Спосіб одержання пробіотика “симбітер-форте”

1. Спосіб одержання пробіотика, що передбачає спільне культивування в молочному середовищі полівидового мультисимбіозу біфідобактерій C2 2 86542 1 3 вище посівного матеріалу, що містить біфідобактерії видів Bifidobacterium longum і Bifidobacterium bifidum, оцтовокислі бактерії видів Acetobacter aceti і Acetobacter pasteurianus, пропіоновокислі бактерії видів Propionibacterium freudenreichii і Propionibacterium acidipropionici, молочнокислі бактерії при співвідношенні симбіозу молочнокислих і оцтовокислих бактерій із симбіозом біфідобактерій, пропіоновокислих і оцтовокислих бактерій, рівному 1:3 [Патент України №10367, С12N1/20, А23С9/12,1996]. Бактеріальний концентрат, одержаний відомим способом, характеризується високим вмістом життєдіяльних клітин пробіотичних бактерій і антагоністичною активністю щодо широкого спектра патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів. Однак у даному способі використовується обмежена кількість видів біфідобактерій і лактобацил, що не дає можливості підвищення активності концентрату за рахунок пробіотичних властивостей додаткових таксонів лактобацил і біфідобактерій, зокрема підвищення резистентності до природних інгібіторів травного тракту. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб одержання пробіотика «Симбітер-2», що передбачає спільне культивування в молочному середовищі багатокомпонентної асоціації біфідобактерій, лактобацил, лактококів, стрептококів, пропіоновокислих і оцтовокислих бактерій видів Bifidobacterium bifidum, В. longum, В. infantis, В. breve, В. adolescentis, Lactococcus lactis, Streptococcus salivarius ssp. thermophilus, Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. plantarum, L. gasseri, L. brevis, Propionibacterium freudenreichii, P. acidipropionici і Acetobacter aceti, при цьому попередньо отриманий консорціум молочнокислих стрептококів і лактобацил з'єднують із консорціумом біфідобактерій, пропіоновокислих і оцтовокислих бактерій у співвідношенні 1:4 [Патент України №28040, А23С9/12, С12N1/20, 2000] - прототип. Пробіотик, який одержують відомим способом, містить 24 штами пробіотичних бактерій, пригнічує ріст широкого кола патогенних і умовнопатогенних мікроорганізмів, синтезує вітаміни й екзополісахариди, внаслідок чого проявляє високу пробіотичну активність. Однак пробіотик має недостатньо високу резистентність до природних інгібіторів травного тракту й низьку гіпохолестеринемічну й антивірусну активності. Крім того, пробіотик має низький термін зберігання (не більше двох місяців), а також містить велику кількість бактеріальних штамів, що підвищує трудомісткість процесу одержання стабільних мультикомпонентних симбіозів. Завданням винаходу є створення способу одержання пробіотика «Симбітер-форте», в якому шляхом введення додаткових штамів лактобацил: Lactobacillus fermentum lMB В-7133 і Lactobacillus salivarius lMB В-7134, Lactobacillus helveticus lMB В-7115 та використання із біфідобактерій штамів Bifidobacterium bifidum lMB В-7113, Bifidobacterium longum lMB В-7150, Bifidobacterium adolescentis lMB B-7148, Bifidobacterium infantis lMB B-7147 і Bifidobacterium breve lMB B-7132, а також змішування одержаної біомаси із суспензією гелю бен 86542 4 тоніту, забезпечується підвищення резистентності пробіотика до природних інгібіторів травного тракту, гіпохолестеринемічної і антивірусної здатностей, збільшення його збережоздатності та зниження трудомісткості при конструюванні мультисимбіозу за рахунок зменшення кількості штамів, що використовуються. Поставлене завдання вирішується тим, що в способі одержання пробіотика "Симбітер-форте", що передбачає спільне культивування в молочному середовищі полівидового мультисимбіозу біфідобактерій видів Bifidobacterium bifidum, В. longum, В. breve, В. infantis, В. adolescentis, лактобацил: Lactobacillus acidophilus ВКПМ В-5863, L. casei ВКПМ В-5724, L. brevis lMB В-7114, L. plantarum lMB В-7116, L. gasseri lMB В-7135, молочнокислих стрептококів: Lactococcus lactis ВКПМ В-5725 і Streptococcus salivarius ssp. thermophilus ВКПМ В5388, пропіоновокислих бактерій Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii ВКПМ В-4544 і P. acidipropionici ВКПМ В-5800, нарощування і відділення біомаси, відповідно до винаходу, до складу пробіотика додатково вводять штами лактобацил Lactobacillus fermentum lMB В-7133, Lactobacillus salivarius lMB В-7134 і Lactobacillus helveticus lMB В-7115, із біфідобактерій використовують штами Bifidobacterium bifidum lMB В-7113, Bifidobacterium longum lMB В-7150, Bifidobacterium adolescentis lMB B-7148, Bifidobacterium infantis lMB B-7147 і Bifidobacterium breve lMB B-7132, при цьому отриману біомасу змішують у співвідношенні 1:1-1:2 із протектором-ентеросорбентом, що є 5-10%-ною суспензією гелю бентоніту. Крім того, пробіотик можна виготовляти у вигляді супозиторіїв для ректального чи вагінального застосування або мазі для зовнішнього використання. Пропонований спосіб передбачає використання у складі пробіотика додаткових штамів лактобацил Lactobacillus fermentum lMB В-7133, Lactobacillus salivarius lMB В-7134 і Lactobacillus helveticus lMB В-7115, а із біфідобактерій - штамів Bifidobacterium bifidum lMB В-7113, Bifidobacterium longum lMB В-7150, Bifidobacterium adolescentis lMB B-7148, Bifidobacterium infantis lMB B-7147 і Bifidobacterium breve lMB B-7132. Властивості штамів наведені в Таблицях 1-4. Використані у складі пробіотика штами лактобацил і біфідобактерій ізольовані із кишечнику здорових людей. За допомогою спеціальних селективних методів підвищена резистентність ізольованих штамів до природних інгібіторів травного тракту (шлункового соку, жовчі, фенолу, хлористого натрію, травних ферментів, лізоциму). За рахунок здатності до синтезу лізоциму, коротколанцюжкових жирних кислот (КЛЖК) і високої густоти формованих клітинних популяцій штами активно пригнічують ріст широкого спектра патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів (Таблиці 1, 2). Завдяки цим властивостям, використані бактерії можуть зберігати життєздатність при транзиті через проксимальні ділянки травного тракту, досягати в активному стані біотопу товстої кишки й реалізувати свій пробіотичний потенціал. 5 Крім того, додатково введені до складу пробіотика штами лактобацил вирізняються здатністю знижувати в середовищі культивування вміст холестерину. Причому, спеціально проведені дослідження встановили, що синтез лізоциму й гіпохолестеринемічна здатність значно посилюються в консорціумі лактобацил, а також проявляють синергізм у мультикомпонентному симбіозі з біфідобактеріями, пропіоновокислими бактеріями й молочнокислими стрептококами (Таблиці 3, 4). Уведення додаткових штамів лактобацил до складу пробіотика для орального застосування, а також використання нових штамів біфідобактерій дають можливість підвищити його резистентність до природних інгібіторів травного тракту, антагоністичну активність щодо патогенних і умовнопатогенних мікроорганізмів, здатність знижувати вміст холестерину. Використання високоактивних культур біфідобактерій і лактобацил дає змогу зменшити кількість штамів, що використовуються у складі пробіотика, з 24 (за прототипом) до 17, і за рахунок цього знизити трудомісткість, пов'язану з підтриманням штамів і конструюванням мультикомпонентних симбіозів. Пропонований спосіб передбачає також змішування отриманої після культивування клітин багатовидового симбіозу в живильному середовищі біомаси з 5-10%-ною суспензією гелю бентоніту. Бентоніт - це природний глинистий матеріал, що належить до класу алюмосилікатів і має високі гідратаційні та адсорбційні властивості. Здатність бентоніту до набрякання й адсорбції стала підставою для використання його у фармацевтичній промисловості як основи для мазей [Муравйов І.А., Жакова Н.А. Дослідження бентонітових глин для готування мазей-суспензій // Аптечна справа. 1964. - №5. – С.23-25]. Відомі способи одержання пробіотиків із використанням ентеросорбентів передбачають іммобілізацію пробіотичних клітин на поверхні часточок різних сорбентів [Патент РФ №2017486, МПК 6 А61К31/00, опубл. 15.08.94p.; Патент РФ №2164801, А61К35/74, А23С9/12, С12Ν1/08, опубл. 04.10.2001p.]. Оскільки у відомих способах використовуються сорбенти у вигляді досить великих часточок (до 100-500мкм), курси застосування таких препаратів не можуть бути тривалими, так як при тривалому застосуванні можливі побічні явища (запори, діарея, зниження в організмі рівня вітамінів, гормонів, деяких мікроелементів, корисних мікроорганізмів та ін. за рахунок їхнього зв'язування сорбентом), що може викликати серйозні метаболічні порушення. Застосування таких сорбентів, особливо активованого вугілля, протипоказано при ерозивно-виразкових ураженнях слизової оболонки стравоходу, шлунка, кишечнику, а також при шлунково-кишкових кровотечах. Гель бентоніту, що використовується у пропонованому способі як сорбент, являє собою натрієву форму дрібнодисперсної фракції бентоніту із частками 1-5нм, що одержують із сухого природного бентоніту шляхом обробки його вуглекислим натрієм і очищення від забруднювальних речовин і грубих часток бентоніту. 86542 6 Використання як сорбенту гелю бентоніту не потребує проведення операції з іммобілізації бактеріальних клітин, за якої втрачається значна частина клітин (до 50% від вихідної кількості). Гель бентоніту має високі адсорбційні властивості щодо вірусів, однак він не зв'язує бактеріальні клітини, тому має високу ефективність виведення з організму збудників вірусних інфекцій і різних токсинів, не порушуючи при цьому мікробного балансу в біотопах, і не викликає метаболічних порушень. При змішуванні концентрованої біомаси з гелем бентоніту дрібнодисперсний сорбент зв'язується з поверхневими структурами бактеріальних клітин, покриває їх захисним шаром, захищаючи від впливу інгібуючих факторів: шлункової кислоти, жовчі, лізоциму, ферментів та ін. Бентоніт є цінним джерелом макро- і мікроелементів. Завдяки здатності активно зв'язувати воду, набрякати й формувати гелі, бентоніт, на відміну від багатьох інших сорбентів, не може руйнівно діяти на стінку кишки, а навпаки, сприяє зміцненню слизового бар'єра. Водночас здатність гелю бентоніту активно адсорбувати ентеровіруси дозволяє наділити пробіотик високою антивірусною активністю. Як показали спеціально проведені дослідження, гель бентоніту в зазначеній концентрації має високі протекторні властивості щодо біомаси багатовидового симбіозу, що є бактеріальною основою пробіотика. Зв'язуючи кисень і його токсичні похідні, гель бентоніту оптимізує умови для розвитку облігатно анаеробної пробіотичної флори, насамперед біфідобактерій, що дає змогу виключити зі складу пробіотика аеробні мікроорганізми (оцтовокислі бактерії), які виконують функцію активаторів анаеробних сахаролітичних бактерій. У присутності гелю бентоніту, який одержують спеціальним способом, значно краще зберігається бактеріальний склад і активність пробіотичної біомаси, підвищується резистентність клітин до шлункового соку й жовчі, знижується концентрація холестерину в середовищі (Таблиця 5). На відміну від інших видів ентеросорбентів, гель бентоніту вирізняється м'яким впливом на травний тракт, не здатний травмувати стінку кишечнику або викликати метаболічні розлади, тому пробіотик з використанням гелю бентоніту можна застосовувати тривалими курсами без небезпеки розвитку побічних реакцій. Суспензія, що використовується в даному способі, містить 5-10% бентоніту. Зниження концентрації бентоніту менш 5% призводить до зменшення протекторної дії гелю бентоніту щодо пробіотичної мікрофлори й адсорбції холестерину й вірусів. Підвищення концентрації бентоніту в суспензії вище 10% недоцільно, оскільки не сприяє помітному збільшенню захисних властивостей щодо мікрофлори пробіотика, гіпохолестеринемічної і антивірусної активності, але призводить до зайвого ущільнення консистенції препарату. Клітинну біомасу змішують із 5-10%-ною суспензією гелю бентоніту у співвідношенні 1:1-1:2. Таке співвідношення є найбільш оптимальним. Зміна співвідношення у бік зменшення частки суспензії гелю бентоніту призводить до погіршення терміну зберігання пробіотика, зниження резисте 7 нтності до природних інгібіторів травного тракту й гіпохолестеринемічної активності. Збільшення кількості суспензії гелю бентоніту недоцільно, оскільки не сприяє поліпшенню пробіотичних властивостей і терміну зберігання, але приводить до зниження концентрації клітин у пробіотику і його активності. Спосіб здійснюють таким чином. Як середовище культивування використовують молоко зі вмістом сухих речовин 4-5%, у яке додають 10% молока, гідролізованого панкреатином, або 5% гідролізату казеїну й 1-2% натрію лимоннокислого 3-х-заміщеного. Середовище стерилізують, охолоджують до температури культивування, інокулюють пробіотичним симбіозом і ферментують для накопичення біомаси, яку відокремлюють від культуральної рідини центрифугуванням. Для готування інокулята використовується мультикомпонентний симбіоз молочнокислих, пропіоновокислих і біфідобактерій. Для створення симбіозу культури нижчеперелічених штамів з'єднують у наступних співвідношеннях: Bifidobacterium bifidum lMB В-7113 - 6 Bifidobacterium longum lMB В-7150 - 6 Bifidobacterium adolescentis lMB B-7148 - 4 Bifidobacterium infantis lMB B-7147 - 6 Bifidobacterium breve lMB B-7132 - 6 Lactobacillus fermentum lMB B-7133 - 4 Lactobacillus helveticus lMB B-7115 -2 Lactobacillus acidophilus ΒΚΠΜ B-5863 - 1 Lactobacillus casei ΒΚΠΜ Β-5724 - 5 Lactobacillus brevis lMB B-7114-4 Lactobacillus plantarum lMB B-7116 - 6 Lactobacillus gasseri lMB B-7135 - 3 Lactococcus lactis ΒΚΠΜ B-5725 - 1 Streptococcus salivarius ssp. thermophilus ΒΚΠΜ Β-5388 - 2 Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii ΒΚΠΜ Β-4544 - 7 P. acidipropionici ΒΚΠΜ Β-5800 - 6. Отриманий комплекс штамів вносять у стерильне знежирене молоко зі вмістом сухих речовин 10%. Інокульоване молоко ферментують протягом 15-18год при температурі 36-37°С. Спеціально проведеними дослідженнями встановлено, що при з'єднанні штамів у зазначених співвідношеннях вони формують стійкий мультикомпонентний симбіоз. Отриманий симбіоз використовують як посівний матеріал при одержанні інокулята. Біомасу клітин, відділену від культуральної рідини, змішують з 5-10%-ною суспензією гелю бентоніту у співвідношенні 1:1-1:2. Для одержання гелю бентоніту сухий бентоніт диспергують у воді з додаванням вуглекислого натрію, центрифугують. Осад суспендують у воді, центрифугують для відділення забруднювальних речовин і грубих часток бентоніту. Після 3кратного фракціонування одержують дрібнодисперсну фракцію бентоніту, яку суспендують у бідистильованій воді до одержання 5-10%-ϊ суспензії гелеподібної консистенції, а потім її стерилізують при температурі 121°С протягом 20 хвилин. 86542 8 Винахід пояснюється прикладами. Приклад 1. Одержання пробіотика «Симбітерфорте» у вигляді рідкого бактеріального концентрату для орального застосування. Для готування інокулята у 25л стерильного знежиреного молока з вмістом 10% сухих речовин вносять 1,25л культури мультикомпонентного симбіозу молочнокислих, пропіоновокислих і біфідобактерій такого штамового складу: Bifidobacterium bifidum lMB В-7113 -6 Bifidobacterium longum lMB В-7150 - 6 Bifidobacterium adolescentis lMB B-7148 - 4 Bifidobacterium infantis lMB B-7147 - 6 Bifidobacterium breve lMB B-7132 - 6 Lactobacillus fermentum 1MB B-7133 - 4 Lactobacillus salivarius lMB B-7134 - 2 Lactobacillus helveticus lMB B-7115 - 2 Lactobacillus acidophilus ВКПМ B-5863 - 1 Lactobacillus casei ВКПМ В-5724 - 5 Lactobacillus brevis lMB B-7114 - 4 Lactobacillus plantarum lMB B-7116 - 6 Lactobacillus gasseri lMB B-7135 - 3 Lactococcus lactis ВКПМ B-5725 - 1 Lactococcus lactis ΒΚΠΜ B-5725 - 1 Streptococcus salivarius ssp. thermophilus ΒΚΠΜ Β-5388 - 2 Propionibacterium freudenreichii ssp. shermanii ΒΚΠΜ Β-4544 - 7 P. acidipropionici ΒΚΠΜ Β-5800 - 6. Інокульоване молоко ферментують протягом 18год при температурі 36°С. Готовий інокулят характеризується густою в'язкою консистенцією, кислотністю 98°Т, рН 4,5, концентрацією живих клітин - 8,6´108КУО/см3. Для готування середовища культивування 25кг сухого знежиреного молока розчиняють в 100л водопровідної води. До розчиненого молока доливають воду (до 500л) з розрахунку одержання відновленого молока зі вмістом сухих речовин 5%. Відновлене молоко стерилізують при температурі 121°С із витримкою протягом 25 хвилин. Охолоджують до температури 37°С і вносять 5% інокулята. Одночасно з інокулятом уводять 10% стерильного панкреатичного гідролізату молока й 1% натрію лимоннокислого 3-х-заміщеного (у вигляді стерильного 50%-го розчину). Процес культивування проводять 22год при температурі 37°С і рН 6,5. Концентрація життєдіяльних клітин наприкінці культивування становить 1,2´1010КУО/см3. Клітинну біомасу відокремлюють центрифугуванням і змішують її в співвідношенні 1:1 з 5%-ю суспензією гелю бентоніту. Характеристика отриманого пробіотика «Симбітер-форте» наведена у Таблиці 6. Приклад 2. Одержання пробіотика «Симбітерфорте» у вигляді рідкого бактеріального концентрату для орального застосування. Спосіб здійснюють відповідно до прикладу 1, за винятком того, що біомасу пробіотичних клітин змішують із 10%-ю суспензією гелю бентоніту в співвідношенні 1:2. Характеристика отриманого пробіотика «Симбітер-форте» наведена у Таблиці 6. 9 86542 Приклад 3. Одержання пробіотика «Симбітерфорте» у вигляді рідкого бактеріального концентрату для орального застосування. Спосіб здійснюють відповідно до прикладу 1, за винятком того, що біомасу пробіотичних клітин змішують із 7%-ю суспензією гелю бентоніту в співвідношенні 1:1,5. Характеристика отриманого пробіотика «Симбітер-форте» наведена в Таблиці 6. Приклад 4. Одержання пробіотика «Симбітерфорте» у формі ректального супозиторія. Біомасу пробіотичних бактерій і суспензію гелю бентоніту одержують відповідно до прикладу 1, за винятком того, що отриману дрібнодисперсну фракцію бентоніту суспендують у бідистильованій воді до одержання 8%-ї суспензії. Клітинну біомасу змішують зі стерильною суспензією гелю бентоніту в співвідношенні 1:1. Отриманий пробіотик змішують із розплавленою жировою основою у співвідношенні 1:4, установлюють рН 6,0-6,5 і формують супозиторії вагою 1,5-1,7г. Як жирову основу використовують масло какао, суміш масла какао з ланоліном або інші жирові основи, що використовуються для готування ректальних супозиторіїв, і температура плавлення яких не перевищує 4244°С. Характеристика отриманого пробіотика «Симбітер-форте» наведена у Таблиці 7. Приклад 5. Одержання пробіотика «Симбітерфорте» у формі вагінального супозиторія. Спосіб здійснюють відповідно до прикладу 4, за винятком того, що в супозиторній суміші встановлюють рН 5,0-5,5 і формують супозиторії вагою 1,0-1,2г. 10 Характеристика отриманого пробіотика «Симбітер-форте» наведена в Таблиці 7. Приклад 6. Одержання пробіотика «Симбітерфорте» у формі мазі. Спосіб здійснюють відповідно до прикладу 1, за винятком того, що отриману дрібнодисперсну фракцію бентоніту суспендують у бідистильованій воді до одержання 6,5%-ї суспензії. Клітинну біомасу змішують зі стерильною суспензією гелю бентоніту у співвідношенні 1,0:1,5. Отриманий пробіотик змішують із будь-якою прийнятною мазевою основою у співвідношенні 1:5, установлюють рН 6,5-7,0. Характеристика отриманого пробіотика «Симбітер-форте» наведена в Таблиці 7. У Таблиці 6 наведена порівняльна характеристика пробіотиків для орального застосування, одержаних відомим і пропонованим способом. Як видно з даних таблиці, запропонований спосіб, порівняно з відомим, дає можливість поліпшити якість пробіотика за рахунок підвищення стійкості до природних інгібіторів травного тракту, гіпохолестеринемічної і антивірусної здатності, а також підвищити його термін зберігання. У Таблиці 7 наведена характеристика пробіотиків у формі супозиторіїв для ректального й інтравагінального застосування й мазі для зовнішнього використання. Пробіотики характеризуються високою концентрацією життєдіяльних клітин фізіологічних бактерій та їхніх метаболітів, що доповнюють пробіотичний ефект (КЛЖК, лізоцим, екзополісахариди). Таким чином, пропонований спосіб дає змогу одержувати ефективні пробіотики для орального, ректального й вагінального використання. Таблиця 1 Резистентність нових штамів лактобацил і біфідобактерій, що використовуються у складі пробіотика, до інгібіторів травного тракту Показник Збереження життєздатності в шлунковому соку (рН 2,0), % клітин, що вижили після 2-годинної витримки Збереження життєздатності в середовищі з 30% жовчі, % Збереження життєздатності в середовищі з 0,4% фенолу, % Збереження життєздатності в середовищі із рН 8,8, % Збереження життєздатності клітин у середовищі з 4% NaCl, % L. L. L. fermentum salivarius helveticus lMB lMB lMB В-7133 В-7134 В-7115 В. bifidum lMB В-7113 В. lоngum lMB В-7150 В. Infantis lMB Β-7147 В. B. breve adolescentis lMB lMB В-7132 В-7148 49,4±3,92 37,7±4,08 38,6±5,11 58,5±4,12 60,8±2,97 54,8±3,06 50,5±1,89 54,9±2,25 50,2±4,08 38,9±2,99 44,3±3,12 52,1±4,23 50,8±5,43 42,7±3,24 47,6±3,80 53,5±4,06 62,1±4,22 38,9±4,93 40,6±5,06 61,7±7,23 69,8±2,98 63,6±4,20 67,3±4,45 60,4±3,09 68,8±5,32 49,1±4,64 38,0±4,61 80,8±3,44 87,5±5,12 77,7±4,62 69,0±5,40 79,6±5,98 89,8±3,36 59,9±4,73 47,8±2,45 95,4±3,08 98,1±1,50 90,7±2,13 78,9±3,90 86,5±5,21 11 86542 12 Продовження таблиці 1 Збереження життєздатності клітин у середовищі, що міс- 78,7±5,43 66,5±5,50 50,7±3,91 76,2±5,56 80,4±4,11 88,7±5,05 79,8±2,33 90,1±2,06 тить 1мг/мл лізоциму, % Збереження життєздатності клітин у середовищі, що міс- 87,6±5,09 69,2±4,30 60,8±3,75 90,5±5,33 98,7±1,10 92,4±3,49 98,1±1,35 93,0±3,56 тить 1г/л панкреатину (рН 7,8), % Збереження життєздатності клітин у середовищі, що міс- 77,1±4,06 56,0±3,54 62,1±4,48 56,1±3,96 58,7±4,25 55,2±0,78 50,4±0,76 52,3±2,06 тить 5г/л пепсину (рН 2,0), % Таблиця 2 Антагоністична активність окремих штамів і консорціуму біфідобактерій та лактобацил, що використовуються у складі пробіотика (зона затримки росту патогенних і умовно-патогенних мікроорганізмів, мм) L. L. L. B. fermentum salivarius helveticus bifidum Тест-культура lMB lMB lMB lMB B-7133 B-7134 B-7115 B-7113 S.aureus 209 17 12 14 8 P. mirabilis 12 8 10 14 403 P.vulgaris 52 15 16 11 7 K. pneumoniae 12 10 10 5055 C.albicans 1b 12 S. sonnet 115 16 8 8 9 E. coli 055 18 10 6 E. coli 0111 16 15 8 7 P. aeruginosa 18 16 12 15 9027 E.cloaceae 8 12 12 16 C. freundii 12 39 S. typhimurium 10 8 10 156 Y. enterocolitica 12 6 10 11 15 M. morganii 9 7 8 76 E. aerogenes 11 8 312 E. faecalis 15 15 10 9 S. epidermidis 8 8 37 B. longum lMB B-7150 4 B. infantis lMB B-7147 B. B. breve adolescentis Консорціум lMB lMB B-7132 B-7148 7 10 22 5 6 19 8 10 8 16 20 9 8 8 16 8 6 10 9 6 12 8 12 14 16 20 19 11 12 8 18 28 8 12 17 19 6 10 15 22 12 16 21 8 12 13 12 19 6 10 6 10 15 14 13 8 14 18 12 11 18 16 11 12 9 21 13 86542 14 Таблиця 3 Лізоцимсинтезуюча активність лактобацил, що використовуються у складі пробіотика, їхнього консорціуму й мультикомпонентного симбіозу Штам лактобацил Lactobacillus fermentum lMB В-7133 Lactobacillus salivarius lMB В-7134 Lactobacillus helveticus lMB B-7115 Lactobacillus fermentum lMB B-7133, Lactobacillus salivarius lMB В-7134 і Lactobacillus helveticus lMB B-7115 Мультисимбіоз Зона лізису тест-культури (Micrococcus luteus АТСС 4698), мм 4,2±0,2 3,5±0,3 2,8±0,1 5,4±0,3 8,9±0,5 Таблиця 4 Гіпохолестеринемічна здатність штамів лактобацил, їхнього консорціуму й мультисимбіозу, що використовуються у складі пробіотика Штам лактобацил Lactobacillus fermentum 1MB В-7133 Lactobacillus salivarius 1MB В-7134 Lactobacillus helveticus 1MB B-7115 Lactobacillus fermentum 1MB B-7133, Lactobacillus salivarius 1MB В-7134 і Lactobacillus helveticus 1MB B-7115 Мультисимбіоз Зниження концентрації холестерину в середовищі культивування, % 42,9±7,4 35,7±12,6 33,2±8,9 48,8±7,0 52,5±5,7 Таблиця 5 Вплив суспензії гелю бентоніту на пробіотичні властивості біомаси Показники Резистентність до шлункового соку, % клітин, що вижили після 2-годинної витримки Резистентність до жовчі, збереження життєздатності в середовищі з 30% жовчі, % Зниження концентрації холестерину, % Зниження концентрації клітин через 3 місяця зберігання, % Ступінь адсорбції вірусних часток, % Співвідношення біомаси з 5-10%-ю суспензією гелю бентоніту 1:0 1:1 1:1,5 1:2 1:3 55,8±6,2 69,1±5,5 71,3±4,7 73,0±5,3 72,8±5,9 52,4±3,9 68,9±3,3 72,0±4,5 72,8±5,1 72,2±4,9 53,5±5,1 71,2±6,4 73,0±5,5 73,3±7,3 73,0±6,7 43,9±5,5 21,7±3,3 23,2±4,1 20,5±2,3 23,4±3,1 5±0,5 99,8±0,2 99,9±0,1 99,9±0,1 99,9±0,1 Таблиця 6 Порівняльна характеристика пробіотиків для орального застосування, що одержані відомим і пропонованим способом Показники Кількість штамів, що використовуються у складі пробіотика Кількість живих клітин про біотичної мікрофлори, КУО/см3 Bifidobacterium Lactobacillus Propionibacterium За прототипом Характеристика пробіотиків За прикладом 1 За прикладом 2 За прикладом 3 24 17 17 17 1,0´1012 4,3´1012 5,0´1011 1,2´1012 4,7´1012 5,2´1011 1,3´1012 4,5´1012 5,5´1011 2,0´1012 4,4´1012 5,2´1011 15 86542 16 Продовження таблиці 6 Lactococcus Збереження життєздатності в шлунковому соку (рН 2,0), % клітин, що вижили після 2годинної витримки Збереження життєздатності в середовищі з 30 % жовчі, % Зниження концентрації холестерину в середовищі культивування, % Ступінь адсорбції вірусних часток, % Лізоцимсинтезуюча активність, зона лізису тесткультури, мм Концентрація КЛЖК, %: молочна оцтова пропіонова Концентрація екзополісахаридів, % Зниження концентрації клітин через 3 місяця зберігання, %: Bifidobacterium Lactobacillus Propionibacterium Lactococcus 2,6´1012 3,2´1012 2,7´1012 2,8´1012 54,5±5,1 71,4±6,3 72,0±4,8 70,7±6,6 42,5±5,2 72,6±4,8 73,9±5,7 71,3±4,9 34,1±4,2 73,8±5,9 72,5±7,1 73,0±8,3 5±0,3 99,5±0,5 99,8±0,2 99,8±0,2 2,2±0,3 8,9±0,5 8,8±0,6 8,5±0,9 0,79±0,20 0,58±0,15 0,34±0,10 1,05±0,16 0,78±0,10 0,67±0,11 1,10±0,19 0,81±0,17 0,66±0,10 1,08±0,21 0,80±0,19 0,64±0,08 1,8-2,2 3,3±0,27 3,4±0,31 3,4±0,31 44,7±4,3 51,0±5,0 39,8±3,9 61,1±7,8 20,8±3,9 23,2±1,7 19,7±2,3 28,2±4,4 21,1±2,5 22,6±3,0 20,4±4,9 31,3±3,3 20,6±5,2 24,0±3,1 18,8±1,3 21,6±3,5 Таблиця 7 Характеристика пробіотиків у формі супозиторіїв для ректального й вагінального застосування та мазі Показники Концентрація клітин, КУО/г: Bifidobacterium Lactobacillus Propionibacterium Lactococcus Зниження концентрації клітин через 3 місяця зберігання, % Лізоцимсинтезуюча активність, зона лізису тесткультури, мм Концентрація екзополісахаридів, % Концентрація КЛЖК, %: молочна оцтова пропіонова Комп’ютерна верстка М. Ломалова За прикладом 4 Характеристика пробіотиків За прикладом 5 За прикладом 6 3,3´109 5,6´108 1,5´109 2,7´108 2,8´109 6,2´108 1,8´109 3,0´108 1,2´109 2,6´108 7,1´108 1,3´108 19,4±2,0 21,2±3,4 24,6±4,1 8,0±0,7 8,3±0,5 8,1±0,4 3,0±0,21 2,9±0,25 2,7±0,31 0,80±0,18 0,59±0,12 0,36±0,10 0,82±0,22 0,61±0,17 0,33±0,13 0,76±0,14 0,53±0,09 0,30±0,05 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601