Біс(n,n’-біс(2-галоетил)аміно)фосфородіамідати, спосіб їх одержання (варіанти), фармацевтична композиція, яка їх містить, та спосіб лікування пухлин

1. Біс-(N,N’-біс(2-галоетил)аміно) фосфородіамідати формули I: C2 2 (19) 1 3 74574 4 12. Сполука за п. 11, яка являє собою 2(а) перетворення сполуки формули I, де R ознагідроксіетил-N,N,N',N'-тетракіс(2чає водень і Q означає кисень, у сполуку формули хлоретил)фосфородіамідат. I, де R-Q разом означають складноефірну групу; 13. Сполука за будь-яким з пп. 1-4, де Q означає і/або NH. (б) взаємодію сполуки формули I у формі вільної 14. Сполука за будь-яким з пп. 1-13 для застосуоснови з кислотою з утворенням фармацевтично вання для лікування пухлин, насамперед раку. прийнятної кислотно-адитивної солі; або 15. Фармацевтична композиція, призначена для (в) взаємодію кислотно-адитивної солі сполуки лікування пухлин, насамперед раку, яка містить формули I з основою з утворенням відповідної терапевтично ефективну кількість сполуки за вільної основи; або будь-яким з пунктів 1-13 і принаймні один фарма(д) перетворення солі сполуки формули I в іншу цевтично прийнятний носій. фармацевтично прийнятну сіль сполуки формули 16. Спосіб лікування пухлин, насамперед раку, I; і/або який передбачає введення терапевтично ефекти(е) розділення рацемічної суміші, яка містить вної кількості сполуки за будь-яким з пунктів 1-13 будь-які пропорції сполуки формули I, для одерабо композиції за пунктом 15. жання необхідного стереоізомера вказаної сполу17. Спосіб одержання сполуки формули I ки. X 18. Спосіб одержання сполуки формули I’ X O O P O N R-Q X N O P R-Q N X N X X , (I) де: X означає атом галогену; Q означає O, S або NH; і R означає водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетероарил або заміщений гетероарил, або означає R’CO-, R’NHCO-, R’SO2- або R’NHSO2-, де R’ означає водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетероарил або заміщений гетероарил; або R-Q разом означають хлор, або її фармацевтично прийнятних солей, при якому проводять взаємодію сполуки формули (2) X O Cl P N X N X (2) X зі сполукою формули (3) OH R-Q (3) і необов’язково Даний винахід стосується хімічних сполук, способів лікування, фармацевтичних композицій і способів їх одержання. Більш конкретно, він стосується сполук, які мають протипухлинну активність або які можна модифікувати так, щоб вони мали протипухлинну активність. Таким чином, даний винахід стосується насамперед застосування спо X X , (I’) де: X означає атом галогену; Q означає O; і R означає R’CO-, R’NHCO-, R’SO2- або R’NHSO2-, де R’ означає водень, нижчий алкіл, заміщений нижчий алкіл, арил, заміщений арил, гетероарил або заміщений гетероарил; або її фармацевтично прийнятних солей, при якому проводять естерифікацію сполуки формули I, де R означає водень, з одержанням сполуки формули I’, де R-Q разом означають складноефірну групу; і необов’язково (а) взаємодію сполуки формули I’ у формі вільної основи з кислотою з утворенням фармацевтично прийнятної кислотно-адитивної солі; або (б) взаємодію кислотно-адитивної солі сполуки формули I’ з основою з утворенням відповідної вільної основи; або (в) перетворення солі сполуки формули I’ в іншу фармацевтично прийнятну сіль сполуки формули I’; і/або (г) розділення рацемічної суміші, яка містить будьякі пропорції сполуки формули I’, для одержання необхідного стереоізомера вказаної сполуки. лук для лікування пухлин і насамперед для лікування раку, а також способів одержання сполук. Існуючі в даний час протоколи хіміотерапії раку передбачають введення пацієнтам антимітотичних лікувальних засобів, таких як адріаміцин, вінкристин, цисплатин, доксорубіцин, дауноміцин і метотрексат, токсинів, таких як дифтерійний ток 5 74574 6 син, токсин, який виробляється бактеріями роду Pseudomonas, і рицин, і протипухлинних лікувальних засобів, таких як циклофосфамід і ізофосфамід. Циклофосфамід є одним з протиракових агентів, що найбільш широко застосовують в усьому світі, і його вводять у сполученні з багатьма іншими лікувальними засобами при лікуванні різноманітних гематологічних захворювань і твердих пухлин. Однак деякі особливості циклофосфаміду значно знижують його клінічну ефективність. Наде: приклад, цей лікувальний засіб має потребу в меX означає атом галогену; таболічній активації в печінці для того, щоб продуQ означає О, S або ΝΗ; і кувати метаболіти, токсичні для ракових клітин. R означає водень, (нижч.)алкіл, заміщений Лікувальний засіб особливо токсичний для сечово(нижч.)алкіл, арил, заміщений арил, гетероарил го міхура, а також виявляє токсичну дію у відноабо заміщений гетероарил, або означає R'CO-, шенні кісткового мозку, яка є типовою для протиRTMHCO-, R'SO2-або R'NHSO2-, де R' означає пухлинних лікувальних засобів із класу водень, (нижч.)алкіл, заміщений (нижч.)алкіл, алкілувальних агентів. Циклофосфамід у дозах, арил, заміщений арил, гетероарил або заміщений що застосовуються для лікування раку, має сильну гетероарил; або R-Q разом означають хлор, супресорну дію у відношенні імунної системи, зниі їх фармацевтично прийнятні солі. жуючи тим самим здатність пацієнтів, вже ослабНаступним об'єктом даного винаходу є фарлених хворобою, боротися з інфекціями. Нарешті, мацевтична композиція, яка містить терапевтично повторне застосування циклофосфаміду часто ефективну кількість сполуки формули І у сполуприводить до розвитку стійкості ракових клітин в ченні принаймні з одним фармацевтично прийняторганізмі пацієнта до лікувального засобу, робляним носієм. Зокрема, композиція призначена для чи тим самим лікувальний засіб неефективним. лікування раку й інших захворювань, у відношенні Фосфороамідні похідні вже давно відомі з ліяких може виявляти сприятливу дію антимітотичтературних джерел і докладно описано їх застосуний агент. вання як алкілувальних реагентів. Було встановЩе одним об'єктом винаходу є спосіб лікуванлено, що деякі з них можна застосовувати для ня в ссавця раку та інших захворювань, у віднолікування раку (див. огляд DeVita, "Principles of шенні яких може виявляти сприятливу дію антиміCancer Therapy", crop. 765-788 у Petersdorf і ін., тотичний агент, який передбачає введення ссавцю Principles of Internal Medicine, 10-e вид. McGrawтерапевтично ефективної кількості сполуки форHill, NY., 1983). У літературі докладно описані тамули І. кож аналоги циклофосфамідів та їх численні похіНаступним об'єктом винаходу є спосіб одердні (Cyclophosphamide, Merck Index, 11-e вид., жання сполуки формули І. cтop. 429-430, US 5190929). Однак є лише невелиВикористовувані в даному описі поняття зака кількість публікацій, де згадуються біс(М,Н'сновані на їх загальноприйнятому значенні і вони біс(2-хлоретил)аміно)фосфороамідати (DE повинні бути зрозумілі фахівцям у даній галузі. 19524515, US 5306727, WO 9306120, DE 3835772, Поняття "галоген" або "гало" означає бром, GB 2207674, DE 3239858, EP 072531). У US йод, фтор або хлор. 5556942 як проміжний продукт реакції описана Поняття "алкіл", що використовується в назвах сполука "алкіл" або "алкілокси", означає одновалентний С1С20-вуглеводневий фрагмент, який може бути лінійним, розгалуженим або циклічним. Поняття "(нижч.)алкіл", що використовується в назвах "(нижч.)алкіл", "гало(нижч.)алкіл", "арил(нижч.)алкіл" або "гетероарил(нижч.)алкіл", означає повністю насичений одновалентний вуглеводневий радикал, що несе 1-10 атомів вуглецю і складається лише з атомів вуглецю і водню, який де Ζ означає бром і R означає водень або R може представляти собою циклічний радикал або означає хлор. радикал з розгалуженим або прямим ланцюгом. Короткий виклад суті винаходу Прикладами таких радикалів є метил, етил, ізопОдним з об'єктів даного винаходу є новий клас ропіл, пропіл, бутил, ізобутан, вmор-бутил, mреmфосфороамідатних сполук, представлених форбутл, пентил, гексил, циклопентил, циклопропілмулою І: метил, циклогексил або циклогексилметил. У контексті даного винаходу переважним є (нижч.)алкіл, що несе 1-6 атомів вуглецю. Поняття "заміщений алкіл або заміщений (нижч.)алкіл" означає алкіл або (нижч.)алкіл відповідно, який, як правило, є моно-, ди- або тризаміщеним такими радикалами, як арил, R1-заміщений арил, гетероарил, нітро, ціано, галоген, -OR1, -SR1, -C(O)R1, -OC(O)R1, -C(O)OR1, -NR12, -SO2OR1, 7 74574 8 OSO2R1, -SO2NR12, -NRSO2R1, -CONR12 або ціано, тіо, нітро, (нижч.)алкіл, гало(нижч.)алкіл або NRCCCOR1, де кожен R1 незалежно означає воаміно. Крім того, будь-які два сусідні замісники в день, (нижч.)алкіл, R2-заміщений (нижч.)алкіл, арильному фрагменті необов'язково можуть утвоарил, R2- заміщений арил, гетероарил, гетероарювати разом (нижч.)алкілендіоксигрупу. Найбільш рил(нижч.)алкіл, R2-заміщений арил(нижч.)алкіл переважними замісниками в заміщеному арилі є 2 або арил(нижч.)алкіл, і кожен R незалежно ознагідрокси, галоген, (нижч.)алкілокси, ціано, тіо, нітчає гідрокси, галоген, (нижч.)алкілокси, ціано, тіо, ро, (нижч.)алкіл, гало(нижч.)алкіл або аміно. нітро, (нижч.)алкіл, гало(нижч.)алкіл або аміно. Поняття "гетероарил", що використовується в Найбільш переважними є заміщені алкіли або запозначеннях гетероарил і гетероарил(нижч.)алкіл, міщені (нижч.)алкіли, які мають один-три замісниозначає радикал, який є похідним ароматичного ки, вибрані з ряду, який включає ціано, галоген, вуглеводню, що несе 5-14 кільцевих атомів, з яких (нижч.)алкілокси, тіо, нітро, аміно і гідрокси. 1-5 представляють собою гетероатоми, вибрані Поняття "гало(нижч.)алкш" означає незалежно з N, О або S, воно включає моноциклі(нижч.)алкіл, заміщений одним-трьома атомами чні, конденсовані гетероциклічні і конденсовані галогену, прикладами таких радикалів є -CF3, карбоциклічні і гетероциклічні ароматичні кільця CH2CF3 і –СН2ССІ3. (наприклад, тієніл, фурил, піроліл, піримідиніл, Поняття "арил(нижч.)алкіл" означає ізоксазоліл, оксазоліл, індоліл, ізобензофураніл, (нижч.)алкільний радикал, заміщений арилом. Попуриніл, ізохіноліл, птеридиніл, імідазоліл, піридил, няття "заміщений арил(нижч.)алкіл" означає піразоліл, піразиніл, хіноліл і т.д.). арил(нижч.)алкільний радикал, який має один-три Поняття "заміщений гетероарил" означає гезамісники на арильному фрагменті або алкільному тероарил, який може мати один-три замісники, фрагменті радикала, або на обох фрагментах. таких як алкіл, R^aMiineHHU алкіл, галоген, ціано, Поняття "гетероарил(нижч.)алкіл" означає нітро, -SR1, -OR1, -C(O)R1 -ОС(О)R1, -SOzOR1, (нижч.)алкільний радикал, заміщений гетероариOSO2R1, -SO2NR1, -NRSO2R1, -C(O)OR1 -NR12, лом. Поняття "заміщений гетероарил(нижч.)арил" CONR12 або –NRC(O)R1, де кожен R1 незалежно означає гетероарил(нижч.)алкільний радикал, який означає водень, (нижч.)алкіл, R2-заміщений має один-три замісники на гетероарильному фра(нижч.)алкіл, арил, R2-заміщений арил, гетероагменті або на алкільному фрагменті радикала, або рил, гетероарил(нижч.)алкіл, арил(нижч.)алкіл або на обох фрагментах. R2-заміщений арил(нижч.)алкіл і кожен R2 незалеПоняття "(нижч.)алкілокси" означає радикал жно означає гідрокси, галоген, (нижч.)алкілокси, OR3, де R3 означає (нижч.)алкіл. ціано, тіо, нітро, (нижч.)алкіл, галоген(нижч.)алкіл Поняття "арил", що використовується в познаабо аміно. Крім того, будь-які два сусідні замісники ченнях "арил", "арилокси" і "арил(нижч.)алкіл", в гетероарильному фрагменті необов'язково моозначає радикал, який є похідним ароматичного жуть разом утворювати (нижч.)алкілендіоксигрупу. вуглеводню, що несе 6-20 кільцевих атомів вуглеНайбільш переважними замісниками заміщеного цю, який має одне кільце (наприклад, феніл) або гетероарилу є гідрокси, галоген, (нижч.)алкілокси, два або більше сконденсованих кільця, переважно ціано, тіо, нітро, (нижч.)алкіл, гало(нижч.)алкіл або 2-3 сконденсовані кільця (наприклад, нафтил), або аміно. два або більше ароматичних кільця, переважно 2Поняття "гетероцикл" означає радикал, який є 3 ароматичні кільця, з'єднані простим зв'язком похідним ароматичного вуглеводню, що несе 5-14 (наприклад, біфеніл). Переважно арил представкільцевих атомів, з яких 1-5 представляють собою ляє собою С6-С16арил, а ще більш переважно С6гетероатоми, вибрані незалежно з N, О або S, воС14арил. Арильний радикал сам може мати один но включає моноциклічні, сконденсовані гетероциабо декілька замісників, які представляють собою клічні і сконденсовані карбоциклічні і гетероциклічтакі радикали, як алкіл, заміщений алкіл, галоген, ні ароматичні кільця (наприклад, тієніл, фурил, ціано, нітро, -SR1, -OR1, -C(O)R1, -OC2R1, -SO2OR1, піроліл, піримідиніл, ізоксазоліл, оксазоліл, індо-OSO2R1, -SO2NR12, -NRSO2R1, -С(О)OR1, -NR12, ліл, ізобензофураніл, пуриніл, ізохіноліл, птеридиCONR12 або –NRC(O)R1, де кожен R1 незалежно ніл, імідазоліл, піридил, піразоліл, піразиніл, хіноозначає водень, (нижч.)алкіл, R2-заміщений ліл і т.д.). Гетероцикли можуть мати один-три (нижч.)алісіл, арил, R2-заміщений арил, гетероазамісники, таких як алкіл, R1-заміщений алкіл, гарил, гетероарил(нижч.)алкіл, арил(нижч.)алкіл або логен, ціано, нітро, -SR1, -OR1, -C(O)R1, -ОС(О)R1, R2-заміщений арил(нижч.)алкіл і кожен R2 незалеSO2OR1, -OSO2R1, -SO2NR1, -NRSO2R1, -C(O)OR1, жно означає гідрокси, галоген, (нижч.)алкілокси, NR12, -CONR12 або -NRC(O)R1, де кожен R1 незаціано, тіо, нітро, (нижч.)алкіл, гало(нижч.)алкіл або лежно означає водень, (нижч.)алкіл, R2-зaмiщeний аміно. (нижч.)алкіл, арил, R2-заміщений арил, гетероаПоняття "заміщений арил" означає арил, зарил, гетероарил(нижч.)алкіл, арил(нижч.)алкіл або міщений одним-трьома замісниками, вибраними з R2-зaмiщeний арил(нижч.)алкіл і кожен R2 незалеряду, який включає алкіл, заміщений алкіл, галожно означає гідрокси, галоген, (нижч.)алкілокси, ген, ціано, нітро, -SR1, -OR1, -C(O)R1, -OC(O)R1, ціано, тіо, нітро, (нижч.)алкіл, гало(нижч.)алкіл або 1 1 1 1 1 SO2OR , -OSO2R , -SO2NR 2, -NRSO2R , -C(O)OR , аміно. Крім того, будь-які два сусідні замісники в -NR12, -CONR12 або -NRC(O)R1, де кожен R1 незагетероарильному фрагменті необов'язково можуть лежно означає водень, (нижч.)алкіл, R2-заміщений утворювати разом (нижч.)алкілендіоксигрупу. Най(нижч.)алкіл, арил, R2-заміщений арил, гетероабільш переважними замісниками в заміщеному рил, гетероарил(нижч.)алкіл, арил(нижч.)алкіл або гетероарилі є гідрокси, галоген, (нижч.)алкілокси, R2-заміщений арил(нижч.)алкіл і кожен R2 незалеціано, тіо, нітро, (нижч.)алкіл, гало(нижч.)алкіл або жно означає гідрокси, галоген, (нижч.)алкілокси, аміно. 9 74574 10 Поняття "складноефірна група" означає теріони можуть утворюватися в тому випадку, якR'C(O)-O, R'CO-S-, сульфонат або карбамат, де R' що сполуки формули І містять як кислотні протони, означає водень, (нижч.)алкіл, арил або гетеротак і основні групи. "Внутрішні солі" або "цвітеріоцикл. ни" можуть утворюватися в результаті перенесенМається на увазі, що поняття "захворювання" ня протона з карбоксильної групи на вільні пари у контексті даного опису включає пухлини, зокреелектронів атома азоту в аміногрупі. ма, рак, а також інші захворювання, у відношенні Поняття "стереоізомери" означає сполуки, які яких може виявляти сприятливу дію антимітотичмають ту саму послідовність ковалентних зв'язків і ний агент, що включають (але не обмежуючись відрізняються відносним розташуванням своїх ними) доброякісну гіперплазію й інфекції, викликаатомів у просторі. ні патогенами, такі як грибкові і паразитарні інфекПоняття "терапевтично ефективна кількість" ції. означає кількість, яка при введенні в організм тваПоняття "фармацевтично прийнятні солі" рини з метою лікування захворювання є достатозначає солі, які можуть утворюватися, якщо приньою для лікування захворювання. сутні кислотні групи, більш конкретно кислотні проПоняття "антимітотичний" стосується лікуватони, можуть взаємодіяти з неорганічними або льного засобу або агенту, які впливають на поділ органічними основами. Кислотні протони присутні, ядра еукаріотичної клітини. наприклад у групах -OR1, -SO2OR1 або ~C(O)OR1. Мається на увазі, що поняття "лікувати" або Як правило, батьківську сполуку обробляють над"лікування" захворювання в ссавця включають: лишковою кількістю лужного реагенту, такого як (1) попередження виникнення захворювання в гідроксид, карбонат або алкоксид, який несе відссавця, який може бути схильний до захворюванповідний катіон. Прикладами катіонів, які присутні ня, але ще не відчуває або не проявляє симптомів у фармацевтично прийнятних солях є такі катіони, захворювання, як Na+, K+, Са2+ і NH4+. Найбільш переважними є (2) стабілізацію захворювання, тобто приписолі, які містять Na+. Так, прийнятними неорганічнення його розвитку, або ними основами є гідроксид алюмінію, гідроксид (3) ослаблення симптомів захворювання, тобкальцію, гідроксид калію, карбонат натрію і гідрокто досягнення регресу захворювання. сид натрію. Солі можна одержувати також з викоДеякі сполуки за винаходом можуть мати один ристанням органічних основ, таких як етаноламін, або декілька хіральних центри. У таких випадках діетаноламін, триетаноламін, N-метилглюкамін і усі стереоізомери підпадають під обсяг даного трометамін. Якщо сполуки за винаходом містять винаходу. Так, у контексті винаходу мається на основну групу, то можна одержувати кислотноувазі, що під обсяг винаходу підпадають індивідуадитивні солі. Прикладами основних груп можуть альні виділені стереоізомери, а також суміші таких служити групи –NR12. Кислотно-адитивні солі спостереоізомерів. лук одержують з батьківської сполуки стандартниСеред сполук, вказаних у першому об'єкті вими методами в придатному розчиннику з викориснаходу, певні сполуки (включаючи фармацевтично танням надлишкової кількості кислоти, такої як прийнятні солі сполук) є переважними. соляна кислота, бромистоводнева кислота, сірчаТакими переважними сполуками є сполуки, де: на кислота (для одержання сульфатів і бісульфа(1) X означає хлор або бром, насамперед тів), азотна кислота, фосфорна кислота і т.п., і хлор; органічних кислот, таких як оцтова кислота, пропі(2) Q означає О або NH; онова кислота, гліколева кислота, піровиноградна (3) R означає R'CO-, R'NHCO-, R'SO2- або кислота, щавлева кислота, яблучна кислота, маRTSHSO2-, де R' означає водень, (нижч.)алкіл, лонова кислота, янтарна кислота, малеїнова кисзаміщений (нижч.)алкіл, арил, заміщений арил, лота, фумарова кислота, винна кислота, лимонна гетероарил, або заміщений гетероарил, насампекислота, бензойна кислота, корична кислота, мигред, де R означає ацетил, бензоїл, бензолсульфодалева кислота, метансульфонова кислота, етанніл, иара-бромбензолсульфоніл, napaсульфонова кислота, саліцилова кислота, паранітробензолсульфоніл, napa-толуолсульфоніл або толуолсульфонова кислота, капронова кислота, метансульфоніл; або енантова кислота, циклопентанпропіонова кисло(3) R означає водень, (нижч.)алкіл, заміщений та, молочна кислота, орmо-(4(нижч.)алкіл, арил, заміщений арил, гетероарил гідроксибензоїл)бензойна кислота, 1,2або заміщений гетероарил; насамперед де R етандисульфонова кислота, 2означає водень, метил або бензил. гідроксіетансульфонова кислота, бензолсульфоСеред сполук за винаходом сполуки, які задонова кислота, nара-хлорбензолсульфонова кисловольняють вказаним умовам надання переваги, є та, 2-нафталінсульфонова кислота, камфорсульбільш переважними в порівнянні зі сполуками, які фонова кислота, 4-метилбіцикло[2.2.2.]окт-2-ен-1не задовольняють вказаним умовам надання пекарбонова кислота, глюкогептонова кислота, глюреваги, а сполуки, які задовольняють більшій кільконова кислота, 4,4'-метиленбіс(3-гідрокси-2кості умов надання переваги, є більш переважнинафтойна) кислота, 3-фенілпропіонова кислота, ми в порівнянні зі сполуками, які задовольняють триметилоцтова кислота, mpem-бутилоцгова кисменшій кількості умов надання переваги. лота, лаурилсірчана кислота, глюкуронова кислоОсобливо переважними є сполуки, де X озната, глутамінова кислота, 3-гідрокси-2-нафтойна чає хлор, Q означає О і R означає водень, бензил, кислота, стеаринова кислота, муконова кислота і ацетил, бензоїл, бензолсульфоніл, napaт.п.. Поняття "фармацевтично прийнятні солі" бромбензолсульфоніл, nаравключає також внутрішні солі або цвітеріони. Цвінітробензолсульфоніл, napa-толуолсульфоніл або 11 74574 12 метансульфоніл, або R-Q разом означають хлор; і ляти несприятливу дію на терапевтичну ефективнайбільш переважними є сполуки 2-гідроксіетвлність сполуки формули І. Такі ексципієнти можуть N,N,N',N'-тетракіс(2-хлоретил)фосфородіамідат і бути твердими, рідкими або напівтвердими. 2-хлоретил-N,N,N',N'-тетракіе(2До твердих фармацевтичних ексципієнтів нахлоретил)фосфородіамідат. лежать крохмаль, целюлоза, тальк, глюкоза, лакІншими переважними сполуками є сполуки, де тоза, сахароза, желатин, солод, рис, борошно, X означає хлор і R означає R'SO2-, де R' означає крейда, силікагель, стеарат магнію, стеарат наводень, (нижч.)алкіл, заміщений (нижч.)алкіл, трію, моностеарат гліцерину, хлорид натрію, сухе арил, заміщений арил, гетероарил або заміщений знежирене молоко і т.п. Рідкі і напівтверді ексципігетероарил. Особливо переважними є сполуки, де єнти можна вибирати з групи, що включає воду, R означає бензоїл, метансульфоніл, napaетанол, гліцерин, пропіленгликоль і різні масла, у нітробензолсульфоніл або napaтому числі масла, отримані з нафти, масла твабромбензолсульфоніл. Найбільш переважно R ринного, рослинного або синтетичного походження означає nара-бромбензолсульфоніл. (наприклад, арахісова олія, соєва олія, мінеральне Фармакологія і практична застосовність масло, кунжутне масло і т.д.). Переважні рідкі ноСполуки формули І мають протипухлинну аксії, найбільш придатні для розчинів для ін'єкції, тивність або їх можна модифікувати таким чином, включають воду, фізіологічний розчин, водну декщоб вони мали протипухлинну активність. 2строзу і гліколі. галоетильний, більш конкретно 2-хлоретильний Кількість сполуки формули І у композиції може фрагмент молекули цих сполук, має здатність діязмінюватися в широких межах залежно від типу ти безпосередньо як ДНК-алкілувальний агент або композиції, розміру стандартної дози, типу ексцивін може бути перетворений в азиридиніл. Азирипієнта й інших факторів, відомих фахівцям в галузі динільна форма молекули має дуже високу активфармацевтики. Як правило, кінцева композиція ність і передбачається, що вона обумовлює мехаможе містити від 1 до 99мас. %, більш переважно нізм дії сполук із класу гірчичного газу. Завдяки від 10 до 90мас. % сполуки, найбільш переважно цьому сполуки мають ефективність при лікуванні від 25 до 75мас. %, при цьому частина, що залипухлин, а також інших захворювань, у відношенні шилася, припадає на частку ексципієнта або ексяких може виявляти сприятливу дію антимітотичципієнтів. ний агент, що включають (але не обмежуючись Фармацевтичні композиції готують за допомоними) доброякісну гіперплазію й інфекції, викликагою звичайних фармацевтичних методів. ні патогенами. Для вказаних сполук не потрібна Об'єктом даного винаходу є також фармацевметаболічна активація в печінці для надання їм тичні композиції, які містять терапевтично ефектипротипухлинної активності й отже вони не мають вну кількість сполуки формули І профілю токсичності, характерного для циклофосфамідів. Шляхи введення і фармацевтичні композиції Сполуки за винаходом можна вводити в терапевтично ефективній кількості будь-яким зі звичайних і прийнятних для пацієнта, що піддається лікуванню, шляхів введення. Шляхи введення включають (але не обмежуючись ними) введення шляхом ін'єкції, включаючи внутрішньовенну, внутрішньоочеревинну, внутрішньом'язову і підшкірну де: ін'єкцію, введення через слизову оболонку або X означає атом галогену; Q означає О, S або трансдермальне введення, введення за допомоΝΗ; і гою місцевого нанесення, назального спрею, супоR означає водень, (нижч.)алкіл, заміщений зиторію і т.п., або можна використовувати перора(нижч.)алкіл, арил, заміщений арил, гетероарил льне введення. або заміщений гетероарил, або означає R'CO-, Терапевтично ефективна кількість може зміR'NHCO-, R'SO2- або R'NHSO2-, де R' означає вонюватися в широких межах залежно від серйознодень, (нижч.)алкіл, заміщений (нижч.)алкіл, арил, сті захворювання, віку і відносного стану здоров'я заміщений арил, гетероарил або заміщений гетепацієнта, ефективності застосовуваної сполуки, а роарил; або R-Q разом означають галоген, або їх також інших факторів. Як правило, вона становить фармацевтично прийнятні солі, і принаймні один від приблизно 1мг/кг ваги тіла в день до 1000мг/кг фармацевтично прийнятний носій. ваги тіла в день, переважно приблизно від 1 до Крім того, згідно із даним винаходом передба100мг/кг/день. чається, що фармацевтичну композицію, яка місЯк правило, сполуки за винаходом слід вводитить одну або декілька сполук формули І можна ти у вигляді фармацевтичних композицій, які мавводити як індивідуально, так і в сполученні з інють форму таблеток, пілюль, капсул, напівтвердих шими фармакологічними агентами. Переважний препаратів, порошків, композицій із пролонгованим варіант здійснення винаходу стосується комбіновивільненням, розчинів, суспензій, еліксирів або ваної терапії, при якій фармацевтичну композицію, будь-яких інших придатних композицій, які у цілояка містить одну або декілька сполук формули І, му включають сполуку формули І у сполученні застосовують у сполученні з іншими фармакологіпринаймні з одним фармацевтично прийнятним чно активними агентами, вибраними з групи, яка носієм. Прийнятні носії повинні бути нетоксичними, включає антибіотики, протипухлинні агенти, агенповинні полегшувати введення і не повинні виявти, що знищують пухлинні клітини, агенти, що ста 13 74574 14 білізують пухлину, і т.п. Таке застосування комбіку. Реакційну суміш перемішують/збовтують і потім нованої терапії легко може бути реалізоване на охолоджують. До суміші додають алкоксид лужнопрактиці фахівцями в даній галузі на основі загаго металу, потім її повільно нагрівають до 0-50°С і льноприйнятих стандартів медичного лікування і перемішують протягом тривалого періоду часу. У на основі загальноприйнятих клінічних методів. реакційну суміш вносять розчин галогеноводню, У даному винаході запропонований також спонаприклад, НСl, у воді. Збирають органічну фраксіб лікування пухлин, насамперед раку, у ссавця, цію і водну фракцію екстрагують апротонним пощо передбачає введення ссавцю, який потребує лярним розчинником, який не змішується з водою, такого лікування, терапевтично ефективної кілько(2x4л). Прикладами апротонних полярних розчинсті сполуки формули І ників, які не змішуються з водою, є дихлорметан, хлороформ і т.п. Об'єднані органічні фракції промивають і розчинники видаляють при зниженому тиску. Потім утворений неочищений продукт реакції, тобто сполуку формули (І), промивають і очищають звичайними методами. Більш конкретно, сполуку 2 (див. схему синтезу 2, нижче) можна одержувати шляхом реакції оксихлориду фосфору зі сполукою 1, а саме, гідрохлоридом біс(2-галоетил)аміну. Реакційну суміш де: у розчиннику, такому як толуол, бензол, ксилол і X означає атом галогену; т.п., перемішують/збовтують при помірній швидкоQ означає О, S або NH; і сті (до одержання прозорого розчину) і протягом 5R означає водень, (нижч.)алкіл, заміщений 30хв до реакційної суміші додають триетиламін. (нижч.)алкіл, арил, заміщений арил, гетероарил Потім реакційну суміш перемішують протягом триабо заміщений гетероарил, або означає R'CO-, валого періоду часу при кімнатній температурі. До R'NHCO-, R'SO2- або R'NHSO2-, де R' означає вовказаної суміші додають додаткову кількість гідродень, (нижч.)алкіл, заміщений (нижч.)алкіл, арил, хлориду біс(2-галоетил)аміну і триетиламіну. заміщений арил, гетероарил або заміщений гетеУтворену суспензію нагрівають до температури роарил; або R-Q разом означають галоген, дефлегмації розчинника і перемішують протягом або її фармацевтично прийнятної солі. 16-24год. Потім суміш охолоджують до кімнатної Синтез сполук формули І температури й обробляють вугіллям, перемішують при кімнатній температурі протягом 2год і потім піддають вакуумній фільтрації через подушку з целіту. Розчинник видаляють при зниженому тиску (30мм рт. стовпа, кінцева температура бані 50°С) на роторному випарнику, одержуючи сполуку 2. Отриману в такий спосіб сполуку 2 потім піддають реакції зі сполукою 3. Реакцію проводять у розчиннику, такому як тетрагідрофуран, діоксан, метил-mреm-бутиловий ефір і т.п. Реакційну суміш перемішують/збовтують при помірній швидкості (до одержання прозорого розчину червоного кольору) і суміш охолоджують до 0°С за допомогою бані лід/вода. До отриманого охолодженого розчину протягом 20хв додають mpem-бутоксид, калію (362г, 3,22моля). Потім реакційну суміш повільно Сполуки формули І можна одержувати відпонагрівають до кімнатної температури і перемішувідно до реакційної схеми, яка зображена вище й ють протягом тривалого періоду часу (16-24год). описана нижче: На цій стадії в реакційну суміш вносять розчин Сполуку В можна одержувати шляхом взаємохлористого водню у воді. Збирають органічну фрадії оксихлориду фосфору зі сполукою А, яка предкцію і водну фракцію екстрагують етилацетатом ставляє собою галогенід біс(2-галоетил)аміну. Ре(2x4л). Об'єднані органічні фракції промивають акцію проводять в інертному розчиннику. Як насиченим водним розчином хлориду натрію інертні розчинники можна застосовувати аромати(1x4л) і розчинники видаляють при зниженому тисчні вуглеводні. До реакційної суміші додають оску (вакуум 30мм рт. стовпа, кінцева температура нову, більш переважна органічна основа, така як бані 50°С) на роторному випарнику. Потім утвореорганічний амін, найбільш переважно триетиламін, ний неочищений продукт реакції, що представляє і потім реакційну суміш перемішують протягом собою сполуку формули (І), промивають і очищатривалого періоду часу при 0-50°С. Суміш, що чають звичайними методами. сто представляє собою суспензію, нагрівають до Використовувані в цьому синтезі реагенти, такі 0-100°С і перемішують протягом тривалого періояк оксихлорид фосфору, сполуки 1 і 3, усі надходу часу. Потім суміш охолоджують, обробляють дять у продаж від таких фірм, як Aldrich, Fluka і адсорбентом, наприклад, вугіллям, перемішують Alfa. при кімнатній температурі і фільтрують. Після цьоПри синтезі деяких сполук формули І, можна го видаляють розчинник, одержуючи сполуку В. вводити, а після закінчення синтезу видаляти заПотім сполуку В піддають взаємодії зі сполухисні групи. Придатні захисні групи для аміно-, кою С. Реакцію проводять у полярному розчинни 15 74574 16 гідроксильних, карбоксильних груп описані в перетворенням типу Perkin-Elmer Spectrum 1000. Greene і ін., у "Protective Groups in Organic Mac-спектроскопічні аналізи проводили на масSynthesis," 2-е вид., John Wiley and Sons, New спектрометрі типу Shimadzu QP-5000 GC (СІ, меYork, 1991. Для одержання деяких похідних потрітан) шляхом безпосередньої ін'єкції. Термічні анабна етерифікація спиртів до складних ефірів, яку лізи проводили на диференціальному сканувальможна здійснювати методами, добре відомими в ному калориметрі типу Mettler Toledo DSC821e. даній галузі (див., наприклад, Larock, Синтез сполук формули І "Comprehensive Organic Transformations", VCH Publishers, New York, 1989). Відповідно до вищевикладеного спосіб одержання сполуки формули І передбачає здійснення однієї або декількох із вказаних нижче стадій: (а) взаємодію сполуки формули (2) зі сполукою формули (3) або, (б) одержання замісників у сполуці формули І добре відомим методом; чи (в) перетворення сполуки формули І, де R означає водень і Q означає кисень, у сполуку формули І, де R-Q разом означають складноефірну групу; або (г) взаємодію сполуки формули І у формі вільної основи з кислотою з утворенням фармацевтично прийнятної кислотно-адитивної солі; або (д) взаємодію кислотно-адитивної солі сполуки формули І з основою з утворенням відповідної вільної основи; або (e) перетворення солі сполуки формули І в іншу фармацевтично прийнятну сіль сполуки формули І; або (ж) розділення рацемічної суміші, яка містить будь-які пропорції стереоізомерів сполуки формули І, для одержання необхідного стереоізомера вказаної сполуки. Приклади Представлені нижче приклади наведені для того, щоб фахівці в даній галузі могли більш чітко зрозуміти і втілити на практиці даний винахід. Вони не спрямовані на обмеження обсягу винаходу, а наведені лише з метою ілюстрації репрезентативних варіантів здійснення. У прикладах синтезу тонкошарову хроматографію здійснювали на силікагелевих пластинах типу Analtech GF 350 розміром 1дюйм x3 дюйми з використанням флуоресцентного індикатора. Візуалізацію пластин для ТШХ здійснювали з використанням парів йоду. Протонні і вуглецеві магнітні резонансні спектри одержували за допомогою спектрометра ядерного магнітного резонансу типу Bruker AC 300MHz з використанням тетраметилсилану як внутрішнього стандарту. Температури плавлення одержували з використанням електротермічного пристрою для визначення температури плавлення і їх не коректували. Інфрачервоні спектри одержували з використанням гранул КВr на інфрачервоному спектрофотометрі з фур'є Приклад 1 Одержання сполуки 3 (Схема 2) Одержання хлориду N.N.N',N'-тетракіс(2хлоретил)фосфородіаміду (2) До тригорлої круглодонної колби місткістю 12л, яка знаходиться в кожусі з електричним підігрівом, приєднували верхню механічну мішалку, парціальний конденсатор гарячого зрошення і краплинну лійку з зрівноваженим тиском об'ємом 2л, обладнану барботером із вхідним/вихідним клапаном для азоту. У колбу завантажували оксихлорид фосфору (258мл, 2,77моля), гідрохлорид біс(2-хлоретил)аміну (495г, 2,77моля), сполуку 1, і толуол (5л). Мішалку регулювали таким чином, щоб перемішування здійснювалося з помірною швидкістю (для одержання прозорого розчину), і в реакційну суміш протягом 10хв додавали триетиламін (812мл, 5,82 моля). Потім реакційну суміш перемішували протягом 26год при кімнатній температурі. До цієї суміші протягом 10хв додавали гідрохлорид біс(2-хлоретил)аміну (505г, 2,83моля) і триетиламін (830мл, 6,11моля). Суспензію рудувато-коричневого кольору нагрівали до температури дефлегмації толуолу (110°С) і перемішували протягом 22год. Потім суміш охолоджували до кімнатної температури й обробляли вугіллям (500 г), перемішували при кімнатній температурі протягом 2год і після цього піддавали вакуумній фільтрації через подушку з целіту (1кг). Розчинник видаляли при зниженому тиску (30мм рт. стовпа, кінцева температура бані 50°С) на роторному випарнику, одержуючи хлорид Ν,Ν,Ν',Ν'-τντρωάο(2хлоретил)фосфородіаміду, що представляє собою сполуку 2, у вигляді масла червонястокоричневого кольору (979г, вихід 97%). ТШХаналіз виявив наявність однієї плями (Rf=0,71; етилацетаттексан 1:1). Протонний ЯМР-спектр відповідав продукту, який надходить у продаж. Приклад 2 Одержання 2-гідроксіетил-N,N,N',N'-тетракіс(2хлоретил)фосфородіамідату, сполуки 3 До тригорлої круглодонної колби місткістю 12л, яка знаходиться в кожусі з електричним підігрівом, приєднували верхню механічну мішалку, 17 74574 18 термометр і барботер із вхідним/вихідним клапаперемішування в цілому протягом 14 год. Утворені ном для азоту. У колбу завантажували хлорид суспензію перемішували протягом 30хв при 0°С, N,N,N',N'-тетракіс(2-хлоретил)фосфородіаміду, що після чого осад збирали шляхом вакуумної фільтпредставляє собою сполуку (2) (979г, 2,68моля), рації і промивали холодним метил-mреmетиленгліколь (1,5л, 26,8моля), сполуку 4 і тетрагібутиловом ефіром (1л). Об'єднані фільтрати кондрофуран (3л). Мішалку регулювали таким чином, центрували при зниженому тиску (вакуум 30мм рт. щоб перемішування здійснювалося з помірною стовпа, кінцева температура бані 50°С) на роторшвидкістю (для одержання прозорого розчину ченому випарнику до об'єму 500мл і перемішували рвоного кольору), і суміш охолоджували до 0°С за протягом 30хв при 0°С. Утворений осад збирали допомогою бані лід/вода. До отриманого охолоза допомогою вакуумної фільтрації і промивали дженого розчину протягом 20хв додавали mpemхолодним метил-mреm-бутиловом ефіром (200 бутоксид калію (362г, 3,22ммоля). Потім реакційну мл). Потім об'єднували дві партії твердого продуксуміш повільно нагрівали до кімнатної температуту і сушили протягом ночі (30мм рт. стовпа, 40°С), ри і перемішували в цілому протягом 19год. У колодержуючи 2-гідроксіетил-N,N,N',N'-тетракіс(2бу протягом 10хв вводили розчин хлористого водхлоретил) фосфородіамідат, що представляє соню у воді (8л, 1М). Збирали органічну фракцію і бою сполуку 3, у вигляді порошку рудуватоводну фракцію екстрагували етилацетатом (2x4л). коричневого кольору (526г, вихід 50%). ТШХОб'єднані органічні фракції промивали насиченим аналіз виявив одну пляму (Rf 0,62; метаводним розчином хлориду натрію (1x4л) і розчиннол:хлороформ 1:9). Температура плавлення: 76ники видаляли при зниженому тиску (вакуум 30мм 78°С; 14 (КВr) 3372, 2957, 1459, 1344, 1206, 1098, рт. стовпа, кінцева температура бані 50°С) на ро1053, 929см1; МС (СІ, метан) m/z 391(МH+), 353, торному випарнику, одержуючи темне масло чер339, 248, 106. Термічний аналіз (ДСК) виявив два вонясто-коричневого кольору. Потім цей неочищеекзотермічних діапазони розкладання при 164ний органічний продукт розчиняли в теплому 179°С i 222-231°С. (40°С) метил-mреm-бутиловому ефірі (2л) і давали У представленій нижче таблиці 1 наведені нагрітися до кімнатної температури, здійснюючи сполуки, отримані аналогічним методом Таблиця 1 Сполука 5 6 7 8 9 10 R-Q ОН NH2 SH Вr СІ Вr Приклад 3 Одержання сполуки 11 (Схема 3) До розчину, що містить сполуку 3 (0,780г, 2ммоля) у ТГФ/Н20 (1:1) і 1н. NaOH (2мл), додавали розчин ηαρα-толуолсульфоніхлориду (TsCl, X Вr СІ СІ СІ СІ Вr ММ 568 389 406 453 408 631 0,40г, 2,1ммоля) у ТГФ. Реакційну суміш перемішували протягом 24год при КТ. Суміш розбавляли метиленхлоридом і промивали 1н. НС1. Органічний шар промивали соляним розчином, сушили над К2СО3 і концентрували до одержання в'язкого масла, що представляє собою сполуку 11 (1,04г, 96%) У представленій нижче таблиці 2 наведені сполуки, отримані аналогічним методом 19 74574 20 Таблиця 2 Сполука 12 13 14 15 Сполука 16 17 18 19 20 21 22 23 R Ас PhCO PhSO2 napa-BrPhSO2 R nара-NO2PhSO2 Me бензил бензил napa-MePhSO2 Ac PhCO napa-MePhSO2 Приклад 4 Життєздатність клітин Клітини людської меланоми лінії RPMI 8322 (АТСС) вирощували при 37°С у середовищі MEM, доповненим 10% фетальної бичачої сироватки, 1% L-глутамату і 0,1% гентаміцину. Клітини висівали в 96-лункові титраційні мікрошіаншети з щільністю 2X106 клітин/лунку. Через 24год середовище замінювали таким же середовищем, у яке додавали тестовані сполуки в кінцевих концентраціях від 1мкМ до 10мМ і 1% DMSO. Клітини вирощували в присутності сполук протягом ще 4 днів. Кожну концентрацію сполуки тестували в трьох повторах. Життєздатність клітин оцінювали за допомогою стандартного аналізу, заснованого на спостереженні за метаболічним перетворенням барвника (CellTiter 96™, фірма Promega). Сполука 3 6 9 15 16 23 Концентрація (мкМ), при якій життєздатність клітин становить 50% 410 >500 490 >500 >500 >500 Приклад 5. Оцінка протипухлинної ефективності в дослідах на мишах Самок безтимусних мишей лінії NCrnu 7-тижневого віку одержували від фірми Charles River Laboratories (Рейліг, Північна Кароліна) і акліматизували в лабораторних умовах протягом одного тижня перед початком експерименту. Тварин поміщали в невеликі ізольовані клітки по п'ять особин у клітку і утримували при світловому режимі 12год світла/12год темряви. Тваринам давали Q О О О О Q O О О О О NH NH NH X Сl Сl Сl Сl X Сl Сl Cl Вr Вr Сl Сl Cl профільтровану стерилізовану воду і стерильний корм для гризунів ad libitum. Тварин щодня оглядали і реєстрували клінічні ознаки, такі як зменшення пухлини. Модель пухлини. 30-40мг фрагментів пухлини молочної залози людини лінії МХ-1 імплантували підшкірно мишам поблизу правої пахвової ділянки за допомогою троакара з голкою 12-го розміру і давали рости. Пухлинам давали рости до початку обробки доти, поки їх маса не досягала 75-196мг (розмір 75-196мм3). Обробка лікувальним засобом. Сполуку 3 вводили внутрішньоочеревинно протягом п'яти послідовних днів у дозах 55, 75 і 100мг/кг/день. Сполуку З готували кожного разу заново в концентрації 10мг/мл у суміші 5% ЕtOН/45% пропіленгликолю/50% ЗФР. Дози розчинів вводили мишам не більше ніж за 4год після приготування. Сполуки вводили з урахуванням точної величини ваги тіла, при цьому ін'єкований об'єм становив 0,1мл/10г ваги тіла. Вимірювання пухлини. Вимірювання пухлин і ваги тіла мишей проводили двічі в тиждень, починаючи з першого дня обробки. Об'єм пухлини визначали на основі вимірювань за допомогою циркуля (у мм) і з використанням формули для об'єму еліпсоїда: LxW2/2=мм3, де L і W означають максимальний і мінімальний розміри, що визначаються при кожному вимірюванні. Вказану формулу можна використовувати також для обчислення маси пухлини, знаючи її густину (об'єм 1мм3 відповідає масі 1мг). Дослідження проводили протягом 28 днів після імплантації пухлини. Усіх тварин, у яких маса пухлини досягала 4г, умертвляли до закінчення експерименту. Кількість неспецифічРегрес пухлини Час подвоєння (у Відсутність них смертельних випаднях) пухлини Частковий регрес Повний регрес дків 100 0/8 0 0 0/8 7,7 75 0/8 0 0 0/8 8,1 55 0/8 0 0 0/8 7,2 ЗФР-контроль 0/8 6,6 Доза (мг/кг) 21 Комп’ютерна верстка О. Воробей 74574 Підписне 22 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601