Спосіб визначення вмісту еластину в м’ясі забійних тварин

Реферат: Спосіб визначення вмісту еластину в м'ясі забійних тварин шляхом виділення хімічно резистентного еластину від інших компонентів м'яса в результаті подрібнення й гомогенізації з дистильованою водою наважки м'яса та поступової обробки етиловим спиртом, ацетоном, хлороводневою кислотою з використанням водяної бані та сушильної шафи. UA 68834 U (12) UA 68834 U UA 68834 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель належить до сільського господарства, зокрема до ветеринарної медицини, і може бути використана для визначення вмісту еластину в м'ясі забійних тварин у виробничих лабораторіях потужностей з переробки м'яса, в державних лабораторіях ветеринарної медицини та в лабораторіях ветсанекспертизи на агропродовольчому ринку. За результатами цього метода можна отримати кількісні значення при оцінці якості м'яса. Аналогом корисної моделі є фотометричний метод визначення масової частки білку в м'ясі біуретовим методом [1], в якому використовують лужний екстракт проби м'яса при додаванні біуретового реактиву, який інкубують при 37 °C, вимірюють оптичну густину на фотометрі 3 фотоелектричному при довжині хвилі 550 нм та встановлюють вміст білка в мг/см з використанням калібрувального графіка. Недоліком даного методу є те, що він громіздкий, довготривалий, використовуються дорогі реактиви, а також метод дає похибку у визначеннях від 17 до 25 %. Прототипом корисної моделі є фотометричний метод визначення вмісту поліфосфатів в м'ясі [2], в якому використовують екстраговану досліджувану пробу м'яса трихлороцтовою кислотою при проведенні очищення витяжки за допомогою суміші етанол/діетиловий ефір та розділення фосфатів тонкошаровою хроматографією та подальшого виявлення поліфосфатів розпилюванням реактивів для утворення забарвлення. Недоліком даного методу є те, що розчини для утворення кольору нестійкі. Крім того, даний метод дає похибку у 15-20 % під час проведення аналізу та вирахування вмісту поліфосфатів. В основу даної корисної моделі поставлено задачу - розробити спосіб визначення вмісту еластину в м'ясі забійних тварин шляхом виділення хімічно резистентного еластину від інших компонентів м'яса в результаті подрібнення та гомогенізації з дистильованою водою наважки м'яса та поступової обробки етиловим спиртом, ацетоном, розчином хлороводневої кислоти з використанням водяної бані та сушильної шафи. Задача корисної моделі вирішується тим, що беруть наважку м'яса у кількості 20,0-20,2 г 3 подрібнюють на електром'ясорубці та гомогенізують її у 100,0-120,0 см дистильованої води упродовж 10-11 хв. у гомогенізаторі при 8-14 тис. об./хв., потім отриманий гомогенізат кількісно 3 переносять у центрифугальну склянку об'ємом 250 см і центрифугують упродовж 10-15 хв. зі швидкістю 2500 об./хв., потім промивають осад двічі у дистильованій воді та двічі промивають і 3 центрифугують зі 150,0-150,5 см етилового спирту з масовою концентрацією 100 % і двічі 3 обробляють ацетоном у кількості 150,0-150,5 см . Потім підігрівають осад у центрифугальній склянці на водяній бані упродовж 5-8 хв. та підсушують у сушильній шафі при температурі 60 °C 3 упродовж 15-17 хв., потім до осаду додають 130,0-130,5 см розчину гідроксиду натрію з 3 масовою концентрацією 0,1 моль/дм і знову занурюють у водяну баню при температурі 80 °C на 10-20 хв., потім охолоджують та центрифугують упродовж 15-20 хв. зі швидкістю 2500 об/хв., потім осад обробляють розчином хлороводневої кислоти з масовою концентрацією 0,01 3 моль/дм , потім двічі промивають дистильованою водою і етиловим спиртом з масовою концентрацією 100 %, переносячи осад у бюкс і висушують його у сушильній шафі при температурі 100 °C упродовж 15-17 хв. і зважують осад, який являє собою чистий еластин. Вміст еластину (X) у пробі м'яса у % обчислюють за формулою: X 45 50 55 (a  б)  100 в , (1) де а - вага бюкс з висушеним осадом, г; б - вага пустої бюкси, г; в - наважка м'яса, г; 100 - переведення у %. Етапи вирішення даної задачі наведено у нижчезазначених прикладах. Приклад 1. Для розробки методу використовують наважку м'яса у кількості 10,0-10,2 г, яку подрібнюють 3 на електром'ясорубці та гомогенізують її у 100,0-120,0 см дистильованої води упродовж 10-11 хв. у гомогенізаторі при 4-6 тис. об./хв. Отриманий гомогенізат кількісно переносять у 3 центрифугальну склянку об'ємом 250 см і центрифугують упродовж 10-15 хв. зі швидкістю 1000 об./хв. Потім осад промивають двічі у дистильованій воді та двічі промивають і центрифугують 3 зі 80,0-100,0 см етилового спирту з масовою концентрацією 80 % і двічі обробляють ацетоном у 3 кількості 80,0-100,0 см . Потім підігрівають осад у центрифугальній склянці на водяній бані упродовж 5-8 хв. та підсушують у сушильній шафі при температурі 60 °C упродовж 15-17 хв. У 3 подальшому до осаду додають 130,0-130,5 см розчину гідроксиду натрію з масовою 3 концентрацією 0,2 моль/дм і знову занурюють у водяну баню при температурі 80 °C на 10-20 хв., потім охолоджують та центрифугують упродовж 15-20 хв. зі швидкістю 1000 об./хв. Потім 1 UA 68834 U 3 5 10 15 20 25 30 35 40 осад обробляють розчином хлороводневої кислоти з масовою концентрацією 0,02 моль/дм , потім двічі промивають дистильованою водою і етиловим спиртом з масовою концентрацією 80 %. Оброблений осад переносять кількісно у бюкс і висушують його у сушильній шафі при температурі 100 °C упродовж 15-17 хв. і зважують на терезах. Вміст еластину (X) у пробі м'яса у % обчислюють за формулою (1). Приклад 2. Для розробки методу використовують наважку м'яса у кількості 5,0-5,5 г, яку подрібнюють на 3 електром'ясорубці та гомогенізують її у 100,0-120,0 см дистильованої води упродовж 10-11 хв. у гомогенізаторі при 7-9 тис. об./хв. Отриманий гомогенізат кількісно переносять у 3 центрифугальну склянку об'ємом 250 см і центрифугують упродовж 10-15 хв. зі швидкістю 2000 об./хв. Потім осад промивають двічі у дистильованій воді та двічі промивають і центрифугують 3 зі 100,0-120,0 см етилового спирту з масовою концентрацією 60 % і двічі обробляють ацетоном 3 у кількості 100,0-120,0 см . Потім підігрівають осад у центрифугальній склянці на водяній бані упродовж 5-8 хв. та підсушують у сушильній шафі при температурі 60 °C упродовж 15-17 хв. У 3 подальшому до осаду додають 130,0-130,5 см розчину гідроксиду натрію з масовою 3 концентрацією 0,05 моль/дм і знову занурюють у водяну баню при температурі 80 °C на 10-20 хв., потім охолоджують та центрифугують упродовж 15-20 хв. зі швидкістю 2000 об./хв. Потім 3 осад обробляють розчином хлороводневої кислоти з масовою концентрацією 0,05 моль/дм , потім двічі промивають дистильованою водою і етиловим спиртом з масовою концентрацією 60 %. Оброблений осад переносять кількісно у бюкс і висушують його у сушильній шафі при температурі 100 °C упродовж 15-17 хв. і зважують на терезах. Вміст еластину (X) у пробі м'яса у % обчислюють за формулою (1). Приклад 3. Для розробки методу використовують наважку м'яса у кількості 20,0-20,2 г, яку подрібнюють 3 на електром'ясорубці та гомогенізують її у 100,0-120,0 см дистильованої води упродовж 10-11 хв. у гомогенізаторі за 8-14 тис. об/хв. Отриманий гомогенізат кількісно переносять у 3 центрифугальну склянку об'ємом 250 см і центрифугують упродовж 10-15 хв. зі швидкістю 2500 об./хв. Потім осад промивають двічі у дистильованій воді та двічі промивають і центрифугують 3 зі 150,0-150,5 см етилового спирту з масовою концентрацією 100 % і двічі обробляють 3 ацетоном у кількості 150,0-150,5 см . Потім підігрівають осад у центрифугальній склянці на водяній бані упродовж 5-8 хв. та підсушують у сушильній шафі при температурі 60 °C упродовж 3 15-17 хв. У подальшому до осаду додають 130,0-130,5 см розчину гідроксиду натрію з масовою 3 концентрацією 0,1 моль/дм і знову занурюють у водяну баню при температурі 80 °C на 10-20 хв., потім охолоджують та центрифугують упродовж 15-20 хв. зі швидкістю 2500 об./хв. Потім 3 осад обробляють розчином хлороводневої кислоти з масовою концентрацією 0,01 моль/дм , потім двічі промивають дистильованою водою і етиловим спиртом з масовою концентрацією 100 %. Оброблений осад переносять кількісно у бюкс і висушують його у сушильній шафі при температурі 100 °C упродовж 15-17 хв. і зважують на терезах. Вміст еластину (X) у пробі м'яса у % обчислюють за формулою (1). Порівняльна оцінка результатів випробування вищезазначених способів вдосконалення визначення вмісту еластину в м'ясі забійних тварин до прототипу наведені в табл. 1. Таблиця 1 Порівняння методів визначення вмісту еластину в м'ясі забійних тварин до прототипу № п/п 1 1 Показники, що порівнюються Прототип 2 Складові методу: Маса проби, г 3 Дистильована вода, см Час гомогенізації, хв. Кількість об./хв., тис. Час центрифугування, хв. Кількість об./хв. Кратність промивання дист. водою 3 50,0 1 4 Приклади 2 5 3 6 2 5,0-5,5 100,0-120,0 10-11 7-9 10-15 2000 20,0-20,2 100,0-120,0 10-11 8-14 10-15 2500 2 рази 5 год. 10,0-10,2 100,0-120,0 10-11 4-6 10-15 1000 2 рази 2 рази UA 68834 U Продовження табл. 1 Порівняння методів визначення вмісту еластину в м'ясі забійних тварин до прототипу № п/п 1 2. 3 5. 6. 7. 8. 8. 15. 16. 17. 18. 19. Показники, що порівнюються Прототип 1 4 2 3 Додавання реактивів: Трихлороцтова кислота, г 10,0 Реактив для розпилювання (розчин молібдату і конц. 150,0 азотної кислоти) 3 Діетиловий ефір, см 75,0 3 Етиловий спирт, см 50,0 80,0-100,0 Концентрація, % 80,0 Кратність промивання 2 рази етиловим спиртом 3 Ацетон, см 80,0-100,0 Кратність промивання 2 рази ацетоном Температура водяної бані 80 °C Час на водяній бані, хв. 5-8 Температура у сушильній шафі 60 °C Час у сушильній шафі, хв.. 15-17 Обробка осаду гідроксидом 130,0-130,5 3 натрію, см Концентрація гідроксиду 0,2 3 натрію, моль/дм Температура водяної бані 80 °C Час на водяній бані, хв. 10-20 Час центрифугування 15-20 Кратність об./хв. 1000 Обробка хлороводневою кислотою з мас. концентрацією, 0,02 3 моль/дм Кратність промивання 2 рази дистильованою водою Кратність промивання етиловим спиртом 2 рази Концентрація етилового 80,0 спирту, % Висушування осаду у сушильній шафі Температура, °C 60 100,0 Час висушування 20 15-17 Застосування приладу Хроматограф Швидкість проведення досліду, 7 год. 45-60 хв. Стабільність показників вмісту 94,5 еластину, % % співвідношення результатів досліджень до показників 87,0-89,5 89,5-91,1 вмісту вологи % співвідношення результатів досліджень до показників 81,0-82,5 80,7-82,9 вмісту оксипроліну 3 Приклади 2 5 3 6 100,0-120,0 60,0 150,0-150,5 100,0 2 рази 2 рази 100,0-120,0 150,0-150,5 2 рази 2 рази 80 °C 5-8 60 °C 15-17 80 °C 5-8 60 °C 15-17 130,0-130,5 130,0-130,5 0,05 од 80 °C 10-20 15-20 2000 80 °C 10-20 15-20 2500 0,05 0,01 2 рази 2 рази 2 рази 60,0 2 рази 100,0 100,0 15-17 100,0 15-17 55-60 45-55 88,7 98,9 89,5-90,5 95,4-97,5 82,5-86,5 97,5-98,1 UA 68834 U 5 Дані табл. 1 свідчать, що більш достовірні дані в порівнянні до результатів досліджень по вмісту вологи у м'ясі - 95,4-97,5 % [3] та до результатів досліджень по вмісту оксипроліну у м'ясі - 97,5-98,1 % [4] були отримані при застосуванні методу за прикладом № 3. Також найвища стабільність показників по вмісту еластину в м'ясі була за прикладом № 3 - 98,9 %. Використовуючи метод за прикладом № 3, ми визначили вміст еластину у 35 пробах м'яса забійних тварин: 8 проб яловичини; 8 проб свинини; 6 проб конини, 6 проб баранини, 7 проб козлятини. Результати досліджень наведені у таблиці 2. Таблиця 2 Показники вмісту еластину у м'ясі забійних тварин № п/ п 1. 2. 3. 4. 5. Вид м'ясопродуктів Яловичина Свинина Конина Баранина Козлятина Кількість Показники вмісту еластину проб за прикладом № 3, % 8 2,12±0,04 8 0,82±0,05 6 2,85±0,02 6 1,75±0,04 7 1,92±0,03 Норма згідно з діючими стандартами, % 0,2-3,0 10 15 20 25 30 Проведеними дослідженнями визначено, що вміст еластину у м'ясі забійних тварин був в межах норми згідно з діючими стандартами. Ці дані були стабільними та достовірними, отже метод за прикладом № 3 можна використовувати при визначенні вмісту еластину. Крім того, слід зазначити, що метод є ефективним та економним щодо приготування реактивів, а його результати дають конкретні кількісні показники за вмістом еластину у м'ясі забійних тварин. Метод за прикладом № 3 нами пропонується як кількісний спосіб визначення вмісту еластину в м'ясі забійних тварин поряд з іншими методами визначення якості м'яса (вміст вологи, вміст оксипроліну, вміст вільного жиру [5]). Метод має перевагу перед існуючими методами визначення якості м'ясопродуктів в тому, що результати мають високу достовірність та кількісні значення. Джерела інформації: 1. ГОСТ 25011-81. Мясо и мясные продукты. Метод определения белка. - М.: Госстандарт, 1981. – 8 с. 2. ДСТУ ISO 5553:2005. М'ясо та м'ясні продукти. Виявлення поліфосфатів. - К.: Держспоживстандарт України, 2006. - 4 с. 3. ДСТУ ISO 1442:2005. М'ясо та м'ясні продукти. Метод визначення вмісту вологи (контрольний метод). - К.: Держспоживстандарт України, 2006. - 8 с. 4. ГОСТ 23041-78. Мясо и мясопродукты. Метод определения оксипролина. - М.: Госстандарт, 1981. - 6 с. 5. ДСТУ ISO 1443:2005. М'ясо та м'ясні продукти. Метод визначення вмісту вільного жиру. К.: Держспоживстандарт України, 2006. - 8 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 40 45 Спосіб визначення вмісту еластину в м'ясі забійних тварин, що включає одержання проби м'яса, який відрізняється тим, що використовують подрібнену наважку м'яса у кількості 20,0-20,2 г, 3 гомогенізують її у 100,0-120,0 см дистильованої води упродовж 10-11 хв. у гомогенізаторі при 814 тис. об./хв., потім отриманий гомогенізат кількісно переносять у центрифугальну склянку 3 об'ємом 250 см і центрифугують упродовж 10-15 хв. зі швидкістю 2500 об./хв., потім промивають осад двічі у дистильованій воді та двічі промивають і центрифугують зі 150,0-150,5 3 см етилового спирту з масовою концентрацією 100 % і двічі обробляють ацетоном у кількості 3 150,0-150,5 см , потім підігрівають осад у центрифугальній склянці на водяній бані упродовж 5-8 хв. та підсушують у сушильній шафі при температурі 60 °C упродовж 15-17 хв., додаючи до 3 3 осаду 130,0-130,5 см розчину гідроксиду натрію з масовою концентрацією 0,1 моль/дм і знову занурюють у водяну баню при температурі 80 °C на 10-20 хв., потім охолоджують та центрифугують упродовж 15-20 хв. зі швидкістю 2500 об./хв., потім осад обробляють розчином 3 хлороводневої кислоти з масовою концентрацією 0,01 моль/дм , потім двічі промивають дистильованою водою і етиловим спиртом з масовою концентрацією 100 %, переносячи осад у 4 UA 68834 U бюкс, і висушують його у сушильній шафі при температурі 100 °C упродовж 15-17 хв. і зважують осад з наступним вирахуванням еластину. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5