Сполуки діосметину, спосіб їх одержання і фармацевтична композиція, яка їх містить

Реферат: Винахід стосується сполуки формули (І): CH2 OCH3 CH3 O (І) OR2 R1O H2 C CH3 OR3 CH3 O CH2 , UA 98623 C2 в якій R1, R2 і R3, які можуть бути однаковими або різними, кожний являє собою атом водню або групу формули (А): O HO OH O (А) OH OH , Запропоновані лікарські засоби, що містять ці сполуки. UA 98623 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Даний винахід стосується нових сполук діосметину, способу їх одержання і фармацевтичних композицій, які їх містять. Сполуки діосметину і їх активність при лікуванні венозної недостатності розкрито в описі патенту ЕР 0709383. Сполуки за даним винаходом являють собою інгібітори молекул адгезії, інгібітори NADPHоксидази і агенти проти агрегації тромбоцитів. Властивості інгібування адгезії лейкоцитів та інгібування NADPH-оксидази є важливими при лікуванні хронічних венозних захворювань з урахуванням того факту, що, при цій патології, було широко описане запалення мікроциркуляторної сітки нижніх кінцівок, що залучає інфільтрацію лейкоцитами [Verbeuren TJ, Bouskela E, Cohen RA et ah, Regulation of adhesion molecules: a new target for the treatment of chronic venous insufficiency, 2000, Microcirculation, 7, S41-S48]. Властивість інгібувати агрегацію тромбоцитів демонструє антитромботичний потенціал сполук за даним винаходом не тільки у запобіганні і лікуванні венозних і артеріальних тромбозів, а і при лікуванні хронічних венозних захворювань, де тромбоцити можуть активуватись медіаторами запалення, або при лікуванні пацієнтів з посттромботичним синдромом. При хронічних венозних захворюваннях було продемонстровано наявність мікроангіопатії капілярів/венул. Така мікроангіопатія є наслідком венозної гіпертензії і є причиною проблем з фільтрацією капілярів/венул (підвищена проникність) і, таким чином, мікронабряків [Barbier et al, Microcirculation and rheology, 1994, Presse med. 23, 213-224]. Численні дослідження продемонстрували залучення активації ендотеліальних клітин у венозну гіпертензію, пов'язану зі збільшенням рівнів циркуляції молекул адгезії [Saharay M, Shields DA, Georgiannos SN et al., Endothelial activation in patients with chronic venous disease, 1998, Eur J Vase Surg, 15, 342-349; Verbeuren TJ, Bouskela E, Cohen RA et al., Regulation of adhesion molecules: a new 25 target for the treatment of chronic venous insufficiency, 2000, Microcirculation, 7.S41-S48]. Сполуки за даним винаходом мають не тільки протизапальну активність, але також і активність проти підвищеної проникності. Крім того, при хронічних венозних захворюваннях було продемонстроване збільшення вільних радикалів і, таким чином, активації NADPH-оксидази. Вважається, що цей окислювальний стрес пов'язаний з активацією ендотеліальних клітин та інфільтрацією лейкоцитами [Glowinski J and Glowinski S, Generation of reactive oxygen metabolites by the varicose vein wall, 2002, Eur. J. Vasco Endovasc. Surg., 23, 5550-555]. Інфільтрація ендотеліальними клітинами та індукування молекул адгезії і NADPH-оксидази були продемонстровані при численних судинних патологіях [Bedard K and Кrausе КН, The NOXfamily of ROS-generating oxidases: Physiology and pathophysiology, 2007, Physiol. Rev. 87, 245-313]. Відповідно, сполуки за даним винаходом можуть бути застосовані при профілактиці або лікуванні венозних захворювань, особливо хронічних венозних захворювань на будь-якій стадії (біль, телеангіектазія, варикозні вени, набряки, трофічні захворювання, виразки), а також при профілактиці або лікуванні посттромботичного синдрому, судинних ускладнень, пов'язаних з діабетом, гіпертензією, атеросклерозом, запаленням, метаболічного синдрому, пов'язаного з ожирінням, судинних ускладнень, пов'язаних з ожирінням, стенокардією, артеріїтом нижніх кінцівок або порушенням кровообігу мозку, при заживленні хронічних ран, включаючи в основному венозні або змішані виразки ніг і діабетичну стопу, при лікуванні або профілактиці гемороїдальних нападів, при лікуванні або профілактиці пролежнів і при лікуванні розсіяного склерозу. Більш конкретно, даний винахід стосується сполук формули (І): (I) , 1 UA 98623 C2 в якій R1 R2 і R3, які можуть бути однаковими або різними, кожний являє собою атом водню або групу формули (А): (A) , 5 Сполуки, де щонайменше один з R1, R2 і R3 являють собою групу (А), є метаболітами сполуки формули (Іа), в якій R1 R2 і R3, кожний являє собою атом водню. Даний винахід стосується також способу одержання сполук формули (І), починаючи з діосметину формули (II): 10 (II) , який піддають реакції з металілбромідом для одержання сполуки формули (III): (III) , 15 яку нагрівають для одержання сполуки формули (Іа), окремого випадку сполук формули (І), в якій R1, R2 і R3 кожний являє собою атом водню: 2 UA 98623 C2 (Ia) , яку, коли бажано одержати інші сполуки формули (І), піддають реакції зі сполукою формули (IV): (IV) , 5 10 в якій Ас являє собою ацетильну групу, для одержання, після зняття захисних груп кислотної функції і спиртових функцій групи (А), сполук формули (І),в якій щонайменше один з R1, R2 і R3 є іншим, ніж Н. Коли сполуки формули (І) одержують у домішках, вони можуть бути розділені, наприклад, за допомогою препаративної ВЕРХ. Сполуку формули (Іb), в якій R1 і R3 кожний являє собою атом водню і R2 являє собою групу формули (А), також можуть одержувати шляхом ацетилування сполуки формули (Іа) для одержання сполуки формули (V): (V) , 15 в якій Ас являє собою ацетильну групу, яку піддають реакції зі сполукою формули (IV) для одержання сполуки формули (VI): 3 UA 98623 C2 (VI) , 5 10 15 20 25 30 35 40 45 в якій Ас являє собою ацетильну групу, знімають захисні групи кислотної функції і спиртової і фенольної функції якої для одержання сполуки формули (Іb). Сполуки за даним винаходом являють собою інгібітори молекул адгезії і NADPH-оксидази і агенти проти агрегації тромбоцитів. Основуючись на цьому, вони є корисними при профілактиці венозних захворювань, особливо хронічних венозних захворювань на будь-якій стадії (біль, телеангіектазія, варикозні вени, набряки, трофічні захворювання, виразки), а також при профілактиці або лікуванні посттромботичного синдрому, судинних ускладнень, пов'язаних з діабетом, гіпертензією, атеросклерозом, запаленням, метаболічного синдрому, пов'язаного з ожирінням, судинних ускладнень, пов'язаних з ожирінням, стенокардією, артеріїтом нижніх кінцівок або порушенням кровообігу мозку, при заживленні хронічних ран, включаючи в основному венозні або змішані виразки ніг і діабетичну стопу, при лікуванні або профілактиці гемороїдальних нападів, при лікуванні або профілактиці пролежнів і при лікуванні розсіяного склерозу. Даний винахід стосується також фармацевтичних композицій, які містять як активний інгредієнт сполуку формули (І), у поєднанні з одним або більше фармацевтично прийнятним, нетоксичним, інертним носієм або наповнювачем. Серед фармацевтичних композицій відповідно до даного винаходу можуть бути згадані більш конкретно ті, які придатні для орального, парентерального (внутрішньовенного, внутрішньом'язового або підшкірного), під- або черезшкірного, назального, ректального, під'язикового, очного або респіраторного введення, і особливо таблетки або драже, під'язикові таблетки, тверді желатинові капсули, капсули, супозиторії, креми, мазі, шкірні гелі, препарати, придатні для ін'єкцій або для пиття, аерозолі, очні краплі або краплі для носа. В доповнення до сполуки формули (І), фармацевтичні композиції відповідно до даного винаходу містять один або більше наповнювачів або носіїв, таких як розріджувачі, змащувальні речовини, зв'язувальні речовини, агенти, які викликають дезінтеграцію, абсорбенти, барвники, підсолоджувачі. Наприклад, як наповнювачі або носії можуть бути згадані: - як розріджувачі: лактоза, декстроза, сахароза, маніт, сорбіт, целюлоза, гліцерин, - як змащувальні речовини: кремнезем, тальк, стеаринова кислота і її магнієва і кальцієва солі, поліетиленгліколь, * як зв'язувальні речовини: силікат алюмінію, силікат магнію, крохмаль, желатин, трагакант, метилцелюлоза, натрій карбоксиметилцелюлоза і полівінілпіролідон, * як агенти, які викликають дезінтеграцію: агар, альгінова кислота і її натрієва сіль, шипучі суміші. Процент активного інгредієнта формули (І) у фармацевтичній композиції складає переважно від 5 % до 50 % за вагою. Корисне дозування змінюється відповідно до віку і ваги пацієнта, шляху введення, природи і тяжкості захворювання і проведення будь-якого пов'язаного лікування і знаходиться в діапазоні від 0,5 до 1000 мг за одне або більше введень на день. Наступні Приклади ілюструють даний винахід. Структури сполук, які розкрито у Прикладах, були визначені відповідно до звичайних спектрофотометричних методик (інфрачервоний, ядерний магнітний резонанс, мас-спектрометрія). Скорочення: DMSO: диметил сульфоксид NADPH: відновлена форма нікотинамідаденіндинуклеотидфосфату ВЕРХ: Високоефективна рідинна хроматографія 4 UA 98623 C2 ПРИКЛАД 1: 6,8,2'-Трис(ізобут-2-ен-1-іл)діосметин 5 10 15 20 25 30 35 Стадія А: 2-{4-Метокси-3-[{ізобут-2-ен-1-іл)окси]феніл}-5,7-біс[{ізобут-2-ен-1-іл]окси]-4Нхромен-4-он До 30 г діосметину додають 69,3 г карбонату калію і 450 мл ацетону. Суміш нагрівають зі зворотним холодильником протягом 4 годин 30 хвилин і потім повертають до температури навколишнього середовища; потім додають 54 г металілброміду. Реакційну суміш потім нагрівають зі зворотним холодильником протягом ночі і потім повертають до температури навколишнього середовища і фільтрують. Фільтрувальний коржик промивають ацетоном, і потім фільтрат випаровують для одержання залишку, який перекристалізовують з толуолу для одержання вказаної у заголовку сполуки. Стадія В: 6,8,2'-Трис(ізобут-2-ен-1-іл)діосметин До 10 г сполуки, одержаної на попередній Стадії, додають 120 мл N, N-диметиланіліну; суміш потім нагрівають зі зворотним холодильником протягом 1 години. Розчинник потім випаровують під зниженим тиском і одержаний залишок перекристалізовують з ізопропанолу для одержання вказаної у заголовку сполуки. Точка плавлення: 141 °C. ПРИКЛАД 2: (5-Гідрокси-2-[3-гідрокси-4-метокси-2-(ізобут-2-ен-1-іл)феніл]-6,8-біс(ізобут-2ен-1-іл)-4-оксо-4Н-хромен-7-іл)-бета-D-глюкуронова кислота Стадія А: Метил 5-гідрокси-2-[3-гідрокси-4-метокси-2-(ізобут-2-ен-1-іл}феніл]-6,8-біс(ізобут-2ен-1-іл)-4-оксо-4Н-хромен-7-іл-2,3,4-трис-O-ацетил-бета-D-глюкуронат Вказану у заголовку сполуку одержують шляхом піддавання реакції сполуки Прикладу 1 (250 мг) зі сполукою формули (IV) (429 мг), шляхом міжфазного каталізу, відповідно до методики, розкритої у публікації Synth Commun 1999, 29(16), 2775-2781. Стадія В: (5-Гідрокси-2-[3-гідрокси-4-метокси-2-(ізобут-2-ен-1-іл)феніл]-6,8-біс(ізобут-2-ен-1іл)-4-оксо-4Н-хромен-7-іл)-бета-D-глюкуронова кислота Сполуку, одержану на Стадії А, розчиняють у метанолі і потім додають гідроксид натрію. Суміш нагрівають зі зворотним холодильником протягом 1 години 30 хвилин і потім нейтралізують 2N розчином хлористоводневої кислоти перед випаровуванням досуха для одержання сказаної у заголовку сполуки. 5 UA 98623 C2 ПРИКЛАД 3: 3-[5,7-Дигідрокси-6,8-біс(ізобут-2-ен-1-іл)-4-оксо-4Н-хромен-2-іл]-6-метокси-2(ізобут-2-ен-1-іл)феніл-бета-D-глюкуронова кислота 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Стадія А: 5-Гідрокси-2-[3-гідрокси-4-метокси-2-(ізобут-2-ен-1-іл)феніл]-6,8-біс(ізобут-2-ен-1іл)-4-оксо-4Н-хромен- 7-іл ацетат Сполуку Прикладу 1 (3 г) розчиняють у піридині і потім додають ангідрид оцтової кислоти (0,61 мл) при кімнатній температурі. Реакційну суміш перемішують протягом 16 годин і потім випаровують досуха. Залишок додають в льодяну воду і потім екстрагують дихлорметаном, висушують, фільтрують і випаровують. Сирий продукт, одержаний таким чином, очищують на силікагелі і потім за допомогою зворотно-фазної препаративної ВЕРХ для одержання вказаної у заголовку сполуки. Стадія В: Метил 3-[7-(ацетилокси)-5-гідрокси-6,8-біс(ізобут-2-ен-1-іл)-4-оксо-4Н-хромен-2-іл]6-метокси-2-(ізобут-2-ен-1-іл)феніл-2,3,4-трис-О-ацетил-бета-D-глюкуронат Починаючи зі сполуки, одержаної на попередній Стадії, вказану у заголовку сполуку одержують відповідно до методики Стадії А Прикладу 2. Стадія С: 3-[5,7-Дигідрокси-6,8-біс(ізобут-2-ен-1-іл)-4-оксо-4Н-хромен-2-іл]-6-метокси-2(ізобут-2-ен-1-іл)феніл-бета-D-глюкуронова кислота Починаючи зі сполуки, одержаної на попередній Стадії, вказану у заголовку сполуку одержують відповідно до методики Стадії В Прикладу 2. ФАРМАКОЛОГІЧНІ ДОСЛІДЖЕННЯ У наступних Прикладах термін "посилальна сполука" стосується Прикладу 69 опису патенту ЕР 0 709 383. ПРИКЛАД 4: In vitro інгібування агрегації тромбоцитів Зразок крові витягують з сонної артерії анестезованих новозеландських кроликів над 0,109 М цитратом. Збагачену тромбоцитами плазму одержують шляхом центрифугування. Тромбоцити потім промивають шляхом центрифугування. Промиті тромбоцити повторно суспендують в буфері Tyrode. Суспензію тромбоцитів розміщують у ямці і потім у агрегометрі при 37 °C, з перемішуванням, у присутності сполуки Прикладу 1 (30 мкМ) або посилальної сполуки (30 мкМ), кожна з яких розведена у одному й тому ж розчиннику (0,1 % DMSO). Через 2 хвилини викликають агрегацію, використовуючи колаген (4 мкг/мл); відповідь потім зчитують протягом 6 хвилин. Агрегацію тромбоцитів вимірюють за допомогою нефелометрії, інакше кажучи за допомогою світлового потоку у процентах, що розсіюється у суспензії тромбоцитів по відношенню до ямки, яка містить Tyrode, і ямки, яка містить розчинник (0,1 % DMSO). Антиагрегаційну ефективність сполук діосметину відповідно до даного винаходу і, особливо, сполуки Прикладу 1 і посилальної сполуки оцінюють як функцію інгібування агрегації тромбоцитів у процентах, чим більше процент інгібування, тим більше активність. Сполука Прикладу 1 (30 мкМ) викликає інгібування 36,6±9,9 %, в той час як посилальна сполука не викликає значного ефекту (4,1±1,8 %); (Р