Спосіб визначення кількості алкалоїду нікотину у тютюновому пилу

Спосіб визначення КІЛЬКОСТІ алкалоїду нікотину у тютюновому пилу вилученням алкалоїду, осаджуванням коекстрактивних речовин, очищення фільтруванням, який відрізняється тим, що проводять дворазову реєстрацію хлороформом, а КІЛЬКІСТЬ нікотину визначають високоефективною рідинною хроматографією Винахід, що передбачається відноситься до сільського господарства, а саме до визначення КІЛЬКОСТІ алкалоїду нікотину у тютюновому пилу Визначення КІЛЬКОСТІ алкалоїду у тютюновому пилі необхідне при виконанні науково-дослідних робіт та використанні нікотину як інсектициду для боротьби з шкідниками у сільському господарстві Нікотин 1-метил-2-(-піридил)-пірролідин, алкалоїд Легка безбарвна рідина з характерним запахом Розчиняється у воді і органічних розчинниках Нікотин знаходиться (у вигляді солей оцтової, лимонної і яблучної кислот) переважно у тютюні Нікотин Є природним інсектицидом і тому його можливо використовувати замість різних ХІМІЧНИХ препаратів, що дає змогу зменшувати забруднення навколишнього середовища ядохімікатами Існують способи визначення алкалоїдів із проб, які є дослідними Існує „Способ выделения алкалоидов" (патент Роем №2157809 від 10 10 2000р , кл C07D471/22) Це є спосіб виділення алкалоїдів із рослинної сировини, за яким алкалоїдний екстракт кислоти та метилетил кетону Цей спосіб є трудомістким Для визначення алкалоїдів в тютюну за спектрофотометричним методом існує „ГОСТ 30038-93 (ИСО 2881-77), Межгосударственный стандарт, Киев, 1995" Цей стандарт може бути прототипом У прототипі визначення алкалоїдів виконують вилученням алкалоїду, осаджуванням коекстрактивних речовин, очищенням фільтруванням, після чого визначення алкалоїдів проводять спектрофотометричним способом, а для здійснення запропонованого способу кількісне визначення нікотину виконують високоефективною рідинною хроматографією В основу винаходу, що передбачається, поставлено задачу розробити спосіб визначення КІЛЬКОСТІ алкалоїду нікотину у тютюновому пилі вилученням алкалоїду, осаджуванням коекстрактивних речовин, очищенням фільтруванням, шляхом дворазової реєкстракцм хлороформом, а КІЛЬКІСТЬ нікотину визначають високоефективною рідинною хроматографією, щоб забезпечити визначення КІЛЬКОСТІ алкалоїду нікотину у тютюновому пилі Визначення нікотину у тютюновому пилі способом високоефективної рідинної хроматографії виконують таким чином Основний стандартний розчин нікотину для високоефективної рідинної хроматографії розчиняють в дистильованій воді у вимірювальній колбі Зберігають в холодильнику розчиняється у воді Після ЧОГО ЗДІЙСНЮЮТЬ виділення органічної фази від рідинної фази, саме в органічній фазі знаходиться алкалоїд Цей спосіб не дає можливості КІЛЬКІСНОГО визначення алкалоїду Існує „Способ количественного определения алкалоидов Чемерицы Лобеля (патент Роем №1561682 від 12 10 1995р. кл G01N33/15) Цей спосіб виконується потенціометричним титруванням в неводних розчинах мурашиної Робочий розчин нікотину з концентрацією 100мкг/мл готують безпосередньо перед використанням, розводячи основний стандартний 00 ю 1 ю 57258 розчин дистильованою водою Для дослідження використовують скляну колонку CGC, 150 х 3,3мм з комплекту хроматографа, заповнену Separon ТМ SGX - 7 ц т (Чехія) Нову колонку кондицюнують перед дослідженням, на протязі 0,5 - 1,0 години, при відключеному детекторі і репстраційному пристрої, використовуючи рухливу фазу на якій будуть проводити дослідження Основний стандартний розчин нікотину для високоефективної рідинної хроматографії з концентрацією 1 мг/мл Розчиняють 0,1 мл аналітичного стандарту в дистильованій воді у вимірювальній колбі об'ємом ЮОмл Зберігають в холодильнику не більше 6-ти МІСЯЦІВ Робочий розчин нікотину з концентрацією 100мкг/мл готують безпосередньо перед використанням, розводячи основний стандартний розчин дистильованою водою Свинець оцтовокислий основний розчиняють в 5% оцтової кислоти при легкому нагріванні і рН розчину доводять NaOH до 5,4 - 5,6 Зберігають в закритому посуді Проби відбирають ВІДПОВІДНО ДО „Тимчасового порядку відбору зразків сировини, матеріалів, продукції ", затверджених Державним департаментом ветеринарної медицини Мін АПК України 18 березня 1999р Приклад 1 Екстракція та первинна очистка екстракту Екстракцію нікотину із тютюнового пилу проводили у вигляді солей Для цього сировину заливали 1% розчином лимонної кислоти (рН « 3,0) Все перемішували і ставили на водяну баню при температурі + 40 С на 2 години при періодичному помішуванні, або залишали при кімнатній температурі (18 - 22°С) на 1 - 2 доби Приклад 2 Фільтрування рослинної сировини Лимонно-кислотну витяжку із рослинної сировини фільтрували через паперовий фільтр в ділильну лійку, куди додавали 20% розчин оцтовокислого свинцю для осаджування каротиноїдів і інших пігментів Потім проводили реекстракцію 2 рази по 20,0мл хлороформом Ці фракції відкидали Проводили підлужнення лимонно-кислотної витяжки 2,5% розчином NaOH (- 20,0мл) до рН = 9 Комп'ютерна верстка О Воробей Підлужнену лимонно-кислотну фракцію обробляли знову хлороформом 2 рази 25,0 і 20,0мл ВІДПОВІДНО, шляхом легкого змішування на протязі З - 4 хвилин Хлороформні реекстракти об'єднували і випарювали у випарювальних чашках насухо Чашки змивали розчином сульфату ЛІТІЯ в суміші етанол/вода (5 95) і ці екстракти використовували для хроматографування Приклад 3 Ідентифікація і кількісне визначення нікотину високоефективною рідинною хроматографією Екстракти розбавляли в 2 - 5 і більше разів по необхідності водою і аналізували способом високоефективної рідинної хроматографії Екстракти при допомозі мікро шприців вводили в інжектор рідинного хроматографа і хроматографували Якісну ідентифікацію нікотину здійснювали за часом утримання Кількісне визначення нікотину проводили способом абсолютного калібрування безпосередньо порівнюючи з хроматограмами стандартних розчинів нікотину На хроматограмах вимірювали висоту ПІКІВ ВІДПОВІДНО ДО нікотину Для визначення нікотину використовували формулу С-Н 2 -V-100 Х= -Р-К в пробах Де X - вміст нікотину в пробі, мг/кг, С - концентрація стандартного розчину нікотину, введеного в хроматограф, мкг/мл, Ні - висота хроматографічного піка стандарту нікотину, мм, Н2 - висота хроматографічного піка нікотину в пробі, мм, V - загальний об'єм кінцевого розчину проби, мл, Р - маса проби, г, 100 - коефіцієнт для внесення поправки на втрати пестициду при К екстракції і ПІДГОТОВЦІ проби для дослідження, де К - визначаємість нікотину в % (70%) Спосіб визначення КІЛЬКОСТІ алкалоїду нікотину у тютюновому пилі є ефективним і більш точним, дозволяє підвищити точність визначення та зменшити час при використанні цього способу Підписано до друку 05 07 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна