Спосіб одержання яєчного лецитину

Реферат: UA 74078 U UA 74078 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до хімії природних з'єднань, а саме до способу одержання лецитину (фосфатидилхоліну), і може бути використаною в медицині для виготовлення лікарських та діагностичних засобів. Відомий спосіб одержання лецитину з жовтків курячих яєць шляхом обробки ацетоном при температурі від -10 до -12 °C, екстракції етанолом, фільтрації, осадження 50 % водяним розчином хлориду кадмію, переосадження з хлороформу етанолом, що містить хлорид кадмію, розчинення осаду в хлороформі й обробки 30 % розчином етанолу [Регламент производства № 309-91 Харьковского предприятия по производству бактерийных препаратов. Харьков, 1991]. Спосіб має ряд недоліків: значна втрата виходу цільового продукту за рахунок обробки теплим ацетоном і неповної екстракції продукту етанолом, низька стандартність, окисленість жирних кислот, використання токсичного хлористого кадмію для осадження і переосадження лецитину. Відомий також спосіб одержання лецитину з жовтків курячих яєць, що включає обробку їх ацетоном, екстракцію етанолом, осадження хлоридом кадмію, переосадження етанолом і обробку 30 % розчином етанолу, який відрізняється тим, що обробку ацетоном проводять при температурі від -20 до -25 °C, а екстракцію етанолом - при температурі 24-28 °C [Патент України № 19697 С1, Опубл. 25.12.1997, Бюл. № 6]. Спосіб спрямований на рішення наступних задач: підвищення виходу цільового продукту за рахунок зниження втрат при обробці ацетоном і екстракції етанолом. Спосіб має ряд недоліків: використання токсичного хлористого кадмію для осадження і переосадження лецитину, значна кількість етанолу, що підвищує вартість лецитину. Відомий також спосіб одержання лецитину з жовтків курячих яєць, що включає обробку їх ацетоном, екстракцію сумішшю етанолу і хлороформу, осадження хлоридом кадмію, переосадження етанолом, що містить 50 % водяний розчин кадмію й обробку 30 % розчином етанолу, який відрізняється тим, що знежирені ацетоном жовтки промивають охолодженим етанолом, а екстракцію лецитину проводять сумішшю етанолу і хлороформу [Патент України №41280 А61К 35/48, Опубл. 12.05.2009, Бюл. № 9]. Даний спосіб одержання лецитину є найбільш близьким до того, що заявляється, за технічною суттю та результатом, який може бути досягнутим, тому його вибрано як найближчий аналог. Недоліком цього способу, а також двох попередніх способів є використання отрутного, токсичного 50 % розчину хлористого кадмію для осадження і переосадження лецитину, а також використання великої кількості етанолу, що призводить до подорожчання технології виробництва лецитину. У зв'язку з тим, що в останні роки на основі лецитину виготовляють не тільки діагностичні препарати, такі як кардіоліпінові антигени для діагностики сифілісу (РМП і РСК), але і лікарські ліпосомальні препарати, то використання лецитину, у якому можуть знаходитися залишки токсичного кадмію, небажано. За токсичністю кадмій не поступається ртуті і миш'якові. З'єднання кадмію діють пригнічуючи на нервову систему, уражають дихальні шляхи і викликають зміни внутрішніх органів [Софронов П.В. Токсикологическая оценка сочетанного воздействия кадмия хлорида и Т-2 токсина на животных и применение бентонита в качестве лечебно-профилактического средства: Автореферат диссертации. 2008]. В основу корисної моделі поставлено задачу зменшення токсичності лецитину, можливість його використання для виробництва лікарських ліпосомальних препаратів, а також підвищення якості продукту за рахунок відсутності домішок хлористого кадмію, зменшення кількості етанолу за рахунок використання петролейного ефіру для переосадження лецитину. Задача вирішується тим, що у відомому способі одержання яєчного лецитину, що включає обробку жовтків курячих яєць ацетоном, екстракцію сумішшю етанолу і хлороформу, осадження та кількаразове переосадження етанолом з наступною обробкою 30 % розчином етанолу, згідно з корисною моделлю, лецитин осаджують і 4 рази переосаджують 40 % водним розчином хлористого цинку, а як розчинник використовують петролейний ефір. Технічний ефект корисної моделі, а саме осадження лецитину 40 % водним розчином хлористого цинку й переосадження лецитину етанолом, що містить 40 % водний розчин хлористого цинку з петролейного ефіру, а також зменшення кількість етанолу при переосадженнях за рахунок заміни хлороформу іншим розчинником, а саме петролейним ефіром, забезпечений сукупністю та порядком дій способу, який заявляється. При використанні зазначеного способу вихід цільового продукту не зменшується, а наявність токсичного хлористого кадмію відсутня. Це досягається тим, що етанольно-хлороформний розчин лецитину, отриманий після фільтрації, осаджують 40 % розчином хлористого цинку і осад переосаджують 4 рази етанолом, що містить хлорид цинку з петролейного ефіру лецитину. Зменшення кількості спирту робить технологію одержання лецитину більш рентабельною. 1 UA 74078 U 5 Цинк нетоксична речовина і в даний час багато виробників включають цинк до складу вітамінно-мінеральних комплексів у профілактичних дозах [Е.М. Коренева Металлы как факторы гипофертильности// "Медицинские аспекты здоровья женщины" 2010. - № 3/1. - С. 510]. Переваги способу, що заявляється, наведені в табл. Таблиця Переваги способу, що заявляється, у порівнянні з найближчим аналогом Показники наявність токсичного хлористого кадмію кількість домішок в % кількість етанолу на 30 яєць у літрах 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Спосіб, що заявляється відсутній 5-6 5,15 Найближчий аналог присутній 6-8 14,3 Як видно з наведених у табл. 1 даних, використання хлористого цинку для осадження й переосадження лецитину збільшує безпеку одержання лецитину унаслідок відсутності токсичного хлористого кадмію. Крім того, за рахунок заміни хлороформу петролейним ефіром зменшується кількість етанолу при переосадженнях у 2,8 разу. При використанні зазначеного способу вихід цільового продукту не зменшується при зменшенні кількості домішок. Спосіб здійснюють наступним чином: Жовток курячих яєць подрібнюють гомогенізацією в ацетоні при температурі від -20 °C в перебігу 3 хв. Процес повторюють 7 разів. Потім знежирений яєчний жовток промивають охолодженим до 0-2 °C етанолом і екстрагують сумішшю етанол + хлороформ у співвідношенні 17,5:0,5 при температурі 24 °C в атмосфері інертного газу протягом 1,5 години. Розчин, отриманий після фільтрації, осаджують 30-35 мл хлоридом цинку і осад переосаджують 4 рази етанолом, що містить 6-8 мл хлориду цинку з 150 мл петролейного ефіру. Осад розчиняють у хлороформі й обробляють 30 % розчином етанолу. Ефективність способу ілюструють наступні приклади. Приклад 1. Яйця в кількості 30 шт. розбивають і відокремлюють білок від жовтка. Жовтки в кількості 0,6-0,9 кг змішують з ацетоном у кількості 600 мл, охолодженим до температури -20 °C, і подрібнюють при зазначеній температурі при 3000-4000 об./хв. протягом 3 хв. Отриману суміш фільтрують і до осаду додають 600 мл охолодженого до температури -20 °C ацетону, і процес повторюють. Обробку ацетоном проводять ще 6 разів. Отриманий порошок яєчного жовтка промивають 0,5 л охолодженого до 0-2 °C етанолу, змішують з 1,8 л суміші етанол + хлороформ (17,5: 0,5). Екстракцію проводять при постійному перемішуванні (3 тис. об./хв.) і температурі 24 °C в перебігу 1,5 години в атмосфері інертного газу. Суміш відфільтровують і отриманий прозорий розчин ліпідів жовтого кольору в кількості 1,7 л охолоджують до температури 4-6 °C, потім додають 30 мл охолодженого до 4-6 °C 40 % водяного розчину хлориду цинку. Отриману суміш витримують при температурі 4-6 °C в перебігу 12-18 годин до повного осадження лецитину. Осад, що утворився, відокремлюють центрифугуванням при 3000 об./хв. і охолоджують до 0-4 °C в перебігу 40 хв. Отриманий осад розчиняють у 150 мл петролейного ефіру і до нього додають 0,75 л етанолу, що містить 18 мл 40 % водяного розчину хлориду цинку. Суміш витримують при температурі 4-6 °C в перебігу 30 хв., і осад відокремлюють центрифугуванням при 3000 об./хв. і охолоджують до 0-4 °C в перебігу 20 хв. Осад розчиняють у 150 мл петролейного ефіру і процес осадження етанолом повторюють. Осадження етанолом, що містить хлорид цинку, повторюють ще 3 рази. Осад лецитину розчиняють у 360 мл хлороформу і додають 360 мл 30 % розчину етанолу. Суміш перемішують і переносять на ділильну лійку. Нижній хлороформний шар відокремлюють і додають знову 360 мл 30 % розчину етанолу. Процес повторюють ще 5 разів. До отриманого хлороформного розчину лецитину додають 100 г зневодненого сірчанокислого натрію і витримують при температурі 4-6 °C в перебігу 10-12 годин. Розчин відокремлюють від солі фільтрацією, випарюють хлороформ. Вихід цільового продукту складає 26 г. Домішки складають 5 %. Індекс окислювання 0,08. Приклад 2. Яйця в кількості 30 шт. розбивають і відокремлюють білок від жовтка. Жовтки в кількості 0,6-0,9 кг змішують з ацетоном у кількості 600 мл, охолодженим до температури -20 °C, і подрібнюють при зазначеній температурі при 3000-4000 об./хв. протягом 3 хв. Отриману суміш фільтрують і до осаду додають 600 мл охолодженого до температури -20 °C ацетону, і процес повторюють. Обробку ацетоном проводять ще 6 разів. Отриманий порошок яєчного жовтка промивають 0,2 л охолодженого до 0-2 °C етанолу, змішують з 1,8 л суміші етанол + хлороформ (17,5: 0,5). Екстракцію проводять при постійному перемішуванні (3 тис. об./хв.) і температурі 2 UA 74078 U 5 10 15 24 °C в перебігу 1,5 години в атмосфері інертного газу. Суміш відфільтровують і отриманий прозорий розчин ліпідів жовтого кольору в кількості 1,7 л охолоджують до температури 4-6 °C, потім додають 35 мл охолодженого до 4-6 °C 40 % водяного розчину хлориду цинку. Отриману суміш витримують при температурі 4-6 °C в перебігу 12-18 годин до повного осадження лецитину. Осад, що утворився, відокремлюють центрифугуванням при 3000 об./хв. і охолоджують до 0-4 °C в перебігу 40 хв. Отриманий осад розчиняють у 150 мл петролейного ефіру і до нього додають 0,75 л етанолу, що містить 21 мл 40 % водяного розчину хлориду цинку. Суміш витримують при температурі 4-6 °C в перебігу 30 хв., і осад відокремлюють центрифугуванням при 3000 об./хв. і охолоджують до 0-4 °C в перебігу 20 хв. Осад розчиняють у 150 мл петролейного ефіру і процес осадження етанолом повторюють. Осадження етанолом, що містить хлорид цинку, повторюють ще 3 рази. Осад лецитину розчиняють у 360 мл хлороформу і додають 360 мл 30 % розчину етанолу. Суміш перемішують і переносять на ділильну лійку. Нижній хлороформний шар відокремлюють і додають знову 360 мл 30 % розчину етанолу. Процес повторюють ще 5 разів. До отриманого хлороформного розчину лецитину додають 100 г зневодненого сірчанокислого натрію і витримують при температурі 4-6 °C в перебігу 10-12 годин. Розчин відокремлюють від солі фільтрацією, випарюють хлороформ. Вихід цільового продукту складає 30 г. Домішки складають 6 %. Індекс окислювання 0,09. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 20 25 Спосіб одержання яєчного лецитину, що включає обробку жовтків курячих яєць ацетоном, екстракцію сумішшю етанолу і хлороформу, осадження та кількаразове переосадження етанолом з наступною обробкою 30 % розчином етанолу, який відрізняється тим, що лецитин осаджують і 4 рази переосаджують 40 % водним розчином хлористого цинку, а як розчинник використовують петролейний ефір. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3