Спосіб визначення антиоксидантної активності забарвлених рослинних екстрактів in vitro

Реферат: Спосіб визначення антиоксидантної активності рослинних екстрактів, що передбачає оцінку антиоксидантної активності, причому спектрофотометрично визначають зміни оптичної густини досліджуваних екстрактів в модельній тест-системі при довжині хвилі 340 нм з урахуванням власного забарвлення рослинних екстрактів, порівнюють з контролем і визначають антиоксидантну активність за ступенем інгібування супероксидрадикалу. UA 106506 U (12) UA 106506 U UA 106506 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель, що заявляється, належить до фармації, і може використовуватися для визначення антиоксидантної активності рослинних екстрактів на моделі in vitro. На сьогоднішній день доведено взаємозв'язок між вільнорадикальним окисненням та розвитком більшості патологічних процесів - цукрового діабету, серцево-судинних захворювань тощо. Вирішальну роль у даному відношенні мають активні форми кисню, зокрема збільшена генерація супероксиданіону, що у надлишку пошкоджують біомолекули, включаючи білки, ліпіди, РНК і ДНК. Для попередження та корекції оксидативного стресу широко застосовуються антиоксиданти природного походження. Антиоксидантні властивості лікарської рослинної сировини пояснюють наявність флавоноїдів та інших поліфенольних сполук, які здатні інактивувати активну форму кисню шляхом зв'язування і утворення неактивних форм, а також впливом на роботу ферментних систем, блокуючи ксантиноксидазу, НАДФН-оксидазу циклооксигеназу, протеїнкіназу С тощо [1]. Таким чином, актуальним питанням є визначення антиоксидантної активності рослинних екстрактів. Відомий спосіб визначення антиоксидантної активності методом неферментного ініціювання вільнорадикального окиснення in vitro [2]. Але даний спосіб дозволяє оцінити лише кінцевий результат попередження оксидативно го стресу. Найбільш близьким за технічним вирішенням до способу, що заявляється є спосіб визначення антиоксидантної активності S-заміщених хіназоліну в умовах інгібування супероксидрадикала in vitro [3], який виступає як прототип. Однак, цей спосіб не дозволяє оцінити антиоксидантну активність забарвлених рослинних екстрактів. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі, що передбачає оцінку антиоксидантної активності рослинних екстрактів, згідно з корисною моделлю, визначають спектрофотометрично зміни оптичної густини досліджуваних екстрактів в модельній тестсистемі аутоокиснення адреналіну до адренохрому в лужному середовищі, і визначають антиоксидантну активність за ступенем інгібування супероксидрадикалу. Основною відмінністю способу, що заявляється, є визначення оптичної густини досліджуваних екстрактів при довжині хвилі 340 нм з урахуванням власного забарвлення рослинних екстрактів. Переваги цього способу: простота в проведенні досліджень і визначенні показників. Технічний результат, який досягається шляхом вирішення задачі, дозволяє отримати високочутливий, специфічний спосіб визначення рівня антиоксидантної активності. Спосіб здійснюється наступним чином: Як систему, яка продукує супероксидрадикал, беруть аутоокиснення адреналіну в адренохром у лужному середовищі. Розчин адреналіну готують на бідистильованій воді, використовуючи 0,1 % розчин адреналіну гідротартрату в перерахунку на 40,5 мг адреналіну. До мірної колби на 20 мл вносили 4,5 мл 0,1 % розчину адреналіну і додавали 10 мл бідистильованої води, після чого по 0,5-1 мл 0,1н НСl, доводили рН до 2.0, потім бідистилятом доводили об'єм до 20 мл. До кювети біохімічного аналізатора SINNOWA BS-3000M, вносили 0,5 мл 0,15 М карбонатного буфера рН 10,2, який містить 500 мг трилону Б на 1 л об'єму. Після цього вносили -3 -6 -9 речовини в концентрації 10 , 10 , 10 моль/л об'ємом 0,125 мл. Реакцію запускали внесенням 0,1 мл розчину адреналіну. Оптичну густину визначали при довжині хвилі 340 нм проти карбонатного буфера. Експериментально було підтверджено, що утворення адренохрому в реакцій аутоокислення адреналіну є максимальною в діапазоні хвиль 330-365 нм [4]. Інтенсивність наростання оптичної густини значно вища при 340 нм - середній величині в даному діапазоні, ніж при 480 нм. У роботі ставили три проби: дослідну, куди вносили досліджувану речовину, контрольну, яка не містила досліджувану речовину, і холосту - буферований розчин екстрактів без додавання адреналіну з метою врахування власного забарвлення екстрактів та препаратів. Розрахунок антиоксидантної активності досліджуваних екстрактів та препаратів проводили за формулою: Dк  (D  Dx ) AOA   100 Dк , де AOA - % антиоксидантної активності; Dк - оптична густина контрольної проби; D - оптична густина дослідної проби; Dx - оптична густина холостої проби (без внесення адреналіну) Приклад конкретного застосування. 1 UA 106506 U Антиоксидантна активність (у %) рослинних екстрактів Нурегісит perforatum (L.) та Citrullus Colocynthis (L.) Shrad в залежності від концентрації Таблиця 1 -3 -6 10 Екстракт D Dx -9 10 AOA, % D Dx 10 AOA, % D Dx AOA, % 0,0652± 0,0025 0,4063± 0,4035± 0,0724± 0,0678± 0,0655± 0,0586± Нурегісит perforatum (L.) 95,78 92,91 89,46 0,0039 0,0032 0,0042 0,0044 0,0047 0,0032 Citrullus Colocynthis (L.) 0,1386± 0,1127± 0,0665± 0,0591± 0,0655± 0,0558± 60,39 88,62 85,21 Shrad. 0,0034 0,0032 0,0042 0,0023 0,0042 0,0023 Контроль 5 10 15 20 25 За результатами, наведеними у таблиці 1, видно, що досліджувані екстракти проявляють високу антиоксидантну активність у діапазоні всіх концентрацій, попереджуючи утворення супероксидрадикалу на моделі гальмування аутоокислення адреналіну до адренохрому. На базі НДІ експериментальної та клінічної медицини Національного медичного університету імені О.О. Богомольця запропонованим способом було проведено вивчення антиоксидантної активності рослинних екстрактів Hypericum perforatum (L.) та Citrullus Colocynthis (L.) Shrad in vitro. Таким чином: даний спосіб досить точний для визначення антиоксидантної активності забарвлених рослинних екстрактів. Джерела інформації: 1. Chemical and molecular mechanisms of antioxidants: experimental approaches and model systems/ Jian-Ming Ltia, P. H. Lin, Q. Yao, С Chen //J Cell Мої Med.-2010-N14(4).-P.840-860. 2. Богуцька О.ПЄ.П Дослідження антиоксидантної активності лікарського препара ту на основі продуктів бджільництва.// Український біофармацевтичний журнал 2011, № 4(15). - С.1215. 3. Моргунцова С.А. Антиоксидантна активність S-заміщених хіназоліну в умовах інгібування супероксидрадикала in vitro.// Вісник Запорізького національного університету.-2009. -№1. С.161-165. 4. Сирота Т.В. Новый подход в исследовании реакции автоокисления адреналина: возможность полярографического определения активности супероксиддисмутазы и антиоксидантных свойств различных препаратов.// Биомедицинская химия. 2012.-Т. 58, вып. 1.С. 77-87. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 Спосіб визначення антиоксидантної активності рослинних екстрактів, що передбачає оцінку антиоксидантної активності, який відрізняється тим, що спектрофотометрично визначають зміни оптичної густини досліджуваних екстрактів в модельній тест-системі при довжині хвилі 340 нм з урахуванням власного забарвлення рослинних екстрактів, порівнюють з контролем і визначають антиоксидантну активність за ступенем інгібування супероксидрадикалу. Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2