Антагоніст вітронектинового рецептора

1. Сполука формули (І): 2 (19) 1 3 71586 Даний винахід відноситься до фармацевтично активної сполуки, що інгібує вітронектиновий рецептор і є корисною при лікуванні запальних, ракових і серцевосудинних захворювань, таких як атеросклероз та рестеноз, а також захворювань, фактором яких є розсмоктування кістки, таких як остеопороз. Інтегрини представляють собою надродину рецепторів клітинної адгезії, які є трансмембранними глікопротеїнами, що експресуються багатьма клітинами. Дані рецептори поверхневої адгезії клітин включають gpIIb/IIIa (фібриногеновий рецептор) і a nb 3 (вітронектиновий рецептор). Фібриногеновий рецептор gpIIb/IIIa експресується на поверхні тромбоцита й опосередковує агрегацію тромбоцитів та утворення гемостатичного згустк у в місці рани, що кровоточить Philips et al., Blood., 1988, 71, 831. Вітронектиновий рецептор a nb 3 експресується на цілому ряді клітин, включаючи ендотеліальні, клітини гладких м'язів, клітини остеокластів та пухлинні клітини і, таким чином, має множину функцій. Рецептор a nb 3, що експресується на мембрані клітин остеокластів, опосередковує адгезію остеокластів до кісткової матриці, що представляє собою ключову стадію в процесі розсмоктування кістки, Ross et al., J. Biol. Chem., 1987, 262, 7703. Захворюванням, що характеризується надлишковим розсмоктуванням кістки, є остеопороз. Рецептор a nb 3, що експресується на клітинах гладких м'язів аорти людини, опосередковує їхню міграцію в неоинтиму (вн утрішню вистилку органу), що представляє собою процес, який може привести до рестенозу після крізьшкірної коронарної ангіопластики, Brown et al., Cardiovascular Res., 1994, 28, 1815. Крім того, Brooks et al., Cell, 1994, 79, 1157, показали, що антагоніст здатний промотувати зменшення пухлини за рахунок індукування апоптозу розвитку кровоносних судин. Таким чином, агенти, що блокують вітронектиновий рецептор, могли б виявитися корисними при лікуванні захворювань, таких як остеопороз, рестеноз та рак. В даний час відомо, що вітронектиновий рецептор відноситься до трьох різних інтегринів, що позначаються як a nb 1, a nb 3, a nb 5, Horton et al., Int. J. Exp. Pathol., 1990, 71, 741. a nb 1 зв'язує фібронектин та вітронектин. a nb 3 зв'язує цілий ряд лігандів, включаючи фібрин, фібриноген, ламінин, тромбоспондин, вітронектин, фактор Віллебранда (Willebrand), остеопонтин та кістковий сіалопротеїн І. a nb 5 зв'язує вітронектин. Було показано, що вітронектиновий рецептор a nb 5 є включеним у клітинну адгезію цілого ряду типів клітин, включаючи ендотеліальні клітини мікросудин, (Davis et al., J. Cell. Biol., 1993, 51, 206), було підтверджено його роль в ангіогенезі (розвитку кровоносних судин). Даний інтегрин експресується на кровоносних судинах грануляційної тканини рани у людини, але не в нормальній шкірі. Відомо, що вітронектиновий рецептор зв'язується з білками кісткової матриці, що містять трипептидний повторюваний фрагмент Arg-Gl y-Asp (або RGD). Таким чином, Horton et al., Exp. Cell Res., 1991, 195, 368, відкрили, що пептид, який 4 містить RGD, та антитіло анти-вітронектинового рецептора (23С6), інгібують розсмоктування дентину і розходження клітин за допомогою остеокластів. Крім того, Sato et al., J. Cell Biol., 1990, 111, 1713 описали, що ехистатин, пептид зміїної отрути, що містить послідовність RGD, є сильним інгібітором розсмоктування кістки в тканинній культурі та інгібує приєднання остеокластів до кістки. В даний час встановлено, що певна сполука є сильним інгібітором a nb 3 та a nb 5 рецепторів. Зокрема, було встановлено, що така сполука є більш сильним інгібітором вітронектинового рецептора, ніж фібриногенового рецептора. Даний винахід включає сполуку формули (І), яка описана далі, що має фармакологічну активність для інгібування вітронектинового рецептора і може використовуватись при лікуванні запальних, ракових та серцевосудинних захворювань, таких як атеросклероз та рестеноз, а також захворювань, фактором яких є розсмоктування кісток, таких як остеопороз. Даний винахід також відноситься до фармацевтичної композиції, що включає сполуку формули (І) і фармацевтичний носій. Даний винахід також відноситься до способу лікування захворювань, що опосередковані вітронектиновим рецептором. У конкретному аспекті, сполука згідно з даним винаходом є корисною для лікування атеросклерозу, рестенозу, запалення, раку і захворювань, фактором яких є розсмоктування кістки, таких як остеопороз. Даний винахід включає нову сполуку, що є більш сильним інгібітором вітронектинового рецептора, ніж фібриногенового рецептора. Нова сполука включає дибензоциклогептенове ядро, в якому в одному з ароматичних шестичленних кілець дибензоциклогептена присутній азотовмісний замісник, а аліфатичний замісник, що містить кислотний фрагмент, присутній у семичленному кільці дибензоциклогептену. Передбачається, що система дибензоциклогептенових кілець орієнтує бічні ланцюги замісників у шести- і семичленних кільцях таким чином, що вони можуть сприятливим способом взаємодіяти з вітронектиновим рецептором. Бажано, щоб між кислотною групою аліфатичного замісника в семичленному кільці дибензоциклогептену та азотом у заміснику, що містить азот одного з ароматичних шестичленних кілець дибензоциклогептену було приблизно від дванадцятьох до чотирнадцятьох проміжних ковалентних зв'язків по найкоротшому вн утрішньомолекулярному шля ху. Даний винахід включає сполуки формули (І): або його фармацевтично прийнятну сіль. Сполука формули (І) інгібує зв'язування вітронектину та інших пептидів, що містять RGD, з вітронектиновим рецептором. Інгібування вітронектинового рецептора на остеокластах інгібує остеокластне розсмоктування кістки і є корисним при лікуванні захворювань, де розсмоктування 5 71586 6 кістки є патологією, а саме таких як остеопороз і танням сполуки згідно з даним винаходом може остеоартрит. зменшувати інтенсивність симптомів захворюванВ іншому аспекті даний винахід відноситься до ня і, у деяких випадках, може вилікувати захворюспособу стимулювання утворення кісткової тканивання. ни, що включає введення сполуки формули (І), яка Іншою терапевтичною метою сполуки згідно з викликає збільшення вивільнення остеокальцину. даним винаходом є захворювання ока, що харакЗбільшення продукування кісткової тканини є безтеризуються неоваскуляризацією. Такі захворюсумнівною перевагою при хворобливих станах, де вання ока включають неосудинні захворювання спостерігається нестача мінералізованої кісткової рогівки, такі як трансплантація рогівки, герпесний маси або потрібне повторне моделювання кістки, кератит, сифілітичний кератит, патологічна шкірна таких як загоєння перелому та профілактика перескладка і неосудинний паннус (поверхневий дифуломів кісток, захворювання та метаболічні порузний судинний кератит), порушення, зв'язані з зашення, що приводять до втрати структури кістки, стосуванням контактних лінз. Додатково захворютакож виграють від такого лікування. Наприклад, вання ока також включають вікову плямисту введення сполуки згідно з даним винаходом може дегенерацію, визначений очний гістоплазмоз, репринести користь при гіперпаратироїдизмі, хворобі тинопатію передчасної і неосудинної глаукоми. Пагета, гіперкальцемії злоякісної пухлини, остеоліДалі даний винахід забезпечує спосіб інгібутичних патологічних змінах, викликаних кістковими вання росту пухлини, що включає введення постаметастазами, втраті кісток внаслідок іммобілізації дійно або у фізичній комбінації сполуки формули або нестачі статевого гормону, хвороби Беккета, (І) і протипухлинного агента, такого як топотекан і остеомаляції (розм'якшенні кісток), гіперостозі та цисплатин. спадковому системному остеопетрозі. Нова сполука згідно з даним винаходом предКрім того, оскільки сполука згідно з даним виставляє собою (S)-10,11-дигідро-3-[2-(5,6,7,8находом інгібує вітронектинові рецептори на клітитетрагідро-1,8-нафтиридин-2-іл)-1-етокси]-5Ннах різних типів, зазначена сполука може бути дибензо[а,d]циклогептен-10-оцтову кислоту або її корисною при лікуванні запальних захворювань, фармацевтично прийнятну сіль. таких як ревматоїдний артрит та псоріаз, та серВідповідно до дійсного винаходу (S)цево-судинних захворювань, таких як атеросклеконфігурація сполуки формули (І) є найбільш бароз та рестеноз. Сполука формули (І) згідно з дажаною. ним винаходом може бути корисною для лікування Даний винахід також включає пролікарські заабо профілактики інших захворювань, включаючи, соби сполуки згідно з даним винаходом. Під проліале не обмежуючись ними, тромбоемболічне закарськими засобами маються на увазі будь-які хворювання, астму, алергії, респіраторний дисковалентно зв'язані носії, що вивільняють активтресс-синдром (дихальна недостатність) у доросний вихідний лікарський засіб відповідно до форлих, хворобливий стан трансплантат-протимули (І) in vivo. Таким чином, іншим аспектом дахазяїна, відторгнення органа-трансплантата, сепного винаходу є нові пролікарські засоби, що також тичний шок, екзему, контактний дерматит, запальпредставляють собою проміжні сполуки при одерне захворювання кишечнику та інші аутоімунні жанні сполуки формули (І), формули (II) захворювання. Сполука згідно з даним винаходом також може бути корисною для загоєння ран. Сполука згідно з даним винаходом також є корисною для лікування, включаючи профілактику, ангіогенних захворювань. Термін «ангіогенні захворювання», як такий, що використовується у або їх фармацевтично прийнятна сіль. даному описі, включає стани, що передбачають У даному описі для описування сполуки згідно анормальне неоновоутворення кровоносних судин з даним винаходом використані скорочення і сим(неоваскуляризацію). У тому випадку, якщо ріст воли, що звичайно використовуються в галузі пепнових кровоносних судин є причиною або вносить тидів та в галузі хімії. Звичайно, скорочення амінопевний внесок у патологію, зв'язану з захворюванкислот визначаються правилам Спільної Комісії ням, інгібування ангіогенезу (розвитку кровоносних ІЮПАК-ІЮБ (IUРАС-IUВ) по біохімічній номенкласудин) буде знижувати руйнівну дію захворювання. турі, що описані у Eur. J. Biochem., 158, 9 (1984). Прикладом такого цільового захворювання є діаС1-6алкіл, як використовується в даному описі, бетична ретинопатія. Там, де ріст нових кровоноспозначає необов'язково заміщену алальну групу з них судин потрібен для підтримки росту шкідливої 1-6 атомів вуглецю, і включає метил, етил, нтканини, інгібування ангіогенезу буде знижувати пропіл, ізопропіл, н-бутил, ізобутил, трет-бутил, підтримку постачання тканини кров'ю і, отже, внопентил, н-пентил, ізопентил, неопентил та гексил сити певний внесок у зниження маси тканини на та їх найпростіші аліфатичні ізомери. основі вимог підтримки постачання кров'ю. ПриБудь-який С1-6алкіл необов'язково може бути клади включають ріст пухлин, де неоваскуляризазаміщений групою RХ, що може знаходитись при ція є постійною вимогою для росту пухлини і відбудь-якому атомі вуглецю, що приводить до стабіновлення метастазів щільної пухлини. Таким льної структури, та доступна для звичайних синтечином, сполука згідно з даним винаходом інгібує тичних способів. Прийнятними групами RХ є С1ангіогенез пухлинної тканини, запобігаючи, таким OR", SR", С1-4алкілсульфоніл, С14алкіл, чином, метастазам пухлини та росту пухлини. 4алкілсульфоксил, -CN, N(R")2, СН 2N(R")2, -NO2, Таким чином, у відповідності зі способами даCF3, -CO2R", -CON(R")2, -COR", -NR"C(O)R", F, Cl, ного винаходу, інгібування ангіогенезу з викорисBr, І або CF3S(O)r-, де r дорівнює 0, 1 або 2, a R" 7 71586 8 представляє собою Н або С1-6алкіл. Деякі групи радикалів скорочені в даному описі. t-Bu відноситься до третинного бутильного радикалу, Вос відноситься до третбутилоксикарбонільного радикалу, Fmoc відноситься до флуоренілметоксикарбонільного радикалу, Ph відноситься до фенільного радикалу, Cbz відноситься до бензилоксикарбонільного радикалу, Вn відноситься до бензильного радикалу, Me відноситься до метилу, Et відноситься до етилу, Ас відноситься до ацетилу, Alk відноситься до С 14алкілу, Nph відноситься до 1- або 2-нафтилу та сНех відноситься до циклогексилу. Tet відноситься a) Li(TMS)2, е тилбромацетат; b) реагент Джондо 5-тетразолилу. са, OsO4; с) Н 2, 10% Pd/C, НОАс; У даному описі скорочено названі деякі реагеd) С2О2 СI2, ДМФ; e) АІСІ3, СН2Сl2, кімнатна нти. DCC відноситься до дициклогексилкарбодиітемпература; f) H2 , 10% Pd/C, НОАс. міду, DMAP відноситься до диметиламіпіридину, На схемі II також докладно подане одержання DIEA відноситься до диізопропілетиламіну, EDC проміжної сполуки, корисної для одержання сполувідноситься до гідрохлориду 1-(3ки формули (І) диметиламінопропіл)-3-етилкарбодиіміду, HOBt відноситься до 1-гідроксибензотриазолу, ТГФ відноситься до тетрагідрофурану, DIEA відноситься до диізопропілетиламіну, DEAD відноситься до диетилазодикарбоксилату, PPh3 відноситься до трифенілфосфіну, DIAD відноситься до диізопропілазодикарбоксилату, ДМЕ відноситься до диметоксиетану, ДМФ відноситься до диметилформаміду, NBS відноситься до N-бромсукциніміду, Pd/C відноситься до каталізатора - паладію-на-вугіллі, РРА відноситься до поліфосфорної кислоти, DPPA відноситься до дифенілфосфорилазиду, ВОР відноситься до гексафторфосфату бензотриазол-1ілокси-трис(диметиламіно)фосфонію, HF відноситься до фтористоводневої кислоти, TEA відноситься до триетиламіну, ТФОК відноситься до трифтороцтової кислоти, РСС відноситься до хлорхромату піридинію. Сполука формули (І) може бути одержана способами, описаними Bondinell at al., у публікації РСТ заявки №W097/01540 (Міжнародна заявка №PCT/US96/11108), опублікованої 16 січня 1997 року, повний опис якої включено в даний опис як посилання. Крім того, сполуку формули (І) одержують способами, аналогічними описаним на схемах, що докладно обговорені нижче. a) EtOAc/LiHMDS, ΤΓΦ; b) H2 , 10% Pd/C, конц. НСl, HOAc; (c) EtSH, AlCl3, СН2Сl2; (d) 2-(5,6,7,8тетрагідро-1,8 нафтиридин-2-іл)етанол, диізопропілазодикарбоксилат, (Ph)3; (e) 1,0н LiOH, EtOH; HCl. На схемі III докладно представлене одержання сполуки формули (І). Взаємодія III-1 (яка є сполуа) 10% Pd/C, HOAc; b) SOCl2, толуол; с) АlСl3, кою 3 схеми І) у реакції альдольного типу з еноляСН2Сl2. том етил-ацетату, що може бути генерований з На схемі І докладно представлене одержання етилацетату під дією прийнятної амідної основи, проміжної сполуки, корисної для одержання сполунаприклад, диізопропіламіду літію (LDA) або ки формули (І) біс(триметилсиліл)аміду літію (LiHMDS), дає ІЇЇ-2. Часто для альдольної реакції вибирають як розчинник ТГФ, хоча часто використовують ТГФ у присутності різних добавок, наприклад, НМРА або TMED A. Відновлення Іll-2 з одержанням ІІІ-3 (яка є сполукою 6 схеми II) може бути здійснено гідруванням над придатним каталізатором, наприклад, металевим палладієм на активованому вугіллі (Pd/C), у прийнятному розчиннику, такому як оцто 9 71586 10 ва кислота, у присутності мінеральної кислоти, перетворюється на IV-3 по класичній реакції такої як НСl. Альтернативно, дане відновлення Willgerodt-Kindler. Отриманий таким способом тіоможна здійснити обробкою Іll-2 триетилсиланом у амід гідролізують до відповідної карбонової кислоприсутності ефірату трьохфтористого бору з викоти IV-4 взаємодією з гідроксидом лужного металу, ристанням загального способу Orfanopoulos і придатним є КОН, у водяному спиртовому розчинSmonou (Synth. Commun., 1988, 833). Видалення нику, такому як водяний МеОН, ЕtOН або і-РrOН. простої ефірної метальної групи в ІІІ-3 з одержанКарбонову кислоту IV-4 перетворюють у відповідням Іll-4 можна здійснити за допомогою ВВr3 в інений хлорангідрид кислоти реакцією або з SOCI2, ртному розчиннику, наприклад, СН2Сl2 або взаєабо з оксалилхлоридом в умовах, добре відомих модією з етантіолом і АlСl3 в інертному фа хівцям у даній галузі. Обробка такого хлорангірозчиннику, переважно СН2Сl2. Інші корисні спосодриду кислоти прийнятним каталізатором Фріделяби видалення простої ефірної метальної групи Крафтса, таким як АIСI3 або SnCl4, в інертному описані в Greene «Protective Groups in Organic розчиннику, такому як СН2Сl2 або CS2, дає циклічSynthesis» (опублікованої John Wiley and Sons). ний кетон IV-5. Альтернативно, кислота IV-4 може Сполука 4 схеми 3(lll-4) взаємодіє з 2-(5,6,7,8бути безпосередньо перетворена в кетон IV-5 у тетрагідро-1,8-нафтиридин-2-іл)етанолом, даючи кислих умовах, наприклад, під дією поліфосфорної Іll-5. Реакція протікає під дією комплексу, утворекислоти. Взаємодія IV-5 у реакції альдольного типу ного диізопропілазодикарбоксилатом і трифенілз енолятом етилацетату, що може бути генеровафосфіном, і проходить в апротонному розчиннику, ний з етилацетату під дією прийнятної амідної оснаприклад, ТГФ, СН2Сl2 або ДМФ. Етиловий скланови, наприклад, диізопропіламіду літію (LDA) або дний ефір llІ-5 гідролізують з використанням водябіс(триметилсилі)амиду літію (LiHMDS), дає IV-6. ної основи, наприклад, LiOH у водяному ТГФ або Часто для альдольної реакції вибирають як розNaOH у водяному метанолі або етанолі, і проміжну чинник ТГФ, хоча часто використовують ТГФ у карбоксилатну сіль підкислюють прийнятною кисприсутності різних добавок, наприклад, НМРА або лотою, наприклад, ТФУК або НСl, для одержання TMED A. Відновлення ІV-6 з одержанням IV-7 може карбонової кислоти Іll-6. Альтернативно, при бабути здійснене при обробці IV-6 триетил-силаном жанні, проміжна карбоксилатная сіль може бути у присутності ефірату трьохфтористого бору з вивиділена, або карбоксилатная сіль вільної карбокористанням загального способу Orfanopoulos і нової кислоти може бути отримана способами, Smonou (Synth. Commun., 1988, 833). Будь-які добре відомими фахівцям у даній галузі. олефінові побічні продукти, що утворюються в результаті елімінування спирту, відновлюють гідруванням над прийнятним каталізатором, наприклад, металевим палладієм на активованому вугіллі (Pd/C), у прийнятному розчиннику, такому як МеОН або ЕtOН. Альтернативно, відновлення IV-6 з одержанням IV-7 можна проводити гідруванням у присутності мінеральної кислоти, такої як НСI. Звичайно, дана реакція каталізується Pd/C, і оптимальним є її проведення в оцтовій кислоті. Видалення простої ефірної метальної групи в IV-7 з одержанням IV-8 можна здійснити за допомогою ВВr3 в інертному розчиннику, наприклад, СН2Сl2 або взаємодією з етантіолом та АІСІ3 в інертному розчиннику, бажано СН 2Сl2. Інші корисні способи видалення простої ефірної метальної групи описані в Greene «Protective Groups in Organic Synthesis» (опублікованої John Wiley and Sons). IV8 згодом перетворюють у сполуку формули (І) у відповідності зі способом, що коротко описаний для схеми III. Кислотно-адитивні солі сполуки одержують стандартним способом у прийнятному розчиннику з вихідної сполуки і надлишку кислоти, такої як хлористоводнева, бромистоводнева, фтористово(a) PhOH, Cu, К2CО3; (b) сірка, морфолін; (с) днева, сірчана, фосфорна, оцтова, трифтороцтоКОН, Н2О, i-PrOH; (d) SOCІ2, бензол; (е) АІСІ3, ва, малеїнова, бурштинова або метансульфонова. СН2Сl2; (f) EtOAc, Li(TMS) 2, TMED A, ТГФ; (g) Деякі сполуки утворюють внутрішні солі або цвитEt3SiH·BF3 ·OEt 2, СН2Сl2; (h) H 2, Pd/C, EtOH; (i) BBr3, теріони, що також можуть бути прийнятними. КатіСН2Сl2. онні солі одержують обробкою вихідної сполуки Комерційно доступний 2-фтор-4надлишком лужного реагенту, такого як гідроксид, метоксиацетофенон (IV-1) взаємодіє зі спиртом, карбонат або алкоксид, що містить прийнятний наприклад, фенолом, у присутності металевої міді катіон, або прийнятним органічним аміном. Катіоі придатної основи, наприклад, К2СО3, даючи диани, такі як Li+, Na+, К+, Ca++, Mg++ та NH4+ є специриловий простий ефір IV-2. При обробці сіркою і фічними катіонами, що присутні у фармацевтично прийнятним первинним або вторинним аміном, прийнятних солях. переважно морфоліном, відповідно до загального Даний винахід також відноситься до фармацеспособу Harris (J. Med. Chem. , 1982, 25, 855), IV-2 11 71586 12 втичної композиції, що включає сполуку формули зу, гіперпаратироїдизму, хвороби Пагета, гіперка(І) та фармацевтично прийнятний носій. Відповідльцемії злоякісної пухлини, остеолітичних патолоно, сполука формули (І) може бути використана гічних змінах, викликаних кістковими метастазами, при одержанні лікарського засобу. Фармацевтичні при втраті кісток внаслідок іммобілізації або нестакомпозиції сполуки формули (І), отриманої як опичі статевого гормону. Також передбачається, що сано раніше, можуть бути одержані у вигляді розсполука даного винаходу корисна як протипухлинчинів або ліофілізованих порошків для парентераний, антиангіогенний, протизапальний і протимельного введення. Вміст вологи порошків може бути тастазний агент і може використовуватись при відновлений перед вживанням доданням прийнятлікуванні атеросклерозу і рестенозу. ного розріджувача або іншого фармацевтично Сполуку вводять пацієнту або перорально, прийнятного носія. Рідкі препаративні форми моабо парентерально, таким чином, щоб концентражуть бути забуферені ізотонічними водними розція лікарського засобу була достатньою для інгібучинами. Прикладами прийнятних розріджувачів є вання розсмоктування кісток або інших подібних ізотонічний фізіологічний розчин, стандартна 5% показань. Фармацевтичну композицію, що містить декстроза у воді або забуференний розчин ацетасполуку, вводять у пероральній дозі від приблизно ту натрію або амонію. Така препаративна форма є 0,1 до приблизно 50мг/кг способом, сумісним із особливо прийнятною для парентерального ввестаном пацієнта. Переважно пероральна доза будення, але також може використовува тись для де складати від приблизно 0,5 до приблизно перорального введення або інгалятора, що міс20мг/кг. При гострій терапії кращим є парентератить контрольовану дозу, або розпилювача для льне введення. Внутрішньовенне уливання пептиінсуффляції. Може бути бажаним додання ексцида в 5%-ній декстрозі у воді або в звичайному фіпієнтів, таких як полівінілпірролідон, желатин, гідзіологічному розчині або у вигляді подібної роксицелюлози, аравійської камеді, поліетиленглікомпозиції з прийнятними ексципієнтами є найколю, маніту, хлориду натрію або цитрату натрію. більш ефективним, хоча також можна використоАльтернативно, дані сполуки можуть бути інвувати внутрішньом'я зову болюсную ін'єкцію. Звикапсульовані, таблетовані або отримані у вигляді чайно парентеральна доза буде складати від емульсії або сиропу для перорального введення. приблизно 0,01 до приблизно 100мг/кг; переважно Фармацевтично прийнятні тверді або рідкі носії між 0,1 і 20мг/кг. Сполуку вводять від одного до можуть бути додані для посилення або стабілізації чотирьох разів на день на рівні, необхідному для композиції або для полегшення одержання комподосягнення загальної денної дози від приблизно зиції. Тверді носії включають крохмаль, лактозу, 0,4 до приблизно 400мг/кг/день. Точний рівень і дигідрат сульфату кальцію, білу глину, стеарат спосіб, яким вводять сполуку, легко можуть бути магнію або стеаринової кислоти, тальк, пектин, визначені звичайним фахівцем у даній галузі шляаравійську камедь, агар або желатину. Рідкі носії хом порівняння рівня концентрації агента в крові з включають сироп, арахісову олію, маслинову олію, концентрацією, необхідною для досягнення терафізіологічний розчин і воду. Носій також може певтичного ефекту. включати матеріал уповільненого вивільнення, У даному винаході також розроблений спосіб такий як гліцерилмоностеарат або гліцерилдистелікування остеопорозу або інгібування втрати кісарат, сам по собі або у поєднанні з воском. Кільток, що включає введення послідовно або у фізичкість твердого носія з змінною величиною, але ній комбінації сполуки формули (І) та інших інгібіпереважно вона складає від приблизно 20мг до торів розсмоктування кісток, таких як приблизно 1г на одиничну препаративну лікарську бісфосфонати (тобто аллендронат), гормонозаміформу. Фармацевтичні препаративні форми одерсна терапія, антиестрогени або кальцитонін. Крім жують відповідно до звичайних способів фармацетого, даний винахід забезпечує спосіб лікування з втики, включаючи роздрібнення, змішування, гравикористанням сполуки даного винаходу та ананулювання та пресування, при необхідності, для болічного агента, такого як кістковоморфогений таблетованих форм; або роздрібнення, змішуванбілок, іпрофлавон, що використовується для проня і наповнення для твердих желатинових капсуфілактики втрати кісток та/або для збільшення льованих форм. При використанні рідкого носія, кісткової маси. препаративна форма буде у формі сиропу, еліксиДодатково, даний винахід забезпечує спосіб ру, емульсії, водяної або неводяної суспензії. Таку інгібування росту пухлини, що включає введення рідку препаративну форму можна безпосередньо послідовно або у фізичній комбінації сполуки форвводити перорально або нею можна заповнювати мули (І) та протипухлинного агента. Сполука класу м'яку желатинову капсулу. аналогів камптотецину, така як топотекан, іринотеДля ректального введення сполуку даного викан і 9-амінокамптотецин, і координаційні комплекнаходу можна поєднувати з ексципієнтами, такими си платини, такі як цисплатин, ормаплатин і тетраяк олія какао, гліцерин, желатин або поліетиленгплатин, представляють собою добре відомі групи ліколі, та формува ти у вигляді суппозиторія. протипухлинних агентів. Сполуки класу аналогів Описана тут сполука є антагоністом вітронеккамптотецину описані в патентах США №№ тинового рецептора і може використовуватися при 5004758, 4604463, 4473692, 4545880, 4342776, лікуванні захворювань, де базова патологія влас4513138, 4399276, публікаціях заявок на європейтива ліганду або клітині, що взаємодіє з вітронекський патент №№ 0418099 і 0088642, Wani et al., J. тиновим рецептором. Наприклад, дана сполука Med. Chem., 1986, 29, 2358, Wani et al., J. Med. корисна при лікуванні захворювань, де патологію Chem., 1980, 23, 554, Wan et al., J. Med. Chem., створює втрата кісткової матриці. Таким чином, 1987. 30, 1774 та Nitta et al., Proc. 14th International вказана сполука корисна для лікування остеопороCongr. Chemotherapy., 1985, Anticancer Section 1, 13 71586 14 28, повний опис кожної з даних публікацій включездвоєній упаковці. Наприклад, сполука формули (І) но в даний опис як посилання. Координаційний може бути у ви гляді ін'єкційної форми для внутрікомплекс платини, цисплатин, доступний під нашньовенного введення (i.v.) або ємність для введення може бути зв'язана в серію через трубки з звою PlatinolÒ від Bristol Myers-Squibb Corporation. протипухлинним агентом, що міститься в другій Корисні композиції для цисплатину описані в патеємності для введення. З використанням такої сиснтах США №№ 5562925 і 4310515, повний опис теми пацієнт може одержувати спочатку ін'єкцію яких включено в даний опис як посилання. У способі інгібування росту п ухлини, що вклюболюсного типу сполуки формули (І) з наступним введенням протипухлинного агента. чає введення, послідовно або у фізичній комбінаСполука може бути випробувана в одному або ції, сполуки формули (І) та протипухлинного агендекількох біологічних аналізах для визначення та, координаційну сполуку платини, наприклад, концентрації сполуки, що необхідна для досягненцисплатин, можна вводити шляхом повільної внутрішньовенної ін'єкції. Кращим носієм є суміш декня даної фармакологічної дії. Інгібування зв'язування вітронектину строза/фізіологічний розчин, що містить манніт. Твердофазне [3Н]-SK&F-107260 зв'язування з Схема дозування координаційної сполуки платини може складати від приблизно 1 до приблизно a nb 3: a nb 3 плаценти людини або тромбоцита лю500мг на квадратний метр (мг/м 2) площі поверхні дини (0,1-0,3мг/мл) у буфері Τ (що містить 2мМ тіла на курс лікування. Введення координаційної СаСІ2 та 1% октилглюкозид) розводили буфером сполуки платини можна проводити від одного до Т, що містить 1мМ СаСІ2, 1мМ МnСl2 (буфер А) та двох разів на тиждень і тижневі лікування можуть 0,05% NaN3, а потім відразу ж додавали у 96повторюватись декілька разів. При використанні коміркові планшети ELISA (твердофазний іммуносполуки класу аналогів камптотецину в парентеферментний аналіз) Corning, New York, NY)) із ральному введенні, у курсі терапії звичайно викорозрахунку 0,1мл на комірку. Додавали 0,1-0,2мкг ристовують від приблизно 0,1 до приблизно a nb 3 на комірку. Планшети інкубували протягом 300мг/м 2 площі поверхні тіла на день протягом ночі при 4°С. Під час експерименту промивали приблизно п'ятьох послідовних днів. Найбільш один раз буфером А та інкубували з 0,1мл 3,5% бажаним є курс терапії, що використовується для бичачого сироваткового альбуміну (БСА) у тому ж топотекану, і складає від приблизно 1,0 до прибуфері протягом 1 години при кімнатній темпераблизно 2,0мг/м 2 площі поверхні тіла на день протятурі. Після інкубування комірки цілком відсмоктугом п'ятьох послідовних днів. Переважно, курс вали і промивали двічі 0,2мл буфера А. терапії повторюють принаймні один раз з інтерваСполуку розчиняли в 100% ДМСО, одержуючи лом від приблизно 7 днів до приблизно 28 днів. 2мМ вихідного розчину, що розводили буфером Фармацевтичні композиції можуть бути склазв'язування (15мМ Tris-HCl (p 7,4), 100мМ NaCl, дені таким чином, щоб містити сполуку формули (І) 1мМ СаСl2, 1мМ МnСl2, 1мМ MgCl2) до кінцевої і протипухлинний агент у тому самому контейнері, концентрації 100мкМ. Вказаний розчин потім розале кращою є рецептура з різними контейнерами. водили до необхідної кінцевої концентрації сполуКоли обидва агенти представлені у вигляді розчики. Різні концентрації антагоністів, що піддають ну, вони можуть міститися в системі для введентестуванню (0,001-100мкМ), додавали в комірки у ня/ін'єкції для одночасного введення або у здвоєтриразовій послідовності з наступним доданням ній упаковці. 5,0нМ [3H]-SK&F-107260 (65-86Кюрі/ммоль). Для зручного введення сполуки формули (І) та Планшети інкубували протягом 1 години при протипухлинного агента в той самий або в різний кімнатній температурі, після інкубування комірки час готують набір, що включає один контейнер, цілком відсмоктували та промивали один раз такий як коробка, картонна коробка або інший кон0,2мл охолодженого на льоду буфера А способом тейнер, індивідуальні пляшки, пакети, ампули або від комірки-до-комірки. Рецептори піддавали соінші контейнери, кожний з яких містить ефективну любілізації 0,1мл 1% SDS і зв'язаний [3H]-SK&Fкількість сполуки формули (І) для парентерального 107260 визначали за допомогою рідинного сцинвведення, як описано вище, і ефективну кількість тиляційного зчитування з доданням 3мл Ready протипухлинного агента для парентерального Safe у рідинному сцинтиляційному лічильнику введення, як описано вище. Такий набір може Beckman LS з 40%-ною ефективністю. Неспецифівключати, наприклад, обидва фармацевтичні агечне зв'язування [3H]-SK&F-107260 визначали в нти в окремих контейнерах або в тому самому конприсутності 2мМ SK&F-107260, і воно логічно тейнері, необов'язково у вигляді ліофілізованих складало менше 1% від загального введення равкладишів, та контейнерів з розчинами для віднодіоактивного ліганда. ІС50 (концентрацію антагонісвлення вмісту вологи. Варіація даного набору та, що інгібує 50% [3H]-SK&F-107260) визначали за включає розчин для відновлення вмісту вологи та допомогою загальноприйнятого способу апроксиліофілізований вкладиш у дво х відсіках одного мації нелінійної кривої по методу найменших кваконтейнера, що вимагає змішування перед викодратів, що модифікували по програмі LUNDON-2. ристанням. При такому компонуванні протипухК1 (константи дисоціації антагоніста) розраховувалинний агент та сполука згідно з даним винаходом ли по рівнянню: К1=ІС50/(1+L/Kd), де L і Kd предстаможуть бути спаковані окремо, як, наприклад, у вляли собою концентрацію та константу дисоціації двох контейнерах, або ліофілізовані спільно у ви[3H]-SK&F-107260, відповідно. гляді порошку та забезпечені в одному контейнері. Сполука даного винаходу інгібує зв'язування Коли обидва агенти забезпечуються у вигляді вітронетину з SK&F-107260 при К1 приблизно 1,7 розчину, вони можуть міститися в системі для ввенаномолей. дення/ін'єкції для одночасного введення або у Сполуку даного винаходу також тестували на 15 71586 16 in vitro та in vivo розсмоктування кістки в аналізах, людини. прийнятих у даній галузі для оцінки інгібування Аналізи поглиблень розсмоктування та адгезії утворення кістки, таких як аналіз утворення заглибули виконані та стандартизовані з використанням блень, описаний в ЕР 528587, що також може бути нормальних остеокластів людини, отриманих з виконаний з використанням остеокластів людини тканини остеокластоми. Аналіз 1 розробляли для замість остеокластів щурів, та аналіз на основі вимірювання об'ємів остеокластних поглиблень за оваріетомованої моделі щурів, описаної Wronski et допомогою лазерної конфокальної мікроскопії. al., Cell and Materials, 1991, Sup. 1, 69-74. Аналіз 2, в якому колагенові фрагменти (що вивіАналіз міграції судинної клітини гладкого м'яза льняються у процесі розсмоктування) вимірюють Використовували клітини гладкого м'яза аорти конкурентним ELISA (твердофазный імунофермещура або людини. Клітинну міграцію контролювантний аналіз), розробляли як більш високий проли в Transwell камері клітинних культур з викориспускний фільтр. танням полікарбонатної мембрани з порами 8мкм Аналіз 1 (з використанням лазерної конфока(Costar). Нижній рівень поверхні фільтра був вкрильної мікроскопії) тий вітронектином. Клітини суспендували в сереАліквоти суспензій клітин, отриманих з остеодовищі DMEM (модифіковане по способу Дюльбекластоми людини, видаляють з місця збереження кко середовище Ігла), доповненому 0,2% бичачим в рідкому азоті, швидко нагрівають при 37°С і просироватковим альбуміном, у концентрації 2,5мивають у середовищі RPMI-1640 за допомогою 5,0x106клітин/мл і попередньо обробляли сполуцентрифугування (1000об/хв, 5 хвилин при 4°С). ками, що піддають тестуванню, у різних концентСередовище відсмоктують та замінюють на раціях протягом 20 хвилин при 20°С. Розчинник Анти-HLA-DR антитіло миші, потім розводять 1:3 у сам по собі використовували як контроль. У верхRPMI-1640 середовищі. Суспензію інкубують проній відсік камери поміщали 0,2мл суспензії клітин. тягом 30 хвилин на льоду при частому перемішуНижній відсік містив 0,6мл DMEM, доповненої ванні. 0,2% бичачим сироватковим альбуміном. ІнкубуКлітини промивають x 2 холодним RPMI-1640 вання проводили при 37°С в атмосфері 95% повітз наступним центрифугуванням (1000об/хв., 5 хвиря/5% СO2 протягом 24 годин. Після інкубування лин при 4°С), а потім клітини переносять у стериклітини, що не мігрували, на верхній поверхні фільну 15мл центрифужную пробірку. Підраховують льтра видаляли обережним зішкрібанням. Потім число моноядерних клітин в удосконаленій камері фільтр фіксували в метанолі та фарбували 10% Neubauer. Достатню кількість магнітних кульок барвником Гімза. Міграцію вимірювали або а) під(5/моноядерную клітину), вкритих козячим антирахунком числа клітин, що мігрували до нижньої мишиним Ig (Dynal, Great Neck, NY), видаляють з поверхні фільтра, або b) екстракцією пофарбоваємності зберігання та поміщають у 5мл свіжого них клітин 10%-ною оцтовою кислотою з наступсередовища (це вимиває токсичний азидний конним визначенням поглинання при 600нм. сервант). Середовище видаляють за допомогою Тиропаратироїдектомована модель щурів іммобілізації кульок на магніті та заміни на свіже Кожна експериментальна група складалась з середовище. 5-6 дорослих самців щурів Spargue-Dawley (маса Кульки змішують з клітинами і суспензію інкутіла 250-400г). Щурів піддавали тиропаратироїдекбують протягом 30 хвилин на льоду. Суспензію томії (за допомогою приватного лікаря, Taconic часто перемішують. Farms) за 7 днів перед використанням. Усі щури Покриті кульками клітини імобілізують на магодержували замісну дозу тироксину кожні 3 дні. ніті та клітини, що залишилися (остеокластПри одержанні щурів вимірювали циркуляційні збагачена фракція), декантують у стерильну 50мл рівні іонізованого кальцію в суцільній крові безпоцентрифужную пробірку. середньо після її відбору пункцією хвостової вени До покритих кульками клітинам додають свіже в гепаринизовані пробірки. Щурів включали в екссередовище для одержання будь-яких захоплених перимент, якщо рівень іонізованого Са (який виміостеокластів. Цей процес промивання повторюють рювали кальцієвим рН аналізатором моделі Cibax 10. Покриті кульками клітини відкидають. Corning 634) складав 95%, що було продемонстровано за дозування (4,5нМ), a Кd представляє собою констанпомогою SDS-поліакриламідного гелевого електрофореза. ту дисоціації [3H]-SK&F-107260, що складає 4,5нМ при визначенні за допомогою аналізу Scatchard. Вбудовування GPIIb-IIIa у ліпосоми Ефективність сполуки формули (І) самої по Суміш фосфа тидилсерину (70%) та фосфатисобі або у сполученні з протипухлинним агентом дилхоліну (30%) (Avanti Polar Lipids) висушували може бути визначена з використанням декількох на стінках скляної пробірки в струмі азоту. Очи щений GPIIb-IIIa розводили до кінцевої концентрації моделей мишиних пухлин, що трансплантуються. Докладний опис даних моделей дивись в патентах 0,5мг/мл та змішували з фосфоліпідами у співвідСША №№ 5004788 та 5633016. ношенні білок:фосфоліпід, що складає 1:3 Наведені далі приклади не призначені для об(мас:мас). Суміш повторно суспендували та обромеження будь-яким способом згідно з об'ємом блювали ультразвуком в ультразвуковій бані протягом 5 хвилин. Потім суміш піддавали діалізу даного винаходу, а наведені лише для ілюстрації того, яким способом одержують і використовують протягом ночі з використанням діалізної колонки з сполуку даного винаходу. Багато інши х варіантів відсіканням молекулярної ваги 12000-14000 проти здійснення винаходу легко доступні фахівцям у 1000-кратного надлишку 20мМ Tris-HCl, pH 7,4, 23 71586 24 даній галузі. ратури і залишок піддавали флеш-хроматографії Приклади на силікагелі (40% EtOAc/гексани). Вказану в загоЗагальна частина ловку сполуку (4,90г, 55%) одержували у вигляді Спектри протонного ядерного магнітного резосвітло-жовтої твердої речовини: 1 нансу (1Н ЯМР) реєстрували при 300МГЦ, хімічні Н ЯМР (300МГц, CDCI3) d 7,27 (д, J=7,6Гц, 1Н) зміни представлені в мільйонних частках (6) у сла6,81 (д, J=7,6Гц, 1Н), 3,69-3,79 (м, 2Н), 2,65-2,75 бкому полі щодо тетраметилсилану (ТМС), що (м, 2Η), 2,48 (с, 3Н), 1,83-1,98 (м, 2Н), 1,52 (с, 9Н); використовувася як внутрішній стандарт. СкороМас-спектр (ES) m/e 249 (М+Н)+. чення для даних ЯМР наступні: с инглет , с = b) Етил [8-(трет-бутоксикарбоніл)-5,6,7,8д=дублет , т=триплет , кв=квартет , м=мультиплет , тетрагідро-1,8-нафтиридин-2-іл]ацетат дд дублет = дублетів , дт д ублет = триплетів , До розчину диізопропіламіну (7,24мл, вид=видимий , ушир=уширений . J показує ЯМР 55,3ммоль) у сухому ТГФ (50мл) додавали по краконстанти спін-спінової взаємодії, виміряні в Герплях при 0°С n-BuLi (2,5М у гексанах, 22мл, цах. CDCI3 представляє собою дейтерохлоро55,3ммоль). Через 15 хвилин даний розчин додаформ, DMCO-d 6 представляє собою гексадейтевали по краплях до розчину 2-метил-8-(третродиметилсульфоксид, CD3OD представляє бутоксикарбоніл)-5,6,7,8-тетрагідро-1,8собою тетрадейтерометанол. Мас-спектри були нафтиридину (4,9г, 19,7ммоль) і діетилкарбонату отримані з використанням іонізаційних способів (8,86мл, 73,0ммоль) у сухому ТГФ (50мл) при електророзпилення (ES). Елементні аналізи про78°С. Через 30 хвилин суміш гасили насиченим водили Quantitative technologies Inc., White-house, розчином NH4Cl (100мл), нагрівали до кімнатної NJ. Температури плавлення одержували на притемператури та екстрагували EtOAc (3 x200мл). строї для визначення температур плавлення Об'єднані органічні екстракти висушували над Thomas-Hoover і не корегували. Всі температури MgSО4 , фільтрували та концентрували при знижепредставлені в градусах Цельсія. Для тонкошароному тиску. Залишок піддавали хроматографії на вої хроматографії використовували тонкошарові силікагелі (40% EtOAc/гексани), одержуючи зазнапластини Analtech Silica gel GF і Ε. Merck Silica gel чену в заголовку сполуку у вигляді світло-жовтої 60 F-254. Флеш-хроматографію проводили на сиолії: мас-спектр (ES) m/e 321 (М+Н)+. лікагелі E.merck Kieselgel 60 (230-400меш). Аналіс) 2-(5,6,7,8-Тетрагідро-1,8-нафтиридин-2-іл)тичну і препаративну високоефективну рідинну 1-етанол хроматографію проводили на хроматографах До розчину етил [8-(трет-бутоксикарбоніл)Beckman. ODS відноситься до октадецилсилільної 5,6,7,8-тетрагідро-1,8-нафтиридин-2-іл]ацетату похідної силікагелевого хроматографічного носія. (5,72г, 17,85ммоль) у сухому ТГФ (80мл) при кімнатній температурі додавали LiBH4 (2,0Μ в ТГФ, YMC ODS-AQÒ представляє собою ODS хроматографічний носій, та є зареєстрованою торговою 10,7мл, 21,42ммоль) та отриману суміш нагрівали при кипінні зі зворотним холодильником. Через 18 маркою YMC Co. Ltd., Kyoto, Японія. PRP-1Ò предгодин суміш охолоджували до 0°С та обережно ставляє собою полімерний (стиролгасили Н2О (100мл). Через 10 хвилин суміш екстдивінілбензольний) хроматографічний носій та є рагували EtOAc (3 x100мл). Поєднані органічні ексзареєстрованою торговою маркою Hamilton Co., тракти висушували над MgSO4, фільтрували та Reno, nevada. CeliteÒ представляє собою фільтконцентрували при зниженому тиску. руючу допоміжну добавку на основі промитого Вищевказаний залишок (4,9г) розчиняли в кислотою діатомового діоксиду кремнію, та є зареСН2Сl2 (10мл). До розчину при кімнатній темпераєстрованою торговою маркою Manville Corp., турі за один прийом додавали 4н НСІ у діоксані Denver, Colorado. (20мл). Через 4 хвилини суміш концентрували при Одержання 1 зниженому тиску. Залишок поміщали в суміш 1:1 Одержання 2-(5,6,7,8-тетрагідро-1,8NaOH і насиченого NaCl (100мл) та екстрагували нафтиридин-2-іл)-1-етанолу СН2Сl2 (3x100мл). Поєднані органічні екстракти a) 2-Метил-8-(трет-бутоксикарбоніл)-5,6,7,8висушували над MgSO 4, фільтр ували та конценттетрагідро-1,8-нафтиридин рували при зниженому тиску, залишок піддавали Суміш 2-метил-1,8-нафтиридину (J. Chem. хроматографії на силікагелі (10% МеОН у 1:1 Soc. (С) 1966, 315; 5,13г, 35,58ммоль), 10% Pd/C EtOAc/СНСІ3), одержуючи зазначену в заголовку (1,14г, 1,07ммоль) та абсолютний EtOH (70мл) сполуку (2,09г, 66%) у вигляді жовтої твердої репіддавали дезоксигенізації з використанням трьох човини : мас-спектр (ES) m/e 179 (М+Н)+. циклів вакуумування/заповнення Н 2, потім інтенсиОдержання 2 вно перемішували при під'єднаному балоні з Н 2. Одержання етил (±)-10,11-дигідро-3-гідроксиЧерез 18,5 години суміш фільтрували через це5Н Дибенко[а,d]циклогептен-10-ацетату) літÒ і шар на фільтрі послідовно промивали абсоА) 6-Метокси-1-фенілінден лютними EtOH та EtOAc. Фільтрат концентрували 3,0Μ розчин фенілмагнійброміду в Et2 O досуха, залишок повторно концентрували з EtOAc, (680мл, 2,04моля) в атмосфері аргону при темпеодержуючи не зовсім білу тверду речовину (5,25г). ратурі навколишнього середовища розводили при Розчин вищевказаної речовини (5,25г), диперемішуванні Et2O (700мл) та додавали по краптрет-бутилдикарбонату (15,53г, 71,16ммоль) та лях протягом 1 години розчин 6-метокси-1СН2Сl2 (10мл) концентрували на роторному випарінданону (277г, 1,71моля). Реакційну суміш перенику для видалення розчинника, а маслянистий мішували протягом 2 годин при температурі назалишок нагрівали в атмосфері N2 на масляній вколишнього середовища і потім виливали при бані, установленій на 55-60°С. Через 45 годин реперемішуванні в насичений NH4Cl (2,8л). Додаваакційну суміш охолоджували до кімнатної темпе 25 71586 26 ли Н2О (1,4л) і відокремлювали органічну фазу. ЯМР (300МГц, CDCI3) d 5 7,05-7,35 (м, 6Н) , 6,77 Водяну фазу екстрагували Et 2O (2 x1л) та поєднані (дд, J=8,3, 2,7Гц, 1H), 6,71 (д, J=2,7Гц, 1H), 4,00 (с, органічні екстракти концентрували, одержуючи 2Н), 3,76 (с, 3Н), 3,54 (с, 2Н). сирий (неочищений) 6-метокси-1-феніл-1-інданон d) 10,11-Дигідро-3-метокси-5Н(445г) у вигляді коричневої олії. Одержану олію дибензо[а,d]циклогептен-10-он розчиняли в толуолі (2,5л) та додавали моногідрат Розчин 2-бензил-4-метоксифенілоцтової кисп-толуолсуль фонової кислоти (12,3г, 0,065моля). лоти (215г сирої речовини, що містила 204,6г Розчин перемішували та нагрівали при кипінні зі (0,80моля чистої речовини)) у СН 2Сl2 (1л) перемізворотним холодильником протягом 16 годин і при шували в атмосфері аргону при температурі навикористанні пастки Діна-Старка з холодильником. вколишнього середовища та додавали ДМФ (1мл), Уловлювання Н2O було мінімальним через 2 годипотім оксалилхлорид (400мл, 4,59моля). Оксалилни, та усього було зібрано 28мл. Розчин охолохлорид додавали протягом 1 години, спочатку доджували та екстрагували послідовно 5% водним даючи по краплях для контролю інтенсивного виNa2CO3 (1л) та Н2O (2 х1л). Органічний шар концеділення газу. Розчин перемішували протягом 16 нтрували, одержуючи темно-коричневу олію годин при температурі навколишнього середови(400г). Дану олію піддавали перегонці у вакуумі, ща і потім концентрували, одержуючи сирий хлоодержуючи зазначену в заголовку сполуку (298,2г, рангідрид кислоти (207,7г, 0,756моля, 95%) у ви79%) у вигляді жовтої олії: температура кипіння гляді жовтої рідини. Дану рідину розчиняли в 152-190°С/2 торр; ТСХ (10% EtOAc/гексани) Rf0,75. СН2Сl2 при загальному об'ємі 500мл та розчин b) 2-Бензоїл-4-метоксифенілоцтова кислота АlСl3 (100,8г, 0,756моля) додавали паралельно Ацетон (4,2л) охолоджували до 10°С та додапротягом 1 години до СН 2Сl2 при перемішуванні в вали протягом 1,5 години розчин 6-метокси-1атмосфері аргону при температурі навколишнього фенілідену (271г, 1,22моля) в ацетоні (1,8л) парасередовища. Після завершенні додавання темпелельно з реактивом Джонса (Jones) (1,8л, отримаратура складала 28°С. Реакційну суміш перемішуний з СrО3 (470г, 4,70моля), Н2O (1л) та концентвали протягом 16 годин при температурі навколированою H2SO4 (405мл). До отриманої суміші шнього середовища, за цей час відбувалося додавали 4%-ний водний OsO4 (153 мл) двома осадження твердої речовини. Додавали Н2O, спопорціями, одну на початку додавання, а другу - у чатку по краплях, протягом 30 хвилин. Потім суміш середині процесу додавання, підтримуючи темперозділяли і органічну фазу промивали послідовно ратур у реакційної суміші нижче 15°С. Після доданН2O (1л) та 5%-ним водяним розчином NaHCO3 ня реакційну суміш нагрівали до 22°С і перемішу(1л). Потім розчин СН 2Сl2 концентрували, одержували протягом 1,5 години, протягом даного часу ючи жовту тверду речовину (175,3г). Перекристаспостерігалося слабке екзотермічне підвищення лізація з EtOAc/гексаном давала зазначену у заготемператури до 28°С. Потім реакційну суміш о холовку сполуку (128г, 71%): температура плавлення лоджували до температури нижче 20°С і додавали 107-109°С. ізопропанол (1л), спочатку по краплях і швидко є) Етил (±)-10,11-Дигідро-10-гідрокси-3після зменшення початкового екзотермічного підметокси-5Н-дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетат йому температури. Під час даної фази перемішу1,0Μ розчин біс (триметилсиліл) аміду літію в вання ставало утрудненим. Під час додання ізогексанах (1282мл, 1,282моля) додавали до ТГФ пропанолу температура досягала 32°С. Додавали (4,0л) при температурі -70°С в атмосфері аргону, Н2O (2л) і суміш переносили в ділильну лійку. Допотім додавали по краплях протягом 20 хвилин датково додавали Н20 для розчинення хромової EtOAc (146мл, 1,49моля). Реакційну суміш заликислоти, що випала в осад, і суміш екстрагували шали перемішува тися протягом 15 хвилин, потім СН2Сl2 (2л). Органічний (верхній) шар відокремлюпротягом 20 хвилин додавали Ν,Ν,Ν',N'вали та водяну фазу екстрагували СН 2Сl2 (2x1л). тетраметилетилендіамін (378мл, 2,5моля). РеакПоєднані СН2Сl2 екстракти промивали послідовно ційну суміш перемішували протягом 10 хвилин, Н2O (2л) і насиченим розчином солі (2л), а потім потім додавали по краплям протягом 40 хвилин концентрували, одержуючи вологу сіру тверду розчин 10,11-дигідро-3-метокси-5Нречовину (416г). Дану речовину розтирали з сумідибензо[а,d]циклогептен-10-ону (119,2г, 0,50моля) шшю ацетону та EtOAc і фільтрували, одержуючи у безводному ТГФ (1,26л). У процесі проведення зазначену в заголовку сполуку (225,4г, 71%) у вивсіх операцій температуру підтримували нижче гляді не зовсім білої твердої речовини: температу65°С. Реакційну суміш перемішували протягом 20 ра плавлення 158-159°С. хвилин при -65-70°С, а потім виливали в насичеc) 2-Бензил-4-метоксифенілоцтова кислота ний водяний розчин ΝΗ4СІ (6,2л) при інтенсивному 2-Бензоїл-4-метоксифенілоцтову кислоту перемішуванні. Органічний шар відокремлювали і (215,5г, 0,8моля) розділяли на дві рівні порції і ководяну фазу екстрагували EtOAc (2x1л). Поєднані жну з них розчиняли в крижаній АсОН (1,5л) у товорганічні екстракти промивали Н 2O (2x1л), а потім стостінній колбі на 2,5л. У кожну додавали 5% концентрували, одержуючи світло-коричневу олію Pd/C (10г, 0,0048моля) та кожну суміш струшували (175г). При тонкошаровій хроматографії (20% при температурі навколишнього середовища в EtOAc/гексани) спостерігали основний Rf 0,5 (баатмосфері водню в апараті Парра. Через 2,5 годижаний продукт) та мінорний Rf 0,7 (виділений кени суміші фільтрували для видалення каталізатотон). Сирий продукт піддавали хроматографії на ра і шар на фільтрі промивали EtOAc. Поєднані силікагелі (2кг, 10% EtOАс/гексани), одержуючи фільтрати концентрували, одержуючи зазначену в зазначену в заголовку сполуку (101г, 61%) у визаголовку сполуку (215г, кількісно) у вигляді важкої гляді жовтої олії. 1Н ЯМР (300МГц, CDCI3) d 7,63 жовтої олії, що кристалізується при зберіганні: 1Н (д, J=7,7Гц, 7,00-7,30 (м, 4Н) , 6,80 (д, J=2,6Гц, 1Н), 27 71586 28 6,69 (дд, J=8,2, 2,6Гц, 1Н), 3,95-4,35 (м, 2Н), 4,07 колонка Daicel Chiracel OJo (21,2x250мм), рухлива (с, 2Н), 3,76 (с, 3Н), 3,68 (с, 1Н), 3,64 (д, J=14,2Гц, фаза 20%-ний етанол у гексані, швидкість потоку 1Н), 3,35 (д, J=14,2Гц, 1Н), 2,79 (д, J=16,0Гц, 1Н), 15мл/хв, УΦ виявлення при 254нм, введення 2,66 (д, J=16,0Гц, 1Н), 1,22 (т, J=7,2Гц, 3Н). 140мг; t (час утримування) для етил (R)-(+)-10,11f) Етил (±)-10,11-дигідро-3-метокси-5Ндигідро-3-гідрокси-5Н-дибензо[а,d]циклогептен-10дибензо[a,d]циклогептен-10-ацетат ацетату=13,1 хвилини. Етил(±)-10,11-дигідро-10-гідрокси-3-метоксиОдержання 4 5Н-дибензо[a,d]циклогептен-10-ацетат (101г, Одержання 10,11-дигідро-3-метокси-5Н0,31моля) розчиняли у крижаній оцтовій кислоті дибензо[а,d]циклогептен-10-она (1/8л) та додавали 12н НСI (28,5мл, 0,34моля). а) 2-Бензил-4-метоксифенілоцтова кислота Суміш поміщали у товстостінну колбу на 2,5л, що Розчин 2-бензоїл-4-метоксифенілоцтової кисмістить 5% Pd/C (20г, 0,0094моля), та отриману лоти (13,0г, 0,048моля), отриманої способом, описуміш стр ушували при 35°С в атмосфері водню на саним у J. Med. Chem., 1981, 24, 998, у крижаній апараті Парра для гідрування, обладнаному нагріоцтовій кислоті (600мл) обробляли в атмосфері вачем. Через 18 годин реакційну суміш о холоджуаргону 4,3г 10% Pd/C та піддавали гідруванню при вали до температури навколишнього середовища 50фунта х/дюйм (344,74КПа) протягом 17 годин. та каталізатор видаляли фільтруванням. Фільтрат Суміш фільтрували з використанням celiteÒ і фіконцентрували, одержуючи світло-жовту олію. Її льтрат концентрували, після чого повторно піддавали хроматографії на силікагелі (2кг, постаконцентрували з толуолом та хлористим дійно-градієнтне елюювання сумішшю від 5% до метиленом, одержуючи 14,2г зазначеної у 10% EtOAc/гексани), одержуючи зазначену в загозаголовку сполуки: 1Н ЯМР (400МГц, CDCI3) d 3,52 1 ловку сполуку (69,1г, 72%) у вигляді олії: Н ЯМР (с, 2Н), 3,75 (с, 3Н), 4,0 (с, 3Н), 6,7 (м, 2Н), 7, 15 (м, (250МГц, CDCI3) d 7,05-7, 22 (м, 4Н), 7,01 (д, 6Н).b) 10,11-Дигідро-3-метокси-5НJ=8,2Гц, 1Н), 6,76 (д, J=2,7Гц, 1Н), 6,67 (дд, J=8,2, дибензо[а,d]циклогептен-10-он 2,7Гц, 1Н), 4,30 (д, J=15,0Гц, 1 Η), 4,11-4,25 (м, Розчин 2-бензил-4-метоксифенілоцтової кис2Н), 3,85 (д, J=15,0Гц, 1Н), 3,70-3,90 (м, 1Н), 3,77 лоти (14,2г, 0,055моля) у бензолі (120мл) та тіоні(с, 3Н), 3,31 (дд, J=15,0Гц, 1Н), 2,93 (дд, J=15,0, лхлорид (28мл) нагрівали при кипінні зі зворотним 9,2Гц, 1Н), 2,64 (дд, J=15,6, 5,0Гц, 1Н), 2,52 (дд, холодильником протягом 1 години та концентруJ=15,6, 9,3Гц, 1Н), 1,27 (т, J=7,1Гц, 3Н). вали. Хлорангідрид кислоти розчиняли в сухому д) Етил (±)-10,11-дигідро-3-гідрокси-5Нхлористом метилені (40мл) та розчин додавали по дибензо[a,d]циклогептен-10-ацетат краплях в атмосфері аргону до розчину АlСl3 Розчин етил (±)-10,11-дигідро-3-метокси-5Н(14,7г, 0,11моля) у хлористому метилені (600мл). дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетату (8,5г, Реакційну суміш перемішували в атмосфері аргону 0,027моля) у СН 2Сl2 (150мл) охолоджували до протягом 2,5 годин при кімнатній температурі, по10°С при перемішуванні в атмосфері аргону. Дотім гасили сумішшю лід-вода (200мл). Шари відодавали етантіол (10,7мл, 0,144моля), потім АlСl3 кремлювали й органічну фазу промивали послідо(20,6г, 0,154моля) двома порціями за 15 хвилин. вно 10%-ним розчином NaOH, водою і розведеної Після додавання спостерігали екзотермічний підНСl. Отриманий розчин розводили простим ефійом температури до 0°С, а потім температуру підром (200мл), сушили над MgSO4 та концентрувавищували до 25°С з використанням водяної бані. ли, твердий залишок розтирали з сумішшю просРеакційну суміш перемішували при 25-30°С протятий ефір/гексан (1:1) і збирали фільтруванням гом 2,25 годин, і в даний момент виливали в су9,25г зазначеної у заголовку сполуки: температура міш. Органічний шар відокремлювали, додавали плавлення 105-106°С; 1Н ЯМР (400МГц, CDCI3) d метанол (100мл) та суміш екстрагували СН 2Сl2 3,72 (с, 3Н), 4,1 (с, 2Н), 4, (с, 2Н), 6,7 (д, 1Н), 6.82 (2x50мл). Поєднані СН2Сl2 екстракти промивали (с, 1Н), 7,30 (м, 4Н), 8,1 (д, 1Н). Н2O (250мл), а потім концентрували, одержуючи Одержання 5 в'язку олію (8,6г). Цю олія поміщали в Et2 O (150мл) Одержання етил (±)-10,11-дигідро-3-метоксита ефір кип'ятили, замінюючи його на гексан. Ці5Н-дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетату льовий фенол спочатку відокремлювався у вигляді a) Етил (±)-3-(3-метоксифеніл)інденацетат олії, що кристалізувалася при перемішуванні при До холодного розчину 3-(3температурі навколишнього середовища. Збирали метоксифеніл)індену (4г, 18ммоль), отриманого дві порції твердої речовини, одержуючи зазначену згідно зі способом, описаним в J. Med. Chem., в заголовку сполуку (7,1г, 89%): температура пла1981, 24, 998, в ТГФ (15мл) при 0°С добавляли по влення 110-112°С. краплях розчин LiN(TMS)2 (20мл, 1М у ТГФ) протяОдержання 3 гом 5 хвилин. Отриманий розчин добавляли по Розділення енантіомерів етил (±)-10,11краплях до розчину етилбромацетату (3,34г, дигідро-3-гідрокси-5Н-дибензо[а,d]циклогептен-1020ммоль) у ТГФ при -78°С протягом 30 хвилин. ацетату за допомогою висоефективної рідинної Через 2,5 години суміш гасили насиченим розчихромтаографії ном хлориду амонію і шари відокремлювали. Ора) Етил (R)-(+)-10,11-дигідро-3-гідрокси-5Нганічний шар сушили над MgSO4 та концентрувадибензо[а,d]циклогептен-10-ацетат та етил (S)-(-)ли, одержуючи сирий продукт, який очищали за 10,11-дигідро-3-гідрокси-5Ндопомогою колоночної хроматографії (SiO2/2-4% дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетат EtOAc/гексан), одержуючи зазначену в заголовку Етил(±)-10,11-дигідро-3-гідрокси-5Нсполуку (1,1г): 1Н ЯМР (400МГц, CDCI3) d 1,30 (т, дибензо[a,d]циклогептен-10-ацетат розділяли на 3Η), 2,50 (м, 1H), 2,85 (м, 1Η), 3,85 (с, 3Η), 4,0 (м, енантіомери з використанням наступних умов: 1Η) , 4,20 (кв, 2Η), 6,6 (с, 1Н), 6,9 (м, 1Н), 7,2 (с, 29 71586 30 1Н), 7,35 (м, 6Н). хлористим метиленом, одержуючи 0,25г зазначеb) Етил (±)-3-[(3ної у заголовку сполуки: 1Н ЯМР (400МГц, CDCI3) d метоксибензоїл)]фенілсукцинат 1,28 (т, 3Н), 2,60 (м, 2Н), 2,90 (м, 1Н), 3,30 (м, 1Н), Розчин етил (±)-3-(33,80 (с, 3Н), 3,85 (д, 1Н), 4,18 (кв, 2Н), 4,30 (д, 1Н), метоксифеніл)інденацетату (1,1г, 3,6ммоль) в аце6,70 (м, 2Н), 7,0 (д, 1Н), 7,22 (м, 2Н). тоні (30мл) обробляли 4%-ним водяним розчином Наступний приклад ілюструє спосіб одержання тетраоксиду осмію (0,5мл) з наступним доданням біологічно активної сполуки згідно з даним винапо краплях 1,2М реактиву Джонса (5мл, 6ммоль) ходом з проміжних сполук, таких, що описані в відповідно до літературного способу (J. Org. Chem. попередніх способах одержання. , 1993, 58, 4745). Після перемішування протягом Приклад 1 ночі при кімнатній температурі темну реакційну Одержання (S)-10,11-дигідро-3-[2-(5,6,7,8суміш гасили ізопропанолом, після чого бісульфітетрагідро-1,8-нафтиридин-2-іл)-1-етокси]-5Нтом натрію (0,9г) та водою (30мл). Продукт екстрадибензо[а,d]циклогептен-10-оцтової кислоти гували етилацетатом, промивали насиченим роза) Етил (S)-10,11-дигідро-3-[2-(5,6,7,8чином солі, сушили над MgSO4 та концентрували, тетрагідро-1,8-нафтиридин-2-іл)-1-етокси]-5Нодержуючи твердий залишок. Розтирання з сумідибензо[а,d]циклогептен-10-ацетат шшю 1:1 простий ефір/гексан давало 0,76г зазнаДо розчину етил (S)-10,11-дигідро-3-гідроксиченої в заголовку сполуки: 1Н ЯМР (400МГц, 5Н-дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетату (200мг, CDCI3) d 1,18 (т, 3Н), 2,90 (м, 1Н), 3,3 (м, 1Н), 3,92 0,67ммоль), 2-(5,6,7,8-тетрагідро-1,8-нафтиридин(с, 3Н), 4,1 (кв, 2Н), 4,4 (м, 1Н), 4,4 (д, 1Н), 7,25 (м, 2-іл)-1-етанолу (241мг, 1,35ммоль) та PPh3 (354мг, 2Н), 7,5 (м, 6Н). 1,35ммоль) у сухому ТГФ (5мл) додавали диізопc) Етил (±)-3-[(3ропілазодикарбоксилат (0,27мл, 1,35ммоль) при метоксибензил)]фенілсукцинат. 0°С. Суміш залишали нагріватися до кімнатної Суміш етил (±)-3-[(3температури при нагрівання бані. Через 18 годин метоксибензоїл)]фенілсукцинату (0,76г, 2,1ммоль) суміш концентрували при зниженому тиску. Залита 10% Pd/C (0,6г) у крижаній оцтовій кислоті шок піддавали хроматографії на силікагелі (1:4,5 (35мл) піддавали гідруванню при тиску гексани/Еt2О), одержуючи зазначену в заголовку 50фунтів/кв.дюйм (344,74КПа) протягом 17 годин. сполуку (94мг, 31%) у вигляді прозорої олії: масспектр (ES) m/e 457 (М+Н)+. Суміш фільтрували через celiteÒ і шар на фільтрі b) (S)-10,11-Дигідро-3-[2-(5,6,7,8-тетрагідропромивали оцтовою кислотою. Фільтрат концент1,8-нафтиридин-2-іл)-1-етокси]-5Нрували, після чого повторно концентрували з тодибензо[а,d]циклогептен-10-оцтова кислота луолом та хлористим метиленом, одержуючи 0,65г До розчину етил (S)-10,11-дигідро-3-[2-(5,6,7,8зазначеної у заголовку сполуки: 1 тетрагідро-1,8-нафтиридин-2-іл)-1-етокси]-5НН ЯМР (400МГц, CDCI3) d 1,20 (т, 3Н), 2,20 (м, дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетату (131мг, 1Н), 3,0 (м, 1Н), 3,74 (с, 3Н), 4,1 (кв, 2Н), 4,18 (кв, 0,29ммоль) у суміші ТГФ/Н 2O (2мл) додавали 1,0н 2Н), 4,4 (д, 1Н), 6,2 (м, 2Н), 7,22 (м, 6Н). LiOH (0,43мл, 0,43ммоль) та суміш нагрівали при d) Етил (±)-10,11-дигідро-3-метокси-11-оксо50°С. Через 18 годин суміш охолоджували до кім5Н-дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетат натної температури та промивали Et2O (2x2мл). До розчину етил (±)-3-[(3Водяний шар підкислювали до рН 6 при викорисметоксибензил)]фенілсукцинату (0,65г, 1,9ммоль) танні 10%-ної НСI. Отриманий молочновидний у сухому хлористому метилені 910мл), що перемірозчин пропускали через С-18-колонку поєднаного шується на магнітній мішалці, додавали ДМФ елюювання (градієнтне елюювання: Н2O, потім (0,2мл) та оксалилхлорид (0,2мл, 2,28ммоль). Че20% CH3CN/H2O, потім СНСІ3 як елюента). Фракції, рез 1,5 години розчин додавали по краплях до що містять продукт, концентрували при зниженому суспензії хлориду алюмінію (0,6г, 4,5ммоль) у сутиску, отримуючи зазначену в заголовку сполуку хому хлористому метилені (15мл). Суміш гасили (30мг, 24%) у вигляді білого порошку: мас-спектр через 2 години крижаною водою, шари відокрем(ES) m/e 429 (М+Н)+. Аналіз: обчислене для лювали та водяний шар екстрагували хлористим C27H28N2 O3, 0,95 НСI: С, 70,02; Н, 6,30; N 6,05. метиленом. Поєднані органічні шари висушували Знайдено: С, 70,01; Н, 6,33; N 5,71. над MgSO4 та концентрували. Залишок очищали Приклад 2 шляхом колоночної хроматографії (SiO2/2-4% Парентеральна композиція одиничної препаEtOAc/гексан), одержуючи зазначену в заголовку ративної лікарської форми. сполуку (0,3г): 1Н ЯМР (400МГц, CDCI3) d 1,28 (т, Препаративну форму, що містить 20мг сполу3Н), 2,88 (м, 1Н), 3,55 (м, 1Н), 3,84 (с, 3Н), 3,88 (д, ки згідно з прикладом 1 у вигляді стерильного су1Н), 4,18 (кв, 2Н), 4,85 (д, 1Н), 4,95 (м, 1Н), 5,8 (м, хого порошку, одержують наступним способом: 2Н), 7,22 (м, 4Н), 8,1 (с, 1Н). 20мг сполуки розчиняють у 15мл дистильованої е) Етил (±)-10,11-дигідро-3-метокси-5Нводи. Розчин фільтрують у стерильних умовах у дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетат 25мл мультидозовочну ампулу та піддають ліофіСуміш етил(±)-10,11-дигідро-3-метокси-11лізації. Вміст вологи у порошку відновлюють додаоксо-5Н-дибензо[а,d]циклогептен-10-ацетату (0,3г, ванням 30мл 5% декстрози у воду (D5W) для вну0,93ммоль) та 10% Pd/C (0,3г) у крижаній оцтовій трішньовенної або внутрим'язової ін'єкції. кислоті (25мл) піддавали гідруванню при тиску Дозування, таким чином, визначають по об'єму, 50фунтів/кв.дюйм (344,74КПа) протягом 18 годин. що вводять. Подальше розведення можна провоСуміш фільтр ували через celiteÒ, та шар на фільдити, додаючи виміряний об'єм даного дозування трі промивали оцтовою кислотою. Фільтрат концедо іншого об'єму D5W для ін'єкції, або виміряна нтрували та повторно концентрували з толуолом і 31 71586 32 доза може бути додана до іншого механізму відпужують змішуванням та гранулюванням 20мг сахаску лікарського засобу, такого як пляшка або ємрози, 150мг дигідрату сульфату кальцію та 50мг ність для IV краплинної інфузії або в інші сполуки згідно з прикладом 1 з 10% розчином жеiн'єкційно-інфузійні системи. латину. Вологі гранули просівають, сушать, зміПриклад 3 шують з 10мг крохмалю, 5мг тальку та 3мг стеариПероральна композиція одиничної препаратинової кислоти та пресують у таблетку. вної лікарської форми. Вищевказаний опис цілком розкриває, яким Капсулу для перорального введення одержуспособом здійснити та використовувати даний ють змішуванням та роздрібненням 50мг сполуки винахід. Проте, даний винахід не обмежений опизгідно з прикладом 1 з 75мг лактози та 5мг стеарасаними вище конкретними варіантами його здійсту магнію. Отриманий порошок просівають і заповнення, але включає всі модифікації в об'ємі навенюють їм тверду желатинову капсулу. деної далі формули винаходу. Різні посилання на Приклад 4 журнали, патенти та інші публікації, що процитоПероральна композиція одиничної препаративані в даному описі, охоплюють стан даної галузі вної лікарської форми. та включені в опис шляхом посилання, так якщо Таблетку для перорального введення одервони були б викладені цілком. Комп’ютерна в ерстка О. Гапоненко Підписне Тираж 37 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601