски змішують з розчи ном гідроокису натрію в співвідношенні 1 1 з кінцевою концентрацією лугу 0,6-1,5% Суміш нагрівають до 85-90°С і на протязі 3-х годин ведуть гідроліз м'яких тканин Потім гідролізат відстоюють і відокремлюють декантацією протягом 12-16 годин від стулок і мулистого залишку Після вливання гідролізату стулки і непдролізований залишок додатково оброблюють 2%-ним розчином лугу протягом 1 год з наступним доданням додаткового пдролізата до основного Об'єднані гідролізати нейтралізують до рН=6,5 20%-ною соляною кислотою і впарюють до 1/4 обсягу з наступною пастерізацією, Недоліками способу є тривала стадія відокремлювання стулки і нєпдролізованого залишку методом декантації, в результаті чого відбувається сильна деградація білків, що мають біологічну активність Можлива рацемізація амінокислот і появи їхніх токсичних похідних Крім того, відомий спосіб характеризується підвищеними енерговитратами, тому що охолоджений гідролізат знову нагрівається при розпарюванні, а нейтралізація 20%-ною соляною кислотою приводить до значного збільшення випареного об'єму рідини До недоліків також відноситься підвищена витрата реакти со го ю 53327 вів В основу винаходу Способу одержання гідролізату з молюсків поставлена задача шляхом удосконалення технології одержати гідролізат з молюсків, наприклад МІДІЙ, збагачений біологічно активними речовинами Поставлена задача досягається там, що в Способі одержання гідролізату з молюсків, який включає їхнє подрібнення, змішування з розчином лугу, проведення гідролізу протягом 3-х годин, відділення стулок від гідролізату і їхню додаткову обробку розчином лугу, об'єднання одержаних гідролізатів, їхню нейтралізацію концентрованою соляною кислотою, розпарювання і пастеризацію, після подрібнення молюсків відокремлюють виділену штерстиціальну рідину, збагачену фракцією водорозчинних БАР, у т ч глікопротешів, пектинів, що мають імуномоделюючі властивості, і заморожують до введення в об'єднаний гідролізат перед пастеризацією, крім того, гідроліз починають після того, як подрібнені молюски помістять у реактор з гарячою водою в співвідношенні 1 0,75, нагрівання суміші до 60° С і введення розчину лугу з кінцевою концентрацією 0,5% Додаткову обробку стулок проводять 2%-ним розчином лугу протягом ЗО хв Одержані гідролізати гарячими нейтралізують концентрованою соляною кислотою до їхнього з'єднання Відділення штерстиціальної рідини, збагаченої водоррозчиненою БАР і введення її в готовий гідролізат перед пастеризацією, дає можливість зберегти ряд незамінних амінокислот, наприклад таких, як триптофан, у кінцевому продукті, а також збагаченню його антиоксидантами й іммуномодуляторами Використання 0,5% розчину лугу є достатнім для переведення в розчинений стан тканин молюсків Збільшення концентрації розчину лугу до 0,61,5% збільшує вихід білкового азоту всього лише на 2-6%, при цьому концентрація солі в кінцевому продукті зростає в 1,2-3 рази, що приведе до агрегації й осадження високомолекулярних глікопротеінових комплексів, а також більшої частини солей мікроелементів Спосіб реалізується слідуючим чином Свіжа дрібної фракції МІДІЯ подрібнюється Інтерстиціальна рідина, що видалася, збагачена фракцією водорозчинних БАР, у т ч глікопротеїнами і пектинами, яки мають імуномоделюючі властивості, збирається і заморожується Подрібнена маса переноситься в реактор з нагрітою водою в співвідношенні 1 0,75 і нагрівається до 60°С У нагріту суміш додається розчин лугу з кінцевою концентрацією 0,5% і гідроліз йдеться протягом 3х годин Фільтруванням відокремлюється від стулок одержаний розчин і гарячим нейтралізується концентрованою соляною кислотою до рН=6,8-7,4 Стулки додатково обробляються 2%-ним розчином лугу протягом ЗО хв Одержаний гідролізат відокремлюється фільтруванням, нейтралізується концентрованою соляною кислотою і поєднується з первинним гідролізатом Суміш упарюється до 1/5 обсягу при температурі 105-125°С, після чого до неї додається заморожена інтерстиціальна рідина, збагачена фракцією водорозчинних БАР, у т ч глікопротешами і пектинами, які мають імму номоделюючі властивості Пастеризація проводиться протягом ЗО хвилин при 80°С Приклад реалізації способу 10,5 кг свіжої мідії промивали в металевій чи капроновій СІТЦІ водопровідною водою до виходу чистої води Промиту МІДІЮ подрібнювали на м'ясорубці з одним хрестоподібним ножем без сітки Подрібнену масу відкидали на капроновий газ і відокремлювали штерстиціальну рідину, збагачену фракцією водорозчинних БАР, у т ч , гликопротеїнов і лєктинів, що мають іммуномоделюючі властивості Одержану рідину обсягом 0,3л поміщали в морозильну камеру "Почел" при температурі 18°С, у ємкість з нержавіючої сталі поміщали 10,2 кг подрібненій маси МІДІЙ, заливали 7,5 л дистильованої води і нагрівали на електроплиті до 60°С Потім додавали 260 мл 40%-го розчину NaOH до 2,5 л дистиляту, з'єднували з нагрітою масою і вели гідроліз протягом 3 год при постійному нагріванні суміші до 80°С По закінченні процесу 14,6л гідролізату відфільтровували через капронове сито з розміром отворів 1x1 мм й нейтралізували 295мл 37%-оі соляної кислоти до рН=7,4 під контролем рН-метра типу ЭВ-74 Стулки і непдролізований осад заливали 2л 2%-го розчину NaOH і нагрівали до кипіння протягом ЗО хвилин Одержаний гідролізат об'ємом 2,8л відфільтровували від стулок і непдролізованого залишку через капронове сито з розміром отворів 1x1 мм і нейтралізували 240мл 37%-оі соляної кислоти до рН=7,4 Об'єднані гідролізати розливали в ємкості й упарювали до обсягу 2,5л у сушильній шафі типу ШСС-80 при температурі 125°С, додавали спочатку відділену штерстиціальну рідину, збагачену фракцією водорозчинних БАР, у т ч гликопротешов і пектинів, що мають імуномоделюючі властивості, і пастеризували при 80°С протягом ЗО хв Потім промивали стулки 0,8л дистильованої води і об'єднали з гідролізатом Одержаний гідролізат очищали від осаду центрифупрованням на центрифузі з бакетротором типу MPV-302, розливали в стерильну тару й поміщали в автоклав при О.батм протягом ЗОхв Вихід ГОТОВОГО гідролізату склав 2,1л Зміст загального азоту в гідролізаті дорівнював 53,14% від вихідного в м'ясі МІДІЙ ЗМІСТ сухих речовин в гідролізаті склав 45,66% чи 61,64% від виходу в сировину Попередні дослідження гідролізату, одержаного за пропонованою технологією, показали наступне 1 Методом гель-фільтрацм на Сефадексі G200 показана наявність білків з молекулярною масою 185, 138, 96 і 66 кда (фіг 1) і на Сефадексі G50 поліпептидів з молекулярною масою 26 5, 21, 17 5, 12, 8 4, 5 8, 4 4, 2 9, 2 3 і 1 3 кда Частковий вміст фракцій, розрахований по площам ПІКІВ склав для білків з молекулярною масою більш 100 кда — до 7%, для поліпептидів з м м від 10 до 60 кда — 40% і пептидів з м м менш 10 кда ( у т ч коротколанцюгових пептидів і амінокислот) — 53% 2 Концентрація білка, визначена по методу Бредфорда, у перерахуванні на альбумін (ЧСА) складає 125мг/мол Вміст білкових речовин у різних зразках гідро 53327 лізату, сировина і відходах переробки, розрахована по загальному азоті Таблиця Зразок Гідролізат (11 0 9 ,00) Гідролізат після 1 стадії Гідролізат після 2 стадії М'ясо мідії (30-50 мм) Непдролізований залишок Залишок після розпарювання Змив стулки після 2 гідр Стулка після гідролізу Стулка сирої мідії 4,99 3,54 1,99 9,39 3,58 Вміст білка, г/г сухої речовини 0 312 0,221 0,124 0,587 0,223 5,96 0,373 0,04 0,10 0,69 0,002 0,006 0,043 Загальний азот, % З В амінокислотний склад гідролізату входять слідуючи амінокислоти лізин, аргінін, глутаминова й аспарагінова кислоти, гліцин, пстидін, пролін, ланін, серін, тирозін, триптофан, валін, метіонін, фенілаланин, лейцин, треонин Фіг Хроматографія лужного гідролізату на колонку Sephadex G-200 (0,9x30 див, швидкість елюції Юмол/год, 0.05М фосфатний буфер рн 7 4) Використання пропонованого способу одержання гідролізату з молюсків з додаванням інтерстиціальної рідини, збагаченою фракцією водорозчинних БАР, у т ч глікопротешами і пектинами, які мають іммуномодулюючі властивості, забезпечує в порівнянні з відомим способом слідуючи переваги 1 Збереження біологічно активних речовин у кінцевому продукті і збагачення його мікроелементами 2 Скорочення обсягів реактивів, що витрачаються, за рахунок використання більш низьких концентрацій лугу 3 Скорочення часу процесу гідролізу за рахунок введення лугу у вже нагріту суміш, відділення стулок фільтруванням замість декантації, а також за рахунок нейтралізації розчину гарячим 4 Скорочення енерговитрат на стадіях гідролізу, зниженням початкової температури гідролізу до 60°С и розпарювання за рахунок нейтралізації гідролізату гарячим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24