Терпеноїдні похідні (саркодиктиїни), що застосовуються як протипухлинні засоби

1 Соединение, выбранное из группы, состоящей из (-)-(4R,4aR,7R,10S,11S,12aR,1Z,5E,8Z)-7,10эпокси-3,4,4а,7,10,11,12,12а-октагидро-7-гидрокси6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4-(1метилэтил)бензоциклодецен-11 -ил-(Е)-3-(1 -метил1Н-имидазол-4-ил)акрилата (саркодиісгиин А), (-)-(4R,4aR,7R,10S,11S,12aR,1Z,5E,8Z)-7,10эпокси-6-(этокси-карбонил)-3,4,4а,7,10,11,12,12аоктагидро-7-гидрокси-1,10-ди-метил-4-(1метилэтил)бензоциклодецен-11 -ил-(Е)-3-(1 -метил1Н-имидазол-4-ил)акрилата (саркодиісгиин В), (-)-(3R,4S,4aS,7S,10R,11R,12aS,IZ,5E,8Z)-7,10эпокси-3,4,4а,7,10,11,12,12а-октагидро-3,7дигидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4(1 -метилэтил)бензоциклодецен-11 -ил-(Е)-3-(1 метил-1Н-имидазол-4-ил)акрилата (саркод иктиин С), О ю 45974 (-)-(4R,4aR,7R,10S,11S,12aR,1Z,5E,8Z)-7, 107,10-эпокси-1,4,4а,7,10,11,12,12а-октагидро-1,7эпокси-3,4,4а,7,10,11,12,12а-октагидро-7-гидроксидигидрокси-б-(метоксикарбонил) -1,10-диметил-46-(метоксикарбонил)-1, 10-диметил-4-(1(1 -метилэтил) бензоциклодецен-11 -ил (Е)-3-(1 етилэтил)бензоциклодецен-11-ил (Е)-3- (1-метилметил-1 Н-имидазол-4-ил) акрилат (саркодиктиин 1Н-имидазол-4-ил)акрилат (саркодиісгиин А), F), (-)-(4R,4aR,7R,10S,11S,12aR,1Z,5E,8Z)-7,1Oдля использования в качестве терапевтичесэпокси-6-(этоксикарбонил)-3,4,4а,7,10,11,12,12акого агента октагидро-7-гидрокси-1,10-диметил-4-(1Структурные формулы вышеперечисленных метилэтил) бензоциклодецен-11 -ил (Е)-3-(1 соединений представлены в таблице 1, ниже, со метил-1Н-имидазол-4-ил)акрилат (саркодиісгиин ссылкой на следующие формулы В), (-)-(3R,4S,4aS,7S,10R,11R,12aS,1Z,5E,8Z)7,10-эпокси-3,4,4а,7,10,11,12,12а-октагидро-3,7дигидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4(1 -метилэтил) бензоциклодецен-11 -ил (Е)-3-(1 метил-1Н-имидазол-4-ил) акрилат (саркодиктиин С), (-)-(3R,4S,4aS,7S,10R,11R,12aS,1Z,5E,8Z)-3ацетокси-7,10-эпокси-3,4,4а,7,10,11,12а-октагидроR2 7-гидрокси-б- метоксикарбонил)-1,10-диметил-4(1 -метилэтил) бензоциклодецен-11 -ил (Е)-3-(1 метил-1Н-имидазол-4-ил) акрилат (саркодиктиин D), (+)-(3R,4S,4aS,7S,10R,11R,12aS,1Z,5E,8Z)7,10-эпокси-3,4,4а,7,10,11,12,12а-окта гидро-3,7(А*) дигидрокси-6-(метоксикарбонил)-1,10-диметил-4(1 -метилэтил) бензоциклодецен-11 -ил (Z)-3-(1 метил-1 Н-имидазол-4-ил) акрилат (саркодиктин В приведенных выше формулах символ* Е), и представляет хиральный центр (+)-(IR,4R,4aR,7R,10S,11S,12aR,2Z,5E,8Z)Соединение саркодиктиин А саркодиктиин В саркодиктиин С саркодиктиин D саркодиктиин Е саркодиктиин F (А) (А1) (А1) (А1) (А1) (А1) (Аз) В таблице 1 символ Me означает метил, символ Et означает этил, символ оАс означает ОСОСНз, символы (Е)и и (Z)u представляют, соответственно, (Е) и (Z) уроканоильный фрагмент формулы ц> О. вышеперечисленные частности, в саркодиктиины A-F могут быть полезны в качестве терапевтических агентов при лечении злокачественных опухолей человека и животных, благодаря их цитотоксической противоопухолевой активности Злокачественная опухоль может представлять собой саркомы, карциномы, лимфомы, нейробластомы, меланомы, миеломы, опухоль Вильмса, лейкемии и аденокарциномы Ri Me Et Me Me Me Me R2 H H OH OAC OH OH Таблица 1 R3 (E)u (E)u (E)u (E)u (Z)u (E)u Саркодиктиины настоящего изобретения могут получаться выделением из средиземноморского образующего столоны коралла "Sarcodictyon Roseum" (Rolandia rosea) (Forbes 1847), согласно методике, описанной в Helvetica Chimica Acta, том 70, 1987, стр2025 Биологическая активность саркодиктиинов настоящего изобретения была продемонстрирована с помощью (а) испытания in vitro по оценке их активности в отношении стимулирования сборки тубулина и (Ь) испытания in vitro по оценке их цитотоксической активности в отношении как клеток L 1210, так и клеток L 1210, резистентных к доксорубицину (L 1210/Dx) В качестве примера, активность саркодиктиина А (внутренний код FCE 29123) и саркодиктиина С (внутренний код FCE 29119) оценивали согласно методикам, описанным в испытаниях (а) и(Ь) (а) испытание по сборке тубулина Тубулин из мозга теленка приготавливали посредством двух циклов сборки-деструктурирования (Shelanski М L , Gaskm F and Cantor С R , Proc Natl Acad Sci USA 70, 765-768, 1973) и хранили в жидком азоте в МАВ (0 1 М MES, 2 5% мМ EGTA, 0 5мМ MgS04, 0 1 мМ EDTA, 0 1 мМ DTT, рН 45974 6 4) Все эксперименты выполнялись на белке, который хранился менее 4 недель Перед каждым экспериментом тубулин хранился в течение 30 минут при 4°С Сборку оценивали по методу Gaskm et al (Gaskm F, Cantor С R a n d Shelanski M L , J Molec Biol 89, 737-758, 1974) Кювету (длина оптического пути 1см), содержащую тубулин (1мг/мл) и 1мМ GTP, нагревали до 37°С и производили непрерывные измерения мутности при 340нм на двухлучевом двухволновом спектрофотометре Perkm-Elmer 557, снабженном Соединение саркодиктиин A (FCE 29123) саркодиктиин С ( F C E 2 9 1 1 9 ) дозировка (мкМ) 4 40 39 39 Вышеприведенные табличные данные ясно показывают, что испытуемые саркодиктиины способны стимулировать реполимеризацию тубулина даже в присутствии CaCI2, который обычно ингибирует с б о р к у т у б у л и н а Хорошо известно, что микротрубочки являются одними из наиболее стратегически важных субклеточных мишеней противоопухолевых химиопрепаратов (Rowmsky et al , Review, т о м 82, № 15, 1 августа 1990) В отличие от классических агентов, действующих против микротрубочек, таких как колхицин и винка алкалоиды, которые вызывают деполимеризацию микротрубочек, саркодиктиины, как представляется, обладают механизмом действия, сходным с таковым таксола, одного из наиболее интересных противораковых агентов, появившихся в результате скрининга природных продуктов, который заключается в индуцировании полимеризации тубулина и образовании чрезвычайно стабильных, не способных функционировать микротрубочек Таким образом, саркодиктиины могут использоваться как терапевтические антинеопластические агенты при лечении злокачественных опухолей человека и животных, ввиду их способности катализировать быстрое образование и стабилизацию микротрубочек, что приводит к приостановке деления опухолевых клеток автоматическим регистратором и термостатически регулируемой камерой для образцов Спустя 30 минут добавляли 4 м М СаСЬ и измеряли деполимеризацию в течение 10 минут по уменьшению мутности С регулярными интервалами в 15 минут добавляли масштабные дозы испытуемых соединений и оценивали изменения мутности Данные выражали в виде процента реполимеризации, вызванной испытуемыми соединениями Полученные результаты представлены в таблице 2 Таблица 2 сборка тубулина (%) 70 162 112 173 (Ь) культуры клеток и анализ чувствительности к лекарству Клеточные линии мышиной лейкемии L1210 и L1210/DX (устойчивые к доксорубицину) выращивали in vitro в виде стационарной культуральной суспензии в среде RPMI 1640 (GIBCO, Grand island, NY), с добавлением 1 0 % сыворотки плода коровы (Flow, Irvine, UK), 2мМ L-глутамина (Gibco, Europe, Glasgow, UK), Ю м к М р-меркаптоэтанола, 100 ЕД/мл пенициллина и 100мкг/мл стрептомицина Экспоненциально растущие клетки высевали (1 х 1 0 5 клеток/мл) на 12-луночные планшеты (Costar, Cambridge, MA) и сразу же после высевания добавляли испытуемые соединения в различных концентрациях Планшеты инкубировали в течение 48 часов при 37°С в увлажненной атмосфере с содержанием 5% СОг Ингибирование клеточного роста оценивали путем подсчета выживших клеток на счетчике ZBI Coulter (Hialeah, FL) 5 0 % ингибирующую концентрацию (ICso) Расчитывали по полученной кривой зависимости концентрация-ответ Д л я каждой концентрации испытуемого соединения использовали дубликатные культуры Полученные результаты представлены в таблице 3 Таблица 3 Соединение саркодиктиин A (FCE 29123) саркодиктиин С ( F C E 2 9 1 1 9 ) ^обработка в течение 48 часов И Р = индекс резистентности 1С50, L1210 539 2 ± 97 7 408 5 ± 21 3 (нМ)* L1210/DX 754 5 ± 80 3 5787 ±182 6 И Р 14 142 IC 5Q L1210/DX IC 5 0 L1210 Как видно из приведенных в таблице данных, саркодиктиины демонстрировали хорошую цитотоксическую активность in vitro в отношении клеток L1210, а также в отношении клеток L1210, ус тойчивых к доксорубицину (L1210/DX) В силу их эффективности в отношении клеток L1210/DX саркодиктиины могут быть полезны при лечении опухолей, резистентных к химиотерапев 45974 8 лозу, карбоксиметилцеллюлозу или поливинилтическим агентам, таким как, например, антрацикпирролидон, дезагрегирующие агенты, например, линовые гликозиды, в частности, доксорубицин крахмал, альгиновую кислоту, альгинаты или глиЧеловека или животное можно лечить спосоколят натрий-крахмала, шипучие смеси, красибом, который включает введение ему фармацевтели, подсластители, увлажняющие агенты, такие тически эффективного количества соединения, как лецитин, полисорбаты, лаурилсульфаты и выбранного из саркодиктиина А, саркодиктиина В, обычные нетоксичные и фармакологически неаксаркодиктиина С, саркодиктиина D, саркодиктиина тивные вещества, которые используются в фарЕ и саркодиктиина F Посредством этого состоямацевтических рецептурах ние человека или животного может улучшаться Саркодиктиины изобретения можно назначать Указанные фармацевтические препараты модля приема в виде множества лекарственных гут производиться известными способами, наприформ, например, перорально в форме таблеток, мер, посредством процессов смешения, грануликапсул, таблеток, покрытых сахаром или пленкой, рования, таблетирования, нанесения пленки или жидких растворов или суспензий? ректально в покрытия из сахара форме суппозиториев, парентерально, например, Жидкие дисперсии для перорального приема внутримышечно, или путем внутривенных инъекмогут представлять собой, например, сиропы, ций или инфузий эмульсии и суспензии Доза зависит от возраста, веса, состояния паСиропы могут содержать в качестве носителя, циента и способа введения, например, доза, например, сахарозу или сахарозу с глицерином предназначенная для перорального приема и/или маннит и/или сорбит взрослыми, например, для типичного соединения Суспензии и эмульсии могут содержать в канастоящего изобретения, FCE 29213 (саркодикчестве носителя, например, природную смолу, тиина А), может варьировать приблизительно от агар, альгинат натрия, пектин, метилцеллюлозу, О 01 г до 1г в день карбоксиметил целлюлозу или поливиниловый спирт Настоящее изобретение включает также фармацевтические композиции, содержащие саркоСуспензия или раствор для внутримышечных диктиин настоящего изобретения в качестве акинъекций может содержать, например, вместе с тивного ингредиента в сочетании с фармацевтиактивным соединением, фармацевтически приемчески приемлемым эксципиентом (которым может лемый носитель, например, стерильную воду, быть носитель или разбавитель) оливковое масло, этилолеат, гликоли, например, пропиленгликоль, и, если это желательно, подхоФармацевтические композиции, содержащие дящее количество гидрохлорида лидокаина соединения настоящего изобретения, обычно приготавливают стандартными способами и назнаРастворы для внутривенных инъекций или чают для приема в фармацевтически подходящей инфузий могут содержать в качестве носителя, форме например, стерильную воду, или, предпочтительно, могут находиться в виде стерильных водНапример, твердые формы для перорального ных изотонических солевых растворов приема могут содержать, помимо активного соединения, разбавители, например, лактозу, декстСуппозитории могут содержать вместе с акрозу, сахарозу, целлюлозу, кукурузный или картотивным соединением фармацевтически приемлефельный крахмал, смазывающие агенты, напримый носитель, например, масло какао, полиэтимер, диоксид кремния, тальк, стеариновую киленгликоль, сложный эфир полиоксиэтиленсорбислоту, стеарат магния или кальция и/или полиэтитана в качестве поверхностно-активного вещества ленгликоли, связующие агенты, например, крахили лецитин малы, аравийскую камедь, желатин, метилцеллю ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044)456-20- 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71