Похідні о6-алкілгуаніну, спосіб їх одержання та фармацевтична композиція

1 Производные О6-ал кил гуанина формулы OCHRR' NH-, N где Y представляет водород, рибозил или дезоксирибозил, которые могут быть замещены гидрокси или С1-С4 алкоксигруппами, R' представляет водород, Сі гоалкил или гидрокси Сі 20ЭЛКИЛ, R обозначает (і) циклическую группу, имеющую пятичленное гетероциклическое кольцо, содержащее по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, N или S, необязательно конденсированное с кольцом бензола, пиридина или нафталина, или шестичленное гетероциклическое кольцо, содержащее по меньшей мере один атом N, необязательно с атомом S, необязательно конденсированное с одним или двумя бензольными кольцами, где указанная циклическая группа может быть необязательно замещена в гетероциклическом(их) кольце(ах) и/или карбоциклическом(их) Зоя кольце(ах) группами, выбранными из галогена, циано, нитро, азидо, СгСбалкокси, арила, SOnR"", где R"" представляет С-і-Свалкил И П равно 0, 1, 2, COOR5, где R5 представляет Н или или N-оксиды, (м) нафтил, необязательно замещенный галогеном или СгСбалкокси, или их фармацевтически приемлемые соли 2 Соединение по п 1, где R обозначает гетероциклическое кольцо, конденсированное с бензольным кольцом, и где О -алкилгуаниновая группа присоединена к R либо в гетероциклическом, либо в бензольном кольце 3 Соединение по п 1 или 2, где R обозначает пятичленное гетероциклическое кольцо, содержащее один атом серы 4 Соединение по любому из предшествующих пунктов, где R выбран из тиофенового кольца, фуранового кольца или их замещенных производных 5 Соединение по любому из предшествующих пунктов, где R является циклической группой, замещенной галогеном, циано, SOnR"", где R"" представляет СгСбалкил и п = 0, 1 или 2, или -COOR , где R5 представляет С-і-Свалкил 6 Соединение по любому из предшествующих пунктов, где R выбран из тиофенового кольца, фуранового кольца и их замещенных производных, которые выбраны из их бром- и цианопроизводных 7 Соединение по п 6, где -CHRR' является О6тенилом или его бромзамещенным производным 8 Соединение по п 1, выбранное из О6-тенил гуанина, О6-(3-тенилметил)гуанина, О6-пиперонил гуанина, О6-фурфурил гуанина, О6 (З-фурилметил)гуанина, О6 (2-бензо[Ь]тиенилметил)гуанина, О6 (2-бензофуранилметил)гуанина, О6-(5-тиазолилметил)гуанина, О6-(5-метоксикарбонилфурфурил)гуанина, О6-(5-бромфенил)гуанина, О6-(5-цианофурфурил)гуанина, О6-(2-бензо[Ь]тиенилметил)гуанозина, О6-(4-пиколил)гуанина, О6-(2-нафтилметил)гуанина 9 Соединение по любому из пп 1-8, используемое для получения фармацевтической композиции, обладающей способностью ослаблять актив О (О го го го 43336 ность О -ал кил гуанин-ДНК алкилтрансферазы в опухолевых клетках 10 Соединение по п 9, представляющее собой О6-тенилгуанин или его замещенное производное по п 1 11 Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ослаблять активность О6-алкилгуанин-ДНК алкилтрансферазы у хозяина, содержащая производное гуанина и фармацевтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве производного гуанина она содержит эффективное количество соединения формулы I или его фармацевтически приемлемую соль по любому из предшествующих пунктов Настоящее изобретение относится к О -замещенным производным гуанина, способу их получения и к их применению для лечения опухолевых клеток Изобретение, в частности, относится к производным гуанина, имеющим гетарильные или нафгилалкильные заместителя в О6 - положении, при этом указанные соединения обладают способностью снижать активность О6-алкилгуанин-ДНК алкилтрансферазы (АТазы) в опухолевых клетках Было предложено использовать О6-алкилпроизводные гуанина, обладающие способностью снижать активность О6-алкилгуанин-ДНК алкилтрансферазы, для усиления эффективности химико-терапевтических алкилирующих агентов, которые используют для уничтожения опухолевых клеток Появляется все больше доказательств того, что токсическое и мутагенное воздействие алкилирующих агентов на клетки млекопитающих в значительной степени является следствием алкилирования О6-положения гуанина в ДНК Восстановлению О6-алкилгуанина способствует АТазабелок-восстановитель, который воздействует на О6-алкилированные остатки гуанина, осуществляя стехиометрический перенос алкильной группы в остатки цистеина, расположенные в активном сайте белка-восстановителя, в автоинактивационном процессе Важная роль АТазы при защите клеток от биологического воздействия алкилирующих агентов наиболее наглядно была продемонстрирована путем переноса и экспрессии генов АТазы или комплементарных ДНК в клетки с дефицитом АТазы тем самым повышается устойчивость к действию различных агентов, в основном тех, которые метилируют или хлорэтилируют ДНК Хотя механизм уничтожения клеток под действием О6метилгуанина в клетках с дефицитом АТазы до сих пор не прояснен, уничтожение клеток под действием О6-хлорэтилгуанина происходит за счет образования межцепочечных сшивок к остатку цитозина противоположной цепочки посредством циклического этангуанинового промежуточного соединения, и именно этот процесс подавляется за счет стимулируемого АТазой удаления хлорэтильной группы или образования комплекса Использование О6-метилгуанина и О6-бутилгуанина для ослабления активности АТазы описа 12 Фармацевтическая композиция по п 11, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит алкилирующий агент 13 Фармацевтическая композиция по п 12, отличающаяся тем, что алкилирующий агент выбран из 1,3-бис(2-хлорэтил)-1-нитрозомочевины (BCNU) и темозоломида 14 Способ получения производных О6-алкилгуанина формулы І по п 1, отличающийся тем, что осуществляют следующие стадии взаимодействие гидрата натрия с раствором RR'OH, где R и R' указаны в п 1, в органическом растворителе, добавление хлорида 2-амино-г\1,г\1,г\1-триметил-1Нпурин-6-аминия или 2-амино-6-хлорпуринбензола, обработку слабой кислотой и эфиром и экстракцию целевого продукта но (Dolan et al , Cancer Res ,1989, 46, p 4500, DoIan et al , Cancer Chemother, Pharmacol, 1989, 25, p 103 Предложено использовать производные О6-бензил гуанина для ослабления активности АТазы, с целью сделать клетки, экспрессирующие АТазу, более восприимчивыми цитотоксическому воздействию хлорэтилирующих агентов (Moschel et al , J Med Chem ,1992, 35, p 4486) В Патенте США 5091430 и международной патентной заявке WO 91/13898 (Moschel et al) приводится способ уменьшения содержания О -алкилгуанин-ДНК трансферазы в опухолевых клетках реципиента, который заключается в назначении реципиенту эффективного количества композиции, содержащей О6-бензилированные производные гуанина следующей формулы N4 где Z обозначает атом водорода, или Oj или он он НО Т он 7 он a Ra обозначает бензильную группу или замещенную бензильную группу Бензильная группа может содержать в орто-, мета- или пара-положении такие заместители как атом галогена, нитро, арил, такой как фенил или замещенный фенил, алкил, содержащий 1-4 атома углерода, алкокси, содержащий 1-4 атома углерода, алкенил, содержащий вплоть до 4 атомов углерода, алкинил, содержащий вплоть до 4 атомов углерода, амино, моноалкиламино, диалкиламино, трифторметил, гидрокси, гидроксиметил и SOnRb , где п равно 0,1,2 или 3, a R обозначает атом водорода, алкил, содержащий 1-4 атома углерода, или арил В статье MiYoung Chae et al , J Med Chem , 1994, 37, pp 342347 - опубликована после даты приоритета настоящей заявки на изобретение - описываются тестовые испытания аналогов О6-бензил-гуанина, со 43336 держащих в положении 9 бензильного кольца все более возрастающие по размеру заместители Соединением № 6 там является О -(2-пиридилметил)гуанин, который в указанной заявке обозначают как О6-(2-пиколил) гуанин Однако в разделе Результаты и Обсуждение результатов на страницах 342-343 статьи Спае et al не подчеркивается, что Соединение 6 может представлять интерес, а включено в группу "остальные соединения", которые "обладают промежуточной активностью" (страница 343, строки 12-15 по тексту статьи) Авторы подтвердили ранее сделанные ими наблюдения (J Med Chem , 1992, 35, р 4486), что лишь аллильные или бензильные заместители в О6-положении гуанина эффективно дезактивируют АТазу (страница 343, строки 21 -23 по тексту статьи) О6-Бензилгуанин имеет ограниченное использование в качестве дезактиватора АТазы Он более устойчив, чем это необходимо, что приводит к тому, что он долгое время сохраняется в животном, которому он введен Это соединение потенциально токсично как само по себе, так и в сочетании с хлорэтилирующими агентами, что также нежелательно и может быть связано с временем выживания Соединения по настоящему изобретению обладают отличными от О6-бензилгуанина инактивирующими свойствами по отношению к АТазе, а в ряде случае их активность до 8 раз выше, чем активность О6-бензилгуанина Исследованы такие различные полупериоды существования и токсические свойства Таким образом, объектом настоящего изобретения являются новые соединения, полезные для ослабления активности АТазы, с целью усиления воздействия химико-терапевтических средств, таких как хлорэтилирующие или метилирующие антиопухолевые агенты Другой целью настоящего изобретения являются фармацевтические композиции, содержащие соединения, которые полезны для ослабления активности АТазы Еще одной целью настоящего изобретения является способ ослабления активности АТазы в опухолевых клетках Наконец, еще одной целью настоящего изобретения является способ лечения опухолевых клеток реципиента Таким образом, настоящее изобретение относится к О6-замещенным производным гуанина формулы I OCHRR' (I) NH в которой Y обозначает Н, рибозил, дезоксирибозил или R"XCHR'", где X обозначает О или S , R" или R'" обозначают алкил или его замещенное производное, R' обозначает Н, алкил или гидроксиалкил, R обозначает (і) циклическую группу, содержащую, по крайней мере, одно 5- или 6-членное гетероциклическое кольцо, необязательно конденсированное с карбоциклическим или гетероциклическим кольцом, где каждое гетероциклическое кольцо включает, по крайней мере, один гетероатом, выбранный из О, N или S, или его замещенное производное, или (м) нафгил или его замещенное производное, и его фармацевтически приемлемым солям R может обозначать 5- или 6-членным гетероциклическим кольцом или его бензопроизводным, при этом в последнем случае О6-алкилгуаниновый радикал может быть присоединен к R как в гетероциклическом, так и в бензольном кольце В предпочтительных вариантах осуществления изобретения R обозначает 5-членное кольцо, содержащее S или О, которое может быть конденсировано или не конденсировано со вторым кольцом Предпочтительно, R является гетероциклическим кольцом, содержащим, по крайней мере, один S атом, более предпочтительно, R является 5-членным гетероциклическим кольцом, содержащим, по крайней мере, один S атом, и, наиболее предпочтительно, R является тиофеновым кольцом или его замещенным производным В качестве альтернативы R может являться гетероциклическим кольцом, содержащим, по крайней мере, один О атом, в частности, 5-членное гетероциклическое кольцо, содержащее, по крайней мере, один О атом, и, более предпочтительно, R может являться фурановым кольцом или его замещенным производным В качестве еще одной альтернативы, R может обозначать гетероциклическое кольцо, содержащее, по крайней мере, один атом азота, в частности, R может быть 6-членным гетероциклом, содержащим, по крайней мере, один атом азота и, в частности, R может обозначать пиридиновое кольцо В определении Y термин "замещенное производное" включает замещение одной или большим количеством следующих групп гидрокси, алкокси, амино, алкиламино, амидо или уреидо В определении R термин "замещенное производное" включает замещение гетероциклических колец и/или карбоциклического(их) кольца(ец) одной или несколькими следующими группами алкилом, алкенилом, алкинилом, галогеном, галогеналкилом, нитро, циано, гидроксиалкилом, SOn R"", где R"" обозначает алкил, а п равно 0, 1 или 2, или карбоксильной или сложно-эфирной группой формулы -COOR5, где R5 обозначает Н или алкил Галоген, галогеналкил, циано, группа SOnR"" (как указано ранее) и -COOR5, где R5 обозначает алкил, являются предпочтительными заместителями Алкил, алкенил или алкинил, предпочтительно, содержит от 1 до 20, более предпочтительно, от 1 до 100, а более предпочтительно от 1 до 5 атомов углерода Галоген включает иод, бром, хлор или фтор Примеры соединений по настоящему изобретению (вместе с Соединениями В 4214 и В 4218, которые не входят в объем притязаний по настоящей заявке на изобретение) приведены в таблице 1 43336 Таблица 1 ft —N Г - J NH В 4203 О6-фурфурил гуанин В 4205 О6-тенил гуанин В 4206 О6-(3-тиенилметил)гуанин В 4209 О6-(3-фурилметил)гуанин В 4210 О6-(2-пиколил)гуанин > н ( ( г3^ ^OG (5 "OG і (5 "OG 1 і ( > С \ ^