Нові сполуки похідних сапогеніну, їх застосування та композиція

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

1. Cполуки загальної формули II:

,

в яких групу R вибирають з алкілкарбонілу або алкоксикарбонілу, при цьому алкільна група, можливо, заміщена арильною групою, аміногрупою, алкоксикарбоніламіногрупою, моноалкіламіногрупою, діалкіламіногрупою, N-алкілом, N-алкоксикарбоніл-аміногрупою або залишком карбонової кислоти (-СООН), або будь-якою їх комбінацією, за умови, що

R не є незаміщеним ацетилом;

R не є незаміщеним етоксикарбонілом, якщо при цьому стереохімічна конфігурація С3 є S(β) і C25 є R;

R не є сукцинілом, якщо при цьому стереохімічна конфігурація С3 є S(β) і С25 є S або стереохімічна конфігурація С3 є R(a) або S(β) і С25 є R; і

R не є пропіонілом, бутирилом, ізобутирилом, валерилом, ізовалерилом, капроїлом, ізокапроїлом, діетилацетилом, октаноїлом, деканоїлом, лаурилом, міристилом, пальмітилом, стеарилом, бензоїлом, фенілацетилом, фенілпропіонатом, цинаматом, р-нітробензоатом, 3,5-динітробензоатом, р-хлорбензоатом, 2,4-дихлорбензоїлом, р-бромбензоїлом, m-бромбензоїлом, р-метоксибензоїлом, фуроїлом, фталілом, якщо стереохімічна конфігурація С25 є R, а стереохімічна конфігурація С3 є S(β);

включаючи, з урахуванням вищевказаних умов, всі їх стереоізомери, рацемічні суміші і солі.

2. Сполуки формули II, визначені в п. 1, в яких групу R вибирають з нижчого алкілкарбонілу і нижчого алкоксикарбонілу, можливо, заміщеного кінцевим залишком карбонової кислоти (-СООН).

3. Сполуки за пп. 1 або 2, в яких метильна група у С25 має R-конфігурацію.

4. Сполуки за пп. 1 або 2, в яких метильна група у С25 має S-конфігурацію.

5. Сполуки, вибрані з епісмілагеніну катилату, сарсасапогеніну катилату, епісарсасапогеніну катилату, епісарсасапогеніну сукцинату, сарсасапогеніну гліцинату, епісарсасапогеніну гліцинату, смілагеніну гліцинату, епісмілагеніну гліцинату, сарсасапогеніну аланінату, епісарсасапогеніну аланінату, смілагеніну аланінату, епісмілагеніну аланінату, сарсасапогеніну валінату, епісарсасапогеніну валінату, смілагеніну валінату, епісмілагеніну валінату, сарсасапогеніну фенілаланінату, епісарсасапогеніну фенілаланінату, смілагеніну фенілаланінату, епісмілагеніну фенілаланінату, сарсасапогеніну ізолейцинату, епісарсасапогеніну ізолейцинату, смілагеніну ізолейцинату, епісмілагеніну ізолейцинату, сарсасапогеніну метіонінату, епісарсасапогеніну метіонінату, смілагеніну метіонінату, епісмілагеніну метіонінату і їх фармацевтично прийнятних солей.

6. Сполуки за будь-яким з пп. 1-5 для застосування  як лікарського засобу.

7. Застосування сполуки за будь-яким із пп.1-5 або її фармацевтично

прийнятної солі для виробництва лікарського засобу для лікування

захворювань, викликаних зниженням кількості мускаринових та/або

адренорецепторів, або порушеннями у циклі відновлення мускаринових та/або

адренорецепторів або зниженням функції мускаринових та/або

адренорецепторів у людини або тварини.        

8. Композиція, що має активність проти когнітивної дисфункції у людини або тварини, яка включає ефективну дозу сполуки загальної формули ІІ за будь-яким з пп.1-5, або її фармацевтично прийнятні солі та прийнятний носій.

9. Композиція за п.8, що є фармацевтичною композицією.

10. Композиція за п.8, яка відрізняється тим, що вона адаптована для включення до складу продукта харчування.

11. Композиція за п.8, яка відрізняється тим, що вона адаптована для включення до складу харчової добавки.

12. Композиція за п.8, яка відрізняється тим, що вона адаптована для включення до складу напою.

Текст

1. Cполуки загальної формули II: 2 (19) 1 3 78696 4 новлення мускаринових та/або позицією. адренорецепторів або зниженням функції муска10. Композиція за п.8, яка відрізняється тим, що ринових та/або вона адаптована для включення до складу продуадренорецепторів у людини або тварини. кта харчування. 8. Композиція, що має активність проти когнітивної 11. Композиція за п.8, яка відрізняється тим, що дисфункції у людини або тварини, яка включає вона адаптована для включення до складу харчоефективну дозу сполуки загальної формули ІІ за вої добавки. будь-яким з пп.1-5, або її фармацевтично прийня12. Композиція за п.8, яка відрізняється тим, що тні солі та прийнятний носій. вона адаптована для включення до складу напою. 9. Композиція за п.8, що є фармацевтичною ком Винахід стосується сапогенінів і їх похідних, їх синтезу і застосування, а також терапевтичних способів на основі їх застосування. Сапогеніни і їх похідні призначені для застосування у лікуванні когнитивної дисфункції, некогнитивної нейродегенерації, некогнитивної нейром'я зової дегенерації і втрати рецепторів. В іншому аспекті винахід стосується композицій для застосування у таких способах лікування. Когнитивна дисфункція є ознакою деменційних станів і синдромів, таких як хвороба Альцгеймера (ХА), сенільна деменція альцгеймеровського типу (СДАТ), деменція з тільцями Леві і васкулярна деменція. У меншій мірі когнитивна дисфункція є також ознакою деяких недеменційних станів і синдромів, таких як легкий когнитивний розлад (ЛКР), погіршення пам'яті за віком (ППВ) і аутизм. Некогнитивна нейродегенерація (тобто, нейродегенерація у відсутність когнитивної дисфункції) і некогнитивна нейром'язова дегенерація (тобто, нейром'язова дегенерація у відсутність когнитивної дисфункції) є ознакою таких станів і синдромів, як хвороба Паркінсона, м'язова дистрофія, включаючи плечо-лопатково-лицеву м'язову дистрофію (ПЛЛ), м'язову дистрофію Дюшенна, м'язову дистрофію Беккера і м'язову дистрофію Брюса, дистрофія Фучса, міотонічна дистрофія, корнеальна дистрофія, синдром рефлекторної симпатичної дистрофії (СРСД), нейроваскулярна дистрофія, міастенія-гравіс, хвороба Ламберта-Ітона, хвороба Хантінгтона, автотрофний латеральний склероз (АЛС) і множинний склероз. Втрата рецепторів, зокрема, втрата нікотинових і/або мускаринових рецепторів і/або допамінових рецепторів і/або адреноцепторів, є ознакою деяких або усіх ви щезазначених станів і синдромів. Згадана втрата рецепторів у відсутність когнитивного, неврального або нейром'язового погіршення також є ознакою таких станів і синдромів, як постуральна гіпотензія, синдром хронічної втоми, астма, схильність до серцевої недостатності і дегенерація жовтої плями. Вищезазначені стани і синдроми являють собою серйозну і зростаючу проблему в усі х суспільства х, де внаслідок збільшення середньої тривалості життя і контролю адвентиційних захворювань демографічна крива постійно підвищується у бік старіння населення. Таким чином, існує невідкла дна потреба у засобах, які могли б лікувати такі захворювання або сприяти їх лікуванню чи профілактиці. [В WO-A-01/23406], опис якого включений в цю заявку у ви гляді посилання, запропоновані, серед інших сполук, похідні сапогеніну загальної формули (І): а також їх стереоізомери і рацемічні суміші, їх фармацевтично прийнятні проліки і солі, де -R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, R10 незалежно один від одного являють собою Н, ОН, =О або OR, де R -алкіл, можливо, заміщений; ацил, можливо, заміщений; карбамоїл, можливо, заміщений; алкоксикарбоніл; -R9, R12, R 11, R13 можуть являти собою Н, ОН або OR, де R -алкіл, можливо, заміщений; ацил, можливо, заміщений; карбамоїл, можливо, заміщений; алкоксикарбоніл; -R11 -алкільна група, можливо, заміщена; ----представляє можливий подвійний зв'язок, але за виключенням сполук, в яких одночасно: -R1=R2=R4=R5=R6=R7=R8= =R10=R11=R9=R12=R13=H, -R3=βΟΗ, -R14=СН3, -метильна група в положенні С22 є а, -С20 є a, а в положенні С25 присутня Sконфигурація; і застосування цих сполук у якості засобів для підвищення кількості мускаринових рецепторів або покращення функції мускаринових рецепторів у людини або нижчої тварини, зокрема, для лікування когнитивної дисфункції при різних захворюваннях, більш конкретно, для лікування когнитивної дисфункції у пацієнтів, що страждають на захворювання, вибрані з ХА, СДАM, хворобу Паркінсона, деменцію з тільцями Леві, аутизм, міастеніягравіс, хворобу Ламберта-Ітона, постуральну гіпо 5 78696 6 тензію, синдром хронічної втоми і захворювання та Bull., N. Nakeya et al, 32, p.692, 1984; Pro-drugs as проблеми, пов'язані зі старінням. Novel Delivery Systems, T. Higuchi and V. Stella, Згідно з визначеннями, наведеними [в описі Vol.14 of the A.C.S. Symposium Series та WO-A-01/23406], у змінних групах вищезазначеної Bioreversible Carriers in Drug Design, Edward B. формули (І) Roche, ed., American Pharmaceutical Association "Ацил" означає груп у Η-CO-або алкіл-СО-, де and Pergamon Press, 1987, які включені в цю заявалкільна група має значення, визначене далі. Пеку у вигляді посилання; реважні ацили містять нижчий алкіл. Типові аци"Фармацевтично прийнятні солі" означає відльні групи включають форміл, ацетил, пропаноїл, носно нетоксичні неорганічні та органічні солі вка2-метилпропаноїл, бутаноїл і пальмітоїл; заних сполук з кислотами та основами. Ці солі "Алкіл" означає аліфатичну вуглеводневу гр уможуть бути отримані in situ під час кінцевої ізоляпу, що може бути нерозгалуженою або розгалужеції і очистки сполук. Зокрема, солі з кислотами ною і містить в ланцюгу від 1 до 20 атомів вуглеможуть бути отримані шляхом окремої реакції цю. Переважні алкільні групи містять в ланцюгу від очищеної сполуки у формі вільної основи з прида1 до 12 атомів вуглецю. "Розгалужена" означає, тною органічною або неорганічною кислотою і ізощо одна або більше нижчих алкільних груп, таких ляції солі, утвореної таким чином. [Див., наприяк метил, етил або пропил, з'єднані з прямолінійклад, S.M. Berge, et al., Parmaceutical Salts, J. ним алкільним ланцюгом. "Нижчий алкіл" -такий, Pharm. Sci., 66: p.1-19 (1977)], що включена в цю що містить 1-4 атомів вуглецю в ланцюгу, який заявку у вигляді посилання. Солі з основами моможе бути нерозгалужений або розгалужений. жуть бути також отримані шляхом окремої реакції Типові алкільні групи включають метил, етил, nочищеної сполуки в її кислотній формі з придатпропил, i-пропил, n-бутил, t-бутил, n-пентил, 3ною органічною або неорганічною основою і ізоляпентил; ції солі, утвореної таким чином. Солі з основами "Можливо, заміщений" означає, що згадана включають фармацевтично прийнятні солі металів група може бути заміщена одним або більше заміта амінів. сниками, що можуть бути однаковими або різними Згідно [з описом WO-A-01/23406], ефективі включають галоген, алкіл, циклоалкіл, гідрокси, ність сапогенінів загальної формули (І), включаючи алкокси, аміно, ациламіно, арил, ароїламіно, карїх стереоізомери і рацемічні суміші, їх фармацевбокси, алкоксикарбоніл, аралкоксикарбоніл, гететично прийнятні проліки і солі, щонайменше частроаралкоксикарбоніл, можливо, заміщений карбаково зумовлена здатністю цих сполук нормалізумоїл; вати кількість рецепторів, тобто, запобігати "Фармацевтично прийнятний" означає, у мезниженню кількості рецепторів з часом, а також жах загальноприйнятних медичних і ветеринарних відновлювати кількість рецепторів від знижених до норм, придатний для застосування у контакті з нормальних рівнів (стор. 20, рядки 6-9). клітинами організму людини і нижчих тварин без [В DE-A-4303214], опис якого включений в цю надмірної токсичності, подразнення, алергічних заявку у вигляді посилання, описане застосування реакцій і т.п., і відповідний до прийнятного співвіддуже широкого діапазону сапонінів і сапогенінів у ношення користі та риску. "Фармацевтично прийнлікуванні широкого діапазону вірусних за хворюятні проліки" означає такі проліки вказаних сполук, вань, але опис не містить даних, що дозволили б які, у межах загальноприйнятних медичних і ветефа хівцеві у відповідній області вибрати переважну ринарних норм, придатні для застосування у консполуку для лікування якогось конкретного вірустакті з тканинами людини і нижчих тварин без ного захворювання. Хоча хвороба Альцгеймера і надмірної токсичності, подразнення, алергічних хвороба Паркінсона там згадані, ці стани, як відореакцій і т.п., відповідають прийнятному співвідмо, не мають вірусного походження, тому принциношенню користі та риску та ефективні при викопи, викладені в документі, не можуть розглядатися ристанні їх за призначенням, а також цвітер-іонні як застосовні до цих хвороб. форми цих сполук, якщо вони можливі. Термін [В WO-A-99/16786 (опубл. 8 квітня 1999)], опис "проліки" означає сполуки, які швидко трансфорякого включений в цю заявку у вигляді посилання, муються in vivo в батьківські сполуки вищезазнаописане застосування природних сапонінів для ченої формули, наприклад, шляхом гідролізу в лікування деменції. Сапоніни найчастіше є водокрові. Функціональні групи, які можуть швидко розчинними, в той час як сапогеніни є ліпідорозтрансформуватися шляхом метаболічного розщечинними, і тому сапоніни менш ефективно прониплення in vivo, утворюють клас груп, здатних до кають через гематоенцефалічний бар'єр. реакцій з карбоксильною групою. Завдяки легкості, [В патентній заявці Китаю №CN-A-1096031], з якою здатні до метаболічного розщеплення групи опис якої включений в цю заявку у вигляді посивказаних сполук розщіплюються in vivo, сполуки, лання, описане застосування спіростанового сапощо несуть такі групи, діють як проліки. Докладне геніну, сарсасапогеніну, у двосторонній регуляції обговорення проліків наведено [в Design of Prodβ-адренергічних і М-холінергічних рецепторів. rugs, Η. Bundgaard, ed., Elsevier, 1985; Methods in Будь-яка специфічна фармацевтична активність Enzymology, K. Widder et al., Ed., Academic Press, не згадується. Проте [в "Synthesis and Applications 42, p.309-396, 1985; A Textbook of Drug Design and of Isotopically Labelled Compounds", 1998, pages Development, Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, 215-320, Yi et al.], описане застосування сарсасаed., Chapter 5; Design and Applications of Prodrugs, погеніну в лікуванні сенільної деменції. p.113-191, 1991; Advanced Drug Delivery Reviews, Проте у випадках хвороби Паркінсона, міастеH. Bundgaard, 8, p.1-38, 1992; Journal of Pharmaнія-гравіс, хвороби Ламберта-Ітона, постуральної ceutical Sciences, 77, p.285, 1988; Chem. Pharm. гіпотензії і синдрому хронічної втоми когнитивна 7 78696 8 дисфункція не є первинним симптомом, хоча вона схильні до них. може бути присутня як один з можливих вторинних У найбільшій мірі згадане лікування може бути симптомів. Крім того, ці стани не є вірусними зазастосоване до людини або нижчих тварин, що хворюваннями або деменційними захворюваннястраждають на будь-яку з таких хвороб: хвороба ми. Більшість з цих розладів є так званими "спектПаркінсона, м'язова дистрофія, включаючи плечоральними" розладами, для яких властивий лопатково-лицеву м'язову дистрофію (ПЛЛ), м'яширокий діапазон комбінацій симптомів з різною зову дистрофію Дюшенна, м'язову дистрофію Беквідносною тяжкістю. Тому у багатьох випадках кера і м'язову дистрофію Брюса, дистрофія Фучса, лікування когнітивної дисфункції (наприклад, деміотонічна дистрофія, корнеальна дистрофія, синменції) не обов'язково. дром рефлекторної симпатичної дистрофії В основі цього винаходу лежить виявлений (СРСД), нейроваскулярна дистрофія, міастеніянами факт, що деякі сапогеніни, включаючи сполугравіс, хвороба Ламберта-Ітона, хвороба Хантінгки формули І, визначені [в WO-A-01/23406], мають тона, автотрофний латеральний склероз (АЛС), вражаючу активність проти некогнитивної нейромножинний склероз, постуральна гіпотензія, синддегенерації і некогнитивної нейром'язової дегенером хронічної втоми, астма, схильність до серцерації, а також проти втрати рецепторів у відсутвої недостатності і дегенерація жовтої плями. ність когнитивного, неврального або В першому аспекті цей винахід стосується занейром'язового погіршення. Цей факт забезпечує стосування сполук загальної формули II, де групу можливість вдосконалення лікування деяких невіR вибирають з водню; алкіл карбонілу; або алкокрусних спектральних та неспектральних розладів, сикарбонілу; при цьому алкільна група, можливо, при яких когнитивна дисфункція не є первинним заміщена арильною групою, аміногрупою, моноалсимптомом, таких як хвороба Паркінсона, м'язова кіламіногрупою, діалкіламіногрупою, залишком дистрофія, включаючи плечо-лопатково-лицеву карбонової кислоти (-СООН) або будь-якою їх м'язову дистрофію (ПЛЛ), м'язову дистрофію Дюкомбінацією; за умови, що шенна, м'язову дистро фію Беккера і м'язову дисR не є воднем або незаміщеним ацетилом, трофію Брюса, дистрофія Фучса, міотонічна дисякщо при цьому стереохімічна конфігурація С3 не трофія, корнеальна дистрофія, синдром є a, а С25 - не S; рефлекторної симпатичної дистрофії (СРСД), нейR не є незаміщеним етоксикарбонілом, якщо роваскулярна дистрофія, міастенія-гравіс, хвороба при цьому стереохімічна конфігурація С3 є S(b), a Ламберта-Ітона, хвороба Хантінгтона, автотрофC25 є R; і ний латеральний склероз (АЛС), множинний склеR не є сукцинілом, якщо при цьому стереохіміроз, постуральна гіпотензія, синдром хронічної чна конфігурація С3 є S(b), a C25 є S, або стереовтоми, астма, схильність до серцевої недостатнохімічна конфігурація С3 є R(a), а С25 є R; сті і дегенерація жовтої плями. (включаючи, з урахуванням умов, вказаних Крім того, ми виявили, що деякі з цих сполук вище, всі їх стереоізомери і рацемічні суміші), і їх мають активність проти когнитивної дисфункції, що фармацевтично прийнятних солей раніш не було описано. у лікуванні або профілактиці, або в отриманні В першому аспекті цей винахід стосується закомпозицій (наприклад, фармацевтичних композистосування сполук загальної формули II: цій, продуктів харчування, харчови х добавок і напоїв) для лікування або профілактики (і) когнитивної дисфункції, (іі) некогнитивної нейродегенерації, (ііі) некогнитивної нейром'язової дегенерації, або (iv) втрати рецепторів у відсутність когнитивного, неврального або нейром'язового погіршення, у людини або нижчих тварин, що страждають на ці захворювання або схильні до них. В одному аспекті метильна група у С 25 знаходиться в S-конфігурації; ці сполуки за винаходом являють собою сарсасапогенін і епісарсасапогенін де групу R вибирають з водню; алкілкарбонілу; та їх по хідні. В іншому аспекті метильна група у або алкоксикарбонілу; при цьому алкільна група, С25 знаходиться в R-конфігурації; ці сполуки за можливо, заміщена арильною групою, аміногрувинаходом являють собою смілагенін і епісмілагепою, моно-або діалкіламіногрупою, залишком карнін та їх по хідні. бонової кислоти (-СООН) або будь-якою їх комбіВинахід також стосується відповідних способів нацією; лікування людини або нижчої тварини і компози(включаючи всі їх стереоізомери і рацемічні цій, що містять активні речовини, для застосувансуміші), і їх фармацевтично прийнятних солей ня в згаданих способах лікування. Крім того, деякі в лікуванні або профілактиці, або в отриманні з активних речовин, а також деякі проміжні речокомпозицій (наприклад, фармацевтичних композивини, що використовуються в способах отримання цій, продуктів харчування, харчови х добавок і наактивних речовин, є новими, і вони самі по собі, а поїв) для лікування або профілактики (і) некогнитакож способи отримання активних речовин, склативної нейродегенерації, (іі) некогнитивної дають додаткові аспекти цього винаходу. Ці аспекнейром'язової дегенерації, або (ііі) втрати рецепти більш детально описані нижче. торів у відсутність когнитивного, неврального або Активні речовини за винаходом можуть, якщо нейром'язового погіршення, у людини або нижчих це бажано, застосовуватися разом з одним або тварин, що страждають на ці захворювання або більше додатковими активними речовинами, на 9 78696 10 приклад, інгібіторами холінестерази і L-допа. виключено вказаними умовами): гідрокси, катилат Активні речовини (етоксикарбонілокси), ацетат, сукцинат, пропіонат, В наведеному вище визначенні формули II: бутират, валерат, ізовалерат, капроат, ізокапроат, Можливі аміно-, моноалкіламіно і діалкіламінодіетилацетат, октаноат, деканоат, лаурат, мірисзамісники алкільних груп, якщо вони присутні, петат, пальмітат, стеарат, бензоат, фенілацетат, реважно являють собою моно-замісник в αфенілпропіонат, цинамат, р-нітробензоїлокси, 3,5положенні алкільної групи. динітробензоїлокси, р-хлорбензоїлокси, 2,4Можливі -СООН-замісники алкільних гр уп, якдихлорбензоїлокси, р-бромбензоїлокси, mщо вони присутні, можуть знаходитися в кінцевому бромбензоїлокси, р-метоксибензоїлокси, фталіл, або будь-якому іншому положенні алкільної групи. гліцинат, аланінат, валінат, фенілаланінат, ізолей"Алкіл" означає аліфатичну вуглеводневу гр уцинат, метіонінат, аргінінат, аспартат, цистеїнат, пу, що може бути нерозгалуженою або розгалужеглутамінат, гістидинат, лізинат, пролінат, серинат, ною і містить в ланцюгу від 1 до 20 атомів вуглетреонінат, триптофанат, тирозинат, фумерат і мацю. Переважні алкільні групи містять в ланцюгу від леат. 1 до 12 атомів вуглецю. "Розгалужена" означає, У вищезазначеній формулі II група R може бущо одна або більше нижчих алкільних груп, таких ти вибрана, наприклад, з нижчого алкілу і нижчої як метил, етил або пропіл, з'єднані з прямолінійалкоксигрупи, можливо, заміщених кінцевим заним алкільним ланцюгом. "Нижчий алкіл" -такий, лишком карбонової кислоти -СООН. що містить 1-4 атомів вуглецю в ланцюгу, який Зі сполук загальної формули II і їх фармацевможе бути нерозгалужений або розгалужений. тично прийнятних солей особливо переважними є Типові алкільні групи включають метил, етил, nтакі сполуки (якщо це не виключено вказаними пропіл, i-пропіл, n-бутил, t-бутил, s-бутил, nумовами): пентил, 3-пентил. сарсасапогенін "Арил" означає будь-яку груп у, що містить сарсасапогеніну катилат ароматичне кільце або систему злитих кілець і сарсасапогеніну ацетат переважно містить до 12 атомів вуглецю. Типовою сарсасапогеніну сукцинат і його фармацевтичарильною групою є фенільна група. Арильна група но прийнятні солі може бути моно-або полізаміщеною, наприклад, епісарсасапогенін замісниками, незалежно один від одного вибраниепісарсасапогеніну катилат ми з радикалу галогену (наприклад, хлору або епісарсасапогеніну ацетат брому), алкілу, циклоалкілу, гідрокси, алкокси, аміепісарсасапогеніну сукцинат і його фармацевно, нітро, ациламіно, карбокси і алкоксикарбонілу. тично прийнятні солі "Залишок карбонової кислоти" означає групу смілагенін СООН. смілагеніну катилат "Фармацевтично прийнятні солі" означає відсмілагеніну ацетат носно нетоксичні неорганічні та органічні солі спосмілагеніну сукцинат і його фармацевтично лук за винаходом з кислотами та основами. Ці солі прийнятні солі можуть бути отримані in situ під час кінцевої ізоляепісмілагенін ції і очистки сполук. Зокрема, солі з кислотами епісмілагеніну катилат можуть бути отримані шляхом окремої реакції епісмілагеніну ацетат очищеної сполуки у формі вільної основи з придаепісмілагеніну сукцинат і його фармацевтично тною органічною або неорганічною кислотою і ізоприйнятні солі ляції солі, утвореної таким чином. [Див., наприсарсасапогеніну гліцинат і його фармацевтичклад, S.M. Berge, et al., Parmaceutical Salts, J. но прийнятні солі Pharm. Sci., 66: p.1-19 (1977)], що включена в цю епісарсасапогеніну гліцинат і його фармацевзаявку у вигляді посилання. Солі з основами мотично прийнятні солі жуть бути також отримані шляхом окремої реакції смілагеніну гліцинат і його фармацевтично очищеної сполуки в її кислотній формі з придатприйнятні солі ною органічною або неорганічною основою і ізоляепісмілагеніну гліцинат і його фармацевтично ції солі, утвореної таким чином. Солі з основами прийнятні солі включають фармацевтично прийнятні солі металів сарсасапогеніну аланінат і його фармацевтичта амінів. Приклади придатних солей з кислотами но прийнятні солі включають солі, утворені з кислотами, вибраними епісарсасапогеніну аланінат і його фармацевз соляної, сірчаної, фосфорної і азотної кислот. тично прийнятні солі Приклади придатних солей з основами включають смілагеніну аланінат і його фармацевтично солі, утворені з основами, вибраними з гідроксиду прийнятні солі натрію, гідроксиду калію і гідроксиду амонію. епісмілагеніну аланінат і його фармацевтично "Фармацевтично прийнятний" означає, у меприйнятні солі жах загальноприйнятних медичних і ветеринарних сарсасапогеніну валінат і його фармацевтично норм, що ця речовина придатна для застосування прийнятні солі у контакті з клітинами організму людини і нижчих епісарсасапогеніну валінат і його фармацевтварин без надмірної токсичності, подразнення, тично прийнятні солі алергічних реакцій і т.п., і відповідна до прийнятносмілагеніну валінат і його фармацевтично го співвідношення користі та риску. прийнятні солі У вищезазначеній формулі II група -OR може епісмілагеніну валінат і його фармацевтично бути вибрана, наприклад, з таких груп (якщо це не прийнятні солі 11 78696 12 сарсасапогеніну фенілаланінат і його фармаВ наступному аспекті винахід стосується комцевтично прийнятні солі епісарсасапогеніну феніпозиції, що має активність проти некогнитивної лаланінат і його фармацевтично прийнятні солі нейродегенерації, некогнитивної нейром'язової смілагеніну фенілаланінат і його фармацевтично дегенерації або втрати рецепторів у відсутність прийнятні солі епісмілагеніну фенілаланінат і його когнитивного, неврального або нейром'язового фармацевтично прийнятні солі сарсасапогеніну погіршення у людини або нижчої тварини, яка ізолейцинат і його фармацевтично прийнятні солі включає ефективну кількість сполуки загальної епісарсасапогеніну ізолейцинат і його фармацевформули II, що визначена вище, або її фармацевтично прийнятні солі смілагеніну ізолейцинат і його тично прийнятної солі. фармацевтично прийнятні солі епісмілагеніну ізоВ наступному аспекті винахід стосується комлейцинат і його фармацевтично прийнятні солі позиції, що має активність проти когнитивної диссарсасапогеніну метіонінат і його фармацевтично функції у людини або нижчої тварини, яка включає прийнятні солі епісарсасапогеніну метіонінат і його введення згаданій людині або нижчій тварині ефефармацевтично прийнятні солі смілагеніну метіоктивної кількості сполуки загальної формули II, що нінат і його фармацевтично прийнятні солі епісмівизначена вище, або її фармацевтично прийнятної лагеніну метіонінат і його фармацевтично прийнясолі, за умови, що R не є воднем або незаміщеним тні солі. ацетилом, якщо при цьому стереохімічна конфігуОсобливо переважною активною речовиною є рація С3 не є a, а С25 - не S; R не є незаміщеним епісарсасапогенін і його катилатний, ацетатний, етоксикарбонілом, якщо при цьому стереохімічна сукцинатний, гліцинатний, аланінатний, валінатконфігурація С3 є S(b), а С25 є R; і R не є сукциніний, фенілаланінатний, ізолейцинатний і метіонілом, якщо при цьому стереохімічна конфігурація натний ефіри, а також їх фармацевтично прийнятні С3 є S(b), а С25 є S, або стереохімічна конфігурасолі. ція С3 є R(a), а С25 є R. Активні речовини можуть виготовлятися для Вираз "фармацевтична композиція" в контексті дозування у формі фармацевтично прийнятних цього винаходу означає композицію, що включає проліків, визначення яких наведено вище відповіактивну речовину і додаткові фармацевтично придно [до WO-A-01/23406]. Приклади таких проліків йнятні носії, розріджувачі, ад'юванти, наповнювачі включають 3-ОН-форми сполук, в яких в 3або розчинники, такі як консерванти, наповнювачі, положенні знаходиться сульфонільна група (дезінтегратори, зволожувачі, емульгатори, суOSO3H), фосфонільна група (-ОР(О)(ОН)2), арилспендуючі агенти, підсолоджувачі, ароматизатори, карбонілоксигрупа, можливо, заміщена, або алкілвіддушуючі засоби, антибактеріальні засоби, прокарбамоїлоксигрупа, можливо, заміщена. тигрибкові засоби, лубриканти і диспергатори, у Композиції i застосування залежності від лікарських форм і способу їх застоВ наступному аспекті винахід стосується спосування. собу лікування або профілактики некогнитивної Вирази "продукт харчування", "харчова добавнейродегенерації, некогнитивної нейром'язової ка" і "напій" тут мають звичайні значення і не обдегенерації або втрати рецепторів у відсутність межені фармацевтичними препаратами. когнитивного, неврального або нейром'язового Дози активної речовини можуть змінюватися в погіршення у людини або нижчої тварини, що поширокому діапазоні, в залежності від тяжкості требує такого лікування, який включає введення симптомів, що лікуються або запобігаються. Звизгаданій людині або нижчій тварині ефективної чайний фахівець у цій області може самостійно кількості сполуки загальної формули II, що визназробити вибір дози, не вдаючись до зайвих дослічена вище, або її фармацевтично прийнятної солі. дів. Доза активної речовини може складати, наВ наступному аспекті винахід стосується споприклад, більше ~0,3мг/кг ваги тіла, і прийматися собу лікування або профілактики когнитивної диспереважно один раз на день. Більш типово доза функції у людини або нижчої тварини, що потребує буде складати від ~1 до ~25мг/кг, наприклад, від такого лікування, який включає введення згаданій ~1 до ~10мг/кг, і прийматися переважно один раз людині або нижчій тварині ефективної кількості на день. Композиції можуть виготовлятися у висполуки загальної формули II, що визначена вище, гляді разових лікарських форм, адаптованих для або її фармацевтично прийнятної солі, за умови, прийому від ~1 до ~10мг/кг ваги тіла пацієнта, при що R не є воднем або незаміщеним ацетилом, цьому повинна бути призначена кількість і частота якщо при цьому стереохімічна конфігурація С3 не прийомів за конкретний період часу. Для людей є a, а С25 - не S; R не є незаміщеним етоксикарзручна доза складає від ~70 до ~700мг на день. бонілом, якщо при цьому стереохімічна конфігура"Фармацевтично прийнятні лікарські форми" ція С3 є S(b), a C25 є R; і R не є сукцинілом, якщо означає лікарські форми сполук або композицій за при цьому стереохімічна конфігурація С3 є S(b), a винаходом і включає, наприклад, таблетки, драже, C25 є S, або стереохімічна конфігурація С3 є R(a), порошки, еліксири, сиропи, рідкі препарати, вклюа С25 є R. чаючи суспензії, аерозолі, інгаляційні таблетки, Активна речовина може вводитися у формі пілюлі, емульсії, розчини, гранули, капсули і супокомпозиції, що містить активну речовину і будьзиторії, а також рідкі препарати для ін'єкцій, вклюякий придатний додатковий компонент. Така комчаючи ліпосомні препарати. Технології і склади позиція може являти собою, наприклад, фармацеможна знайти в Remington, Pharmaceutical Sciвтичну композицію (ліки), продукт харчування, хаences, Mack Publishing Co., Easton, PA, останнє рчову добавку або напій. Композиція може містити видання. суміш визначених вище сполук і/або їх фармацевЗагалом, посилання на присутність однієї спотично прийнятних солей. луки з визначеної групи сполук тут включає прису 13 78696 14 тність суміші дво х або більше таких сполук. хвороби Паркінсона, м'язової дистрофії, включаюВ наступному аспекті винахід стосується спочи плечо-лопатково-лицеву м'язову дистрофію собу лікування або профілактики когнитивної дис(ПЛЛ), м'я зову дистрофію Дюшенна, м'я зову дисфункції у пацієнта, що страждає на хворобу Альцтрофію Беккера і м'язову дистрофію Брюса, дисгеймера, СДАM, ППВ, деменцію з тільцями Леві трофії Фучса, міотонічної дистрофії, корнеальної або аутизм, який включає введення пацієнту фардистрофії, синдрому рефлекторної симпатичної макологічно ефективної кількості сполуки загальдистрофії (СРСД), нейроваскулярної дистрофії, ної формули II або її фармацевтично прийнятної міастенія-гравіс, хвороби Ламберта-Ітона, хвороби солі, за умови, що R не є воднем або незаміщеним Хантінгтона, автотро фного латерального склерозу ацетилом, якщо при цьому стереохімічна конфігу(АЛС), множинного склерозу, постуральної гіпотерація С3 не є а, а С25 -не S; R не є незаміщеним нзії, синдрому хронічної втоми, астми, схильності етоксикарбонілом, якщо при цьому стереохімічна до серцевої недостатності і дегенерації жовтої плями. конфігурація С3 є S(b), a C25 є R; і R не є сукциніВинахід також стосується застосування однієї лом, якщо при цьому стереохімічна конфігурація або більше сполук формули II або їх фармацевтиС3 є S(b), a C25 є S, або стереохімічна конфігурачно прийнятних солей, за умови, що: R не є водція С3 є R(a), а С25 є R. нем або незаміщеним ацетилом, якщо при цьому В наступному аспекті винахід стосується спостереохімічна конфігурація С3 не є a, а С25 - не S; собу покращення когнитивної функції у людини R не є незаміщеним етоксикарбонілом, якщо при або нижчої тварини, який включає введення пацієцьому стереохімічна конфігурація С3 є S(b), a C25 нту фармакологічно ефективної кількості сполуки є R; і R не є сукцинілом, якщо при цьому стереохізагальної формули II або її фармацевтично прийнятної солі, за умови, що: R не є воднем або немічна конфігурація С3 є S(b), a C25 є S, або стезаміщеним ацетилом, якщо при цьому стереохіміреохімічна конфігурація С3 є R(a), а С25 є R; у чна конфігурація С3 не є a, а С25 - не S; R не є якості інгредієнта у фармацевтичній композиції, незаміщеним етоксикарбонілом, якщо при цьому продукті харчування, харчовій добавці або напої в способі лікування хвороби Альцгеймера, СДАM, стереохімічна конфігурація С3 є S(b), а С25 є R; і R ПЛЛ, ЛКР і аутизму. не є сукцинілом, якщо при цьому стереохімічна Отримання сполук для застосування за винаконфігурація С3 є S(b), а С25 є S, або стереохімічходом на конфігурація С3 є R(a), а С25 є R. Лікування Смілагенін, епісмілагенін, сарсасапогенін та може являти собою нетерапевтичний спосіб, заепісарсасапогенін є речовинами, що серійно випустосований до нормального суб'єкта, для покраскаються. Виробники включають, наприклад, щення когнитивної функції суб'єкта. Sigma Aldrich, Research Plus Inc. і Steroids Inc. В наступному аспекті винахід стосується споСпособи отримання цих речовин також можна собу лікування (і) некогнитивної нейродегенерації, знайти в літературі (наприклад, отримання епісар(іі) некогнитивної нейром'язової дегенерації, або сасапогеніну [наведене в JASC р.5225 (1959)]). (ііі) втрати рецепторів у відсутність когнитивного, Епісарсасапогенін може бути отриманий шляхом неврального або нейром'язового погіршення у лювідновлення сарсасапогеніну з використанням дини або нижчих тварин, що страждають на одну з відновлюючого засобу на основі гідриду металу. таких хвороб: хвороба Паркінсона, м'язова дисСарсасапогенін може бути отриманий з використрофія, включаючи плечо-лопатково-лицеву м'ятанням способу Lajis et al, Steroids, 1993, 58, 387зову дистрофію (ПЛЛ), м'язову дистрофію Дюшен389. Також у якості початкових матеріалів можуть на, м'язову дистрофію Беккера і м'язову використовува тися незаміщені сапогеніни, що зудистрофію Брюса, дистрофія Фучса, міотонічна стрічаються у природі в різних видах рослин, осодистрофія, корнеальна дистрофія, синдром рефбливо в рослинах виду Smilax, Asparagus, лекторної симпатичної дистрофії (СРСД), нейроAnemarrhena, Yucca або Agave. Якщо за цим винаваскулярна дистрофія, міастенія-гравіс, хвороба ходом використовують смілагенін або сарсасапоЛамберта-Ітона, хвороба Хантінгтона, автотрофгенін, він може бути застосований у формі рослинний латеральний склероз (АЛС), множинний скленого екстракту або сухо го порошкового рослинного роз, постуральна гіпотензія, синдром хронічної матеріалу, отриманого з рослини виду Smilax, втоми, астма, схильність до серцевої недостатноAsparagus, Anemarrhena, Yucca або Agave. сті і дегенерація жовтої плями, який включає ввеСполуки формули II, в яких R не є Н, можуть дення пацієнту фармакологічно ефективної кількобути отримані з використанням звичайних методик сті сполуки формули II або її фармацевтично із сполук, в яких R=Н. Переважною реакцією є реприйнятної солі. акція нуклеофільного заміщення, в якій сполуку Способи покращення когнитивної або невроформули II, в якій R=Н, піддають реакції зі сполулогічної функції і способи лікування станів, визнакою формули чених ви ще, можуть здійснюватися шляхом приL-R, йому сполуки або композиції або ліків, в в якій R вибирають з водню; алкілкарбонілу; залежності від обставин, у формі фаврмацевтичабо алкоксикарбонілу; при цьому алкільна група, ної композиції, продукту харчування, харчової доможливо, заміщена арильною групою, аміногрубавки або напою. пою, моно-або діалкіламіногрупою, залишком карВинахід також стосується застосування однієї бонової кислоти (-СООН) або будь-якою їх комбіабо більше сполук формули II або їх фармацевтинацією; a L є групою, що відщеплюється, в умовах, чно прийнятних солей у якості інгредієнта фармапридатних для нуклеофільного заміщення. цевтичної композиції, продукту харчування, харчоСполукою L-R може бути, наприклад, карбонової добавки або напою у способі лікування 15 78696 16 ва кислота або, якщо це придатно, ангідрид, або R не є пропіонілом, бутирилом, валерилом, ацилгалід (наприклад, ацилхлорид). Так, якщо R є ізовалерилом, капроїлом, ізокапроїлом, діетил катилатною (етоксикарбонільною) групою, тоді у ацетил ом, октаноїлом, деканоїлом, лаурилом, якості сполуки L-R придатний етилхлорформат. міристилом, пальмітилом, стеарилом, бензоїлом, Реакцію переважно проводять в основі, такій фенілацетилом, фенілпропіонатом, цинаматом, ряк піридин, можливо, у присутності кислоти, такої нітробензоатом, 3,5-динітробензоатом, ряк соляна кислота. хлорбензоатом, 2,4-дихлорбензоїлом, рПодробиці проведення реакцій нуклеофільнобромбензоїлом, m-бромбензоїлом, рго заміщення добре відомі. Див., наприклад, RC метоксибензоїлом, бензолсульфонілом, рLarock, in Comprehensive Organic Transformations, толуолсульфонілом, циклопентилпропіонілом, VCH publishers, 1989. фуроїлом або фталілом, якщо стереохімічна конВ реакціях, що описані тут, може бути необфігурація С25 є R, а стереохімічна конфігурація С3 хідно захистити реакційноздатні функціональні є S(b); групи, наприклад, гідрокси-, карбокси- або аміно(включаючи, з урахуванням усіх умов, всі їх групи, якщо вони бажані в кінцевому продукті, щоб стереоізомери і рацемічні суміші), і їх солі. запобігти їх небажаній участі в реакціях. Для цього Особливо у якості нових сполук слід згадати ті можуть бути використані звичайні захисні групи сполуки формули II, в яких R є будь-якою з вищезгідно зі стандартною практикою. Приклади [див. у зазначених гр уп, за виключенням ацетилу. TW Green and PGM Wuts, in "Protective Groups in Нові солі сполук загальної формули II, вклюOrganic Chemistry", John Wiley & Sons, 1991; JFW чаючи ті нові солі сполук загальної формули II, які McOmie in "Protective Groups in Organic Chemistry", самі по собі не є фармацевтично прийнятними, Plenum Press, 1973]. Для захисту амінозамісників в можуть знайти застосування у якості проміжних сполуках формули L-R, де R є амінозаміщеним, речовин у способах отримання сполук загальної переважно використовувати алкоксикарбонільну формули II та їх фармацевтично прийнятних созахисну груп у, завдяки чому амінофункція буде лей. присутня під час етапів синтезу як алкоксикарбоніОпис механізму активності ламіногрупа (переважно t-бутоксикарбоніламіно), Без створення будь-якої теорії, вважається, до зняття захисту в кислотних умовах в безводнощо сполуки, визначені вище, показують здатність му розчиннику. регулювати рецептори. Наприклад, виявилося, що Сполука, отримана таким чином, може бути деякі з цих сполук запобігають або повертають у ізольована з реакційної суміші традиційними засопротилежному напрямі втрату м ускаринових рецебами. Наприклад, сполука може бути ізольована пторів або допамінових рецепторів у мозку. Ввашляхом дистиляції розчинника з реакційної суміші жається, що ці сполуки функціонують шляхом виабо, якщо це необхідно після дистиляції розчинниправлення дефіциту кількості рецепторів або їх ка з реакційної суміші, переносу залишку у воду, функції або циклу відновлення у тварини, що підекстракції його розчинником, що змішується з водана лікуванню. дою, і дистиляції розчинника з екстракту. Крім тоОдна з гіпотез полягає в тому, що ці сполуки го, продукт може бути, якщо це бажано, додатково збільшують синтез або вивільнення, або ж знижуочищений за допомогою різноманітних, добре віють ступінь деградації нейротропних факторів, домих методик, таких як перекристалізація, перетаких як церебральний фактор росту і/або фактор осадження, або різноманітних хроматографічних росту нервів. Ці ефекти на фактори росту можуть методик, особливо колоночної хроматографії або бути зумовлені ефектом сполуки на цистолічний препаративної тонкошарової хроматографії. або ядерний рецептор, або зв'язуванням сполуки з Нові сполуки промоторною ділянкою з подальшим ефектом Деякі сполуки загальної формули II і захи щені безпосередньо на швидкість вироблення мРНК проміжні речовини в способах їх отримання, а тадля фактора росту, або є наслідком підвищеного кож їх солі, самі по собі є новими, і тому вони вироблення іншого матеріального фактора. складають додатковий аспект цього винаходу. Підвищена експресія і/або анормальна обробУ додатковому аспекті винахід стосується спока попередника амілоїдного протеїну (АРР) асоцілук загальної формули II, в яких гр упу R вибирайована з утворенням амілоїдних бляшок і церебють з алкілкарбонілу; або алкоксикарбонілу; при роваскулярних амілоїдних відкладень, які є цьому алкільна група, можливо, заміщена арильосновними морфологічними ознаками хвороби ною групою, аміногрупою, алкоксикарбоніламіногАльцгеймера. Особливий інтерес представляють рупою, моноалкіламіногрупою, діалкіламіногрупою, процеси, що регулюють протеолітичне розщепN-алкілом, N-алкоксикарбоніламіногрупою або лення АРР на амілоїдогенні і неамілоїдогенні фразалишком карбонової кислоти (-СООН) або будьгменти. Розщеплення АРР ферментом aякою їх комбінацією; за умови, що секретазою всередині β-амілоїдної послідовності R не є незаміщеним ацетилом, якщо при цьопротеїну призводить до утворення неамілоїдогенму стереохімічна конфігурація С3 не є a, а С25 ного С-термінального фрагмента і розчинного не S; фрагмента APPsa; цей останній фрагмент, як виR не є незаміщеним етоксикарбонілом, якщо явилось, має нейротропну і нейрозахисну активпри цьому стереохімічна конфігурація С3 є S(b), a ність, а також покращує пам'ять у мишей при інC25 є R; трацеребровентрикулярних (ІЦВ) ін'єкціях. У R не є сукцинілом, якщо при цьому стереохіміпротилежність цьому, обробка АРР β-секретазою чна конфігурація С3 є S(b), a C25 є S, або стереооголює N-закінчення β-амілоїду, який вивільняєтьхімічна конфігурація С3 є R(a), a C25 є R; і ся шляхом розщеплення g-секретазою біля варіа 17 78696 18 бельних С-закінчень. Результуючі β-амілоїдні пепвинаходом. За припущеннями, сполуки діють готиди, які містять 39-43 амінокислоти, як виявилось, ловним чином на ядра клітин; проте винахід не є нейротоксичними і акумулюються у вигляді бляобмежений будь-яким окремим механізмом дії. шок, які заважають межнейронним сполученням. Виявлене збільшення кількості рецепторів після У ряді досліджень показано, що стимуляція введення активної речовини інтерпретується як мускаринових рецепторів призводить до збільтаке, що приводить до збільшеної експресії протеїну мускаринових (і/або нікотинових і/або допамішення активності a-секретази. Внаслідок цього посилюється обробка АРР з перетворенням в нових) рецепторів. На малюнку позначений можливий зв'язок між секретазами і утворенням βAPPsa з його нейрозахисними ефектами. Паралеамілоїдного протеїну (описано вище). льно зменшується обробка АРР β-і g-секретазою з Фіг.2-5 більш детально описані нижче в Прирезультуючим зменшенням β-амілоїду. Ін ші кладах. трансмітери, такі як фактор росту нервів (ФРН) і Епісмілагеніну катилат, епісмілагеніну ацетат, церебральний нейротропний фактор (ЦНФ), а тасарсасапогеніну катилат, епісарсасапогеніну катикож брадикінін і вазопресин можуть мати подібні лат, епісарсасапогеніну сукцинат, епісарсасапогеефекти у збільшенні співвідношення АРР, переніну етилсукцинат (для порівняння), сарсасапогетвореного в APPsa. У ефектах ФРН може прийманін, епісарсасапогенін, смілагенін і епісмілагенін ти участь ряд чинників, які можуть включати зв'ябули випробувані на активність у ряді in vitro та in зування фактора з тирозинкіназним рецептором vi vo дослідів. Аналізи/досліди, які вважалися най(ТrkА) і стимуляцію фосфоліпази Сg з подальшим більш важливими для визначення можливої активфосфорилуванням і активацією протеїнкінази С і ності у модуляції кількостей рецепторів, включапідвищенням відносної активності a-секретази. ють такі: Сполуки за винаходом, які повертають в проАналіз 1: Клітинний аналіз тилежному напрямі втрату м ускаринових рецептоКлітини яєчника китайського хом'яка (СНО) рів і/або збільшують їх кількість, будуть мати осотрансфектували вектором, кодуючим мускаринобливу корисність. Дійсно, їх переваги можна вий рецептор і/або бета-адренорецептор. Клітинна розділити на три частини: лінія, яка використовувалася для більшості дослі1. Збільшення кількості мускаринових рецепдів, являла собою клітинну лінію, що експресувала торів, що веде до збільшеної синаптичної трансмімускариновий рецептор. сії; зворотний хід втрати і/або збільшення кількості Аналіз 2: Модель хвороби Альцгеймера нікотинових рецепторів, що знаходяться вище сиЦе in vivo модель хвороби Альцгеймера, в якій наптичної щілини, приведе до збільшення і/або β-амілоїд і іботенову кислоту вводили шляхом зворотного ходу втрати ацетилхолінового вивільін'єкції в мозок щура. нення в синаптичну щілину, що збільшить активаАналіз 3: Тест на навчання і запам'ятовування цію мускаринових рецепторів і, таким чином, посиY-подібний лабіринт використовували для вилить загальний ефект. пробування здатності до навчання і запам'ятову2. Вторинне до збільшення кількості рецептовання у щурів, підданих дії тестових сполук. Потім рів, збільшення активності a-секретази, що веде щурів умертвили і оцінили щільність мускаринових до: рецепторів в мозку за допомогою аналізу дводіля2.1 Зниженого вироблення β-амілоїду і резульнкового конкурентного зв'язування, для визначентуючого зниження утворення бляшок і нейронної ня кореляції поведінки в Y-подібному лабіринті, втрати; щільності рецепторів і активності активних речо2.2 Збільшення APPsa і результуючого покравин. щення церебральної функції, про що свідчить поАналіз 4: Нейропротекція культивованих нейкращення короткочасної і довготривалої пам'яті. ронів Для ілюстрації винаходу за допомогою необЦе in vitro випробування здатності тестових межуючих прикладів далі надається короткий опис сполук захищати нейрони від пошкодження в отосупровідних малюнків і Прикладів, наведених нижченні, ворожому до нейронів. че. Способи і результати На малюнках: Способи і результати цих дослідів описані в Фіг.1 показує гіпотетичний механізм дії сполук, наступних Прикладах, які також включають прищо застосовуються в способах за винаходом; клади способів синтезу. Фіг.2 показує ефекти сарсасапогеніну, епісарПриклад 1 сасапогеніну катилату і смілагеніну на здатність до Клітинний аналіз навчання і запам'ятовування у старих щурів; Досліджували ефекти епісмілагеніну катилату, Фіг.3 показує ефекти сарсасапогеніну, епісарсарсасапогеніну катилату, епісарсасапогеніну касасапогеніну катилату і смілагеніну на кількість тилату, епісарсасапогеніну сукцинату, епісмілагемускаринових рецепторів; ніну ацетату і сарсасапогеніну на експресію mФіг.4 показує ефекти сарсасапогеніну, епісаррецепторів в СНО-клітинах, трансфектованих вексасапогеніну катилату і смілагеніну на глутаматтором мускаринового рецептора. Кількості рецепіндуковану нейродегенерацію в первинних кортиторів оцінювали з використанням [3Н]NMSкальних нейронах щурів; і зв'язування і віднімання неспецифічного зв'язуФіг.5 показує ефект епісмілагеніну ацетату на вання. Сполуки розчиняли в диметилсульфоксиді щільність адренорецепторів m3 і β2 на п'ятий день (DMSO), і в якості контрольного досліду викорисв b2/m3-котрансфектованій клітинній лінії СНО. товували DMSO. На Фіг.1 схематично показана дія сполук за Методика: 19 78696 20 Клітини яєчника китайського хом'яка (СНО), після операції (Giovannelli et al., 1995: Neurosciекспресуючі високі рівні мускаринового рецептора ence, 6JL. 781-792.). Крім того, спільна ін'єкція β(~2,2пмоль на мг протеїну-1) вмістили у 24амілоїду з малою кількістю іботенової кислоти у чарункову пластину за 1 день до початку досліду. гіпокамп щура синергічно спричиняє нейронну Середовище культури замінили середовищем, що втрату з інфільтрацією гліальних клітин не тільки містило носій (DMSO) або сполуки. Клітини інкубупоряд з ділянкою ін'єкції, але й далеко від неї (Moвали протягом 2-3 днів, потім після зміни середоrimoto et al., 1998: Neuroscience, 84. 479-487). вища клітини інкубували ще 2-3 дні. Клітини інкуМетодика: бували з насичуючою концентрацією міченого NВ наших дослідженнях використаний метод метил-скопаламіну, ([3H]N MS). Клітини промили Morimoto (Morimoto et al., 1998: Neuroscience, 84. крижаним сольовим розчином, буферизованим 479-487) з деякими модифікаціями (одностороння фосфа том (PBS) (тричі), і зв'язаний [3H]NMS виін'єкція замість двосторонньої). Щурів Sprague значали шляхом солюбілізації рецепторів буфеDawley віком три місяці випадковим чином роздіром RIPA і наступного вимірювання рідинним сцилили на різні групи. Ін'єкцію амілоїду β1-40 і іботентиляційним лічильником. нової кислоти (обидва виробництва Sigma) провоРезультати, показані на Фіг.5, отримані з викодили за допомогою стереотаксичного інструмента ристанням клітинної лінії СНО, котрансфектованої (Stoelting Co.) з координатами АР= -0,5мм (правоадренорецепторами β2 і мускариновими рецепторуч від медіальної лінії), L= -2,8мм (назад від брерами mЗ. Для вимірювання щільності рецепторів гми), Н= -7,0мм (вентрально до мозку). Доза для β2 і m3 використовували [ 3H]NMS і [ 3H]CGP. кожного щура складала 4мкг амілоїду β1-40 і 1мкг Результати: іботенової кислоти в 1мкл сольового розчину. Ін'єПоказані в Таблиці 1, наведеній нижче, і на кцію виконували протягом 20 хвилин, а голку витяФіг.5. Протягом періоду культивування обробка гували ще через 10 хвилин. Шкіру після цього закожноюречовиною, вибраною з епісмілагеніну шивали. катилату, сарсасапогеніну катилату, епісарсасапоВісім груп були такі: геніну катилату, епісарсасапогеніну сукцинату і Робоча контрольна - звичайний сольовий розсарсасапогеніну, запобігає зниженню кількості мучин скаринових рецепторів. Інкубація котрансфектоваМодель (контрольна група, що отримала βної клітинної лінії з епісмілагеніну ацетатом (Фіг.5) амілоїд + іботенову кислоту) суттєво не змінювала щільності рецепторів m3, у Модель + епісарсасапогеніну катилат той час як застосування епісмілагеніну ацетату (18мг/кг/день)* суттєво запобігало зниженню адренорецепторів Модель + сарсасапогеніну катилат β2. (18мг/кг/день)* Модель + епісарсасапогеніну етилсукцинат Таблиця 1 (18мг/кг/день) (для порівняння) Модель + епісарсасапогенін (18мг/кг/день)* Концентрація АктивМодель + епісмілагенін (18мг/кг/день)* Сполука [мікромоль] ність Модель + діосгенін (тобто, негативна контроепісмілагеніну катилат 10 ++ льна група, 18мг/кг/день) сарсасапогеніну катилат 10 ++ *Сполуки за винаходом епісарсасапогеніну катилат 10 ++ Введення ліків епісарсасапогеніну сукцинат 10 ++ Епісарсасапогеніну катилат, сарсасапогеніну сарсасапогенін 10 ++ катилат, епісарсасапогеніну етилсукцинат (сполука для порівняння), епісарсасапогенін, епісмілагенін і Таким чином, досліди показують, що кожна з діосгенін (усі з дозою 18мг/кг/день) вводили тварицих сполук, епісмілагеніну катилату, сарсасапогенам у формі стабільних суспензій в CMC-Na (0,5%) ніну катилату, епісарсасапогеніну катилату, епісаодин раз на день через шлункову тр убку. Контрорсасапогеніну сукцинату, епісмілагеніну ацетату і льній групі та групі моделі Альцгеймера вводили сарсасапогеніну, була здатна збільшувати кільоднаковий об'єм CMC-Na (0,5%) один раз на день. кість мускаринових рецепторів або адренорецепЛіки та носії вводили протягом двох місяців, почиторів, що експресувалися в СНО-клітинах, культинаючи за 20 днів до операції. вованих in vitro. Сполуки за винаходом сприяють Вимірювання щільності мускаринових рецепнормалізації кількості рецепторів, тобто, вони здаторів тні зменшувати спад кількості рецепторів з часом і Зразки мозку гомогенізували, центрифугували, здатні відновлювати кількість рецепторів до норі осад, отриманий після центрифугування при мальних рівнів при введенні їх в клітини, в яких 27000хg, перегомогенізували і використали для рівень рецепторів знижений. вимірювання. Концентрацію 3H-QNB вибирали в Приклад 2 діапазоні насичення. Після інкубації і сепарації Модель хвороби Альцгеймера зв'язану частину вимірювали рідинним сцинтиляВикористовували in vivo модель хвороби Альційним лічильником. цгеймера, в якій β-амілоїд і іботенову кислоту ввоТест наскрізних переходів дять шляхом ін'єкції в мозок щура, що приводить Ефект тестових сполук на пам'ять оцінювали до втрати рецепторів в мозку і когнитивному погіза допомогою тесту наскрізних переходів. Ящик ршенню. Попередні дослідження показали, що 60´15´15см, розділений на два однакові за розмітака локальна ін'єкція β-амілоїду в nucleus vasalis ром відділення, одне -темне, з мідною стержневою мозку щура викликає холінергічну гіпофункцію і основою, що електрично заряджається (40В змінпогіршення поведінки на період до двох місяців 21 78696 22 ного струму) при ввімкненні, а друге - освітлене і або смілагеніном (18мг/кгхдень, n=10). Контрольну не заряджене. Між двома відділеннями є отвір груп у (n=14) необроблених молодих щурів також (дірка) для щурів. Дослід проводили для кожного включили в цей дослід. Щоденну дозу ліків змішущура протягом двох послідовних днів. Перший вали з мінімальною кількістю їжі і давали кожного день був призначений для тренування: коли щур ранку окремо кожному щур у. адаптується в ящику перші 3 хвилини, тоді його Для тесту на навчання і запам'ятовування вивміщують в світле відділення, спиною до дірки, і користовували Y-лабіринтний апарат. На підлозі подають напругу на мідні стержні протягом 5 хвикожного відгалуження лабіринту знаходиться набір лин. Другий день призначений для тестування, мідних стержнів, на які, коли необхідно, подається коли підраховують число переходів протягом 5 електричний струм з регульованою напругою. Кохвилин. Про покращення пам'яті свідчить зниженжне відгалуження має довжину 45см і містить в ня числа переходів. кінці лампочку на 15Вт, що вмикається, коли необРезультати хідно. Після трьох місяців прийому ліків кожного Щільність мускаринових рецепторів в мізках з щура тренували протягом 7 послідовних днів тамоделлю хвороби Альцгеймера була значно нижким чином. На кожному тренувальному сеансі щучою, ніж в контрольній групі. Епісарсасапогеніну ра вміщували в одне відгалуження Y-лабіринту, катилат, сарсасапогеніну катилат, епісарсасапогепісля двох хвилин покою подавали електричну нін і епісмілагенін спричинили суттєве збільшення напругу на мідні стержні і вмикали лампочку у сущільності мускаринових рецепторів в мозку, у той сідньому відгалуженні за годинниковою стрілкою, час як діосгенін і епісарсасапогеніну етилсукцинат показуючи нестимульовану область. Якщо щур не зумовили значного збільшення щільності муспереходив у це відгалуження, зараховувалася одкаринових рецепторів. Таким чином, досліди покана вірна реакція, якщо в інше жодна невірна реакзують, що сполуки за винаходом сприяють нормація. Такий тест на основі стимуляцій-реакцій полізації кількості рецепторів, тобто, вони здатні вторювали 20 разів кожного дня, з 5-секундними зменшувати спад кількості рецепторів з часом і паузами між кожними двома послідовними тестаздатні відновлювати кількість рецепторів до норми. Число вірних реакцій після двадцяти тестів на мальних рівнів при введенні їх тваринам, у яких сьомий день використовували як показник здатнорівень рецепторів знижений. сті до навчання (що вище число, то краще здатЧисло невірних реакцій (число помилок) за 5 ність до навчання). Тоді щурів залишали відпочихвилин було значно більше в групі з моделлю хвовати протягом 30 днів і повторювали процедуру роби Альцгеймера, ніж в контрольній групі, що знову. Число вірних реакцій з 20 тестів після 30 показує погіршення пам'яті (див. Таблицю 2 нижднів відпочинку використовували як показник здаче). Епісмілагенін, епісарсасапогеніну катилат, тності до запам'ятовування. епісарсасапогенін і сарсасапогенін суттєво знизиВимір щільності мускаринових рецепторів в ли число невірних реакцій, тоді як діосгенін і епісамозку рсасапогеніну етилсукцинат були неефективними Препарування тканини: мізки швидко видаляв зниженні числа невірних реакцій. ли після обезголовлювання, заморожували у сухому льоду і переносили у морозильну камеру. Таблиця 2 Мізки гомогенізували, а отриманий осад суспендували у буфері. Щільність мус- Тест наскрізАналіз дводілянкового конкурентного лігандГрупа каринов их них перехозв'язування: 3H-QNB (хінуклінідил бензилат) викорецепт орів дів ристовували у якості радіоактивного ліганда, що (фмоль/мг Число помибув неселективним до підтипів М-рецепторів in протеїну) лок vitro. Пірензипин використовували у якості селекКонтрольна(n=10) 859+101 0.60±0.70 тивного нерадіоактивного конкуруючого засобу. Модель (n=10) 713±48 4.00+2.40 Концентрацію протеїну визначали за мікрохімічним Модель + епісарсасапоге877±89* 1.36±0.92* методом Лоурі. ніну катилат (n=10) Результати показані на Фіг.2 і Фіг.3. Досліди з Модель + сарсасапогеніну 916±158* 1.36±1.03* катилат (n=11) Y-лабіринтом показали, що і здатність до навчанМодель + епісарсасапогеня, і пам'ять у старих щурів погіршені. Сарсасапо774±79 3.73±1.35 ніну етилсукцинат(n=11) генін, епісарсасапогеніну катилат і смілагенін відЕпісарсасапогенін (n=10) 869±104* 1.50+1.18* новили здатність до навчання і запам'ятовування у Епісмілагенін (n=11) 877±90* 1.73±0.91* старих щурів після прийому. Щільність мускариноМодель + діосгенін (n=8) 770±68 3.75±1.49 вих рецепторів у старих щурів була помітно знижена. Сарсасапогенін, епісарсасапогеніну катилат Статистичний аналіз з в икористанням t-тесту Ст'юі смілагенін суттєво відновили кількість мускаридента. * означає р

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Novel compounds of sapogenin derivatives, use thereof and composition

Автори англійською

Barraclough Paul, Hanson Jim, Gunning Phil, Rees Daryl, Xia Zongqin, Hu Yaer

Назва патенту російською

Новые соединения производных сапогенина, их применение и композиция

Автори російською

Барраклаф Пол, Хансон Джим, Ганнинг Фил, Рис Дарил, Ксиа Зонгкин, Ху Яэр

МПК / Мітки

МПК: A61P 25/00, A61K 31/585, C07J 75/00, C07J 71/00

Мітки: сполуки, композиція, застосування, похідних, сапогеніну, нові

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/16-78696-novi-spoluki-pokhidnikh-sapogeninu-kh-zastosuvannya-ta-kompoziciya.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Нові сполуки похідних сапогеніну, їх застосування та композиція</a>

Подібні патенти