Спосіб вдосконалення визначення вмісту нітриту натрію в м’ясопродуктах

Реферат: Спосіб вдосконалення визначення вмісту нітриту натрію в м'ясопродуктах належить до сільського господарства, зокрема до ветеринарної медицини, і може бути використаний для визначення вмісту нітриту натрію в м'ясопродуктах у виробничих лабораторіях з переробки м'яса, в державних лабораторіях ветеринарної медицини та в лабораторіях ветсанекспертизи на агропродовольчих ринках. UA 68835 U (12) UA 68835 U UA 68835 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до сільського господарства, зокрема до ветеринарної медицини, і може бути використана для визначення вмісту нітриту натрію в м'ясопродуктах у виробничих лабораторіях потужностей з переробки м'яса, в державних лабораторіях ветеринарної медицини та в лабораторіях ветсанекспертизи на агропродовольчих ринках. За результатами цього методу можна отримати кількісні значення при оцінці безпечності м'ясопродуктів. Аналогом корисної моделі є метод визначення вмісту L-(+)-глутамінової кислоти, що включає екстрагування її в досліджуваній пробі м'ясопродукту перхлорною кислотою, в подальшому центрифугування і додавання хлориду йодонітротетразолію у присутності діафорази та фотометричне вимірювання інтенсивності забарвлення формазану при довжині хвилі 492 нм [1]. Недоліком даного методу є те, що він громіздкий, довготривалий, використовуються дорогі реактиви, а також метод дає похибку у визначеннях від 15 до 20 %. Прототипом корисної моделі є фотометричний метод визначення вмісту нітриту натрію [2], в якому використовують екстраговану гарячою водою досліджувану пробу із м'ясопродуктів при проведенні ферментативного відновлювання нітрату до нітриту при обробці сульфаніламідом і N-1-нафтилетилендіаміном дигідрохлоридом та фотометричним вимірюванням інтенсивності червоного кольору при довжині хвилі 538 нм. Недоліком даного методу є те, що розчини для утворення кольору (розчин 1, 2, 3) готуються у великій кількості і вони нестійкі. Крім того, даний метод дає похибку у 10-15 % під час проведення аналізу та вирахування вмісту нітриту натрію. В основу даної корисної моделі поставлено задачу - вдосконалити спосіб визначення вмісту нітриту натрію в м'ясопродуктах шляхом зміни кількості та концентрації реактивів при 3 депротеїнiзації досліджуваної проби, додаючи 5,0-5,1 см насиченого розчину бури, 100,03 100,2см гарячої дистильованої води (70 °C), нагріваючи колбу на киплячій водяній бані 3 упродовж 15-16 хв. та послідовно додаючи реактиви І та II у кількості по 2,2-2,4 см кожного, 3 використовуючи отриманий фільтрат в кількості 30,0-30,2 см для утворення кольору, додаючи 3 3 при цьому послідовно 8,0-8,2 см розчину 1 та 4,5-5,0 см розчину 3, витримавши в темному місці при температурі 20-22 °C упродовж 6-7 хв., додавши 1,6-1,8 см розчину 2 та витримавши знову в темному місці упродовж 8-10 хв. при тій же температурі, доводячи об'єм в мірній колбі до мітки дистильованою водою. Потім швидко вимірюють інтенсивність червоного забарвлення розчину на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 545-550 нм (зелений світофільтр) в кюветі з товщиною поглинаючого світла 1,0 см та після чого вираховують нітрит натрію у мг/кг за формулою, що забезпечить достовірність результатів при визначенні вмісту хлориду натрію в м'ясопродуктах. Задача корисної моделі вирішується тим, що беруть наважку м'ясопродукту в кількості 10,03 10,2 г, подрібнюють на електром'ясорубці, потім поміщають у конічну колбу ємністю 250 см , 3 3 додають по черзі 5,0-5,2 см насиченого розчину бури та 100,0-100,2 см гарячої дистильованої води (70° С) та нагрівають вміст колби упродовж 15-16 хв. на киплячій водяній бані. Вміст колби періодично струшують. Колбу охолоджують при температурі 20-22 °C і послідовно додають 3 реактиви І та II у кількості 2,2-2,4 см . Після кожного з додавань ретельно перемішують. 3 Переливають вміст у мірну колбу з однією міткою ємністю 200 см , доводять до мітки і перемішують. Дають колбі постояти 30-31 хв. при температурі 20-22 °C. Вміст ретельно перемішують та фільтрують через гофрований фільтрувальний папір так, щоб одержати 3 прозорий розчин. До мірної колби ємністю 100 см за допомогою піпетки вносять 30,0-30,2 см 3 3 фільтрату і додають 30,0-29,8 см дистильованої води, щоб одержати об'єм близько 60 см . 3 3 Потім додають 8,0-8,2 см розчину 1 та 4,5-5,0 см розчину 3, перемішують і залишають суміш 3 на 6-7 хв. при температурі 20-22 °C в темному місці. Потім додають 1,6-1,8 см розчину 2, перемішують і залишають суміш на 8-10 хв. при тій же температурі у темному місці. Вміст колби доводять до мітки дистильованою водою. Потім швидко вимірюють інтенсивність червоного забарвлення розчину на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 545-550 нм (зелений світофільтр) в кюветі з товщиною поглинаючого світла 1,0 см. При цьому враховують, що: 3 - реактив І містить 26,5-26,6 г калію фераціаніду та 250 см дистильованої води, - реактив II 3 3 містить 55,0-55,1 г цинку ацетат дигідрату, 7,5-7,6 см льодової оцтової кислоти та 250 см дистильованої води, 3 - розчин 1 містить 1,0-1,1 г сульфаніламіду, 40,0-50,1 см концентрованої хлороводневої 3 кислоти та 400,0-400,1 см дистильованої води, 3 - розчин 2 містить 0,25-0,26 г N-1-нафтилетилендіамін дигідрохлориду та 250 см дистильованої води, 3 3 - розчин 3 містить 74,17 см концентрованої хлороводневої кислоти та 166,67 см дистильованої води. Проводять два незалежних визначення з різними досліджуваними пробами, відібраними від того самого дослідного зразка м'ясопродукту. 1 UA 68835 U 3 5 Побудова калібрувальної кривої: у чотири мірні колби ємністю 100 см піпеткою переносять 3 3 відповідно по 10 см дистильованої води і по 10 см кожного з трьох стандартних розчинів нітриту натрію, які містять 2,5 мкг, 5,0 мкг і 10,0 мкг нітриту на 1 см. У кожну колбу додають 3 дистильовану воду, щоб одержати близько 60 см , і проводять у подальшому дослідження, як описано у методиці вище. Будують калібрувальну криву, розташувавши отримані значення поглинальної здатності стандартних розчинів проти значень концентрації цих розчинів, у 3 мкг/см . Вміст нітриту натрію у пробі м'ясопродукту у міліграмах на кілограм обчислюють за формулою: 10 NaNO 2  c  2000 mV (1) де 15 20 25 30 35 40 45 50 55 c - концентрація розчину нітриту натрію, визначена за допомогою калібрувальної кривої, що 3 відповідає поглинальній здатності розчину, приготовленого з проби м'ясопродукту, мкг/см ; m - маса досліджуваної проби м'ясопродукту, г; 3 V - об'єм досліджуваної порції фільтрату, взятої для фотометричного визначення, см . Результат виражають з точністю до 1 мг на 1 кг продукту. Етапи вирішення даної задачі наведено у нижчезазначених прикладах. Приклад 1. Для розробки методу використовують наважку м'ясопродукту в кількості 8,0-8,5 г, 3 подрібнюють на електром'ясорубці, потім поміщають у конічну колбу ємністю 250 см , додають 3 3 по черзі 4,5-5,0 см насиченого розчину бури та 100,0-105,0 см гарячої дистильованої води (70 °C) та нагрівають вміст колби упродовж 15-16 хв. на киплячій водяній бані. Вміст колби періодично струшують. Колбу охолоджують при температурі 20-22 °C і послідовно додають реактиви І та II у кількості 1,8-2,0 см. Після кожного з додавань ретельно перемішують. 3 Переливають вміст у мірну колбу з однією міткою ємністю 200 см , доводять до мітки і перемішують. Дають колбі постояти 25-27 хв. при температурі 20-22 °C. Вміст ретельно перемішують та фільтрують через гофрований фільтрувальний папір так, щоб одержати 3 3 прозорий розчин. До мірної колби ємністю 100 см за допомогою піпетки вносять 25,0-25,5 см 3 3 фільтрату і додають 35,0-34,5 см дистильованої води, щоб одержати об'єм близько 60 см . 3 3 Потім додають 10,0-10,5 см розчину 1 та 6,0-6,5 см розчину 3, перемішують і залишають суміш 3 на 5-6 хв. при температурі 20-22 °C в темному місці. Потім додають 2,0-2,2 см розчину 2, перемішують і залишають суміш на 3-5 хв. при тій же температурі у темному місці. Вміст колби доводять до мітки дистильованою водою. Потім швидко вимірюють інтенсивність червоного забарвлення розчину на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 538-540 нм (зелений світофільтр) в кюветі з товщиною поглинаючого світла 1,0 см. Проводять два незалежних визначення з різними досліджуваними пробами, відібраними від того самого дослідного зразка м'ясопродукту. 3 Побудова калібрувальної кривої: у чотири мірні колби ємністю 100 см піпеткою переносять 3 3 відповідно по 10 см дистильованої води і по 10 см кожного з трьох стандартних розчинів 3 нітриту натрію, які містять 2,5 мкг, 5,0 мкг і 10,0 мкг нітриту на 1 см . У кожну колбу додають 3 дистильовану воду, щоб одержати близько 60 см , і проводять у подальшому дослідження, як описано у методиці вище. Будують калібрувальну криву, розташувавши отримані значення поглинальної здатності стандартних розчинів проти значень концентрації цих розчинів, у 3 мкг/см . Вміст нітриту натрію у пробі м'ясопродукту у міліграмах на кілограм обчислюють за формулою (1). Результат виражають з точністю до 1 мг на 1 кг продукту. Приклад 2. Для розробки методу використовують наважку м'ясопродукту в кількості 8,5-9,0 г, 3 подрібнюють на електром'ясорубці, потім поміщають у конічну колбу ємністю 250 см , додають 3 3 по черзі 6,0-6,5 см насиченого розчину бури та 95,0-100,0 см гарячої дистильованої води (70 °C) та нагрівають вміст колби упродовж 12-15 хв. на киплячій водяній бані. Вміст колби періодично струшують. Колбу охолоджують при температурі 20-22 °C і послідовно додають 3 реактиви І та II у кількості 2,0-2,2 см . Після кожного з додавань ретельно перемішують. 3 Переливають вміст у мірну колбу з однією міткою ємністю 200 см , доводять до мітки і перемішують. Дають колбі постояти 22-26 хв. при температурі 20-22 °C. Вміст ретельно перемішують та фільтрують через гофрований фільтрувальний папір так, щоб одержати 2 UA 68835 U 3 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 3 прозорий розчин. До мірної колби ємністю 100 см за допомогою піпетки вносять 20,0-20,5 см 3 3 фільтрату і додають 40,0-39,5 см дистильованої води, щоб одержати об'єм близько 60 см , 3 3 Потім додають 12,0-12,5 см розчину 1 та 5,5-6,0 см розчину 3, перемішують і залишають суміш 3 на 6-7 хв. при температурі 20-22 °C в темному місці. Потім додають 2,5-2,6 см розчину 2, перемішують і залишають суміш на 4-6 хв. при тій же температурі у темному місці. Вміст колби доводять до мітки дистильованою водою. Потім швидко вимірюють інтенсивність червоного забарвлення розчину на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 550-555 нм (зелений світофільтр) в кюветі з товщиною поглинаючого світла 1,0 см. Проводять два незалежних визначення з різними досліджуваними пробами, відібраними від того самого дослідного зразка м'ясопродукту. 3 Побудова калібрувальної кривої: у чотири мірні колби ємністю 100 см піпеткою переносять 3 3 відповідно по 10 см дистильованої води і по 10 см кожного з трьох стандартних розчинів 3 нітриту натрію, які містять 2,5 мкг, 5,0 мкг і 10,0 мкг нітриту на 1 см . У кожну колбу додають 3 дистильовану воду, щоб одержати близько 60 см , і проводять у подальшому дослідження, як описано у методиці вище. Будують калібрувальну криву, розташувавши отримані значення поглинальної здатності стандартних розчинів проти значень концентрації цих розчинів, у 3 мкг/см . Вміст нітриту натрію у пробі м'ясопродукту у міліграмах на кілограм обчислюють за формулою (1). Результат виражають з точністю до 1 мг на 1 кг продукту. Приклад 3. Для розробки методу використовують наважку м'ясопродукту в кількості 10,0-10,2 г, 3 подрібнюють на електром'ясорубці, потім поміщають у конічну колбу ємністю 250 см , додають 3 3 по черзі 5,0-5,2 см насиченого розчину бури та 100,0-100,2 см гарячої дистильованої води (70 °C) та нагрівають вміст колби упродовж 15-16 хв. на киплячій водяній бані. Вміст колби періодично струшують. Колбу охолоджують при температурі 20-22 °C і послідовно додають 3 реактиви І та II у кількості 2,2-2,4 см . Після кожного з додавань ретельно перемішують. 3 Переливають вміст у мірну колбу з однією міткою ємністю 200 см , доводять до мітки і перемішують. Дають колбі постояти 30-31 хв. при температурі 20-22 °C. Вміст ретельно перемішують та фільтрують через гофрований фільтрувальний папір так, щоб одержати 3 3 прозорий розчин. До мірної колби ємністю 100 см за допомогою піпетки вносять 30,0-30,2 см 3 3 фільтрату і додають 30,0-29,8 см дистильованої води, щоб одержати об'єм близько 60 см . Потім додають 8,0-8,2 см розчину 1 та 4,5-5,0 см розчину 3, перемішують і залишають суміш на 6-7 хв. за температури 20-22 °C в темному місці. Потім додають 1,6-1,8 см розчину 2, перемішують і залишають суміш на 8-10 хв. при тій же температурі у темному місці. Вміст колби доводять до мітки дистильованою водою. Потім швидко вимірюють інтенсивність червоного забарвлення розчину на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 545-550 нм (зелений світофільтр) в кюветі з товщиною поглинаючого світла 1,0 см. Проводять два незалежних визначення з різними досліджуваними пробами, відібраними від того самого дослідного зразка м'ясопродукту. Побудова калібрувальної кривої: у чотири мірні колби ємністю 100 см піпеткою переносять 3 3 відповідно по 10 см дистильованої води і по 10 см кожного з трьох стандартних розчинів 3 нітриту натрію, які містять 2,5 мкг, 5,0 мкг і 10,0 мкг нітриту на 1 см . У кожну колбу додають 3 дистильовану воду, щоб одержати близько 60 см , і проводять у подальшому дослідження, як описано у методиці вище. Будують калібрувальну криву, розташувавши отримані значення поглинальної здатності стандартних розчинів протни значень концентрації цих розчинів, у 3 мкг/см . Вміст нітриту натрію у пробі м'ясопродукту у міліграмах на кілограм обчислюють за формулою (1). Результат виражають з точністю до 1 мг на 1 кг продукту. Порівняльна оцінка результатів випробування вищезазначених способів вдосконалення визначення вмісту нітриту натрію в м'ясопродуктах до прототипу наведені в таблиці 1. 3 UA 68835 U Таблиця 1 Порівняння методів визначення вмісту нітриту натрію в м'ясопродуктах до прототипу № п/п 1 Показники, що порівнюються Прототип 2 3 Складові методу: Маса проби, г 10,0 3 Насичений розчин бури, см 5,0 Кількість гарячої дист. води 3 1. (70 °C), см 100,0 Час нагрівання на водяній бані, хв. 15 Температура охолодження вмісту колби, °C 20-22 Додавання реактивів: 3 Реактив І, см 2,0 Склад реактиву І: калію фероціанід, г 106,0 дистильована вода, см до 1000 2. 3 Реактив II, см 2,0 Склад реактиву II: цинку ацетат дигідрат, г 220,0 3 льодова оцтова кислота, см 30,0 3 дистильованої води, см до 1000 Розбавлення дистильованою 3. водою до позначки в мірній 200 3 колбі, см 4. Експозиція відстоювання, хв… 30 Температура 5. 20 охолодження, °C 6. Експозиція фільтрування, хв 10 3 7. Кількість фільтрату, см 25,0 Додавання реактивів: 3 Дистильована вода, см 35,0 3 Розчин 1, см 10,0 Склад розчину 1: сульфаніламід, г 2,0 дистильована вода, см 800 8. концентрована хлорводнева 3 кислота, см 100,0 3 Розчин 3, см 6,0 Склад розчину 3: концентрована хлорводнева 3 кислота, см 445,0 3 дистильована вода, см 1000,0 Експозиція відстоювання в 9. 5,0 темному місці, хв. 10. Температура відстоювання, °C 20-22 3 Додавання розчину 2, cм 2,0 Склад розчину 2: 11. N-1-нафтилетилендіамін дигідрохлорид, г 0,25 3 дистильована вода, см 250 4 1 4 Приклади 2 5 3 6 8,0-8,5 4,5-5,0 8,5-9,0 6,0-6,5 10,0-10,2 5,0-5,2 100-105 95-100 100,0-100,2 15-16 12-15 15-16 20-22 20-22 20-22 1,8-2,0 2,0-2,2 2,2-2,4 26,5-26,6 до 250 1,8-2,0 26,5-26,6 до 250 2,0-2,2 26,5-26,6 до 250 2,2-2,4 55,0-55,1 7,5-7,6 до 250 55,0-55,1 7,5-7,6 до 250 55,0-55,1 7,5-7,6 до 250 200 200 200 25-27 22-26 30-31 18-20 22-25 20-22 10-11 25,0-25,5 10-11 20,0-20,5 10-12 30,0-30,2 35,0-34,5 10,0-10,5 40,0-39,5 12,0-12,5 30,0-29,8 8,0-8,2 1,0-1,1 400,0-00,1 1,0-1,1 400,0-400,1 1,0-1,1 400,0-00,1 40,0-50,1 6,0-6,5 40,0-50,1 5,5-6,0 40,0-50,1 4,5-5,0 111,25 250,0 111,25 250 74,17 166,67 5-6 6-7 6-7 20-22 2,0-2,2 20-22 2,5-2,6 20-22 1,6-1,8 0,25-0,26 250 0,25-0,26 250 0,25-0,26 250 UA 68835 U Продовження таблиці 1 1 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 5 10 2 Експозиція відстоювання в темному місці, хв. Температура відстоювання, °C Довжина хвилі, нм Товщина кювета поглинаючого світла, см Швидкість проведення досліду, хв. Стабільність показників вмісту нітриту натрію, % % співвідношення результатів досліджень до показників вмісту крохмалю % співвідношення результатів досліджень до показників вмісту натрію хлориду 3 4 5 6 3-10 3-5 4-6 8-10 20-22 538 20-22 538-540 20-22 550-555 20-22 545-550 1,0 1,0 1,0 1,0 35-40 35-40 40-42 25-27 95,8 89,4 84,5 98,9 88,0-90,4 88,0-92,4 90,0-92,5 96,2-98,5 86,0-88,5 81,5-83,7 85,0-89,1 97,8-98,7 Дані табл. 1 свідчать, що більш достовірні дані в порівнянні до результатів досліджень по вмісту крохмалю - у 96,2-98,5 % [3] та до результатів досліджень по вмісту натрію хлориду - у 97,8-98,7 % [4] були отримані при застосуванні методу за прикладом № 3. Також найвища стабільність показників по вмісту нітриту натрію була за прикладом № 3-98,9 %. Використовуючи метод за прикладом № 3, ми визначили вміст нітриту натрію у 38 пробах м'ясопродуктів: 6 проб - варено-копченої ковбаси; 6 проб - сирокопченої ковбаси, 6 проб сиров'яленої ковбаси, 7 проб - вареної ковбаси, 7 проб - сардельок та 6 проб - сосисок. Результати наведені в табл. 2. Таблиця 2 Показники вмісту нітриту натрію у різних видах м'ясопродуктів №п/ п 1. 2. 3. 4. 5. 6. 15 20 25 Вид м'ясопродуктів Варено-копчена ковбаса Сирокопчена ковбаса Сиров'ялена ковбаса Варена ковбаса Сардельки Сосиски Кількість проб Показники вмісту нітриту натрію за прикладом №3, (У %) 6 3,82±0,14 не більше 5,0 6 6 7 7 6 5,12±0,09 4,80±0,22 1,65±0,09 2,02±0,05 1,98±0,04 не більше 6,0 не більше 6,0 не більше 2,5 не більше 2,5 не більше 2,5 Норма згідно з діючими стандартами, % Проведеними дослідженнями визначено, що вміст нітриту натрію у різних видах м'ясопродуктів був в межах норми згідно з діючими стандартами в Україні. Ці дані були стабільними та достовірними, отже метод за прикладом № 3 можна використовувати при визначенні вмісту нітриту натрію. Крім того, слід зазначити, що метод є ефективним та економним щодо приготування реактивів, а його результати дають конкретні кількісні показники за вмістом нітриту натрію у м'ясопродуктах. Метод за прикладом № 3 нами пропонується як кількісний спосіб вдосконалення визначення вмісту нітриту натрію в м'ясопродуктах поряд з іншими методами визначення якості м'ясопродуктів (вміст крохмалю, вміст натрію хлориду, вміст вільного жиру [5]). Метод має перевагу перед існуючими методами визначення якості м'ясопродуктів в тому, що результати мають високу достовірність та кількісні значення. Джерела інформації: 1. ДСТУ ISO 4134:2004. М'ясо та м'ясні продукти. Контрольний метод визначення вмісту L(+)-глутамінової кислоти. К.: Держспоживстандарт України, 2006.-9 с. 5 UA 68835 U 5 10 15 20 25 30 2. ДСТУ ISO 2918:2005. М'ясо та м'ясні продукти. Метод визначення загального вмісту нітриту (контрольний метод). К.: Держспоживстандарт України, 2007.-5 с. 3. ДСТУ ISO 5554:2005. М'ясні продукти. Визначення вмісту крохмалю (контрольний метод). К.: Держспоживстандарт України, 2007.-9 с. 4. ДСТУ ISO 1841-1:2004. М'ясо та м'ясні продукти. Визначення вмісту хлоридів. Частина 1. Метод Волхарда. К.: Держспоживстандарт України, 2005.-4 с 5. ДСТУ ISO 1443:2005 М'ясо та м'ясні продукти. Метод визначення вмісту вільного жиру. К.: Держспоживстандарт України, 2006.-8 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб вдосконалення визначення вмісту нітриту натрію в м'ясопродуктах, що включає використання 10,0-10,2 г мясопродукту, який екстрагують насиченим розчином бури у кількості 3 3 5,0-5,1 см та гарячою дистильованою водою (70 °C) у кількості 100,0-100,2 см , який відрізняється тим, що при депротеїнізації послідовно додають реактиви І та II у кількості по 3 3 2,2-2,4 см кожного, використовують отриманий фільтрат в кількості 30,0-30,2 см для утворення 3 3 кольору, додають при цьому послідовно 8,0-8,2 см розчину 1, 4,5-5,0 см розчину 3 та 1,6-1,8 3 см розчину 2 та витримують в темному місці упродовж 8-10 хв. при температурі 20-22 °C та доводячи об'єм в мірній колбі до мітки дистильованою водою, потім швидко вимірюють інтенсивність червоного забарвлення розчину на фотоелектроколориметрі при довжині хвилі 545-550 нм (зелений світофiльтр) в кюветі з товщиною поглинаючого світла 1,0 см та вираховують вміст нітриту натрію за заданою формулою, при цьому враховують, що: 3 - реактив І містить 26,5-26,6 г калію фераціаніду та 250 см дистильованої води, - реактив II 3 3 містить 55,0-55,1 г цинку ацетат дигідрату, 7,5-7,6 см льодової оцтової кислоти та 250 см дистильованої води, 3 - розчин 1 містить 1,0-1,1 г сульфаніламіду, 40,0-50,1 см концентрованої хлороводневої 3 кислоти та 400,0-400,1 см дистильованої води, 3 - розчин 2 містить 0,25-0,26 г N-1-нафтилетилендіамін дигідрохлориду та 250 см дистильованої води, 3 3 - розчин 3 містить 74,17 см концентрованої хлороводневої кислоти та 166,67 см дистильованої води. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 6