Спосіб отримання біогенних стимуляторів

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано в фармацевтической и парфюмерной промышленности, а также в медицинской практике. Известен способ получения биогенных стимуляторов - биологически активных веществ растительного происхождения путем размельчения сырья и последующего технологического процесса получения цельного продукта (А.с. СССР №1438800, Бюл. №43, 1988, с.33). Недостатком известного способа является невысокая эффективность регенераторных влияний биогенных стимуляторов, полученных из нативного сырья в виде части растения. Известен способ получения биогенных стимуляторов, основанный на предварительном выдерживании сырья в виде изолированных тканей растительного или животного происхождения в неблагоприятной среде (охлаждение, отсутствие освещения, денатурирующий консервант) для мобилизации адаптивных метаболических реакций в ответ на повреждение с последующим извлечением накопленных при этом биологически активных веществ (Филатов В.П. Тканевая терапия. - М., 1948). Продукты, образующиеся в изолированных тканях, например, в срезанных листках алоэ в условиях охлаждения и темноты, известные под общим названием "биогенные стимуляторы", применяются в широкой медицинской практике для неспецифической терапии различных заболеваний. Появление их, согласно концепции В.П. Филатова, рассматривается как результат адаптационных процессов в переживающих тканях. Недостаток известного способа состоит в том, что источником получения биогенных стимуляторов является изолированная часть организма - ткань животного или растительного происхождения. Например, препараты алоэ получены из свежих или высушенных листьев алоэ (Aloe aborescens), биоседа (Biosedum) - из консервированной свежей травы очистка большого (Sedum maximum), препараты плаценты - из ткани изолированной плаценты, полибиолин (Polybiolinum) -из ретроплацентарной и плацентарной сыворотки крови. То же относится к препаратам животного происхождения: румалону, плазмолу, стекловидному телу и мн. др. (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М., 1985. - Ч.2. - С.150 - 163). При этом как в количественном, так и, в особенности, качественном отношении структурнофункциональные превращения в изолированной ткани ограничены исключительно ее ресурсностью как части целого. Поэтому в случае получения лекарственных средств на основе биологически активных веществ из изолированных тканей именно из-за отсутствия регуляторных влияний на них со стороны материнского организма в значительной мере снижена терапевтическая эффективность биогенных стимуляторов, в особенности в отношении регенераторных процессов в больном организме. Задача состоит в том, чтобы увеличить выход биологически активных веществ - биогенных стимуляторов из сырья растительного происхождения с направленными свойствами преимущественно стимулирующего влияния на процессы регенерации в поврежденных тканях больного организма человека и животных. При поиске технического решения, прежде всего, было принято во внимание свойство клубней картофеля интенсивно восстанавливать поврежденную кожуру при условии сохранения связи клубней с материнским растением; обычно в течение 5 - 10 дней. Кроме того, выбор клубней картофеля в качестве сырья для получения биогенных стимуляторов обусловлен: особенностями химического состава клубней; 2) особенностями их фармакологических свойств; 3) существующим опытом практического использования препаратов картофеля в лечебной практике; 4) технологичностью накопления эндогенных биологически активных веществ. 1. Из особенностей химического состава клубней картофеля следует отметить то, что в ни х содержится около 25% сухого ве щества. Кроме крахмала, на долю которого приходится 80 - 85%, в картофеле содержится до 3% белка, вмещающего 14 из 20 незаменимых аминокислот. Клубни богаты витаминами: аскорбиновая кислота (10 - 54мг%), почти весь комплекс витамина B (тиамин, рибофлавин, пиридоксин, фолиевая и никотиновая кислоты), каротиноиды, токоферолы, никотинамид, биотин и противоязвенный фактор - витамин U и др. На долю минеральных веществ и микроэлементов приходится до 1% сухого вещества : соединения калия, фосфора, кальция, железа, серы, марганца, иода, никеля, кобальта, меди и др. Кроме того, в клубнях имеются стерины (стигмастерин, кампестерин, ситостерин), липиды и органические кислоты (кофейная, хлорогенная, лимонная, щавелевая и яблочная). Наконец, в кожуре клубней, как впрочем, и в надземной части растения, содержатся глюкоалкалоиды, в частности соланин и чакронин, фармакодинамические эффекты которых в последние годы вызывают особый интерес у специалистов. 2. Особенности фармакодинамических эффектов определяются входящими в растение химическими соединениями. Например, с действием ацетилхолина связывают гипотензивное влияние сока клубней картофеля. Этот же эффект обусловлен выраженным Naуретическим влиянием избытка ионов калия. Ряд феноменов связывают с действием алкалоида соланина, который по своему строению близок к кортикостероидам и сердечным гликозидам. В малых дозах соланин обеспечивает стойкое продолжительное снижение артериального давления, увеличивает амплитуду и снижает частоту сердечных сокращений, обусловливает противовоспалительный, болеутоляющий и гипосенсибилизирующий эффекты. 3. Существующий опыт применения картофеля в лечебной практике обусловлен имеющимся, главным образом, в клубнях разнообразных биологически активных веществ, микроэлементов, прочих химических соединений, обладающих лечебным действием. Прежде всего, следует отметить ранозаживляющее действие картофельного сока, его антиульцерозный эффект. 4. Технологичность процесса накопления биологически активных веществ обусловлена наличием промышленных те хнологий выращивания картофеля на жидких питательных средах, сравнительно быстрым процессом роста и коротким периодом времени от момента повреждения клубня до накопления в нем биологически активных веществ, термостабильностью компонентов, обладающих свойствами биогенных стимуляторов, а следовательно - технологичностью их извлечения из дезинтегрированного сырьевого субстрата. Исходя из сказанного, одним из путей решения поставленной задачи представляется использование в качестве источника сырья для получения биогенных стимуляторов клубней картофеля, предварительно (до отделения от корневой системы материнского растения) поврежденные, например, путем механического надреза. В силу эволюционно выработанных механизмов регенерации материнское растение картофеля обладает значительно большей ресурсностью адаптивных механизмов, по сравнению с изолированной частью его, которые целостный организм мобилизирует в ответ на повреждение части и направляет к очагу повреждения, в данном случае в клубни. Перечень микрофотографий. Микрофото 1. Поврежденная дерма, нарушение микроциркуляции, лейкоцитарная инфильтрация межуточной ткани на третьи сутки при ожогах IIIА степени. Окраска гематоксилин-эозином ´ 200. Микрофото 2. Незначительный отек дермы и локальные очаги воспалительного процесса на 6 сутки при ожогах IIIА степени у больных с местным применением мази с биогенным стимулятором (опытная группа). Окраска гематоксилин-эозином ´ 90. Микрофото 3. Отграничение в ожоговой ране некротизированной ткани от глубоких слоев основы кожи демаркационным валом на 10 сутки у больных при лечении общепринятым методом (вторая контрольная группа), слабо выраженная грануляционная ткань. Окраска гематоксилин-эозином ´ 90. Конкретно поставленная в задаче цель достигается тем, что поврежденные, например, путем механического надреза (частичного отсечения), клубни картофеля выдерживают на корню в грунте или иной питательной среде еще в течение 5 - 10 дней, после чего отделяют от корневой системы, тщательно промывают водой, подсушивают до удаления влаги на поверхности клубней и подвергают те хнологической переработке. Критерием зрелости клубней в качестве сырья для получения биогенных стимуляторов служит образование молодой кожуры в местах надреза как показатель завершенности локального (на уровне клубня) процесса регенерации, а следовательно, и максимального накопления эндогенных факторов регуляции регенераторных сдвигов в переживающем растительном организме. Пример использования способа 1. Получение сырья и приготовление субстрата, содержащего биогенный стимулятор. Поврежденные путем частичного отсечения клубни картофеля выдерживали на корню в грунте в течение 7 дней, после чего извлекали из почвы, отделяя от корневой системы, тщательно промывали водой, высушивали до полного удаления влаги на поверхности клубней и, не очищая от кожуры, подвергали их измельчению на терке из пластмассы. Полученную массу отстаивали в течение 30 минут в стеклянной посуде для отделения крахмала, который выпадал в осадок. Надосадочную мезгу отделяли от крахмала, разбавляли равным объемом 96 спирта, настаивали при комнатной температуре (18 - 21°C) в темной посуде в течение 14 дней, после чего центрифугированием отделяли от жидкой части. Полученную спиртовую настойку использовали в качестве базового субстрата для получения лекарственного средства на основе биогенного стимулятора. Аналогичным способом готовили спиртовую настойку из размельченного неповрежденного картофеля для проведения контрольных исследований. 2. Приготовление лечебной мази с биогенным стимулятором. К смеси равных частей ланолина с вазелином (по 50г) при тщательном растирании постепенно добавляли 25мл спиртовой настойки измельченного растительного субстрата. Полученную мазь сохраняли в холодильнике. Аналогичным образом готовили мазь из спиртовой настойки неповрежденного картофеля для проведения контрольных исследований. 3. Клиническое применение мази с биогенным стимулятором. С лечебной целью мазь с биогенным стимулятором применяли у 16 больных с ожогами II - IIIАБ степени, сравнивая с результатами лечения 15 больных аналогичной патологией с применением контрольной мази (первая контрольная группа) и результатами традиционного лечения 14 больных указанной степенью ожоговой травмы (вторая контрольная группа). На 3 - й день проводили тщательный туалет ран с последующим наложением на раны мазевых повязок с биогенным стимулятором. Перевязки проводили ежедневно. На струп мазь не накладывали до его полного отторжения. У больных опытной группы в первые же часы после применения мази отмечали улучшение общего состояния. Начиная с 5 - го дня после ожоговой травмы, снижались проявления интоксикационного синдрома: температура тела в среднем на 0,5 - 0,7°C у них была ниже, чем у больных обеих контрольных гр упп. При этом, лейкоцитоз у больных опытной группы был ниже на 6 - 9% (P < 0,05) по сравнению с больными первой и на 10 - 15% (P < 0,05) - во второй контрольной группе. Во время перевязок визуально отмечена активная эпителизация ран, отсутствие гнойного отделяемого. Полная эпителизация ран II - IIIА степени наступала на 15 + 1 день, в то время как больных 1 - й контрольной группы - на 17 + 1 дней (P < 0,05), а во 2 - й контрольной группе - на 19 + 1 день (P < 0,05). Применение мази при лечении ожоговых ран IIIБ степени после отторжения струпа способствовало очищению ран, уменьшению гнойного отделяемого, активации краевой эпителизации, появлению грануляционной ткани, что позволило на 20 - 21 день после ожоговой травмы проводить первую а утодермопластику. У больных обеих контрольных групп аналогичный этап лечения проводили на 23 - 24 день после травмы. Биопсию ран проводили на 6 и 10 сутки после ожоговой травмы. Микроскопически на 6 сутки после ожоговой травмы отмечалось глубокое поражение эпидермиса, отечность и базофилия субэпидермального слоя основы кожи, микроциркуляторные расстройства в виде стаза в гемокапиллярах, а в сосудах более крупного калибра - агрегация эритроцитов, скопление плазмы, очаговая гомогенизация сосудистой стенки. Поверхностные слои дермы весьма инфильтрированы лейкоцитами с признаками их распада (микрофото 1). В биопсийном материале больных опытной группы поверхность ран покрыта экссудатом, который сорбируется из раны. В экссудате выраженный некротический детрит из распавшихся лейкоцитов. Обращает внимание отсутствие реакции со стороны каких-либо других клеточных элементов -макрофагов, гигантских клеток и пр., что указывает на то, что компоненты мази не инфицируют гранулематозного воспаления. Это подтверждается в материалах более поздних сроков наблюдения за раневым процессом и его исходах. Воспалительный процесс под влиянием мази с биогенным стимулятором приобретает четко выраженный локальный характер и распространяется на глубокие слои дермы, ограничивает зону гнойной инфильтрации. Микроциркуляторные расстройства и отек тканей дермы выражены в значительно меньшей мере, чем у больных 1 - й контрольной группы (микрофото 2). На 10 сутки после термической травмы у больных 2 - й контрольной группы при микроскопическом анализе ткани поверхностных слоев ожоговой раны некротизированы и отграничены от более глубоких слоев дермы демаркационным валом, состочщим из сегментоядерных лейкоцитов, часть из которых в состоянии распада. Местами лейкоцитарная инфильтрация распространяется на более глубокие слои нередко достигая жировой клетчатки, что свидетельствует о прогрессировании патологического процесса (микрофото 3)., Напротив, у больных, леченых с применением мази с биогенным стимулятором (опыт), в эти же сроки поверхность раны покрыта фибринозно-гнойным экссудатом. Значительная часть раны покрывается эпителием как за счет краевой эпителизации, так и путем пролиферации эпителия кожных придатков - сальных желез, волосяных фолликулов. Пласт эпителия стелится по молодой соединительной ткани дермы, отделяя свернувшийся фибринозный экссудат, инфильтрованный распавшимися лейкоцитами кнаружи, как-бы отторгая его. Приведенный пример свидетельствует о высокой клинической эффективности лекарственного средства, содержащего биогенный стимулятор, применение которого для лечения Ожеговых ран обеспечивает интенсивное формирование тканевого регенераторного процесса. Возможные направления разработки технологии приготовления лекарственных препаратов из клубней картофеля с предварительным обогащением их эндогенными биологически активными веществами: 1. Консервированный сок клубней картофеля для перорального применения с лечебнопрофилактической целью, например, в гастроэнтерологической практике. 2. Экстракты из мезги для парентерального применения с целью стимуляции тканевой регенерации при язвенно-некротических патологических процессах. 3. Мази и линименты на основе экстракта из клубней картофеля с добавлением некоторых компонентов сухи х веществ для лечения воспалительных заболеваний, включая ожоговое повреждение кожи и слизистых, п утем стимуляции ранозаживляющих механизмов. 4. Шампуни, лосьоны и прочие средства, содержащие биогенные стимуляторы для укрепления волос на основе экстракта и други х компонентов клубней и зеленой части картофеля. 5. Бальзамы в виде тонизирующи х напитков, оказывающих благотворное влияние на механизмы регуляции сосудистого тонуса. 6. Кремы питательные на основе биогенных стимуляторов регенераторной направленности для профилактики раннего увядания кожи.