Спосіб визначення вмісту загального холестеролу у м’ясі, яйцях та інших продуктах тваринництва

Реферат: Спосіб визначення вмісту загального холестеролу у м'ясі, яйцях та інших продуктах тваринництва ферментативним методом, в якому пробопідготовка дослідного зразка, а саме для екстракції холестеролу з проб використовується охолоджений ацетон. UA 115101 U (12) UA 115101 U UA 115101 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі лабораторної практики, а саме до визначення якості продукції тваринництва і може бути застосована для покращення біологічної та екологічної безпеки. Холестерол міститься в клітинних мембранах всіх тварин. Близько 80 % холестеролу виробляється самим організмом. Холестерол забезпечує стабільність клітинних мембран. У печінці ефіри холестеролу з поліненасиченими жирними кислотами перетворюються в жовчні кислоти. З холестеролу утворюються вітамін D, стероїдні гормони (кортизол, альдостерон, естрогени і прогестерон, тестостерон). За останніми даними він грає важливу роль в діяльності синапсів головного мозку та імунної системи, включаючи захист від розвитку пухлин [2, 5]. Проте за надмірного його споживання надлишок холестеролу накопичується на стінках артерій, утворюючи бляшки, що звужують судини. Якщо бляшка досягла великих розмірів або ускладнилася наявністю тромбу, то вона може повністю перекрити просвіт артерії, що перешкодить крові безперешкодно просуватися по судинах. З цього моменту включається свого роду ланцюгова реакція: нестача крові веде до браку кисню й поживних речовин у тканинах, внаслідок чого вона відмирає. Якщо описане явище відбувається в серці - трапляється інфаркт міокарда, якщо в мозку - це загрожує інсультом [2, 6]. Особливу увагу звернуто на вміст холестеролу у продуктах харчування, особливо у м'ясі. Саме тому дослідження вмісту холестеролу в м'ясі та м'ясних продуктах, є актуальними. На сьогодні для екстракції холестеролу із тканин використовуються екстракція за методом Фолча (сумішшю метанолу та хлороформу), ефіром, хлороформом, бензолом. Для кількісного визначення використовують концентровану сірчану кислоту та оцтовий ангідрид, які на сьогодні знаходяться в обмеженому обігу, оскільки є прекурсорами [1]. В основу корисної моделі поставлена задача розробки простого та доступного способу визначення вмісту холестеролу у м'ясі, яйцях та інших продуктах тваринництва. Використання цього способу дає змогу об'єктивно визначати вміст холестеролу в пробах, що аналізуються з використанням доступних реагентів та тестових систем. Аналогами запропонованого нами способу є методи визначення холестеролу в екстрактах, які основані на реакції Залковського або на реакції з сумішшю формаліну та концентрованої сірчаної кислоти. Загально відомий також метод визначення загального холестерину в сироватці крові, оснований на реакції Лібермана-Бурхарда (метод Ілька) [1]. Найближчим аналогом запропонованого способу є ферментативний метод визначення холестеролу в крові [3]. Однак цей метод, а саме пропобідготовка, не дає можливості визначати вміст холестеролу у м'ясі, яйцях та інших продуктах тваринництва. Поставлена задача вирішується тим, що для екстракції холестеролу з дослідної проби використовується охолоджений ацетон, а для визначення його кількісного вмісту застосовуються комерційні тест-системи. Прилади і реактиви, що використовуються у запропонованому способі: ваги 4 класу точності, фотоелектроколориметр КФК-ЗМП, центрифуга на 3000 об./хв, автоматична водяна баня або термостат, що підтримують температуру +37±1 °C, кювети з довжиною оптичного шляху 10 мм, гомогенізатор лабораторний (або порцелянова ступка з товкачиком), центрифугальні пробірки, 3 піпетки місткістю 1; 2; 5 і 0,05 см , дистильована вода, ензимний реагент, калібрувальний розчин холестеролу. Дозволяється використовувати інші засоби вимірювальної техніки, допоміжне обладнання, реактиви та матеріали, які за характеристиками і якістю не гірше, зазначених. Виконання цього способу проводять таким чином. Зразок вагою 0,5 г гомогенізується з 1,0 3 см ацетону з температурою 3-5° С протягом 3-х хвилин. Для гомогенізації використовується лабораторний гомогенізатор. Екстракція холестеролу з отриманого гомогенату проводиться на льодяній бані 60 хвилин. Отриманий ацетоновий екстракт відділяють від зразка центрифугуванням при 3000 об./хв протягом 5 хвилин. У штатив поміщуються пробірки відповідно до кількості проб та додають ще по одній для 3 калібрувальної та холостої проб. У всі;пробірки наливають по 1,0 см ензимного реагенту, після 3 3 чого в дослідні проби додають по 0,01 см розчину що аналізується, в калібрувальну - 0,01 см 3 калібрувального розчину холестеролу, а в холосту - 0,01 см дистильованої води. Розчин у пробірці ретельно перемішують і витримують у термостаті при +37 °C протягом 10 хв або інкубувати 20 хв при температурі від +20 °C до +25 °C. Вимірюють оптичну щільність дослідної (E дос ) і калібрувальної (Eкал ) проб проти холостої проби. Остаточне забарвлення (рожевочервоне або бузкове) стабільне протягом 60 хв після закінчення інкубації за умови запобігання потрапляння прямого сонячного світла. Розрахунок ведуть за формулою (1): 1 UA 115101 U С 5 10 15 (E дос ) (Eкал )  5,17 ммоль/л, (1) де С - концентрація холестеролу в дослідні пробі, ммоль/л; E дос - оптична щільність дослідної проби, од оптичної щільності Eкал - оптична щільність калібрувальної проби, од оптичної щільності 5,17 - концентрація холестеролу в калібрувальному розчині, ммоль/л. Джерела інформації: 1. Антипова Л.В. Методы исследования мяса и мясных продуктов / Л.В. Антипова, И.А. Глотова, И.А. Рогов. - М.: Колос, 2001.-376 с. 2. Березов Т. Т., Коровкин Б. Ф. Б 48 Биологическая химия: Учебник.-3-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 1998.-704 с: ил. - (Учеб. лит. Для студентов мед. вузов). 3. Набори реактивів для визначення концентрації аналізів у біологічних рідинах (вуглеводневий і ліпідний обмін). - ТУ У 24.4-24607793-020-2003. - Свід. про держреєстрацію № 2219/2003, 4. Павловский П.Е., Пальмин В.В. Биохимия мяса. - М.: Пищевая пром-сть, 1975.-С. 265. 5. Холестерин // National Chemistry.-2013. - №2 (январь/февраль). - С. 39-42. 6. Clinical Biochemistry-An illustrated Color Text-5th ed / Allan Gaw at al // Elsevier Health Sciences-2013. - 175 p. 20 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 Спосіб визначення вмісту загального холестеролу у м'ясі, яйцях та інших продуктах тваринництва ферментативним методом, який відрізняється тим, що здійснюють пробопідготовку дослідного зразка, а саме для екстракції холестеролу з проб використовується охолоджений ацетон. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2