Композиція, що містить bifidobacterium longum cncm i-2618, для лікування та профілактики імунних розладів

Реферат: Винахід стосується композиції, що містить В. longum CNCM I-2618, що не реплікується, для профілактики і/або лікування хвороб, пов'язаних із імунною системою, включаючи інфекції. UA 109876 C2 (12) UA 109876 C2 UA 109876 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Даний винахід в цілому відноситься до галузі запобігання та/або лікування запальних та інфекційних захворювань, зокрема, шляхом збільшення ендогенного антимікробного захисту. Одним з варіантів втілення даного винаходу є використання B. longum NCC2705 (депозит № CNCM l-2618), що не реплікується, для застосування у лікуванні або профілактиці захворювань, пов'язаних із імунною системою, в тому числі інфекцій. Середовище, що нас оточує, забруднене багатоманіттям потенційно патогенних мікроорганізмів. Як шкірні кератиноцити, так і епітеліальні клітини, що вистилають шлунковокишечний тракт, респіраторний тракт, урогенітальний тракт, утворюють фізичний бар'єр, що захищає від мікробного вторгнення в організм. Крім того, епітелій допомагає захисту людини шляхом виробництва і виділення антимікробних засобів для обмеження доступу бактерій та інших мікроорганізмів. Такі антимікробні молекули становлять ключові компоненти основного захисту вродженого імунітету. Одним з найважливіших класів антимікробних пептидів людини є дефензини. Дефензини виробляють епітеліальні клітини легенів, шкіри, порожнини рота, урогенітального, респіраторного і шлунково-кишечного трактів. Серед іншого, існує родина β-дефензинів, до яких відносяться дефензини 1 (hBD1) i 2 (hBD2). HBD1 виділяється у різноманітних слизових поверхнях, наприклад, слизовій рота, слинних залоз, шлунку, тонкого кишечника, кишечника, печінки і підшлункової залози. HBD2 також наявний у епітеліальних клітинах багатьох слизових поверхонь, зокрема, у шлунковокишечному тракті. Крім того, обидва дефензини також наявні у слині та рідини з дихальних шляхів (Cunliffe.R.N. and Mahida.Y.R. 2004, J Leukoc.Biol. 75:49-58). HBD2 в нормальних тканинах наявний в дуже невеликих кількостях, і його експресію активують бактерії та прозапальні цитокіни. На відміну від hBD2, HBD1 виділяється конституітивно. HBD1 ніколи не демонстрував послідовної активації бактеріями або запаленнями (Ou, G., et al., 2009, Scand.J Immunol 69:150-161). Пробіотики добре відомі як такі, що можуть зміцнювати різноманітні лінії кишкового захисту: імунне виключення, імунне видалення та імунне регулювання. Пробіотики також відомі як стимулятори неспецифічного опору істоти-носія мікробним патогенам і, відтак, направлені на їх ерадикацію. Однак, незважаючи на це, експресія конституітивного hBD1 відзначена як така, на яку не впливають бактерії-пробіотики (O'Neil.D.A. et al., J Immunol 163:6718-6724) і яка дуже слабко активується умовно-патогенними (Escherichia coli) і патогенними (Salmonella typhimurium) штамами (Ou, G., et al., 2009, Scand.J Immunol 69:150-161). Застосування пробіотиків наразі полягає у зменшенні ризику захворювань, пов'язаних із дисфункцією кишкового бар'єру (Е. Isolauri, et al., 2002, Gut 2002;50:iii 54-iii 59). Вважають, що пробіотики ефективні завдяки виживанню у кишечнику, стабільності до кислоти та жовчі, темпоральній колонізації слизових поверхонь кишкового тракту. Таким чином, велика кількість опублікованих джерел пов'язана із живими пробіотиками. Однак, деякі дослідження вивчали переваги для здоров'я, які забезпечують бактерії, що не реплікуються, і більшість з них показало, що інактивація пробіотиків, наприклад, за допомогою теплової обробки, веде до втрати їх очікуваних корисних ефектів для здоров'я (Rachmilewitz, D., et al., 2004, Gastroenterology 126:520-528; Castagliuolo, et al., 2005, FEMS Immunol. Med. Microbiol. 43:197-204; Gill, Η. S. and K. J. Rutherfurd, 2001, Br.J.Nutr. 86:285-289; Kaila, M., et al., 1995, Arch.Dis.Child 72:51-53.). Робота із живими бактеріями у харчових продуктах наразі має декілька недоліків. Живі бактерії зазвичай не є стійкими до навантажень, тому з ними важко працювати у промислових масштабах, підтримуючи життєздатність. Крім того, для деяких категорій продуктів може бути не зовсім оптимальним додавати живі мікроорганізми до композиції, зважаючи на проблеми безпечності. Таким чином, існує потреба у біоактивних нежиттєздатних мікроорганізмах. З іншого боку, якщо будуть запропоновані пробіотичні мікроорганізми, які не реплікуються, це дозволить відновлення в умовах високої температури, наприклад, порошкових харчових композицій, із збереженням корисних ефектів для здоров'я споживача. Виходячи з цього, бажано працювати із бактеріями, що не реплікуються, замість їх живих аналогів, однак, наявні в цьому відношенні дослідження поки не є обнадійливими. Застосування живих пробіотиків як стратегія для лікування або запобігання запальним кишковим хворобам було відзначено у літературі, нещодавно був підготовлений огляд Dotan et al. (Dotan, І. and D. Rachmilewitz. 2005; Curr.Opin.Gastroenterol. 21:426-430). Наприклад, висококонцентрована суміш із восьми живих бактерій-пробіотиків (VSL#3) продемонструвала ефективність у профілактиці (Gionchetti, P., et al., 2003, Gastroenterology 124:1202-1209) та лікуванні рецидивних або таких, що не піддаються лікуванню паучитів у людей (Gionchetti, P., et 1 UA 109876 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 al., 2000, Gastroenterology 119:305-309; Mimura, Т., et al., 2004, Gut 53:108-114). Дуже цікавим є результати проведеного із застосуванням моделі DSS-мишей дослідження колітів Rachmilewitz et al. (Rachmilewitz, D., et al., 2004, Gastroenterology 126:520-528), яке свідчить про те, що лікування живими і γ-опроміненими, однак, не знищеними тепловою обробкою VSL#3, захищає від колітів. Аналогічним чином, вбиті тепловою обробкою L crispatus не показані ефективності у захисті від DSS-стимульованих колітів, хоча живі бактерії очевидно знижували втрату ваги тіла і активність МПО в кишечнику (Castagliuolo, et al., 2005, FEMS Immunol. Med. Microbiol. 43:197204). Такі дослідження дозволяють припустити, що живі пробіотики в контексті запалень кишечника є більш ефективними, аніж ті, що не реплікуються. Було встановлено, що інактивовані L. reuteri (вбиті тепловою обробкою і γ-опромінені) не можуть зменшити TNFα-стимульоване продукування IL-8 Т84-клітинами, хоча живі бактерії показували значний корисний ефект (Ma, D., et al., 2004, Infect. lmmun. 72:5308-5314). Відтак, існує потреба запропонувати натуральні композиції, із якими легко працювати в промислових умовах, які є безпечними і нескладними у введенні і які дозволяють запобігати і/або лікувати запальні і інфекційні захворювання, зокрема, шляхом збільшення ендогенного антимікробного захисту. В ідеалі натуральні композиції слід одержувати з пробіотичних культур, зокрема, з пробіотичних мікроорганізмів, що на сьогодні добре сприймаються і визнаються споживачами за корисний для здоров'я ефект. Переважно, композиція має містити бактерії, що не реплікуються, які мають бути більш ефективними, ніж живі. Автори даного винаходу вирішити цю проблему. Відтак, метою даного винаходу є покращення рівня техніки, забезпечення натуральної композиції, яка уможливлює профілактику і/або лікування запальних та інфекційних захворювань, зокрема, шляхом збільшення ендогенного антимікробного захисту та виконання вищеописаних вимог. Автори несподівано з'ясували, що дану задачу можна вирішити за допомогою об'єкта у незалежних пунктах формули винаходу. Залежні пункти додатково визначають переважні варіанти втілення даного винаходу. Об'єкт даного винаходу посилює ендогенний антимікробний захист ссавців шляхом введення продукту із вмістом мікроорганізмів, таких, як мікроорганізми, що не реплікуються, наприклад, підданих тепловій обробці. Автори описують, що В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), має прекрасний ефект на стимулювання експресії антимікробних пептидів, ніж попередньо описані і ідентифіковані в літературі штами. Було встановлено, наприклад, що: - B. longum NCC 2705 (депозит № CNCM 1-2618) стимулює експресію hBD2 сильніше, ніж інші мікроорганізми, і ніж комбінація з 8 бактерій (Mondel. M., et al., 2009, Mucosal. Immunol 2:166-172; Schlee. M., et al., 2007, lnfect. lmmun. 75:2399-2407), і - підданий тепловій обробці В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) активує hBD2 значніше, ніж живий, і, крім того, активує hBD1. HBD1 і hBD2 проявляють антибактеріальну активність до широкого спектру бактерій, включаючи Е. соlі і Pseudomonas aeruginosa, Η. pylori (Nuding.S., et al., 2009, Microbes. Infect. 11:384-393), і також проти грибків, наприклад, Candida albicans (O'Neil, DA 2003, Mol. Immunol 40:445-450) і вірусів (вірус імунодефіциту людини) (Kota,S. Et al., 2008, J. Biol. Chem 283:2241722429). Тобто, такі антимікробні пептиди можуть зміцнювати мукозальний бар'єр і відповідно обмежувати бактеріальне приєднання і інвазію. Все більше і більше доказів вказують на те, що рівні дефензинів зменшуються у певних патофізіологічних умовах, і що це є фактором ризику для патогенезису і ускладнень таких інфекційних і запальних хвороб, як (Doss, M.et al., 2010, J Leukoc.Biol. 87: 79-92); Rivas-Santiago. B. et al., 2009, Infect. lmmun. 77:4690-4695): - у респіраторному тракті: муковісцидоз, реактивні захворювання дихальних шляхів, легеневі інфекції і тютюнопаління, астма, пневмонія, риніт, отит, синусит, туберкульоз; - у шлунково-кишечному тракті: Хвороба Крона (у товстому кишечнику та клубовій кишці), виразковий коліт, гастрит і виразка шлунку, викликані інфекцією Helicobacter pylori, інфекційна діарея, некротичний ентероколіт, викликана антибіотиками діарея, целіакія, кишкова незрілість; - в урогенітальному тракті: Бактеріальний вагіноз, ВІЛ, вірус простого герпесу (Herpes simplex), урінальні інфекції; - на шкірі: 2 UA 109876 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Атопічний дерматит, хронічні виразки, карцинома, атопічна екзема, опіки; - в порожнині рота: Пацієнти із ВІЛ, тонзиліт, гінгівіт, карієс зубів; - кератит очей. Презентовані результати показують, що B. longum NCC 2705 (CNCM I-2618) має більшу потужність для збільшення ендогенного антимікробного захисту, ніж раніше ідентифіковані бактерії-пробіотики, і, відтак, може бути більш ефективним для профілактики та лікування надмірного бактеріального зросту в тонкому кишечнику, запальних та інфекційних захворювань. Крім того, дані авторів винаходу показують, на відміну від даних, очікуваних із літератури, що теплова обробка не зменшує, а збільшує сильний антимікробіальний ефект В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618). Одним з варіантів даного винаходу є композиція, що містить В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) для застосування у лікуванні або профілактиці захворювань, пов'язаних із імунною системою, наприклад, інфекцій. Відповідно до даного винаходу захворювання, пов'язані із імунною системою, можна лікувати або запобігати ним за допомогою збільшення експресії ендогенного hBD1 і або експресії hBD2. Даний винахід також стосується композиції, що містить В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM 1-2618) для застосування і лікуванні або профілактиці хвороб, пов'язаних із зменшеною експресією hBD1, наприклад, мікробних інфекцій. Даний винахід також стосується застосування B. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I2618) у приготуванні композиції для лікування або профілактики захворювань, пов'язаних із імунною системою. В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) що не реплікується, може застосуватися принаймні частково, B. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) що не реплікується, зокрема, підданий тепловій обробці, демонструє перевагу - більшу ефективність, ніж у живих бактерій. Застосування мікроорганізмів, що не реплікуються, наприклад, підданого тепловій обробці B. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), замість живих мікроорганізмів, забезпечує такі додаткові переваги: - зменшується потенційний ризик пов'язаного із живими пробіотиками сепсису у чутливих групах населення, - є безпечною альтернативою для пацієнтів із імунними розладами, і - нижчими є труднощі в переробці, їх можна вводити у рідкі продукти тривалого зберігання. Тобто, в одному з варіантів втілення даного винаходу принаймні 90 %, наприклад, принаймні 95 %, переважно принаймні 98 %, переважніше принаймні 99 %, в ідеалі принаймні 99.9 %, або повністю В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) є такими, що не реплікуються. Даний винахід також стосується композиції, що містить B. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), яка відрізняється тим, що принаймні 95 %, переважно принаймні 98 %, переважніше принаймні 99 %, в ідеалі принаймні 99.9 %, або 100 % В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) є такими, що не реплікуються. Таким чином, даний винахід також стосується біоактивних В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), що не реплікуються, наприклад, підданих тепловій обробці. "Такі, що не реплікуються" B. longum NCC 2705 включають В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), піддані тепловій обробці. Це включає B. longum NCC 2705 що є інактивованими, мертвими, нежиттєздатними і/або наявні в якості фрагментів, наприклад, ДНК, метаболітів, цитоплазмідні сполуки, і/або матеріали клітинних стінок. "Такі, що не реплікуються" означає, що класичними способами культивування не можливо визначити життєздатні клітини і/або колонієутворюючі одиниці. Такі класичні способи культивування описані у книзі із мікробіології: James Monroe Jay, Martin J. Loessner, David A. Golden. 2005. Modern food microbiology. 7th edition, Springer Science, New York, N.Y. 790 p. Як правило, відсутність життєздатних клітин демонструють наступним способом: відсутні видимі колонії на чашках з агаровим середовищем або відсутнє збільшення мутності у рідкому середовищі зросту після інокуляції різними концентраціями бактеріальних препаратів (зразки, "що не відтворюються") та інкубації в відповідних умовах (аеробне і /або анаеробне середовище протягом принаймні 24год). The B. longum NCC 2705 можна зробити такими, що не реплікуються, за допомогою теплової інактивації. Теплова інактивація може проходити при принаймні 70 °С. 3 UA 109876 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Може застосовуватися будь-яка теплова обробка для інактивації пробіотиків, оскільки вона здійснюється достатньо довго для забезпечення інактивації. Наприклад, така теплова обробка може здійснюватися протягом принаймні 10 секунд. Як правило, висока температура зумовлює короткий час нагрівання, а нижча температура вимагає довшого нагрівання. Наприклад, В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) можна зробити такими, що не відтворюються, при 110-140° протягом 1-30 секунд, наприклад, 10-20 секунд, або при 75-95° протягом 10-30 хвилин. Такий заданий час стосується часу, протягом якого В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I2618) піддають заданій температурі. Слід відзначити, що в залежності від природи та кількості композиції, в якій наявні В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), і в залежності від будови застосовуваного нагрівального апарату час теплової обробки може змінюватися. Температурна обробка може застосовуватися при нормальному атмосферному тиску, але й може при підвищеному. Як правило, діапазон тиску становить від 1 до 50 бар, переважно від 110 бар, навіть переважніше від 2 до 5 бар. Ідеальний тиск залежить від природи композиції, в якій наявні мікроорганізми, і від застосовуваної температури. Якщо композиції, в яких наявні В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM l-2618), піддані певній тепловій обробці, наприклад, до пакування і реалізації, може бути переважним застосування такої теплової обробки для інактивації В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618). Як правило, композиції, що містять В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) можуть оброблятися високотемпературною короткотривалою обробкою (HTST), миттєвою пастеризацією або надвисокою температурою (UHT). UHT-обробка - це надвисокотемпературна обробка або переробка, що передбачає принаймні часткову стерилізацію композиції шляхом нагрівання її протягом короткого часу, приблизно 1-10 секунд, при температурі вище 135 °C (275 °F), що є температурою, необхідною для знищення бактеріальних спор у молоці. Наприклад, така обробка молока із застосуванням температур вище 135° С уможливлює зменшення бактеріального навантаження при належному часті витримування (протягом 2-5 сек), що уможливлює безперервне виробництво. Існує два основних типи UHT-систем: прямі і непрямі системи. При прямих системах продукти обробляють шляхом інжекції пари або нагнітання пари, а в непрямих системах продукти піддають тепловій обробці у пластинчатому теплообміннику, трубчастому теплообміннику або скребковому теплообміннику. Комбінації UHT-систем можуть застосовуватись на будь-якій або на декількох стадіях в процесі приготування продукту. Високотемпературна короткотривала обробка (HTST) - це спосіб пастеризації, призначений для досягнення 5-кратного зменшення, знищення 99,9999 % кількості життєздатних мікроорганізмів у молоці. Це вважається адекватним для знищення майже усіх грибків, пліснявих грибків та загально-забруднюючих бактерій, а також для забезпечення адекватного знищення звичайних патогенних теплостійких організмів. При високотемпературній короткочасній обробці молоко нагрівають до 71.7 °C (161 °F) протягом 15-20 секунд. Миттєва пастеризація - це спосіб теплової пастеризації швидкопсувних напоїв, наприклад, фруктових та овочевих соків, пива та молочних продуктів. ЇЇ здійснюють до наповнення ємностей для знищення забруднюючих мікроорганізмів, забезпечення безпеки та тривалішого строку зберігання продуктів. Рідина пересувається контрольованим безперервним потоком при підданні температурі 71.5 °C (160 °F) - 74 °C (165 °F) протягом приблизно 15-30 секунд. Для цілей даного винаходу термін "короткотривала високотемпературна обробка" включає, наприклад, високотемпературну короткочасну (HTST) обробку, UHT-обробку і миттєву пастеризацію. Композиції згідно даного винаходу можуть включати В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) у кількості, достатній для принаймні часткової обробки інфекцій та розладів, пов'язаних із імунною системою та/або їх ускладненнями. Кількість, достатню для досягнення цієї мети, позначають як "терапевтично ефективну дозу". Ефективні для цієї мети кількості залежать від багатьох відомих фахівцям з рівня техніки факторів, наприклад, від тяжкості захворювання, ваги, загального стану здоров'я споживача, його харчової матриці. Для профілактичного застосування композиції згідно винаходу вводять споживачеві, що вразливий до або несе інший ризик захворювань, пов'язаних із імунною системою, в кількості, що є достатньою для принаймні часткового зниження ризику таких захворювань. Таку кількість визначають як "профілактично ефективну дозу". Знов, точні кількості залежать від багатьох специфічних для пацієнта факторів, наприклад, стану здоров'я пацієнта, ваги, ефекта на харчову матрицю. 4 UA 109876 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Фахівці з рівня техніки зможуть регулювати терапевтично ефективну дозу і/або у профілактично ефективну дозу відповідно. Як правило, композиція згідно даного винаходу містить В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) у терапевтично ефективній дозі і/або у профілактично ефективній дозі. Як правило, терапевтично ефективна доза і/або профілактично ефективна доза становить в діапазоні від приблизно 0,005-1000 мг на добову дозу. В кількісних значеннях В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) може бути наявний в 4 12 композиції в кількості, що відповідає між 10 і 10 еквіваленту КУО/г композиції в сухій вазі. Очевидно, мікроорганізми, що не реплікуються, не утворюють колоній, відповідно, цей термін 4 12 слід розуміти як кількість мікроорганізмів, що не реплікуються, одержану з 10 -10 КУО/г бактерій, що реплікуються. Це включає мікроорганізми, які не активовані, не життєздатні або мертві або наявні в якості фрагментів ДНК або клітинних стінок або цитоплазмідних сполук. Інакше кажучи, кількість мікроорганізмів, яку містить композиція, виражається у колонієутворюючій здатності (КУО) такої кількості мікроорганізмів, якби всі мікроорганізми були живими, незважаючи на те, чи є вони насправді такими, що не реплікуються, наприклад, інактивованими або мертвими, фрагментованими або комбінацією з будь-яких або всіх зазначених станів. Наприклад, композиція згідно даного винаходу може містити кількість В. longum NCC 2705 4 12 (депозит № CNCM I-2618) що відповідає приблизно 10 -10 КУО на добову дозу. Композиція згідно даного винаходу може містити приблизно 0,005-1000 мг В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) на добову дозу. Композиція згідно даного винаходу може бути композицією будь-якого виду. Композицію можна вводити орально, ентерально, парентерально (черезшкірно або внутрішньом'язово), локально або наочно, або шляхом інгаляції, інтраректально або інтравагінально, наприклад. Тобто, композиція згідно даного винаходу може бути обрана з групи, до якої належать харчові композиції, харчові продукти, включаючи корми для тварин, напої, суміші для повноцінного харчування, харчові добавки, нутрацевтики, поживні добавки, фармацевтичні композиції, косметичні композиції, медикаменти та композиції для місцевого застосування. Можуть бути додані пребіотики. Пребіотики можуть сприяти зросту пробіотиків до того, як вони стають такими, що не реплікуються. Пребіотики також можуть діяти синергетично із життєздатними пробіотичними бактеріями, які наявні в композиції та/або можуть бути додані до неї. Хвороби, пов'язані із імунною системою, можуть бути обрані із групи інфекцій, наприклад, бактеріальних, вірусних, грибкових та/або паразитарних інфекцій; запалень, фагоцитних недостач, дефектів епітеліального бар'єру, незрілості імунної системи, надлишкового бактеріального зросту в тонкому кишечнику та їх комбінацій. В одному з варіантів втілення даного винаходу композиція, що включає B. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) може застосовуватись для лікування або профілактики мікробних інфекцій, наприклад, вірусних, грибкових та/або паразитарних інфекцій. Хвороби, пов'язані із імунною системою, можуть бути обрані із групи хвороб, пов'язаних із низьким рівнем дефензинів, зокрема, hBD2. Крім того, якщо застосовуються B. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), що не реплікуються, хвороби, пов'язані із імунною системою, можуть бути обрані із групи хвороб, пов'язаних із низьким рівнем дефензинів hBD1. Такі хвороби можуть бути обрані з групи, до якої належать муковісцидоз, реактивні захворювання дихальних шляхів, легеневі інфекції внаслідок тютюнопаління, астма, пневмонія, риніт, отит, синусит, туберкульоз, хвороба Крона (у товстій кишці та клубовій кишці), виразковий коліт, целіакія, кишечна незрілість, гастрит, виразка шлунку, спричинена інфекцією Helicobacter pylori, інфекційна діарея, некротичний ентероколіт, пов'язана із антибіотиками діарея, бактеріальний вагіноз, ВІЛ, вірус Herpes simplex, урінальні інфекції, атопічний дерматит, хронічна виразка, карцинома, атопічна екзема, опіки, тонзиліт, гінгівіт, карієс зубів, кератит очей, їх комбінації. Композиція згідно даного винаходу може застосовуватися для збільшення ендогенного антимікробного захисту. Цього можна досягти, наприклад, шляхом збільшення експресії ендогенного hBD2; і - якщо застосовуються В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), що не реплікуються, - шляхом додаткового збільшення експресії ендогенного hBD1. Автори даного винаходу встановили, що В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) значно стимулює експресію конституітивного hBD2; і що В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618), що не реплікується, наприклад, підданий тепловій обробці, активує експресію hBD2 5 UA 109876 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 навіть більше, ніж живий мікроорганізм; і що підданий тепловій обробці В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) також стимулює експресію конституітивного hBD1. Відповідно, предмет даного винаходу також включає спосіб збільшення ефективності B. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) у лікуванні або профілактиці хвороб, пов'язаних із імунною системою, що передбачає стадію обробки В. longum NCC 2705) таким чином, що він не реплікується, наприклад, шляхом теплової обробки. Хвороби, пов'язані із імунною системою, можуть бути одними з, наприклад, вищеперелічених хвороб. В одному з варіантів втілення даного винаходу спосіб передбачає стадію теплової обробки при принаймні приблизно 70 °C протягом принаймні приблизно 10 секунд. Фахівці з рівня техніки зрозуміють, що вони можуть легко поєднувати всі ознаки даного винаходу, описані вище, без виходу за об'єм розкритого винаходу. Зокрема, ознаки, які описані для композицій, можуть застосовуватись до застосування і/або способу згідно даного винаходу і навпаки. Додаткові переваги і ознаки даного винаходу є очевидними з наступних прикладів та фігур. Фігура 1 зображує, що В. longum (депозит № CNCM I-2618)), підданий тепловій обробці при 120 °C - 15 секунд значно стимулює hBD2 мРНК в епітеліальних клітинах кишечника in vitro у порівнянні із іншими підданими тепловій обробці штамами. Клітини Т84 інкубували протягом 4 годин із штамами, підданими тепловій обробці. Генна експресія hBD1 була проаналізована за допомогою полімеразної ланцюгової реакції в режимі реального часу. Стовпчики відтворюють значення ± стандартна похибка середньої величини (sem), нормалізовані до базальної експресії нестимульованих клітин. Фігура 2 зображує, що високотемпературна короткотривала обробка В. longum (депозит № CNCM I-2618) при 85 °C - 20 хвилин призводить до стимулювання hBD2 (А) і hBD1 (В). Клітини Т84 стимулюють протягом 4 годин із живими та підданими тепловій обробці В. longum (депозит № CNCM I-2618) при 120 °C - 15 секунд або 85 °C - 20 хвилин. Генна експресія hBD2 була проаналізована за допомогою полімеразної ланцюгової реакції в режимі реального часу. Стовпчики відтворюють значення ± стандартна похибка середньої величини (sem), нормалізовані до базальної експресії нестимульованих клітин. Приклади: Експериментальний протокол Клітини Т84 застосовувалися від проходу 30-40 і були культивовані в модифікованому есенціальному середовищі Дульбеко /F-12 (Sigma D 6421), що містить 5 % плодної сироватки теляти (FCS) (Amined BioConcept) і 2 ммоль глютаміну. Клітини висівалися при концентрації 6 210 клітин/лунка у 6-лункових пластинах для культур та вирощувалися як моношари при 37 °C у 5 % СО2 - 95 % повітряна атмосфера. Клітини вирощувалися протягом 1 тижня після злиття були інкубовані із сироваткою і вільним від антибіотиків середовищем протягом принаймні 12 годин. Дана стадія була необхідною для виключення стимульованою сироваткою експресії дефензинів та запобігання будь-якому впливу антибіотиків на пробіотики та на клітинну імунну відповідь. Клітини були додатково інкубовані із пробіотиками або підданими тепловій обробці штамами протягом 4 годин. Наприкінці періоду інкубації клітини були промиті із фосфатносольовим буфером і одержали ізоляційним реагентом TriPure™ відповідно до протоколу постачальника. Експресія генів людини hBD1 ihBD2 у таким чином оброблених клітинах оцінили кількісною ПЛР. Застосовуваними в даному експерименті бактеріальними штамами були В. longum (NCC 2705, депозит № CNCM I-2618), В. lactis (NCC 2818, депозит № CNCM І-3446), L.johnsonii (La1, NCC 533, депозит № CNCM I-1225), L paracasei (ST11, NCC 2461, депозит № CNCM I-2116). Дані штами тестували живими або підданими тепловій обробці або при 120 °C - 15 секунда або 85 °C - 20 хвилин. Результати: Експресія hBD2 мРНК активували всі досліджені піддані тепловій обробці штами (120 °C - 15 секунд), однак В. longum (NCC 2705) (депозит № CNCM I-2618) стимулював значно сильніший ефект, ніж інші піддані тепловій обробці штами (Фігура 1). Крім того, презентовані дані свідчать, що теплова обробка В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) покращує ефект на експресію hBD2 мРНК. Тобто, підданий тепловій інактивації В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) при 120 °C - 15 секунд або при 85 °C - 20 хвилин є більш ефективним, ніж живий штам (Фігура 2). Крім того, інактивація В. longum NCC 2705 (депозит № CNCM I-2618) при низькій температурі (85 °C) і протягом тривалого часу (20 хвилин) значно збільшує не тільки експресію hBD2, але й експресію hBD1 мРНК (Фігури 2 А і В). 6 UA 109876 C2 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1. Композиція, що містить В. longum CNCM I-2618, для застосування у лікуванні або профілактиці захворювань, пов'язаних із імунною системою, включаючи інфекції, яка відрізняється тим, що В. longum CNCM I-2618 принаймні частково стає таким, що не реплікується, за допомогою теплової інактивації, переважно за допомогою обробки при 110140 °C протягом 10-20 секунд або при 75-95 °C протягом 10-30 хвилин, причому захворювання, пов'язані із імунною системою, обирають із групи, до якої входять інфекції, зокрема, бактеріальні, вірусні, грибкові і/або паразитарні інфекції; надмірний ріст бактерійу тонкому кишечнику; їх комбінації; або з групи захворювань, пов'язаних із зниженим рівнем hBD2, до якої входять муковісцидоз, реактивні захворювання дихальних шляхів, легеневі інфекції внаслідок тютюнопаління, астма, пневмонія, риніт, отит, синусит, туберкульоз, хвороба Крона (у товстій кишці та клубовій кишці), виразкові коліти, целіакія, незрілість кишечника, гастрити і виразка шлунка, викликана інфекцією Helicobacter pylori, інфекційна діарея, некротизуючий ентероколіт, пов'язана із антибіотиками діарея, бактеріальний вагіноз, ВІЛ, вірус Herpes simplex, урінальна інфекція, атопічний дерматит, хронічна виразка, карцинома, атопічна екзема, опіки, тонзиліт, гінгівіт, карієс зубів, кератит очей. 2. Композиція для застосування за п. 1, яка відрізняється тим, що теплову обробку здійснюють протягом принаймні 10 секунд. 3. Композиція для застосування за п. 1, яка відрізняється тим, що В. longum CNCM I-2618 стає таким, що не реплікується, при 110-140 °C протягом 10-20 секунд. 4. Композиція для застосування за п. 1, яка відрізняється тим, що В. longum CNCM I-2618 стає таким, що не реплікується, при 75-95 °C протягом 10-30 хвилин. 5. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка відрізняється тим, що композиція містить 4 12 кількість В. longum CNCM I-2618, що не реплікується, що відповідає приблизно 10 -10 КУО на добову дозу. 6. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка відрізняється тим, що композиція містить приблизно 0,005-1000 мг В. longum CNCM I-2618, що не реплікується, на добову дозу. 7. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка відрізняється тим, що принаймні 95 % В. longum CNCM I-2618 є такими, що не реплікуються, переважно, всі В. longum CNCM I-2618 є такими, що не реплікуються. 8. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка відрізняється тим, що композицію обирають з групи, яка складається із харчових композицій, харчових продуктів, включаючи корми для тварин, напої, суміші для повноцінного харчування, харчові добавки, нутрацевтики, харчові добавки, фармацевтичні композиції, косметичні композиції, композиції для місцевого застосування та медикаменти. 9. Композиція за будь-яким з попередніх пунктів, яка застосовується для збільшення ендогенного антимікробного захисту, і/або експресії ендогенного hBD2 і hBD1. 10. Спосіб збільшення ефективності В. longum CNCM I-2618 у лікуванні або профілактиці інфекцій та хвороб, пов'язаних із імунною системою, який передбачає стадію обробки В. longum CNCM I-2618 до нереплікативності, а саме, теплової обробки при 110-140 °C протягом 10-20 секунд або при 75-95 °C протягом 10-30 хвилин, який відрізняється тим, що захворювання, пов'язані із імунною системою, обирають із групи, до якої входять інфекції, зокрема, бактеріальні, вірусні, грибкові і/або паразитарні інфекції; надмірний ріст бактерій у тонкому кишечнику; їх комбінації; або з групи захворювань, пов'язаних із зниженим рівнем hBD2, до якої входять муковісцидоз, реактивні захворювання дихальних шляхів, легеневі інфекції внаслідок тютюнопаління, астма, пневмонія, риніт, отит, синусит, туберкульоз, хвороба Крона (у товстій кишці та клубовій кишці), виразкові коліти, целіакія, незрілість кишечника, гастрити і виразка шлунка, викликана інфекцією Helicobacter pylori, інфекційна діарея, некротизуючий ентероколіт, пов'язана із антибіотиками діарея, бактеріальний вагіноз, ВІЛ, вірус Herpes simplex, урінальна інфекція, атопічний дерматит, хронічна виразка, карцинома, атопічна екзема, опіки, тонзиліт, гінгівіт, карієс зубів, кератит очей. 11. Композиція, яка містить В. longum CNCM I-2618, що відрізняється тим, що принаймні 95 %, переважно принаймні 98 %, найпереважніше принаймні 99 %, найбільш переважно принаймні 99,9 %, або 100 % В. longum CNCM I-2618 стають такими, що не реплікуються, шляхом теплової інактивації, а саме, обробки при 110-140 °C протягом 10-20 секунд або при 75-95 °C протягом 10-30 хвилин. 7 UA 109876 C2 8 UA 109876 C2 Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 9