Мікробіологічний спосіб отримання правастатину та біологічно чиста культура mortierella mаculata, що використовується у способі

1. Мікробіологічний спосіб отримання сполуки формули (І)

(I)

із субстратної сполуки формули (II)

, (II)

де R означає іон лужного металу або амонію,

що включає етапи:

(a) культивування штаму ниткоподібних  плісневих грибків Mortierella maculata, здатного 6-гідроксилювати сполуку формули (II) на поживному середовищі, що містить засвоювані джерела вуглецю і азоту і мінеральні солі,

(b) введення субстрату, що підлягає трансформації, в розвинену культуру Mortierella maculata,

(с) ферментація субстрату до завершення біоконверсії,

(d) відділення сполуки формули (І) від культурального бульйону і

(е) ізоляція сполуки формули (І).

2. Спосіб по п. 1, в якому згадане середовище являє собою поживний бульйон.

3. Спосіб по п. 2, в якому згаданий етап відділення сполуки формули (І) від культурального бульйону виконують шляхом адсорбції на аніонообмінній смолі.

4. Спосіб по п. 2, в якому згаданий етап відділення сполуки формули (І) від культурального бульйону виконують шляхом екстракції водонезмішним органічним розчинником з подальшим отриманням його лактонової похідної або його солі з вторинним аміном як проміжної речовини.

5. Спосіб по п. 2, в якому згаданий етап відділення сполуки формули (І) від культурального бульйону виконують шляхом очищення лужного водного екстракту, одержаного  з екстракту в органічному розчиннику ферментаційного бульйону, за допомогою хроматографії на неіонній адсорбуючій смолі.

6. Спосіб по п. 1, в якому штам Mortierella maculata являє собою штам Mortierella maculata n. spec. E-97, депонований в Національній колекції сільськогосподарських і промислових мікроорганізмів, Будапешт, Угорщина, під реєстраційним номером NCAIM(P)F 001266.

7. Спосіб по п. 1, в якому штам Mortierella maculata являє собою штам Mortierella maculata n. sp. E-97/15/13, депонований в Національній колекції сільськогосподарських і промислових мікроорганізмів, Будапешт, Угорщина, під реєстраційним номером NCAIM(P)F 001267.

8. Спосіб по п. 1, в якому фермент гідроксилазу штаму, що використовується для трансформації, індукують за допомогою 8-де(2-метилбутирил)-компактину або компактину.

9. Спосіб по п. 2, в якому сполуку формули (II) як субстрат додають в культуру паралельно з етапом введення, і в якому етап введення залежить від рН культури, і кількість субстрату, що вводиться, становить 0,5-1,0 % від об'єму бульйону.

10. Спосіб по п. 1, в якому етап ферментації проводять на середовищі, що містить джерело вуглецю, вибране з групи, що включає глюкозу, фруктозу і гліцерин.

11. Спосіб по п. 1, в якому етап ферментації проводять на середовищі, що містить джерело азоту, вибране з групи, що включає соєву муку, пептон, казеїн, дріжджовий екстракт і м'ясний екстракт.

12. Спосіб по п. 2, в якому сполуку формули (І), створену під час біоконверсії, відділяють від культурального бульйону шляхом адсорбції з фільтрату бульйону і з промивальної води міцелію на аніонообмінній смолі, елюювання сполуки формули (І) з смоли, повної трансформації сполуки формули (І) в її лактонову форму, ізоляції лактонової похідної, гідролізації лактонової похідної гідроксидом натрію і знесолення сполуки формули (І) на неіонній адсорбційній смолі.

13. Спосіб по п. 12, в якому згадана аніонообмінна смола має полістирол-дивінілбензольний скелет, що несе активні групи четвертинного амонію і використовується для відділення сполуки формули (І) від фільтрату бульйону.

14. Спосіб по п. 4, в якому сполуку формули (І), створену під час біоконверсії, екстрагують в кислій формі з бульйону, підкисленого перед цим до рН 3,5-3,7, або з фільтрату бульйону водонезмішним органічним розчинником.

15. Спосіб по п. 14, в якому згаданий водонезмішний органічний розчинник являє собою етилацетат.

16. Спосіб по п. 14, в якому згаданий водонезмішний органічний розчинник являє собою ізобутилацетат.

17. Спосіб по п. 5, в якому згадану сполуку формули (І) екстрагують в формі натрієвої солі з органічного розчинника водним розчином гідроксиду натрію і очищають на неіонній адсорбційній смолі.

18. Спосіб по п. 14, в якому згадану сполуку формули (І) осаджують з екстракту в кристалічній формі вторинним аміном, що містить алкільні, циклоалкільні, аралкільні або арильні замісники.

19. Спосіб по п. 18, в якому сіль кристалічного вторинного аміну суспендують в суміші алкільного ефіру, що містить С1-4, оцтової кислоти і води; до суспензії додають у вигляді водного розчину еквівалентну кількість гідроксиду натрію, так що утворюється органічна фаза і водна фаза; органічну і водну фази розділяють; водну фазу промивають ізобутилацетатом, потім прояснюють активованим вугіллям; і водний розчин ліофілізують.

20. Спосіб по п. 19, в якому згаданий алкільний ефір являє собою ізобутиловий ефір.

21. Спосіб по п. 18, в якому сіль кристалічного вторинного аміну суспендують в спирті, який містить С1-4, з суспензії отримують розчин сполуки формули (І) шляхом додавання етанольного розчину гідроксиду натрію; і осаджують сполуку формули (І) з розчину ацетоном.

22. Спосіб по п. 21, в якому згаданий спирт, який містить С1-4, являє собою етанол.

23. Спосіб по п. 18, в якому сіль кристалічного вторинного аміну розчиняють в суміші алкільного ефіру, який містить С1-4, алканової карбонової кислоти, яка містить С1-4, і спирту, який містить С1-4, і з розчину осаджують сполуку формули (І) в кристалічній формі шляхом додавання гідроксиду натрію.

24. Спосіб по п. 23, в якому згадана суміш являє собою суміш етилацетату-етанолу.

25. Спосіб по п. 19, в якому правастатин ізолюють з ферментаційного бульйону через дибензиламінову сіль кислотної форми сполуки формули (І).

26. Спосіб по п. 19, в якому кислотну похідну сполуки формули (І) очищують через її дициклогексиламінову сіль.

27. Спосіб по п. 19, в якому кислотну похідну сполуки формули (І) очищують через її діоктиламінову сіль.

28. Спосіб по п. 19, в якому сполуку формули (І) очищують щонайменше до 99,5 % (при вимірюванні за допомогою HPLC) з використанням гель-хроматографії.

29. Спосіб по п. 1, в якому згаданий штам Mortierella maculata культивують при температурі від ~25°С до ~30°С.

30. Біологічно чиста культура штаму Mortierella maculata n. sp. E-97, депонованого в Національній колекції сільськогосподарських і промислових мікроорганізмів, Будапешт, Угорщина, під реєстраційним номером NCAIM(P)F 001266, де штам здатний перетворювати компактиновий субстрат на правастатин шляхом гідроксилювання.

31. Біологічно чиста культура штаму Mortierella maculata n. sp. E-97/15/13, депонованого в Національній колекції сільськогосподарських і промислових мікроорганізмів, Будапешт, Угорщина, під реєстраційним номером NCAIM(P)F 001267, де штам здатний перетворювати компактиновий субстрат на

правастатин шляхом гідроксилювання.

32. Культура Mortierella, здатна 6-гідроксилювати сполуку формули (ІІ)

, (II)

де R означає іон лужного металу або амонію, що складається по суті з нового штаму Mortierella maculata n. sp. E-97, депонованого в Національній колекції сільськогосподарських і промислових мікроорганізмів, Будапешт, Угорщина, під реєстраційним номером NCAIM(P)F 001266.

33. Культура Mortierella, здатна 6-гідроксилювати сполуку формули (II)

, (II)

де R означає іон лужного металу або амонію, що складається по суті з нового штаму Mortierella maculata n. sp. E-97/15/13, депонованого в Національній колекції сільськогосподарських і промислових мікроорганізмів, Будапешт, Угорщина, під реєстраційним номером NCAIM(P)F 001267.