a-кетоаміди, що є інгібіторами протеасоми 20s, та фармацевтична композиція на їх основі (варіанти)

1. Сполуки формули 2 (19) 1 3 71559 Мультикаталітична протеїназа, або протеасома, є високо стійкою клітинною структурою, яка відповідає за залежний від АТР протеоліз більшості клітинних протеїнів (див. роботу Ку, Танака та Гольдберга - Coux, О., Tanaka, K., and Goldberg, Α., 1996 Ann. Rev. Biochem. 65, 801-847). Протеасома 20S містить каталітичне ядро комплексу і кристалізована з архебактерій виду Thermoplasma acidophilum (див. роботу Лове та ін. - Lowe, J., Stock, D., Jap, В., Zwi zki, P., Bauminster, W., and Huber, R., 1995 Science 268, 533-539) і з дріжджів Saccharomices cerevisiae (див. роботу Гроля та ін. - Groll, Μ., Ditzel, L, Lowe, J., Stock., D., Bochtler, M., Bartunik, H.D. and Huber, R., 1997 Nature 386, 463471). На відміну від архебактеріальної протеасоми, яка виявляє головним чином протеолітичну активність відносно хімотрипсину (див. роботи Дальмана та ін. - Dahlmann, В., Kopp, F., Kuehn, L., Niedel, В., Pfeifer, G., 1989 FEBS Lett. 251, 125-131; і Зеемюллера та ін. - Seemuller, E., Lupas, Α., Zuw, F., Zwickl, P. and Baumeister, W., FEBS Lett. 359, 173, 1995), еукаріотна протеасома виявляє щонайменше п’ять видів протеолітичної активності, які піддаються ідентифікації. Три з цих видів активності за специфічністю подібні до активностей хімотрипсин-, трипсині пептидилглутамілпептидази. Два інших описаних види активності спрямовані переважно на розщеплення пептидних зв’язків з боку карбоксильної групи амінокислот розгалуженої будови (ВrААР) та пептидних зв’язків між нейтральними амінокислотами з короткими ланцюгами (SnAAP) (див. роботу Орловського Orlowski, M., 1990 Biochemistry 29, 10289-10297). Хоча протеасома 20S містить протеолітичне ядро, вона неспроможна викликати деструкцію протеїнів in vivo, якщо вона не знаходиться в комплексі з угрупованням 19S, приєднаним до якогонебудь кінця її структури; це угруповання в свою чергу виявляє кілька видів аденозинтрифосфатазної активності. Така структура більшого розміру відома під назвою протеасоми 26S і швидко розкладає протеїни, які підготовлені до розкладу приєднанням кількох молекул поліпептиду з молекулярною масою 8,5кДа, так званого убіквітину (огляд цих питань наведено в роботі Ку, Танака та Гольдберга - Coux, О., Tanaka, К., and Goldberg, Α., 1996 Ann. Rev. Biochem. 65, 801-847). Багато видів функціональних груп, приєднаних до субстратів, використовуються як потенціальні інгібітори серин- і тіол-протеаз. Деякі з таких груп описані як інгібітори протеасоми. До них належать альдегіди пептидів (див. роботи Виницького та ін. Vinitsky, Α., Michaud, С, Powers, J. and Orlowski, M, 1992 Biochemistry 31, 9421-9428; Цубукі та ін. Tsubuki, S., Hiroshi, K., Saito, Y., Mi yashita, N., Inomata Μ and Kawashima, S., 1993 Biochem. Biophys. Res. Commun. 196, 1195-1201; Рока та ін. - Rock, К.I., Gramm, С, Rothstein, L, Clark, K., з Stein, R., Dick, L, Hwang, D. and Goldberg, A.L., 1994 Cell 78, 761-771) N-ацетил-L-лейциніл-L-лейциніл-Lнорлейциналь (ALLN) і N-ацетил-L-лейциніл-L 4 лейциніл-L-метіональ (LLM); найбільш потужним інгібітором цього типу є N-кapбoбeнзoкcил-1-Lлeйцинiл-L-лeйцинiл-L-нopвaлiнaль (MG115). В інших повідомленнях описано ряд дипептидних інгібіторів, які мають значення ІС 50 в діапазоні від 10нМ до 100нМ (див. роботу Ікбала та ін.- Iqbal, M., Chatterjee, S., Kauer, J.C., Das, M., Messina, P., Freed, В., Biazzo, W. and Siman, R., 1995 I-Med. Chem. 38, 2276-2277). Описано також ряд αкетокарбонільних похідних дипептидів та складних ефірів борної кислоти і дипептидів (Iqbal, Μ., Chatterjee, S., Kauer, J.C., Mallamo, J.P., Messina, P.A., Reiboldt, A. and Siman, R., 1996 Bioorg. Med.-Chem. Lett. 6, 287-290) та епоксикетонів (Spattenstein, Α., Leban, J.J., Huang, J.J., Reinhardt, K.R., Vi veros, O.H., Sigafoos, J. and Crouch, R., 1996, Tet. Lett. 37, 1434-1346), які є потужними інгібіторами протеасоми. Іншою сполукою, яка виявляє специфічність в інгібуванні діяльності протеасоми, є лактацистін (див. роботу Фентяні та ін. - Fenteany, G., Standaert, R.F., Lane, W.S., Choi, S., Corey, E.J. and Schreiber, S.L., 1995 Science 268, 726-731), що є метаболітом організмів типу Streptomvces. Ця речовина спочатку була описана у зв’язку з її здатністю індукувати розростання нейритів у культурі клітин нейробластоми (див. роботу Омури та ін. Omura, S., Matsuzaki, К., Fujimoto, Т., Kosuge, К., Furuya, Т., Fujita, S. and Nakagawa, Α., 1991 /. Antibiot. AA, 117-118); пізніше було показано, що вона інгібує проліферацію кількох типів клітин (Fenteany, G., Standaert, R., Reichard, G.A., Corey, Ε. J. and Schreiber, S.L., 1994 Proc. Nat¢l Acad. Set USA 91, 3358-3362). Нині встановлено, що протеасома є головною екстраліпосомною протеолітичною системою, яка бере участь у процесах протеолізу, що мають велике значення для різних функцій клітини, наприклад, для поділу клітини, перетворення антигенів і розкладу короткоіснуючих регулювальних протеїнів, наприклад, продуктів онкогену, циклінів і факторів транскрипції (див. роботу Ци хановера Ciechanover, Α., 1994, Cell 79, 13-21; Паломбел та ін. -Palombell, V.J., Rando, O.J., Goldberg, A.L. and Maniatis, Т., 1994, Cell 78, 773-785). Наприклад, активною формою NF-κΒ є гетеродимер, який складається з блоків р65 та р50. Останній присутній у цитозолі у вигляді неактивного попередника (р105). Протеолітичне перетворення p 105 з утворенням р50 протікає за участю убіквітину та протеасоми. Крім того, утворений р50 та р65 утримуються в цитозолі у вигляді неактивного комплексу, приєднаного до інгібіторного протеїну ІкВ. Стимулятори запальних процесів, наприклад, LPS, активують NF-κΒ шляхом ініціації сигнального механізму, який спричиняє розклад ІкВ. Ці сигнали стимулюють також перетворення p105 у р50. Таким чином, для індукованої сигналом активації NFκΒ потрібні два протеолітичних акти, які обидва регулюються за участю убіквітину та протеасоми. Той факт, що протеоліз, який протікає під дією 5 71559 6 протеасоми за посередництвом убіквітину, відіграє Ще одною метою цього винаходу є викорисвирішальну роль в активації NF-κΒ, можна застотання терапевтично ефективної кількості сполук, сува ти в клінічній практиці шляхом використання описаних у цьому документі, для інгібування функінгібіторів, дія яких спрямована на протеасому. цій протеасоми. Аномальна активація NF-κΒ з наступною стимуляЗгідно з одним із варіантів здійснення цей вицією синтезу цитокіну, спостерігається при різнонахід стосується сполуки, що має формулу манітних запальних та інфекційних захворюваннях. Активація NF-κΒ має також суттєве значення для ангіогенезу і для проявлення активності адгезивних молекул (САМ і селектів), таким чином, інгібітори протеасоми можуть бути корисними також для лікування захворювань, пов’язаних з сув якій Х2 є Аr або Ar-Х3 , де Х3 є -С =О або динною системою. СН2СО- і де Аr є феніл, заміщений феніл, індол, Надійно встановлено, що убіквітинзаміщені індоли і будь-які інші гетероарили; кожпротеасомний механізм має вирішальне значення ний з замісників R1 і R2 окремо вибраний з групи, для регульованої деструкції циклінів, які спричищо включає бокові ланцюги відомих природних αняють вихід з мітозу і забезпечують можливість амінокислот і амінокислот, які не зустрічаються в переходу клітин у наступну фазу клітинного циклу природі, водень, лінійний та розгалужений алкіл з (див. Глотцер та ін. - Glotzer, Μ., Murray, A. W. and числом вуглецеви х атомів від 1 до 10, лінійний та Kirschner, M.W., 1991 Nature 349, 132-138). Отже, розгалужений заміщений алкіл з числом вуглецеінгібування розкладу циклінів шляхом використанвих а томів від 1 до 10, арил, заміщений арил, ня інгібіторів протеасоми спричиняє припинення арил, заміщений лінійною або розгалуженою груросту. Таким чином, іншою потенційно корисною пою з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, алкообластю застосування інгібіторів протеасоми є їх ксиарил, циклоалкіл з числом вуглецеви х атомів використання при лікуванні захворювань, які є навід 3 до 8, гетероцикл, заміщений гетероцикл, геслідками ненормального поділу клітин. тероарил та заміщений гетероарил; Х1 вибраний з У сучасній літературі описано кілька класів інгрупи, що включає гідроксил, моноалкіламіногрупу, гібіторів протеасоми 20S. α-кетоамідна група викодіалкіламіногрупу, алкоксид, арилалкоксид і групу ристовується в інгібіторах протеази в багатьох випадках. Зокрема, сповіщається, що ряд αкетокарбонільних похідних дипептидів та складних ефірів борної кислоти і дипептидів є ефективними інгібіторами функцій протеасоми 20S (Iqbal, Μ., Chatterjee, S., Kauer, J.C., Mallamo, J.P., Messina, в якій Х4 є гідроксил, ариламіногрупа, моноалP.A., Reiboldt, A. and Siman, R., Bioorg. Med.-Chem. кіламіногрупа, діалкіламіногрупа, алкоксид або Lett. 6, 287-290). Похідні 3-індолпіровиноградної арилалкоксид; і кислоти описані як фармацевтично активні речоR3 вибраний з групи, що включає відомі привини для лікування розладів центральної нервової родні α-амінокислоти, амінокислоти, які не зустрісистеми (публікація міжнародної заявки WO чаються в природі, водень, лінійний та розгалуже88/09789 Де Лука та ін. - De Luca et al.) з викорисний алкіл з числом вуглецевих а томів від 1 до 10, танням механізму, який модулює рівень кінуренолінійний та розгалужений заміщений алкіл з чисвої кислоти у мозку. лом вуглецевих атомів від 1 до 10, арил, заміщеНезважаючи на те, що відомі різноманітні споний арил, арил, заміщений лінійною або розгалулуки, які певною мірою інгібують проліферацію женою групою з числом вуглецевих атомів від 1 до клітин, існує постійна потреба у більш ефективних 10, алкоксиарил, циклоалкіл з числом вуглецевих сполуках, які інгібують проліферацію клітин через атомів від 3 до 8, гетероцикл, заміщений гетеропосередництво протеасоми 20S. цикл, гетероарил та заміщений гетероарил. Короткий опис винаходу Згідно з іншим варіантом здійснення, цей виМетою цього винаходу є запропонувати спосіб нахід стосується способу інгібування протеасомноінгібування проліферації клітин у ссавців з викориго протеазного фактора у ссавців, який включає станням терапевтично ефективної кількості сполувведення в організм ссавця терапевтично ефектики, здатність якої інгібувати розростання клітин до вної кількості сполуки, розкритої вище. цього часу була невідома. Згідно зі ще одним варіантом здійснення, цей Метою цього винаходу є також запропонувати винахід стосується фармацевтичної композиції, спосіб лікування захворювань, на які можна вплияка містить сполуку згідно з п. 1 формули винахонути шляхом інгібування функцій протеасоми. ду та одну або кілька фармацевтичних добавок. Крім того, метою цього винаходу є запропонуОпис варіанту здійснення винаходу, якому відвати спосіб лікування проліфераційних захворюдається перевага вань, оснований на інгібуванні функцій протеЦей винахід стосується способу інгібування асоми. розладів проліферації клітин, інфекційних захвоІншою метою цього винаходу є використання рювань та імунологічних розладів у ссавців, зоктерапевтично ефективної кількості сполук, описарема у людини, з використанням сполук, які мають них у цьому документі, для інгібування розладів таку загальну формулу: проліферації клітин у людей. 7 71559 8 алкілів, описаних вище, які несуть один або кілька замісників, наприклад, гідроксил, тіол, алкілтіол, галоген, алкоксигрупу, аміногрупу, амідогрупу, карбоксил, циклоалкіл, заміщений циклоалкіл, гетероцикл, циклогетероалкіл, заміщений циклогетероалкіл, ацил, арил, заміщений арил, арилоксиу якій: груп у, гетарил, заміщений гетарил, аралкіл, Х2 є Аr або Аr-Х3, де Х3 є -С=О , -СН2СО- або гетероаралкіл, алкілалкеніл, алкілалкініл, алкілци(СН2)n, де n=0-2 і де Аr є феніл, заміщений феніл, клоалкіл, алкілциклогетероалкіл, ціан. Ці групи індол, заміщені індоли і будь-які інші гетероарили; можуть бути приєднані до будь-якого вуглецевого кожний з замісників R1 і R2 окремо вибраний з груатома нижчого алкілу. пи, що включає бокові ланцюги відомих природних Термін "арилокси(група)" означає групу -ОАr, α-амінокислот і амінокислот, які не зустрічаються в де Аr є арил, заміщений арил, гетероарил або заприроді, водень, лінійний та розгалужений алкіл з міщений гетероарил згідно з визначеннями, подачислом вуглецеви х атомів від 1 до 10, лінійний та ними нижче. розгалужений заміщений алкіл з числом вуглецеТермін "аміно(група)" означає групу NRR' де вих а томів від 1 до 10, арил, заміщений арил, замісники R і R' незалежно один від одного можуть арил, заміщений лінійною або розгалуженою груявляти собою водень, нижчий алкіл, заміщений пою з числом вуглецевих атомів від 1 до 10, алконижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетарил або ксиарил, циклоалкіл з числом вуглецеви х атомів заміщений гетарил згідно з визначеннями, подавід 3 до 8, гетероцикл, заміщений гетероцикл або ними нижче, або ацил. гетероарил та заміщений гетероарил; перевага Термін "амідо(група)" означає групу -C(O)NRR' віддається варіантам, в яких R2 є діарил або біфеде замісники R і R' незалежно один від одного моніл, R1 є ізобутил; жуть являти собою водень, нижчий алкіл, заміщеХ1 вибраний з групи, що включає гідроксил, ний нижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетарил моноалкіламіногрупу, діалкіламіногрупу, алкоксид, або заміщений гетарил згідно з визначеннями, арилалкоксид і групу поданими нижче. Термін "карбоксил" означає групу -C(O)OR, де замісник R може являти собою водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетарил або заміщений гетарил тощо, згідно з відповідними визначеннями. Термін "арил" або "Аr" стосується ароматичної в якій Х4 є гідроксил, ариламіногрупа, моноалкарбоциклічної групи, що містить, принаймні, одне кіламіногрупа, діалкіламіногрупа, алкоксид або ароматичне кільце (наприклад, феніл або біфеніл) арилалкоксид; перевага віддається варіантам, в або кілька конденсованих кілець, з яких щонаймеяких Х4 - гідроксил; нше одне є ароматичним (наприклад, 1,2,3,4R3 вибраний з групи, що включає бокові лантетрагідронафтил, нафтил, антрил або фенантцюги відомих природних ос-амінокислот та амінорил). кислот, які не зустрічаються в природі, водень, Термін "заміщений арил" стосується арилу, лінійний та розгалужений алкіл з числом вуглецеякий необов’язково несе як замісники одну або вих атомів від 1 до 10, лінійний та розгалужений кілька функціональних гр уп, наприклад, галоген, заміщений алкіл з числом вуглецевих атомів від 1 нижчий алкіл, нижчу алкоксигрупу, алкілтіогрупу, до 10, арил, заміщений арил, арил, заміщений ацетилен, аміногрупу, амідогрупу, карбоксил, гідлінійною або розгалуженою групою з числом вугроксил, арил, арилоксигрупу, гетероцикл, гетарил, лецевих атомів від 1 до 10, алкоксиарил, циклоалзаміщений гетарил, нітрогрупу, ціан, тіол, сульфакіл з числом вуглецеви х атомів від 3 до 8, гетеромідну групу то що. цикл, заміщений гетероцикл або гетероарил та Термін "гетероцикл" стосується насиченої, незаміщений гетероарил; насиченої або ароматичної карбоциклічної групи, перевага віддається варіантам, в яких R3 є що містить одне кільце (наприклад, морфолін, СО2Н, СН2СО2Н, (СН2)2СО 2Н, Arg, L ys, Asn, GІn, піридил або фурил) або кілька конденсованих кіAsp, Glu, Phe та Nle. лець (наприклад, нафтопіридил, хіноксаліл, хіноліНижче подано визначення деяких термінів, ніл, індолізиніл або бензо[b]тієніл) і має в кільці, уживаних у цьому описі. принаймні, один гетероатом, наприклад, Ν, Ο або Термін "галоген" стосується атомів фтору, S, причому ця група може бути незаміщеною або брому, хлор у та йоду. нести необов’язковий замісник, наприклад, галоТермін "гідроксил" стосується групи -ОН. ген, нижчий алкіл, нижчу алкоксигрупу, алкілтіогТермін "тіол" або "меркапто(група)" стосується рупу, ацетилен, аміногрупу, амідогрупу, карбоксил, групи -SH. гідроксил, арил, арилоксигрупу, гетероцикл, гетаТермін "алкіл" стосується аліфатичної групи рил, заміщений гетарил, нітрогрупу, ціан, тіол, суциклічної, розгалуженої або лінійної будови з числьфамідну гр упу то що. лом вуглецевих а томів від 1 до 10. Прикладами Термін "гетероарил" або "гетарил" стосується груп, що їх о хоплює цей термін, є метил, етил, nгетероциклу, в якому, принаймні, одне гетероцикпропіл, ізопропіл, n-бутил, трет-бутил, ізобутил лічне кільце є ароматичним. Гетероарилами, яким (або 3-метилпропіл), циклопропілметил, ізоаміл, nвіддається перевага, є феніл, заміщений феніл, аміл, n-гексил та ін. індол і заміщені індоли. Термін "заміщений алкіл" стосується нижчих 9 71559 10 Термін "заміщений гетероарил" стосується геТермін "заміщений циклоалкіл" стосується цитероцикла, необов’язково моно- або полізаміщеноклоалкільної групи, яка несе один або кілька заміго одною або кількома функціональними групами, сників, наприклад, галоген, нижчий алкіл, заміщедо яких належать, наприклад, галоген, нижчий ний нижчий алкіл, алкоксигрупу, алкілтіогрупу, алкіл, нижча алкоксигрупа, алкілтіогрупа, ацетилацетилен, арил, арилоксигрупу, гетероцикл, гетаен, аміногрупа, амідогрупа, карбоксил, гідроксил, рил, заміщений гетарил, нітрогрупу, ціан, тіол, суарил, арилоксигрупа, гетероцикл, гетарил, замільфамідну гр упу то що. щений гетарил, нітрогрупа, ціан, тіол, сульфамідна Приклади сполук, які можуть бути корисними в група то що. способах терапії згідно з цим винаходом і, зокреТермін "циклоалкіл" стосується двовалентного ма, корисні як інгібітори функцій протеасоми, нациклічного або поліциклічного алкілу, що містить ведені в Таблиці І, поданій нижче. від 3 вуглецевих атомів до 15 вуглецевих а томів. 11 71559 12 13 71559 14 15 71559 16 17 71559 18 19 71559 20 21 71559 22 23 71559 24 25 71559 26 27 71559 28 29 71559 30 31 71559 32 33 71559 34 35 71559 36 37 71559 38 39 71559 40 41 71559 42 43 71559 44 45 71559 46 47 71559 48 49 71559 50 51 Сполуки, описані вище, корисні при лікуванні захворювань та розладів, у яких протеасома 20S є медіатором, наприклад, антипроліфераційних захворювань, раку, запальних процесів. Перевага віддається використанню сполук згідно з цим винаходом для лікування антипроліфераційних розладів та запальних захворювань. Найбільша перевага віддається використанню сполук згідно з цим винаходом для лікування запальних захворювань. Сполуки згідно з цим винаходом корисні для лікування ссавців, що страждають на розлади, в яких протеасома 20S є медіатором. Сполуки згідно з цим винаходом можна вводити в організм ссавців як з профілактичною, так і з терапевтичною метою будь-яким способом, що здатний забезпечити взаємодію, принаймні, одної сполуки згідно з цим винаходом з протеасомою 20S. Необмежувальними прикладами корисних способів введення є пероральний, парентеральний, нашкірний, черезшкірний, ректальний, назальний або будь-який інший спосіб вживання відповідної фармацевтичної композиції, відомий обізнаним фахівцям. Сполуки згідно з цим винаходом можна вживати у вигляді придатних для цієї мети дозованих лікарських форм. Конкретні лікарські форми значною мірою залежать від використовуваного способу вживання. Термін "лікарська форма" охоплює вироби, наприклад, таблетки, капсули, рідини та порошки, які містять інгібітори протеа 71559 52 соми 20S згідно з цим винаходом у чистому вигляді або у присутності одної або кількох фармацевтичних добавок. Добір цих добавок, наприклад, наповнювачів та допоміжних речовин, значною мірою залежить від вибраного способу вживання. Обізнаним фахівцям-фармацевтам відомі численні різноманітні рецептури та носії для вживання сполук згідно з цим винаходом. Спосіб вживання, вибраний для використання сполук згідно з цим винаходом, визначає, в кінцевому підсумку, вигляд та склад лікарських форм, які містять інгібітори протеасоми 20S згідно з цим винаходом. Наприклад, внутрішнє вживання сполук згідно з цим винаходом може здійснюватися перорально у вигляді порошків, таблеток, капсул, паст, напоїв, гранул або розчинів, суспензій та емульсій або драже, які можна приймати через рот, у лікувальній їжі або з питною водою. Внутрішнє вживання можна здійснювати також з використанням композицій з затриманим виділенням лікарського засобу, що містять відповідні добавки, наприклад, поверхневоактивні речовини, або капсул з крохмальною оболонкою, чи з використанням композицій зі швидким виділенням, наприклад, швидкорозчинних таблеток, виготовлених способом сублімаційного сушіння. Нашкірне вживання виконується, наприклад, з використанням лікувальних пластирів, обприскування, наливання або місцевого нанесення на шкіру. Парентеральне вживання здійснюється, наприклад, у ви гляді ін’єкцій (внут 53 71559 54 рішньом’язових, підшкірних, внутрішньовенних, могенізації цієї фази в розчиннику протилежної внутрішньоочеревинних) або імплантатів. фази за допомогою відповідних допоміжних реПерелік придатних для використання лікарсьчовин, наприклад, емульгаторів, барвників, приких форм, які містять інгібітори протеасоми 20S скорювачів резорбції, консервантів, антиоксиданзгідно з цим винаходом, включає такі форми (але тів, фотостабілізаторів та добавок, які не вичерпується ними), як розчини, наприклад, підвищують в’язкість. розчини для ін’єкцій, розчини для перорального Суспензії можуть вживатися перорально, навживання, концентрати для перорального вжишкірно або шляхом ін’єкцій. їх готують шляхом вання після розрідження, розчини для нашкірного суспендування активної сполуки в рідині з додавживання або введення у порожнини тіла, компованням в разі потреби допоміжних речовин, назиції для нанесення на шкіру, гелі; емульсії та приклад, змочувальних агентів, барвників, присуспензії для перорального й нашкірного вживанскорювачів резорбції, консервантів, ня та для ін’єкцій; напівтверді препарати; компоантиоксидантів та фотостабілізаторів. зиції, в яких активна сполука введена в основу, Фармацевтичні композиції згідно з цим винаякою може бути мазь або емульсія типу "масло в ходом можуть містити одну або кілька добавок у воді" чи "вода в маслі"; тверді препарати, напривигляді фармацевтично прийнятних добавок. До клад, порошки, премікси або концентрати, гранукорисних добавок належать розчинники, солюбіли, пілюлі, таблетки, драже, капсули; аерозолі та лізатори, консерванти, загусники, змочувальні композиції для інгаляції; і різноманітні вироби, які агенти, барвники, прискорювачі резорбції, антимістять активну сполуку. оксиданти, фотостабілізатори, адгезійні агенти, Лікарські форми у вигляді розчинів можна видобавки, що підвищують в’язкість, наповнювачі, користовувати шляхом вн утрішньовенних, внутсмакові добавки, змащувальні агенти і будь-які рішньом’язових та підшкірних ін’єкцій. Розчини інші добавки до фармацевтичних композицій, для ін’єкцій готують шляхом розчинення активної відомі обізнаним фахівцям. сполуки у відповідному розчиннику з додаванням Добавкою може бути розчинник, наприклад, в разі необхідності допоміжних речовин, напривода, спирти, наприклад, етанол, бутанол, бенклад, солюбілізаторів, кислот, основ, буферних зиловий спирт, гліцерин, пропіленгліколь, полісолей, антиоксидантів та консервантів. Розчини етиленгліколі, N-метилпіролідон, алканоли, арофільтрують у стерильних умовах і дозують за матичні спирти, наприклад, бензиловий спирт допомогою шприців. фенілетанол, феноксиетанол; складні ефіри, наІншим способом вживання розчинів, що місприклад, етилацетат, бутилацетат, бензилбензотять сполуки згідно з цим винаходом, є перораат; прості ефіри, наприклад, алкілові ефіри алкільний. Концентрати сполук згідно з цим винахоленгліколів, наприклад, монометиловий ефір дом переважно вживають перорально тільки дипропіленгліколю, монобутиловий ефір діетилепісля розрідження концентрату до концентрації нгліколю; кетони, наприклад, ацетон, метилетилвживання. Розчини для перорального вживання кетон; ароматичні та/або аліфатичні вуглеводні, та концентрати готують, як описано вище для рослинні або синтетичні олії, диметилформамід, ін’єкційних розчинів. Розчини для нашкірного диметилацетамід, 2,2-диметил-4-оксиметиленвживання наносять по краплях, за допомогою 1,3-діоксолан. щіток, втирають, наливають або набризкують. Як солюбілізатори в композиціях згідно з цим Такі розчини готують, як описано вище для винаходом можуть бути корисними розчинники, ін’єкційних розчинів. які підвищують розчинність активної сполуки в Гелі наносять на шкіру або вводять у порож основному розчиннику або запобігають її осанини тіла. Гелі готують шляхом додавання до дженню. Прикладами таких солюбілізаторів є розчинів, приготованих, як описано вище для полівінілпіролідон, поліоксиетилована рицинова ін’єкційних розчинів, загусника в кількості, достаолія, поліоксиетиловані складні ефіри сорбіту. тній для утворення прозорої речовини пастоподіКорисними консервантами є, наприклад, бенбної консистенції, або будь-яким іншим способом зиловий спирт, трихлорбутанол, ефіри pвідомим обізнаним фахівцям. гідроксибензойної кислоти і n-бутанол. Композиції для наливання та місцевого нанеДо корисних загусників належать неорганічні сення наливають або набризкують на обмежені загусники, наприклад, бентоніт, колоїдний діокділянки шкіри, при цьому активна сполука пронисид кремнію, моностеарат алюмінію, та органічні кає через шкіру й діє системно. Композиції для загусники, наприклад, похідні целюлози, полівініналивання та місцевого нанесення готують шлялові спирти та їх співполімери, акрилати й метахом розчинення, суспендування або емульгуванкрилати. ня активної сполуки у відповідному розчиннику У складі лікарських форм згідно з цим винаабо суміші розчинників, які не викликають небаходом можуть бути використані також інші рідини, жаних реакцій шкіри. В разі потреби додають донаприклад, однорідні розчинники, суміші розчинпоміжні речовини, наприклад, барвники, прискоників і змочувальні агенти, які, як правило, є порювачі резорбції, антиоксиданти, верхнево-активними речовинами. фотостабілізатори та адгезійні речовини. Корисними барвниками є всі барвники, які не Емульсії можуть вживатися перорально, нає токсичними і можуть бути розчинені або сушкірно або шляхом ін’єкцій. Емульсії можуть бути спендовані. типу "вода в маслі" або "масло в воді". їх готують Корисними прискорювачами резорбції є дишляхом розчинення інгібіторів протеасоми 20S метилсульфоксид, олії з високою просочувальабо в гідрофобній, або в гідрофільній фазі та гоною здатністю, наприклад, ізопропілміристат, 55 71559 56 дипропіленгліколь-пеларгонат, силіконові масла, якого відомого захворювання або розладу, за складні ефіри жирних кислот, тригліцериди, жирні умови, що сумісне вживання обох активних споспирти. лук не викликає небажаних негативних ефектів. Корисними антиоксидантами є сульфіти або Спосіб лікування захворювань та розладів, у метабісульфіти, наприклад, метабісульфіт наяких протеасома 20S є медіатором, включає вветрію, аскорбінова кислота, бутил гідрокситолуол, дення в організм пацієнта ефективної кількості бутилгідроксианізол, токоферол. вибраної сполуки або комбінації сполук; перевага Корисним фотостабілізатором є новантизовіддається введенню в диспергованому вигляді у лова кислота. складі лікарської форми. Готові лікарські форми Корисними адгезійними агентами є похідні згідно з цим винаходом містять активну сполуку в целюлози, похідні крохмалю, поліакрилати, приконцентраціях від 10 частин на мільйон до родні полімери, наприклад, альгінати, желатин. 20%(мас), перевага віддається вмісту від 0,1% до До корисних емульгаторів належать неіоно10%(мас). В разі використання лікарських форм генні поверхнево-активні речовини, наприклад, згідно з цим винаходом, які розріджують перед поліоксиетилована рицинова олія, поліоксиетивживанням, перевага віддається вмісту активної лований моноолеат сорбіту, моностеарат сорбіту, сполуки від 0,5% до 90%(мас), краще від 5% до моностеарат гліцерину, поліоксиетилстеарат, 50%(мас). Як правило, для досягнення ефективалкілфенольні ефіри полігліколів; амфолітні поних результатів доцільно вживати добові кількості верхнево-активні речовини, наприклад, динатрієактивної сполуки від приблизно 0,01мг до привий N-лаурил-бета-імінодипропіонат або лециблизно 100мг/кг маси тіла. тин; аніонні поверхнево-активні речовини, Обізнаному фахівцеві легко визначити дози наприклад, лаурилсульфат натрію, сульфати лікарських форм, які містять інгібітори протеасопростих ефірів жирних спиртів, сіль моноетаноми 20S згідно з цим винаходом, та періодичність ламіну зі складним ефіром ортофосфорної кисїх вживання залежно від низки факторів, в тому лоти і простого ефіру моно/діалкілполігліколю; числі від способу вживання, віку та стан у пацієнкатіонні поверхнево-активні речовини, наприклад, та. Ці одиниці дозування можна вживати при госхлорид цетилтриметиламонію. трих або хронічних захворюваннях від одного До корисних агентів, що підвищують в’язкість разу до 10 разів на добу. В разі вживання сполук та стабілізують лікарські емульсії, належать карзгідно з цим винаходом відповідно до вказівок, боксиметилцелюлоза, метилцелюлоза та інші наведених в опису винаходу, будь-які неприйнятпохідні целюлози й крохмалю, поліакрилати, альні токсикологічні наслідки не очікуються. гінати, желатин, гуміарабік, полівінілпіролідон, Лікарські форми, які містять інгібітори протеполівініловий спирт, співполімери метилвініловоасоми 20S згідно з цим винаходом, виготовляють го ефіру з малеїновим ангідридом, поліетиленгліза відомими способами фармацевтичної техноколі, воски, колоїдний діоксид кремнію та суміші логії, які включають подрібнення, змішування, вищезгаданих речовин. гранулювання і в разі потреби пресування в табДля приготування твердих дозованих лікарлетки; або подрібнення, змішування та заповненських форм активну сполуку змішують з відповідня твердих желатинових капсул. В разі викорисними добавками, додаючи в разі потреби допотання рідких добавок препарат може мати форму міжні речовини, і одержану суміш фасують згідно сиропу, еліксиру, емульсії або водної чи неводної з потребою. Прикладами фізіологічно прийнятних суспензії. Такі рідкі композиції можна безпосеретвердих інертних добавок є хлористий натрій, дньо вживати перорально або ж заповнювати карбонати, наприклад, карбонат кальцію, гідроними м’які желатинові капсули. карбонати, різновиди оксиду алюмінію та діоксиХоча описані в цьому документі сполуки моду кремнію, глини, осаджений або колоїдний діожна вживати, як описано вище, перевага віддаксид кремнію та фосфати. Прикладами твердих ється здійсненню способу згідно з цим винаходом органічних добавок є цукри, целюлоза, харчові шляхом перорального вживання описаних спопродукти, наприклад, молочний порошок, кісткове лук. Якщо вибрано пероральний спосіб вживання, борошно, зернове борошно, в тому числі гр убого то для досягнення однакового ефекту необхідна помелу, і різновиди крохмалю. До інших придатбільша кількість активної сполуки у порівнянні, них добавок належать змащувальні агенти та наприклад, з парентеральним введенням. Відпоагенти сковзання, наприклад, стеарат магнію, відно до правил клінічної практики, перевага відстеаринова кислота, тальк, бентоніти; дезінтеградається вживанню сполук згідно з цим способом тори, наприклад, крохмаль або зшитий полівінілна рівні концентрації, який забезпечує ефективні піролідон; в’яжучі агенти, наприклад, крохмаль, терапевтичні результати і не викликає в той же желатин або лінійний полівінілпіролідон; і сухі час негативних побічних ефектів. в’яжучі агенти, наприклад, мікрокристалічна цеСполуки згідно з цим винаходом можуть мати люлоза. також нетерапевтичне застосування. Вони моАктивні сполуки можуть бути присутні в ліжуть використовуватися як аналітичні стандарти карських формах, описаних у цьому документі, у при випробуваннях інгібіторів протеасоми 20S. вигляді суміші, яка містить, принаймні, один інПриклад 1 ший інгібітор протеасоми 20S. Альтернативно Сполуки, корисні для способу терапії згідно з або додатково лікарські форми згідно з цим винацим винаходом, одержують звичайними методаходом можуть містити, окрім, принаймні, одного ми органічної хімії. До літературних джерел, в інгібітора протеасоми 20S, будь-яку іншу фармаяких наведено описи способів синтезу цих споцевтичну сполуку, придатну для лікування будьлук, належать монографії Боданського (Bo 57 71559 58 dansky) "Практика синтезу пептидів" (The Practice Смолу Fmoc-N-Asp-(O-t-Bu)-MBHA (20мг) відof Peptide Synthesis, Springer-Verlag, 1st Edition, важували і переносили в шприц з фільтром з по1984) та "Групи захисту в органічному синтезі" ристого скла. Смолу витримували для попере(Protective Groups in Organic Synthesis, 2 nd Edition, днього набухання в 1мл диметилформаміду John Wiley & Sons, New York, 1991). Усі пептидні протягом 30 хвилин. Захисну груп у Fmoc (флуосполучення виконують при кімнатній температурі ренілметоксикарбоніл) відщеплювали шляхом при постійному обережному перемішуванні. Хід оброблення 20%-ним розчином піперидину в диреакцій пептидного сполучення та відщеплення метилформаміді протягом 30 хвилин. Видаляли груп захисту контролюють з застосуванням тесту розчин, використаний для відщеплення групи Кайзера на аміни. Абревіатурою "Хаа" позначено захисту. Смолу після відщеплення групи захисту будь-яку з товарних амінокислот, які можна припромивали п’ять разів диметилформамідом, п’ять дбати у вигляді продуктів приєднання до смоли разів метанолом і знову п’ять разів диметилфорМВН А. Абревіатурами "Yaa" та "Zaa" позначено мамідом. До смоли з відщепленою групою захисбудь-яку з товарних амінокислот. ту (1 еквівалент) приєднували Fmoc-D-Leu-OH, Сполуки згідно з цим винаходом можна одевикористовуючи розчин Fmoc-D-Leu-OH (3 еквіржати шляхом твердофазного пептидного синтеваленти) в 1мл диметилформаміду, який містив зу (ТФПС, англ. SPPS) за загальною методикою, карбодіімід (3 еквіваленти) і гідроксибензотриаописаною нижче: Смолу МВНА з приєднаною зол (3 еквіваленти). Для досягнення коефіцієнту амінокислотою Хаа (далі смола МВНА-Хаа) відсполучення, достатнього для позитивного реважують і переносять у шприц, обладнаний фільзультату тесту Кайзера, може виявитися необхідтром з пористого скла. Смолу піддають попереною друга або третя стадія сполучення з розчидньому набуханню в диметилформаміді, а потім нами Fmoc-D-Leu-OH. Повторювали стадії відщеплюють групу захисту при кінцевому атомі відщеплення групи Fmoc та сполучення з аміноазоту (N-термінальну груп у захисту) шля хом реакислотою для приєднання Fmос-N-(4,4кції з 30%-ним розчином піперидину в диметилбіфеніл)аланіну. На кінцевій стадії сполучення формаміді протягом 30 хвилин. Видаляють роззастосовували розчин індолпіровиноградної кисчин, використаний для відщеплення групи лоти (5 еквівалентів), діізопропілкарбодііміду (5 захисту. Смолу після відщеплення групи захисту еквівалентів) та гідроксибензотриазолу (5 еквівапромивають п’ять разів диметилформамідом, лентів) в диметилформаміді і повторювали цю п’ять разів метанолом і знову п’ять разів диметистадію до досягнення позитивного результату лформамідом. Потім до смоли з відщепленою тесту Кайзера. Одержаний продукт, що містив групою захисту можна приєднати амінокислоту завершену пептидну послідовність на смолі, суYaa; для цього використовують розчин Yaa в дишили у вакуумі протягом не менше 6 годин, а метилформаміді, який містить по 3 еквіваленти потім розщеплювали шляхом оброблення протяYaa, карбодіімідного агента сполучення та гідрогом 2,5 годин або 1мл суміші трифтороцтової ксибензотриазолу (ГОБТ, англ. НОВТ). Для досякислоти з водою (95/5), або такою ж кількістю гнення коефіцієнту сполучення, достатнього для свіжоприготованого розчину 90% трифтороцтової позитивного результату тесту Кайзера, можуть кислоти, 5% тіоанізолу, 3% етандитіолу, і 2% анівиявитися необхідними кілька послідовних стадій золу. Відщеплений продукт виділяли або ліофілісполучення з розчинами Yaa. Стадії відщеплення зацією з води, або розтиранням з діетиловим N-термінальної групи захисту та сполучення з ефіром. Чистоту продукту визначали способом Yaa можна повторити для приєднання третьої тонкошарової хроматографії. 1 амінокислоти Zaa. На кінцевій стадії сполучення Н ЯМР (400Мгц, d6-DMSO): δ 6,5-7,7)m, 14Н), застосовують розчин кетокислоти, карбодііміду та 4,5 (m, 1Н), 4,1 (m, 2H), 3,4 (m, 2H), 3 (m,H), 2,7 гідроксибензотриазолу в диметилформаміді і (m, 1H), 1,1-1,5 (m, 3H), 0,5-0,9 (m, 6H). повторюють цю стадію до позитивного результаПриклад 3 ту тесту Кайзера. Одержаний продукт, що містить У цьому прикладі сполуку (3'завершену пептидну послідовність на смолі, суіндолпіровиноградна кислота)-N-біфенілаланін-Dшать у вакуумі протягом не менше 6 годин, а поLeu-Asp-OH одержували за методикою, відомою тім розщеплюють шляхом оброблення на протязі як Chiron Mimotopes Pin Technology. 2,5 годин або сумішшю трифтороцтової кислоти з Залишок першої амінокислоти Хаа приєднуводою (95/5), або свіжоприготованим розчином вали до блоків смоли з прищепленими 490% трифтороцтової кислоти, 3% етандитіолу, (гідроксиметил)феноксиацетамідогрупами 5% тіоанізолу і 2% анізолу. Відщеплений продукт (5,7мкмоль/блок). (тут блок - частинка смоли певвиділяють або ліофілізацією з води, або розтиного розміру, форми й маси). Для цього кожний ранням з діетиловим ефіром. Чистоту продукту блок витримували протягом 2 годин у 800мкл визначають способом тонкошарової хроматограрозчину для сполучення (100мМ амінокислоти, фії (TLC). Для підтвердження складу й будови 100мМ DIC (діізопропілкарбодііміду), 10мМ DMAP продукту зразки пептидів аналізують методом в суміші диметилформаміду з хлористим метипротонного ядерного магнітного резонансу леном, 1:4). Потім блоки промивали протягом 5 (1H NMR). хвилин диметилформамідом, двічі по 5 хвилин Приклад 2 метанолом і сушили на повітрі протягом 15 хвиУ цьому прикладі за методикою, описаною в лин. Відщеплення групи захисту Fmoc виконуваПрикладі 1, одержували сполуку (3’ ли шляхом оброблення 800мкл 20%-ного розчину індолпіровиноградна кислота)-N-біфенілаланін-Dпіперидину в диметилформаміді протягом 30 Leu-Asp-ОН. хвилин. Повторно промивали блоки (1 раз диме 59 71559 60 тилформамідом, двічі метанолом) і сушили їх на подальших процедурах. Чистоту продукту оцінюповітрі (15 хвилин). Приєднували залишок другої вали за даними ТШХ. Вихідні продукти випробоамінокислоти Yaa шляхом оброблення розчином вували шля хом сумісного хроматографування з 100мМ Yaa, 100мМ діізопропілкарбодііміду, автентичними зразками, одержаними згідно з 100мМ гідроксибензотриазолу та індикатора Прикладом 1. бромфенолового синього в диметилформаміді до Приклад 4 зникнення синього забарвлення поверхні блока. Сполуки згідно з цим винаходом, одержані за В разі необхідності стадію приєднання повторюметодикою, даною в Прикладі 1, випробовували, вали. Потім повторювали цикл промивання та як описано нижче. Каталітичний блок 20S протевідщеплення групи захисту Fmoc. Приєднували асоми (відомої також як мультикаталітичний комнаступну амінокислоту Zaa шляхом повторення плекс протеїназ) виділяли з мозку крупної рогатої стадій сполучення та промивання, описаних стохудоби і очищали до однорідності відомим спосовно до Yaa; в разі необхідності стадію приєдсобом (описаним у роботі Уїлка та Орловського нання повторювали. Останній залишок індолпіроWilk S and Orlowski Μ., 1983 /. Neurochem. 40, виноградної кислоти приєднували, застосовуючи 842). Активність комплексу відносно хімотрипсину розчин (100мМ) 15 еквівалентів кислоти, 15 еквівимірювали по посиленню флуоресценції після валентів діізопропілкарбодііміду і 15 еквівалентів розщеплення субстрату пептиду сукцинілгідроксибензотриазолу в диметилформаміді з лейцин-лейцин-валін-тирозін-7-аміно-4додаванням індикатора бромфенолового синьометилкумарину. Стандарт для проби in vitro місго. В разі необхідності стадію приєднання повтотив 2мкг протеасоми 20S, 0,1-100мкг/мл інгібітора рювали. Після остаточного промивання блоки протеасоми в 200мкл 50-мМ розчину HEPES з оранжевого кольору виймали з тримачів і для добавкою 0,1% додецилсульфату натрію, рН 7,5. розщеплення обробляли кожний блок окремо у Протеолітичну реакцію ініціювали додаванням пластикових пробірках для центрифуг місткістю 50мкМ флуорогенного субстрату пептиду і ви2мл свіжоприготованим розчином 90% трифтотримували суміш протягом 15 хвилин при 37°С роцтової кислоти, 5% тіоанізолу 3% етандитіолу, і Припиняли реакцію додаванням 100мкл 100-мМ 2% анізолу (1,5мл) протягом 2,5 годин. Виймали ацетатного буфера, рН 4,0. Швидкість протеолізу блоки з пробірок і випаровували суміш майже прямо пропорційна кількості вивільненого амінонасухо в потоці азоту. Розтирали залишок з діеметилкумарину, яку вимірювали способом флуотиловим ефіром і центрифугували кожну пробірресцентної спектроскопії (довжина хвилі збуку. Цю операцію повторювали з кожною пробірдження 370нм, випромінювання 430нм). кою тричі. Осаджені пептиди збирали, Результати випробувань інгібіторів протеаліофілізували, зважували і використовували в соми 20S подано в Таблиці II. Таблиця II Значення ІС 50 для інгібування активності протеасоми 20S відносно хімотрипсину Номер сполуки 1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 ІС50, мкг/мл 2 10 10 >10 10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 10 10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 Номер сполуки 3 105 106 107 108 109 110 111 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 ІС5о, мкг/мл 4 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 10 10 10 10 10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 >10 10 10