Спосіб одержання похідних піранонів

Изобретение касается производных пиранонов о но щс сщ сн-з о н3с (в частности общей формулы, где пунктирные линии X и Z - две двойные или две одинарные связи), которые проявляют антигиперхолестеролемическуто активность и могут быть использованы в медицине. Цель - создание более активных веществ указанного класса. Получение новых производных пиранона в е дут из трет-бутилдиметилхлорсилана и соответствующего пиринона в среде растворителя в инертной атмосфере при комнатной температуре в присутствии имидазола. Затем обрабатывают клорангидридом кислоты в пиридине Е инертной атмосфере в присутствии 4-пирролидинпиридина как катализатора в растворителе при 100 С. Далее удаляют силильную группу при перемешивании реакционной смеси в тетрагидрофуране в присутствии 3 эквивалентов СН 3 С0ОН на эквивалент силильного производного. В сравнении с известным мевинолином новые вещества более активны з отношении ингибирования холестерина плазмы крови. „ ' „«-И0* t 1318162 Изобретение относится к способу связи отсутполучения новых производных пиранонов ствуют) 3, 1 Соединения быпи исследованы в форобщей формулы I ме соли натрия "разомкнутой" окси-кислоты. Они были приготовлены в виде растворов 4 мг/мл в 10% этанола. Перед проведением анализа препарации разбавляли в ДМСО-диметилсульфоксиде. HC f 0 определяли с использованием пяти концентраций для каждого ингибитора в анализе HMG - СоА-редуктазы. Изоляция и анализ на HMG-CoA-редуктазу. где пунктирные линии X и Z представляют две двойные связи или две одиМикросомы получали из печени крыс, нарные связи, проявляющих антигипер- t5 которым добавляли в корм холестирамин холестеролемическую активность. в течение 7 дней. HMG-СоА-редуктазу Целью изобретения является получеподвергали сольюбилиэации из микроние соединений, обладающих более высом методом Геллера и Шрюсбери и за-* сокой активностью. 20 т е м о ч и с т к е ч е е з с т а д и ю Соединение I, получаемое при помо» осаждения щи нового способа, может быть испольвторичным сульфатом аммония. Препарат зовано в качестве антигилерхолестефермента хранили при температуре 8 0 С в В11Де 1 O O f t J 1 п р о 6 и о н а о с т а ролемического агента для лечения ате" " росклероза, гиперлипемии и других повалась стабильной в течение по крайбодных заболеваний человека. Его мож- 25 ней мере 3 мес. Перед использованием но применять стоматическим или паренфермент активировали при 37 С в течение 30 мин. Осуществляли анализ,при теральным способом в виде капсул, котором реакционная смесь содержала таблеток, препаратов для инъекций. в пересчете на 100 (ил: 0,14 М буфеПредпочтительным является стоматический способ. Дозы могут варьироваться 30 ра фосфата калия, рН 6,8, 0,18 М КС1; 3 в зависимости от возраста пациента, » 5 мМ ЭДТК, рН 7,0, 10 мМ дитиотрейтола, альбумин бычьей сыворотки с его состояния, веса и других показаконцентрацией 0,1 мг/мл, 0,02ft Ки телей. Дневная доза для взрослого паt 1 4 CJHMG - СоА с указанной коицентрациента изменяется от 2 до 2000 мг (предпочтительно от Ю- ТОО мг) и мо- 35 « и е и * 0,3 ^ г частично очищенного жет быть разделена на три или четыфермента (удельная активность 100ре приема. Можно применять более вы150 нмоль мин'1 мг"1 ) с ингибитором. Спустя 5 мнн инкубирования с ингибисокие дозы. тором и НАДПГ при 3 7°С реакцию инициКак соединение II формулы 40 ировали при помощи 0,2 мМ НАДПГ (12,5 м, 5,5^ Ки/^моль). Реакцию прерывали при помощи 20 у. л 5 М раствора НС1. После дополнительного инкубирования в течение 15 мин при 37°С 45 для того, чтобы дать возможность закончить полную лактонизацню продукта, смесь пропускали через колонну 0,5х х5 см, содержащую Био-Рекс в виде поизвестное под названием мевинолин, рошка 100-200 меш (диаметр частиц так и предлагаемое соединение прояв50 0,149-0,074 мм) в хлоридной форме, ляют антигиперхолестеролемическую который уравновешивали дистиллированактивность. Однако последний более ной водой. При помощи этой смолы неактивен, показателем чего является прореагировавший Vі С] HMG-CoA адферментно ингибирующая активность сорбировался, а продукт элюировали ИС 5 0 : 55 при помощи 3 мл дистиллированной воСоединение ИС 5 0 , нМ ды непосредственно в ампулы для анаМевинолин 8,5 лиза сцинтилляций. После добавления I (две двой10 мл Аквазола II измеряли радиоакные связи) 6,5 тивность проб при помощи счетчика I (двойные З 13 18162 • 4 сцинтилляций типа Пакард Б2450. Испока полученные значения не станут пытуемые ингибиторы превращали Б С О стабильными. Для типо чтобы опредеЛ И натрия. лить воздействие мевинолина и соедиОстрое ингибирование синтеза хонения I на холестерин плазмы, собалестерина у крыс. _ кам давали соединение з расчете 8 мг/кг в день. Его подмешивали в Самцы белых крыс Гольцмана имели корм собакам. При этом продолжали вес 100-110 г. Их выдерживали на диебрать пробы крови два раза в неделю те Пурина Формулэб-5008 в течение 1 еще в течение 4 недель и определяли недели. На седьмой день крыс разделили на семь или девять групп по 10 жи-fO содержание холестерина плазмы. вотных с одинаковым средним весом Острое ингибирование синтеза хо(приблизительно 160 г) в группе, лестерина у крыс. кормление на основе диеты Формулэб Не было возможности установить ги— продолжали. По 10 животных помещали в похолестеролемическую активность у клетки, дно которых было изготовлено J5 крыс при использовании МЛ-236Б иначе, из проволоки, клетки помещали в комкак только после обработки препаратом нату с кондиционированным воздухом. Тритон WR-1334. Однако после стоматиВ 8 ч 30 мин на следующий день корм ческого введения одной дозы испытуеудаляли из клеток и каждой группе мых ингибиторов синтез холестерина крыс давали через трубку, введенную 20 из t1*C] ацетата у нормальных крыс зав желудок одну дозу испытываемого метно ингибировался на 2-8 ч после соединения, суспендированного в 5%обработки. Предварительные эксперином Эмульфоре в соляном растворе. менты как с мевинолинатом натрия, Контрольная группа получала только так и с соединениями I показали, что суспендирующий носитель. Спустя 1 ч 25 ингибиторная активность проявлялась после введения соединения крысам у крыс очень быстро. Спустя 1 ч после виутрибрюшинным способом вводили применения соединений внутрибрюшин[ \~1* С ]-ацетат натрия (26,7^-Ки/мл, ным способом вводили С н С ] ацетат удельная активность 23,1^ Ки/мг) в (80^ Ки/кг), а спустя 50 мин опредедозе 80^Ки/кг. Через 50 мин брали 30 ляли содержание С1АС] холестерина плаз4 мл крови через иглу, вставленную мы, которое и служило мерой синтеза в сердце, при этом животные предварихолестерина. Соль натрия соединений тельно подвергались легкой анестезии I была приблизительно в 2 раза более при помощи пентобарбитала, затем поактивна по сравнению с солью натрия лученные пробы помещали в пробирки, 25 мевинолината, причем дозы с 50%-ным содержащие 0,2 мл 0,4 М раствора цитингибированием составили 0,046. рата натрия. Плазму, полученную при П р и м е р 1. 6/R/-[2-/8' /S/-21', центрифугировании, подвергали гидро2" -диметилбутирилокси-2'/3/,б' /К/-ди1 лизации, а холестерин экстрагировали метил 1' , 2' , 6' , 7' , 8 , 8'а /R/ї петролейном эфире. Для измерения в 40 гексагидронафтил-1' /S/-3TRJI J-4/R/содержания [ П С ] холестер.ина в плазокси 3,4,5,5-тетрагидро-2Н-пиран-2-он. ме 2 мл раствора в петролейном эфире Стадия А. Получение 6/R/-[2-[8' /S/выпаривали до сухого состояния в O K C H - 2 ' / S / , 6'/^/-диметил 1 і , 2 І , б', 8-миллиметровых ампулах с делениями 7' , 8', 8'а (R)-гексагидронафтил-1 при умеренном нагревании, а затем ос45 /£//этил]-4(К)-окси-3,4,5,6-тетрагидтаток переносили в 5 мл Аквазола-2 ро-2Н-пиран-2-она и содержание [""С] определяли с использованием жидкостного счетчика Смесь 8,0 г (19,78 ммоттъ) продуксцинтилляций типа Приас ПЛД. та МК-803 (Ilia, R'-метил) и 8,31 г 50 Исследование на собаках. Чистопородных самцов гончих помещали отдельно друг от друга и кормили измельченным кормом на основе диеты Пурива Лэб Кейнин в расчете 30г/кг 55 в день. Перед началом эксперимента у собак брали кровь дважды в неделю из шейной вены и определяли содержание холестерина плазмы до тех пор, (197,8 ммоль) гидрата гидроокиси лития в 600 мл воды перемешивают при температуре кипения с обратным холодильником в атмосфере азота в течение 56 ч. Реакционную смесь охлаждают до 0°С, а затем обрабатывают с перемешиванием 20 мл концентрированной соляной кислоты. Далее эту смесь подвергают трехкратной экстракционной обработке 250-миллиметро 5 13181 62 6 комнатной температуре, после изолявыми порциями диэтилового эфира и объ-ции и сушки воздухом получают 13,7 gni»j!снные экстракты поеледовзтельно белого хлопкообраэного твердого вепромъюают тремя 200-миллилитровыми щества. Маточный раствор упаривают ( порциями" воды и затем 200 мл насыщенного рассола. После сушки над сульфз- 5 до объема 250 мл н дополнительные кристаллы изолируют после того, как том магния этот органический раствор раствор выдерживают при температуре профильтровывают и растворитель вы0°С в течение ночи. Общий выход паривают в вакууме с получением мас17,13 г (69%) целевого соединения в лоподобного остатка. Остаток раствовиде белого хлопкообразкого твердого ряют в 200 мл толуола и выдерживают 10 вещества, температура плавления 142при температуре кипения с обратным 144 С (вакуум). холодильником в атмосфере азота в течение 2 ч при непрерывном отделении ЯМР (CDC1 3 ): 0,10 (с, 6(CH 3 ) 2 Si); воды с целью обеспечить повторную 0,90 (с, 9, ( C H ^ C S i ) ; 1,19 (д. 3, лактонггзацию. В результате выпарива- J5 J = 7 Гц, С Я 3 ) ; 2,58 (д,2,Л=>4 Гц,С 5 Н ния толуола и растирания остатка в пирана); 4,3 (м , 2, С 4 Н пирана и гексане получают 5,15 г (81%) укаС е Н нафталина); 4,70 (м, 1, CfeH пи* занного соединения IV a (R'-метил) в рана); 5,57 (м, t, CSH нафталина); виде белого твердого продукта, кото5,58 (дд, 1, J = 6 , 1 0 Гц, С 3 Н нафтарый не требует дальнейшей очистки. 20 лина); 6,03 (д, 1, J « 10 Гц, С 4 Н нафталина). Аналитическую пробу получают перекристаллизацией части этого продукРассчитано: С 69,08, Н 9,74. та из бутилхлорида, в результате чеC25H4aO4Si го образуются белые сгустки с т.пл. Найдено: С 6 9 , 4 6 , Н 9 , 8 3 . 25 128-131°С (в вакууме). Стадия С. Получение 6/R-[2-/8( /S/й -2 2'-диметилбутирилокси-2' /S/б' /R/ЯМР (CDCljV: 0,87 (д,3,Л=7 Гц, диметил-11 , 2' , 6' , 7' , 8' , 8' а /II/сн 3 ); 1,16 (д,з,л»7 Гц, сн 3 ); 2,64 -гексагидронафтил-11 /S//-3THrt]~4/R/(м,2,пиран С 3 Н-группы); 4,27 (Ьгтп, 1 , -/диметил-трет-бутилсилилокси/-3,4, нафталин C f f H); 4,37 (м, 1, пиран С^Н J А,71 (м, 1, пиран С Ь Н), 5,56 ( м , 1 , 30 5,6-тетрагидро-2Н-пиран-2-она. 2,7 г 2,2-диметилбутирилхлорида нафталин С 5 Н); 5,79 (дд, 1, Л = 6, (20 ммоль) добавляют в перемешивае10 Гц, нафталин С 3 4) d l ; 6,03 (1,Л = мый магнитной мешалкой раствор 2,17 г - 10 Гц, нафталин С 4 Н). (5 ммоль) спирта со стадии В и 74 мг ИК (СНС1 3 ): 8400 (ОН), 1725 ( С О ) , 1240, 1120, J080 см- 1 . 35 4-пирролидйнгтиридина в 25 мл пиридина. Эту реакционную смесь перемешиСтадия В. Получение 6/R [ 2 - / 8 ' ( S ) вают при 100°С в атмосфере азота 4 ч., -окси-2' /S/-6' /К/-ДИМЄТИЛ-11 , 2' , 6' , Реакционную смесь разбавляют 250 мл 7 ' , 8' , 8' а/К/-гексагидронафтил-1" простого эфира и промывают 1 N ра/Б//этил]-4^)-диметил-трет-бутилсилилокси/-3,4,5,6-тетрагидро-2Н-пиран- 40 створом НС1 до тех пор, пока промывочная жидкость не станет кислотной, -?-она. а затем соляным раствором (3x50 мл). Смесь спирта со стадии А (18,3 г, После сушки над сульфатом магния 57, 1 ммоль), 21,5 г (142,8 ммоль) раствор фильтруют и выпаривают, в ретрет-бутилдиметилхлорсилана и 19,4 г 45 зультате чего получают 3,9 г оранже(285,6 ммоль) имидазола в 200 мл N,N вого масла. Это масло подвергают хродиметилформамида перемешивают при матографии в колонне 6x15 см на сили20°С в атмосфере а з о т а в течение 1 8 ч . кагеле (230-400 меш или с размером Затем реакционную смесь разбавляют частиц 0,068-0,037 мм). В результапри помощи 1500 мл простого эфира и 50 те элюирования (при атмосферном давпромывают последовательно водой, 2%лении) смесью простой эфир-гексан ным водным раствором хлористоводород():) по объему) получают 2,7 г соеной кислоты, водой и насыщенным р а динения в виде вязкого желтого масла. створом бикарбоната натрия. Эфирный ЯМР (СБС1 )У: 0,08 (с, 6, (СН 3 ) г раствор сушат над сульфатом магния, ^5 Si),' 0,9 (с, 3 9, (CH 3 ) 3 CSi); 1,12 (с, фильтруют и выпаривают до объема 1 л . После добавления 600 мл г е к с а - і 6, (СН 3 ) 2 СС); -\50 (д, 2, J = 4 Гц, на объем уменьшают до 600 мл в пароС 3 Н пирана); 4,33 (м, 1, С 4 Н пирана); вой бане. Продукт кристаллизуют при 4,63 (м, 1, С-Н пирана); 5,43 (м, 7 13! 8162 С. Н нафталина;; 5,57 (м, 1, С5'И t нафталина); 5,76 (дд, 1, J = 6 Гц, 10 Гц, С3 Н нафталина); 6,03 (д, 1, J = 10 Гц^ С^Н нафталина). Стадия О: Получение 6/К/-Г2-/8 1 /S/-2 ,2 -диметилбутирилокси-2' /S/ 6' /а/-диметип-1' , 2' , 6' , Iі , 8' , В' а/Я/-гексагидронафтил-1 ( / 5 / / - э т и л ] -4^/-окси-3,4,5,6-тетрагидро-2Н-пиран-2-она. Раствор 2,7 г (5 ммоль) силилового простого эфира, 1,2 г (20 ммоль) уксусной кислоты и 4,7 г (15 ммоль) Br 4 N + F~-3H 2 O в 25 мл ТГФ перемешивают при окружающей температуре в т е чение t8 ч . Реакционный раствор р а з бавляют 300 мл простого эфира и промывают последовательно 2%-ным водным раствором НС1 и насыщенным соляным раствором. После сушки (сульфат магния) и фильтрации раствор выпаривают с тем, чтобы получить 2,8 г оранжевого масла. Это масло подвергают хроматографии на колонне 6x15 см с с и ликагелем (230-400 меш или с размером частиц 0,068-0,037 мм). В результате злюирования при атмосферном давлении смесью ацетон-метилен хлорид (1:9 по объему) получали 1 г (48%) целевого соединения в виде бесцветного твердого вещества, которое подвергают кристаллизации из н-ВгС1гексана, в результате чего получают бесцветное твердое вещество с т . п л . 135-138°С. ЯМР (CDCls), CjH нафталина); 6,03 (д, 1, J=10 Гц, С4Н нафталина). Рассчитано: С 71,73, Н 9 , 1 5 . С 25 Н 38°5 Найдено: С 71,90, H 9,54. П р и м е р 2. Получение 6/R/[ 2 - [ 8 / S / / 2 ' , 2"-диметилбутирилокси/2-' /5/,6/5/-диметил-Г , ?,' , 3і , 4' , 4 ' a / S / 5' , 6r B 7' , 8' , 8' а/-дєкагкдронафтил-11 /SO этил] - 4 / R / - O K C H - 3 , 4 , 5,6-татрагидро-2Н-пиран-2-она. Стадия А. Получение 6/R/-[2-/8' / 1 S/OKCH-2' /S/6' /S/диметип-і' 4 ( , 4 ' a / S / , 5' , 6 f , Г , 8(a/S/ 5 Ю 15 20 8 декагидронафтїш-1' /S/Узтііп] -4/R/-OKси-3,4,5,6-тетрагидро-2Н-пиран-2-она. Раствор 2,0 г (6,2 ммопь) спирта из примера 1 (стадия А) в 100 мл этлл ацетата подвергают гидр от- екизации в присутствии окиси платины (1 г) при давлении 2,813 атм до тех пор, пока не будет зафиксировано выделение 2 моль-экв водорода. Кристаллы удаляют фильтрацией, а фильтрат выпаривают до сухого состояния, в р е зультате чего получают белое твердое вещество (1,9 г ) , которое подвергают хроматографии на колонне 6x20 см с силикагелем (230-400 меш или с размером частиц 0,068-0,037 мм). В результате элюирования при атмосферном давлении смесью ацетон-метиленхлорид (3:7 по объему получают 1,0 г (50%) целевого соединения в виде бесцвет- j ного твердого вещества. Аналитические пробы получают при помощи рекристаллизации порции этого *5 материала из хлороформа, в результате чего получают белое хлопкообразное твердое вещество с т . п л . 166168°С. Рассчитано: С 70,33, Н 9,94, 30 с,9ніго4 Найдено: С 69,97, Н 10,05. 35 40 45 50 5$ Стадия В-Получение 6/R/[2-/8'/S/- о к с и - 2 ' / S / , 6 ' / s / ' д и м е т и л - і ' , 2' , 3 і , 4 І , 4 ' a / S / , 5' , б' , 7' , 8' , 8 ' a ^ /3/-декагидронафтил-1' /3/-этил]4~ ^/-/диметил-трет-бутилсилилокси/З, 4,5,6-тетрагидро-2Н-пиран-2-она. Раствор спирта со стадии А ( 1 , 0 г, 3,1 г ммоль), имидазола (1,05 ' ч , 15,4 ммоль) и трет-бутилдиметилхлорсилана (1,16 г, 7,7 ммоль) в 20 мл N,N-p,HMeтилформамида перемешивают при 20°С в атмосфере азота в течение 18 ч . Реакционный раствор разбавляют при помощи 200 мл простого эфира и промывают последовательно водой, 2%-ным водным раствором хлористоводородной кислоты и соляным раствором, Эфирный раствор сушат над сульфатом магния и выпаривают, в результате ч е го получают белое твердое вещество (1,8 г ) , которое подвергают хроматографии на колонне 6x20 см с двуокись» кремния (230-400 меш или с размером частиц 0,063-0,037 мм). В результате злюирования при атмосферном давлении смесью ацетон-метиленхлорид (1:19 по объему) получают 1 s 0 г (74%) целевого 10 9 1318162 соединения в виде белого твердого вещества с т. ШЇ. 147-148 р С. Рассчитано: С 68,44, Н 10,5. , Н 5 4 t 4 Найдено: С 68,64, Н 10,81. Стадия С. Получение 6/R/--£2r8'/S / / 2 " , 2"-диметилбутирилоксн/-2 /S/6 /5/-диметил 1 , 2 3 , 4 , 4 а, 5 , пунктирные линии X и Z - две двойные связи или две одинарные с в я з и , .,,„,* Л7 А ' і , / „ , /у - Д е к а г и Д Р ° н а лФ т и л - . . о т л и ч а ю щ и й с я / тем, что -1'/5/]этил1-4/К//диметил-трет-бутил-10 формулы с о е д и н е н и е о б щ е й силилокси/-3,4,5,6-тетрагидро-2Н-пиран-2-она. Используя процедуру, описанную в примере 1 (стадия С), но применяя при этом аналог декагидронафтила со с т а - 15 дии В примера 2 в качестве исходного материала, получают маслянистое соединение с 60%-ным выходом, которое гпе 1 д е лX и и Z имеют у указанные значения, с непосредственно используют на еле' , п подвергают взаимодействию с третм v дующеи стадии без изучения его 20 „дал бутилдиметилхлорсиланом в растворите "Ъ СВОИСТЕ. Стадия D. Получение 6/R/-[2-[8У_ , .„w „f , ,o i /Ь/fl . Z -диметилбутирилокси/-2 У ^ » "* " и н е р т н о и биосфере при комнатной температуре в присутствии имида, л„ зола, полученное при этом ч-трет-оу25 тилдиметилхлорсилоксисоединение ацилируют хлорангидридом кислоты формулы /S/, 61 /3/-диметил-1' , 2', 3', 4' 4 ' a , / S / , 5 ' , б' , 7 a /S/-декагидронафтил-1' 5 -окси-3,4,5,6-тетрагидро-2Н-пиран-2-она. Аналогично примеру 1 (стадия D), 30 но используя при этом аналог декагидронафтила со стадии С примера 2 в качестве исходного материала, получав пиридине в инертной атмосфере в ют целевое соединение с 94%-ным выхоприсутствии 4-пирролидинпчридина в дом. Аналитическая проба имеет т . п л . 2$ качестве катализатора в растворите159-160°С. ле при 100 С с последующим удалением Рассчитано: С 71,05, Н 10,02. силильной группы путем перемешивания с25н4го5 реакционной смеси при комнатной тем- • пературе в тетрагидрофуране в приНайдено: С 7 0 , 8 8 , Н 10,36. 40 сутствии 3-х эквивалентов тетрабутилФ о р м у л а и з о б р е т е н и я аммонийфторида и 4-х эквивалентов уксусной кислоты на эквивалент силильСпособ получения производных пира-' ного производного. нонов общей формулы Редактор М.Циткина Составитель Р.Марголина Техред Н.Глущенко , Корректор М.Демчик Заказ 2439/57 Тираж 372 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4