Спосіб визначення кількості мікроорганізмів в рідинах

Спосіб визначення кількості мікроорганізмів в рідинах, що передбачає застосування фотоелектроколориметрії та індивідуальних градуювальних характеристик для кожної рідини, який відрізняється тим, що перед проведенням фотоелектроколориметричних вимірювань в рідини додають розчин вердазильних радикалів у пропорції від 1:1 до 2:1, а розчин вердазильних радикалів готують в діапазоні концентрацій 10-2-10-5 М із застосуванням як розчинник етиловий спирт, або ацетонітрил. (19) (21) 98020676 (22) 09.02.1998 (24) 16.10.2000 (33) UA (46) 16.10.2000, Бюл. № 5, 2000 р. (72) Асауленко Алла Олександрівна, Українець Анатолій Іванович, Полумбрик Олег Максимович, Дегтярьов Леонід Сергійович, Гулий Іван Степанович, Дашковський Юрій Олександрович, Олішевський Валентин Вікторович (73) УКРАЇНСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ХАРЧОВИ Х ТЕХНОЛОГІЙ 29230 тона по водневому зв'язку з одержанням тісної іонної пари (б), дисоціація іонних пар (в), перенос електрона із вільного вердазильного радикала на протонований (г) і протонізація утвореного лейковердазилу (д). В реакції вердазилів з карбоновими кислотами перенос електрона відбувається в тримолекулярному донорно-акцепторному комплексі між несольватованими і сольватованими кислотою вердазильними радикалами. + VH · VH + V + X + 6 в · ­¯ б L x - ¬¾® VH · + x - ¬ г (1) V + HX « V : ..HX ¬¾® V ¾® H + ­¯ ¶ + VH + V + XVH 2 + V +H Відомо, що в процесі метаболізму клітини мікрозчині утворюються контактні комплекси вердароорганізмів виділяють кислоти. Розвиток бактезильний радикал-розчинник. При комплексоутворій, як правило, супроводжується зниженням окисренні радикал-розчинник значну роль відіграють но-відноврого потенціалу рідкого середовища, осопросторова будова вільних радикалів та ефекти бливо це помітно у анаеробів, інтенсивний розвистеричного екранування. ток яких відбувається при низьких рН. Спосіб здійстюється наступним чином: готують Таким чином, використання реакції вердазирозчини вердазильного радикалу в діапазоні конльних радикалів з кислотами дає можливість нецентрації 10-2-10-5 М з використанням в якості розпрямого визначення кількості мікроорганізмів у річинника етилового спирту, або ацетонітрилу. Додинах. бавляють розчин вердазильного радикалу в досліПри реалізації способу градуювальну характеджуємий продукт у співвідношенні 1:1-2:1. ристику залежності зміни забарвлення розчину Кювету з одержаним розчином поміщають у від1 кількості мікроорганізмів для кожного продукту фотоелектроколориметр та проводять вимірюванотримують індивідуально. ня. Визначення кількості мікроорганізмів провоНами експериментально встановлено, що збідять по індивідуальній градуювальній характерисльшення концентрації радикалу в два рази підвитиці для кожного продукту одержаній раніше. щує швидкість реакції в чотири рази. При взаємодії Ефективність способу визначення кількості клірозчинів вердазильних радикалів з аналізуємими тин у рідинах із застосуванням розчинів вердазирідинами у співвідношенні 1:1 та 2:1 рівновага польних радикалів перевіряли при аналізі харчових вністю зміщується в сторону утворення продуктів продуктів (пива, безалкогольних напоїв) на загареакції. Додавання розчину вільних радикалів мельні показники якості. нше співвідношення 1:1 не являється достатнім Приклади здійснення способу. для зміщення реакції в сторону утворення продукУ перших п'яти прикладах використовували тів реакції. Співвідношення розчину вердазильних пиво. радикалів і досліджуємої рідини більше ніж 2:1 явКількість клітин визначали після кольорової ляється недоцільним, так як така кількість розчину реакції розчинів вердазилів з пивом на фотоелектвердазильного радикалу не дає можливості виявироколориметрі при довжині хвилі 590 нм, та парати ті малі кількості кислот, що виділяються мікролельно методом висіву на агаризоване середовиорганізмами в процесі їх життєдіяльності. ще в чашках Петрі. Розчини вердазильних радиВимоги до концентрації розчинів вердазильних калів готували з використанням в якості розчиннирадикалів (10-2-10-5 М із застосуванням в якості ка етилового спирту. розчинника етилового спирту або ацетонітрилу) Приклад. Готують розчин вердазильного радиобумовлені необхідністю досягнення оптичної гускалу концентрацією 10-4М з використанням в якості тини розчинів, яка відповідає оптимальній чутлирозчинника етилового спирту. Добавляють розчин вості вимірювальних трактів пристроїв фо тоелектвердазильного радикалу в пиво у співвідношероколориметрії. нні 1:1. Кювету з одержаним розчином поміщають Використання розчинів вердазильних радикау фотоелектроколориметр та проводять вимірюлів концентрацією 10-1М є недоцільним, оскільки вання. Визначення кількості мікроорганізмів провисокі значення оптичної густини розчинів призвоводять по індивідуальній градуювальній характедять до одержання занижених результатів. ристиці, одержаній для пива раніше. При використанні розчинів вердазильних раАналогічні досліди проводили на іншій рідині дикалів концентрацією 10-6М одержували надто безалкогольних напоях. низькі значення оптичної густини, що негативно Всі приклади здійснення способу зведені в впливає на кінцевий результат. табл. 2. Проводились дослідження по визначенню опРезультати аналізів показують, що спосіб витимальної концентрації розчину вердазильного разначення кількості клітин в рідинах із застосувандикалу з використанням в якості розчинника етиням вердазильних радикалів доцільно використолового спирту та у співвідношенні розчину з рідивувати як експрес-метод в харчовій промисловосною 1:1. ті. Зокрема, в пивоварній промисловості він дозвоДані досліджень представлені в табл. 1. ляє контролювати процес розливу, закупорки та Вердазили містять у своєму складі ароматичні визначення терміну зберігання по кількості мікрота гетероциклічні кільця, мають сильні нуклеофіорганізмів. Також, даний спосіб може бути розпольні властивості. Кристали вердазильних радикавсюджений па інші галузі харчової промисловості. лів не розчинні в воді. В якості розчинників доцільЦей спосіб доцільно використовувати, оскільки но використовувати етиловий спирт, або органічні одержані забарвлені сполуки досить стійкі, а реакрозчинники, зокрема, ацетонітрил. В результаті в ція їх утворення досить специфічна. 2 29230 Таблиця 1 № досліду Концентрація радикалу, М Співвідношення радикалу та розчину пива Довжина хвилі, l нм Оптична густина, D pH 1 2 3 4 5 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 1:1 1:1 1:1 1:1 1:1 590 590 590 590 590 3,420 2,282 0,590 0,144 0,008 Кількість клітин в 1 мл пива N кл/мл 4,2*105 4,2*105 4,2*105 4,2*105 4,2*105 4,4 4,4 4,4 4,4 4,4 Таблиця 2 № досліду 1 2 3 4 5 6 Продукт пиво пиво пиво пиво пиво безалк-й напій Концентрація (CH3О)2R N, M 10-4 10-4 10-4 10-4 10-4 Співвідношення розчину (CH3О)2RN та пива 0,5:1,0 1,0:1,0 1,5:1,0 2,0:1,0 3,0:1,0 10-4 1:1 Довжина хвилі, нм Оптична густина, D рН 490 590 590 590 750 0,179 0,554 0,637 0,716 0,297 4,4 4,4 4,4 4,4 4,4 Кількість клітин в 1 мл пива, N кл/мл 4,2*105 4,2*105 4,2*105 4,2*105 4,2* 105 590 0,517 4,3 5,7*104 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2002 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 34 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3