Спосіб одержання лікувального екстракту

Использование технология получения ветпрепаратоз. Сущность изобретения куколки шелкопряда измельчают заливают дистиллированной водой в соотношении 1.5, доводят до кипения, экстэзкт сливают а биомассу заливают поду в соотношении 1.3, экстракт сливают доливают воду в соотношении 1*2, все три фракции экстракта смешивают, фильтруют выдерживают в течение 18-20 ч при 2-Ь п С снова фильтруют доливают натрии хлористый разливают so флаконы и стерилизуют 4 табл Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для получения веществ, обладающих антитоксической активностью^ применяться при изготовлении препаратов ветеринарного назначения Известен способ получения лечебного препарата из биологическою сырья, который заключается в том что в качестве биологическою сырья используют листья алоэ Их предварительно консервируют выдерживая в темноте несколько суток при температуре »4-8°С, промывают дистиллированной водой очищают от зубчиков и концов измельчают настаивают в дистиллированной воде при комьатной температуре затем несколько минут кипятят фильфуют, добав іяіот дистиллированной воды, снова кипят*, и фильтруют, разливают в ампулы, запаивают и автоклавируют Цель изобретения - поьышение эффективности способа а тэкже увеличение антит о к с и ч е с к о й актиен осги получаемого препарата П р и м е р 1 Было взято 100 г куколок шелкопряда, которые тщательно измельчили и смешали с 500 мл дистиллированной воды. Затем смесь нагревали до температуры кипения Полученный экстракт сливали в отдельный сосуд, а биомассу куколок смешивали с 300 мл дисгиплированной воды и нагревали до температуры кипения Попученный экстракт отделяли от биомассы и смешивали с первичным экстрактом а биомассу куколок - с 200 мл дистиллированной воды и нагревали до кипения Полученную третью фракцию смешивали с предыдущими экстрактами. Эту смесь оллэжляли ро комнатной температуры и фильтровали для отделения биомассы куколок Затем фильт рат выдерживали 18 магов при температуре +2°С и при этой же температуре повторно фильтровали для отделения осадка Обьем фильтрата доводила дистиллированной во Недостатком известного способа является его невысокая эффективность t/i пизкий антитоксический эффект получаемого при этом продукта со 1787439 дойдо 1 л В порученный ?кс т ракт добавляли натрии хлористый до получения изотонического раствора после чего разливали во флаконы и стерилизовали Стерильный экстракт разводили физиологическим раствором в соотношении 1 20 и инъецировали подкожно десяти белым мышам в дозе 0,1 мл на голову однократно Десяти контрольным животным подкожно вводили такую же дозу физиологического раствора. Через семь дней всем мышам вводили летальную дозу стрихнина В результате этого, все контрольные мыши погибли спустя 11,1 ± 1 , 3 9 минуты после затравки Мыши, которых обрабатывали экстрактом из куколок шелкопряда разбавленным физиологическим раствором в соотношении 1.20 в дозе 0,1 мл однократно, имели продолжительность жизни после затравки больше, чем контрольные (16,25 ± 1.55 минуты при Р/0,05). Кроме того, 4 мыши (40%) опытной группы выжили. Это говорит о высоком уровне антитоксического действия экстракта из куколок шелкопряда поиготовленного заявляемым способов Антитоксическую активность оценивали также по парэбиотическому и антитоксическому строфантинному тестам (Тканевая терапия / Под ред. Н.А Пучковской, - К,: Здоровье 1975.- 207 с) Пэрабиотический тест заключался в фиксации скорости выхода изолированных порт н я ж н ы х мышц л я г у ш к и D изучаемом растворе из состояния лирабиоза, вызванного 1% раствором хлористого калия. Контрольным р а с т в о р о м служил р а с т в о р Рингера, Мышцы, поме щенные в экстракт из куколок шелкопряда в разведении физиологическим раствором 1.20, выходили из состояния парабиоза через 5,71 ± 0,94 минуты, а контрольные - через 12,51 ± 1 , 0 0 минуту (разница достоверна при Р/0.001), Строфантинный тест заключался в обработке лягушек экстрактом из куколок шелкопряда, разбавленным физиологическим раствором в соотношении 1 '20 в дозе 0,1 мл на одну лягушку однократно. Контрольным лягушкам инъецировали физиологический раствор в такой же дозе Через 7 дней всем лягушкам ввоцили строфантин из расчета 0,2 мл на 10 г живой массы, вскрывали грудную полость и наблюдали за продолжительностью работы сердца. Установлено, что у контрольных лягушек сердце с о к р а щ а л о с ь на п р о т я ж е н и и 24 62± 9,12 минуты ПО^ЛР инъекции отравпяющей дозы строфант w а а у лягушек, обработанных препаратом приготовленным заявляемым способом на протяжении 60 и более минут (P/Q 0011 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Антитоксические стрихнинный (1 тест), строфачтинный (2 тест) и парабиотический (3 тест) тесты говорят о высоком уровне биологической активности лечебного экстракта из куколок шелкопряда, приготовленного заявляемым способом, вообще и о его антитоксическом эффекте, в частности. П р и м е р 2. Экстракцию из куколок шелкопряда проводили, как и в примере 1. После этого экстракт выдерживали 19 часов при температуре 3°С и при такой же температуре фильтровали, При таких условиях антитоксическая активность экстракта была следующей: 1 тест (см.пример 1) - 16,80 ± 1,43 минуты при Р/0,05 (продолжительность жизни мышей после инъекции летальной дозы стрихнина), выжило 40% животных. 2 тест - скорость выхода изолированных мышц лягушек из состояния парабиоза составила 5,20 ± 0,95 минуты (Р/0,001). 3 тест - продолжительность работы сердца после введения отравляющей дозы строфантина - 60 и более минут (Р/0,001). П р и м е р З Экстракцию проводили, как и в примере 1. После этого экстракт выдерживали 20часов при температуре 5°С и при такой же температуре фильтровали. При этом антитоксическая активность зкстракта характеризовалась следующими показателями: 1 тест - продолжительность жизни мышей после инъекции летальной дозы стрихнина 16.89 ± 1,37 минуты (Р/0 05), выжило 40% мышей. 2 тест - скорость выхода изолированных мыши; лягушек из состояния парабиоза 5,38 ± 0 75 минуты (Р/0,001). 3 тест - продолжительность работы сердца после введения отравляющей дозы строфантина 60 и более минут (Р/0,00). Согласно предлагаемому способу биомассу куколок экстрагировали дистиллированной водой путем наїрева до температуры кипения втри последовательных приема. При таких условиях происходит наиболее полная экстракция из биомассы куколок шелкопряда комплекса биологически активных веществ (табл, 1) При условиях, отличных от предлагаемых (меньшее число экстракций, меньшая температура экстракции) ,не. достигается максимальный выход экстрагируемых веществ. При большем количестве экстракций (при одинаковом выходе экстрагируемых веществ) увеличивается трудоемкость процесса. Первая экстракция, согласно заявляемому способу проводилась в соотношении 1787439 1 5, вторая - 1 3 третья - 1 2 (масса куколок шелкопряда к массе дистиллированной воды) При талом соотношении реагентов достигается максимальный процент выхода экстрагируемых веществ необходимый для 5 промышленной технологии получения экстракта (табл 2) Полученные три фракции экстракта смешивают фильтруют при комнатной температуре для отделения биомассы 10 измельченных куколок выдерживают 18-20 часов при температуре не выше +5°С для образования осадка который негативно сказывается на качестве экстракта (табл 3) и при этой же температуре повторно фильт- 15 руют Согласно данным табл 3 при режиме 18-20 часов и выдержке при температуре не выше 5°С наблюдается полное отделение осадка Дальнейшее снижение температу- 20 ры и увеличение продолжительности выдержки нецелесообразно т к дает аналогичный эффект При более высокой температуре осадок который ухудшает оргэнолептические качества экстракта обра- 25 зуется не полностью Различные режимы экстракции влияют также на биологическую (антитоксическую) активность экстракта MJ куколок шелкопряда (табл 4) 30 Анализ данных таблицы 4 показывает, что антитоксический эффект лечебного экстракта из куколок шелкопряда, приготовленного заявляемым способом наивысший по сравнению с препаратами полученными 35 при отличных от предлагаемого режимах экстракции показатели антитоксической акт и в н о с т и по с т р и х н и н ному (1 тест продолжительность жизни мышей после введения летальной дозы стрихнина в мину- 40 тах - выживаемость мышей в %) парабиотическому (2 тест скорость выхода изолированных портняжных мышц лягушки из состояния парабиоза в минутах) и строфантинноиу тестам (3 тест - продолжительность работы сердца лягушек после инъекции отравляющей дозы строфантина в минутах) самые высокие если экстракцию проводить предлагаемым способом в три последовательных этапа и выдерживать при температуре не выше +5°С в течение 18-20 часов с последующей фильтрацией при этой же температуре Способ прототипа для приготовления препарата из куколок шелкопряда также менее эффективен, так как дает меньшую антитоксическую активность как и экстракт алоэ приготовленный согласно А С iNk 96478 Таким образом экстракция куколок шелкопряда предлагаемым способом дает возможность достигнуть повышения эффективности известного способа и увеличения антитоксического эффекта конечного продукта Формула изобретения Способ получения лечебного экстракта, включающий измельчение исходного сырья, экстракцию дистиллированной водой фильтрацию доведение дистиллированной водой до определенного объема повторную фильтрацию разлив закупоривание иавтоклавироаание о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения антитоксической активности препарата в качестве исходного сырья используют куколки шелкопряда, экстракцию осуществляют в гри приема путем нагрева до температуры кипения сначала сырье экстрагируют в соотношении с водой 1 5, полученный экстракт сливают, затем доливают воду в соотношении 1 3 экстракт слвают после чего доливают воду в соотношении 1 2 причем три фракции экстракта сливают вместе фильтруют выдерживают в течение 18-20 ч при 2-5°С Т аблица 1 Влияние количества экстракций и температурного режима на извлечение биологически активных веществ из куколок шелкопряда Соотношение биомасса вода 1 экстракция 1 10 15 15 2 экстракция 15 13 3 экстра кция 4 экстракция ; ] I 12 Температу- Выход зкстраї ируемых ра экстра- веществ из единицы биокции °С массы относитель- массовых % ных % 84 7 42 100 100 9.1 8 03 100 100 8 83 1787439 Продолжение табл.1 Соотношение биомасса: вода 3 экстракция 1 экстракция 2 экстракция 1-5 1:4 1.5 1-3 1:2 1:5 1:3 1:2 1:2 4 экстракция 1:2 Прототип Температу- Выход экстрагируемых ра экстра- веществ из единицы биокции, °С массы относитель- массовых % ных % 100 100 8,85 50 72 6,36 20 57 5,03 69 6,09 Т а бл и ц а 2 Влияние соотношения компонентов в процессе экстракции на выход экстрагируемых веществ Соотношение биомасса: вода 1 экстракция 1:10 1:5 1:2,5 1.1,5 3 экстракция 2 экстракция 1:6 1:3 Температу- Выход экстрагируемых Примечание ра экстра- веществ из единицы биомассы кции ,°С отн. % мае. % 1:4 | 100 100 8,85 1:2 1:1 100 100 100 76 8,83 6,71 Сильно разбавленный экстракт Низкий процент выхода экстрагируемых веществ ТаблицаЗ Влияние продолжительности и температуры выдержки экстракта на образование осадка Продолжительность выдержки часов 17 Температура выдержка 0°С 5°С ю°с 18 • 19 20 + + 21 П р и м е ч а н и е " і" - после фильтрации и повторного отстаивания осадок не образуется; "-" - по гле фильтрации и повторного отстаивания выпадает новый осадок. 1787439 10 Тзб/іицз4 Биологическая активность лечебного экстракта из куколок шелкопряда в зависимо•" • > сти от режима экстракции и в сравнении с прототипом Соотношение Длительность Температура выдержки, °С выдержки биомасса: для образовавода ния осадка, часов 1 этап 1:10 2 этап 1:6 17 -1 Зэтап 1:4 18 2 1 этап 1:5 3 2 этап 1:3 19 5 3 этап 1:2 20 1 этап 1:4 2 этап 1:2 21 6 Зэтап 1:2 Контроль Прототип Антитоксический эффект 1 тест 2 тест 3 тест 13,18-20 10,46 • 16,25-40 16,80-40 16,89-40 5,71 5,20 5,38 60 и более 60 и более 60 и более 15,37-30 9.84 39,18 12,69-20 15,23-30 8,98 6,99 42,13 56.37 29,30 10 15 20 25 Редактор Составитель В.Трокоз Техред М.Моргентал Корректор О.Юрковецкая Заказ 2 1 Тираж Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская нэб., 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101