Лікарський засіб, що містить дизоразоли та їх похідні, для лікування доброякісних та злоякісних пухлинних захворювань

1. Лікарський засіб, який містить принаймні одну похідну дизоразолу загальної формули І C2 2 (19) 1 3 79480 4 нів, суспензій, емульсій, пін, мазей, паст, пластирів 4. Застосування похідних дизоразолу загальної або імплантатів для введення. формули І за п. 3 для лікування онкозів, окремо 3. Застосування похідних дизоразолу загальної або в комбінації з цитотоксичними речовинами формули І та/або інгібіторами трансдукції сигналу. 19 CH3 5 H 3C 11 O 9 7 14 N 3 X 1 O R3 O OR 2 O 1' N O 11 ' H 3C CH3 O 5' O H3 C CH3 9' Y Формула І R1 , у яких, незалежно одне від одного R1 є: (і) воднем, (іі) OR4, (ііі) частиною подвійного зв'язку з С5', R2, R3 та R4 є: (і) воднем, (іі) незаміщеним або заміщеним (С1-С6)-алкілом, (ііі) (С1-С4)-алкілом, заміщеним одним або кількома атомами фтору, в оптимальному варіанті - трифторометильною групою, (iv) незаміщеним або заміщеним (С1-С4)-алкіл-(С6С14)-арилом, незаміщеним або заміщеним (С1-С4)алкілгетероарилом, (v) (С1-С 4)-алкоксикарбонілом, (С1-С4)алкіламінокарбоніл, (С1-С4)-алкіламінотіокарбонілом, (С1-С6)-алкілкарбонілом або (С1С6)-алкоксикарбоніл-(С1-С6)-алкілом, причому є можливим заміщення алкільного радикала F, Сl, Br, I, CN, NH2, NH-(C1-С20)-алкілом, NН(С3-С12)-циклоалкілом, ОН, O-(С1-С20)-алкілом, одноразово або, на однакових або різних атомах, багаторазово, однаковими або різними замісниками, і також можливим є заміщення арильного радикала F, Сl, Br, I, CN, NH 2, NН-(С1-С20)-алкілом, ОН, O-(С1-С20)-алкілом та/або (С3-С8)гетероциклілом, що має від 1 до 5 гетероатомів, в оптимальному варіанті - азоту, кисню, сірки, одноразово або, на однакових або різних атомах, багаторазово, однаковими або різними замісниками, і X, Y є: у кожному з випадків окремо незалежно одне від одного або разом киснем, сіркою, двома сусідніми гідроксильними групами, двома сусідніми метоксигрупами, частиною подвійного зв'язку, причому виключається сполука, в якій R1 є метокси, R2, R3 є воднем, Х є киснем, і Y є частиною подвійного зв'язку, їх та утомерів, E/Z ізомерів, стереоізомерів, включаючи діастереомери та енантіомери, та їх фізіологічно прийнятних солей, для виготовлення медикаменту для лікування доброякісних або злоякісних онкозів у людей або тварин. У наступні кілька років очікується різке збільшення онкозів та пов'язаних з пухлинами смертних випадків у всьому світі. У 2001 році в усьому світі приблизно 10 мільйонів людей страждали від раку, 5. Застосування похідних дизоразолу загальної формули І для виготовлення медикаменту для лікування захворювань у людей або тварин, в основі яких лежить швидка й неконтрольована проліферація ендогенних клітин. 6. Застосування похідних дизоразолу загальної формули І для виготовлення медикаменту для лікування захворювань, які реагують на імуномодулюючу дію, таких як псоріаз, артеріосклероз, артрит, кератоз, розсіяний склероз та рак. 7. Застосування похідних дизоразолу загальної формули І для виготовлення медикаменту для лікування інфекційних захворювань, таких як кахексія, малярія, СНІД і пов'язана з інфекцією лихоманка та біль. 8. Застосування похідних дизоразолу загальної формули І для виготовлення медикаменту для лікування запальних та алергічних захворювань, запалень, опосередкованих еозинофілами, або проліферативних захворювань, таких як захворювання дихальних шляхів, бронхіальна астма, алергічний риніт, алергічний кон'юнктивіт, екзема та хвороба Крона. 9. Застосування похідної дизоразолу Е1 загальної формули І, у якій R1 та R2 є воднем, R3 є метилом, і Х та Y є киснем, за п. 3, для виготовлення медикаменту для лікування доброякісних або злоякісних онкозів у людини або тварин. 10. Застосування похідної дизоразолу загальної формули І за п. 9 для виготовлення медикаменту для лікування раку молочної залози, раку яєчника, раку легенів, раку шкіри, раку передміхурової залози, раку нирок, раку печінки, раку підшлункової залози, раку товстої кишки та ракових захворювань головного мозку у людей. 11. Застосування похідної дизоразолу загальної формули І за пп. 9 або 10 для виготовлення медикаменту для лікування доброякісних або злоякісних онкозів у людей або тварин у комбінації з іншими протипухлинними засобами. 12. Застосування похідної дизоразолу загальної формули І за будь-яким з пп. з 9 по 11 для виготовлення медикаменту для лікування доброякісних або злоякісних онкозів у людей або тварин у комбінації з паклітакселом, доцетакселом, вінкристином, віндезином, цисплатином, карбоплатином, доксорубіцином, іфосфамідом, циклофосфамідом, 5-FU, метотрексатом або в комбінації з імуномодуляторами або антитілами, зокрема, в комбінації з інгібіторами трансдукції сигналу, такими як Herceptin, Glivec або Iressa та іншими. і понад 6 мільйонів людей померли від цього захворювання. Розвиток пухлин є основним захворюванням вищих організмів у рослинному світі, у тваринному світі та серед людей. Існує загально 5 79480 6 відоме припущення, що багатоступінчаста модель смертності. карциногенезу полягає в тому, що в результаті Природні речовини є важливим джерелом нонакопичення кількості мутацій в окремій клітині вих стр уктур у фармацевтичних дослідженнях і у вона змінюється у своїй проліферації та диферендеяких випадках також є безпосередньо придатціації таким чином, що зрештою, через доброякісні ними для розробки нових медикаментів [Y.-Z. Shu, проміжні стадії, це призводить до злоякісного стаJ. Nat. Prod., 1998. 61, 1053-1071]. Відомо, що бану з метастазами. Термін "рак" або "пухлина" не гато природних речовин мають сильний цитотокрозкриває клінічної картини з понад 200 різними сичний вплив [V. J. Ram, S. Kumari, DNP, 2001, окремими захворюваннями. Онкози можуть розви14(8), 465-482]. ватися доброякісно або злоякісно. Найбільш значВідомо, що природні речовини з групи, яка ними пухлинами є пухлини легенів, молочної залоскладається з дизоразолів, виділяють із бактерії зи, шлунка, шийки матки, передміхурової залози, штаму Sorangium cellulosum So се12 [R. Jansen, Η. голови та шиї, великого та малого кишечнику, пеIrschik, Η. Reichenbach, V. Wray, G. Hofle, Liebigs чінки та кровоносної системи. Існують великі розAnn. Chem., 1994. (8), 759-773]. Загалом було вибіжності щодо курсу, прогнозування та терапії. ділено й охарактеризовано з фізико-хімічної точки Понад 90% розпізнаних випадків стосуються тверзору 29 дизоразолів. Про дизоразол А1 повідомдих п ухлин, які, особливо на пізній стадії або в разі ляється, що він має антипроліферативну дію у метастазів, є важковиліковними або взагалі невиклітинних моделях [Н. Irschik, R. Jansen, К. Gerth, ліковними. Три основні принципи боротьби з ракоG. Hofle, H. Reichenbach, J. Antibiot. 1995. 48(1), вими захворюваннями й досі полягають у хірургіч31-35; Y. A. Elnakady, Dissertation, Brunswick ному видаленні, опроміненні та хіміотерапії. Technical University, 2001]. Однак, немає ні опису, Незважаючи на значний прогрес, досі нікому не ані згадки про застосування для лікування онкозів. вдавалося розробити медикаменти, які забезпеБіологічне дослідження інших дизоразолів не здійчують помітне подовження тривалості життя або снювалося. навіть повне виліковування поширених твердих Сполуки згідно з винаходом є придатними, пухлин. Таким чином, велике значення має винайкрім іншого, без обмежень, для застосування як дення нових медикаментів для боротьби з раком. медикаментів для лікування доброякісних та злоДаний винахід стосується дизоразолу - за виякісних онкозів або інших антипроліферативних нятком дизоразолу А1 - та похідних дизоразолів і порушень у людини та тварин. В принципі, сполуки їх застосування як медикаментів, зокрема, для згідно з винаходом є придатними для контролю лікування доброякісних та злоякісних пухлин у над усіма порушенням, в основі яких лежить нелюдей та ссавців. контрольований і швидкий поділ клітин, і які, таким Несподівано було виявлено, що дизоразоли чином, викликають виникнення патологічних стаЕ1 та D1, зокрема, мають відмінний цитотоксичний нів. Сполуки згідно з винаходом застосовують як вплив на різні клітинні лінії пухлин людини. У наноокремі речовини або в комбінації з іншими цитотота пікомолярних концентраціях інгібується, крім ксичними речовинами, наприклад, цисплатином, інших, поділ клітин карциноми яєчника, карциноми карбоплатином, доксорубіцином, іфосфамідом, передміхурової залози, гліобластоми, карциноми циклофосфамідом, 5-FU, метотрексатом, зокрема, легенів та раку молочної залози клітини. Дія дизов комбінації з інгібіторами трансдукції сигналу, разолів Е1 та D1 у цьому разі залежить від клітинтакими як, наприклад, Herceptin, Glivec або Iressa, ного циклу, і навіть у наномолярних концентраціях а також деякими іншими. клітинний цикл тримається у фазі G2/M, і це виСинтетичні та напівсинтетичні аналоги дизокликає апоптоз ракових клітин. Крім того, це доразолів також мають антипроліферативну дію. За зволяє продемонструвати, що в основі заявленої допомогою спеціальної модифікації форми молеантипроліферативної дії дизоразолів, серед іншокули можна модулювати важливі властивості, такі го, лежить ефективне інгібування полімеризації як біологічна інгібіторна дія, стійкість та біофізичні тубулін у. Дизоразол Е1, зокрема, також має високу властивості. Таким способом можна одержувати активність проти резистентних до паклітакселу та цінні з терапевтичної точки зору похідні вихідних віндезину клітинних ліній. Винахід дозволив просполук. Інша мета дериватизації полягає в посладемонструвати, що дизоразол Е1 є високоефектибленні можливих токсичних побічних ефектів. вним щодо біологічної дії, і, таким чином, може Сполуки згідно з винаходом вводять як рідкі бути застосований як активна сполука у медикафармацевтичні форми. Введення здійснюють споменті для боротьби з раковими захворюваннями. собом, який є придатним, залежно від конкретного Це має значення, зокрема, через те, що дизовипадку, у формі розчинів або суспензій. разол А1 є непридатним для застосування як циСполуки згідно з винаходом вводять у придаттостатик [G. Hoefle, annual report 1999/2000 of the ній для введення формі, в оптимальному варіанті Gesellschaft fur Biotechnologische Forschung в артерію, внутрішньоартеріально у формі ін'єкції; [Association for Biotechnological Research] GBF, у вену, вн утрішньовенно у формі ін'єкції або інфуp.103]. зії; у шкіру, внутрішньошкірно у формі ін'єкції; під Однак, у терапевтичному експерименті з викошкіру, підшкірно у формі ін'єкції; у м'язи, внутріристанням, крім інших, наприклад, мишей без вишньом'язово у формі ін'єкції; у черевну порожнину, лочкової залози з ксенотрансплантатом пухлини внутрішньочеревинно у формі ін'єкції або інфузії. NCI-H460, при внутрішньовенному введенні дизоЯкщо сполуки загальної формули І згідно з виразолу Е1 можна було спостерігати значне знинаходом мають принаймні один асиметричний ження росту пухлин навіть у дозах, які не забезпецентр, вони можуть існувати у формі їх рацематів, чували зниження маси або навіть призводили до у формі чистих енантіомерів та/або діастереоме 7 79480 8 рів, або у формі сумішей цих енантіомерів та/або означає ароматичні вуглеводні, до яких, крім індіастереомерів, тобто і як речовини, і як фармацеших, належать феніли, нафтили та антраценіли. втично прийнятні солі цих сполук. Суміші можуть Радикали також можуть бути злиті з іншими насибути в будь-якому потрібному співвідношенні стеченими, (частково) ненасиченими або ароматичреоізомерів. ними кільцевими системами. Якщо потрібно, конфігурації кожного з подвійВираз "гетероарил" означає 5-, 6- або 7них зв'язків у сполуках згідно з винаходом незалечленний циклічний ароматичний радикал, який жно одне від одного в кожному з випадків можуть містить принаймні 1, необов'язково також 2, З, 4 бути Ε або Ζ. або 5 гетероатомів, причому гетероатоми є однаЯкщо можливо, сполуки згідно з винаходом ковими або різними. Гетероцикл також може бути можуть бути у формі таутомерів. частиною бі- або поліциклічної системи. ОптимаЗгідно з одним варіантом втілення винахід льними гетероатомами є азот, кисень та сірка. В стосується сполук загальної формули І: оптимальному варіанті гетероарильний радикал вибирають із групи, яка включає піроліл, фурил, тієніл, тіазоліл. оксазоліл, ізоксазоліл, піразоліл, імідазоліл, піридиніл, шримідиніл, піразиніл, індоліл, індолізиніл, хінолініл, ізохінолініл, хіназолініл, хіноксалініл, карбазоліл, феназиніл, фенотіазиніл, акридиніл. Найбільшу перевагу віддають сполукам згідно з загальною формулою І, які трапляються в такій групі. (1) Дизоразол Е1 у яких, незалежно одне від одного R1 є: (і) воднем (іі) OR4 (ііі) частиною подвійного зв'язку з С5' R2, R3 та R4 є: (і) воднем (іі) незаміщеним або заміщеним (С1-С6)алкілом, (ііі) (С1-С4)-алкілом, заміщеним одним або кількома атомами фтору, в оптимальному варіанті трифторометильною групою, (iv) незаміщеним або заміщеним (С1-С4)-алкіл(С6-С14)-арилом, незаміщеним або заміщеним (С1С4)-алкілгетероарилом, (ν) (С1-С4)-алкоксикарбонілом, (С1-С4)алкіламінокарбоніл (С1-С4)алкіламінотіокарбонілом, (С1-С6)-алкілкарбонілом або (С1-С6)-алкоксикарбоніл-( С1-С6)-алкілом, причому є можливим заміщення алкільного радикала F, СІ, Br, I, CN, NH 2, NH-(-С1-С20)алкілом, NН-(С3-С12)-циклоалкілом, ОН, O-(С1-С20)алкілом, одноразово або, на однакових або різних атомах, багаторазово, однаковими або різними замісниками, і також можливим є заміщення арильного радикала F, СІ, Br, I, CN, NH2, NН-(С1-С20)алкілом, ОН, O-(С1-С20)-алкілом та/або (С3-С8)гетероциклілом, що має від 1 до 5 гетероатомів, в оптимальному варіанті - азоту, кисню, сірки, одноразово або, на однакових або різних атомах, багаторазово, однаковими або різними замісниками, і Χ, Υ є: у кожному з випадків окремо незалежно одне від одного або разом киснем, сіркою, двома сусідніми гідроксильними групами, двома сусідніми метокси-групами, частиною подвійного зв'язку, причому виключається сполука, в якій R1 є метокси, R2, R3 є воднем, X є киснем, і Υ є частиною подвійного зв'язку. Вираз "арил" з точки зору даного винаходу (2) Дизоразол D1 (3) Спеціально зазначено, що дизоразол А1 не є предметом даного винаходу. Синтетичні та напівсинтетичні аналоги дизо 9 79480 10 разолів загальної формули la, Ib та Іс згідно з давідповідними алкілкарбонілхлоридами, алкілкарним винаходом одержують за схемою 1: боновими ангідридами або хлороформатами у присутності відповідної основи, в оптимальному варіанті - триетиламіну, піридину, гідриду натрію, металоалкоголяту, NaOH у воді або карбонату калію, і у відповідному розчиннику, наприклад, дихлорометані, діетиловому етері, ацетонітрилі, NN-диметилформаміді, або сумішах розчинників, таких як суміші діоксан-вода або THF-вода, при температурі від 0 до 100°С [J. Org. Chem. 1957, 22, 1551; Synth. Commun. 1997,27,2777; J. Org. Chem. 1959, 24, 774]. Більш детально винахід пояснюється за допомогою представлених нижче прикладів, які не обмежують його обсягу. Приклади Можливості застосування Приклад 1 Дизоразоли, такі як, наприклад, дизоразол Е1, є оптимальними активними сполуками у готових медикаментах для лікування злоякісних онкозів, таких як рак молочної залози, рак легенів, рак яєчника, рак шкіри, рак передміхурової залози, рак товстої кишки, гіпернефроїдний рак, рак печінки, рак підшлункової залози та ракові захворювання головного мозку. В оптимальній формі для введення активна сполука передбачається як ліофілізат разом з наповнювачами, відомими спеціалістам у даній галузі, в ін'єкційній пляшці, і її розчиняють, застосовуючи фізіологічний розчин перед використанням, Дизоразоли загальної формули І традиційним потім розводять в ін'єкційному резервуарі і ввоспособом можуть бути перетворені на похідні, які є дять пацієнтові за допомогою канюлі у вену. Доза, предметом даного винаходу, згідно з формулою la, яка залежить від стадії онкозу та стану здоров'я Ib та Іс, шляхом заміщення водню на R2, R3 та R4. пацієнта, становить від 0,1мг до 100мг активної Наприклад, якщо треба одержати заміщені дисполуки на м 2. Період інфузії залежить від об'єктизоразоли згідно з формулою Іс, у яких R2, R3 та вних критеріїв захворювання. R4 = алкіл або алкіларил, то відповідний дизораПриклад 2 зол загальної формули І піддають реакції з відпоЗастосування дизоразолів, таких як, напривідним алкілуючим галідом або алкіларилгалідом клад, дизоразол Е1, як активних сполук у готових та відповідною основою, в оптимальному варіанті медикаментах для лікування запальних захворютриетиламіном, піридином, металоалкоголятом, вань. До них належать, наприклад, запальні загідридом натрію або карбонатом калію, у відповідхворювання дихальних шляхів, такі як бронхіальна ному розчиннику, наприклад, дихлорометані, діеастма, алергічний риніт, алергічний кон'юнктивіт, тиловому етері, ацетонітрилі, NNатопічний дерматит, екзема, алергічний ангіїт, задиметилформаміді, при температурі від 0 до палення, опосередковані еозинофілами, такими як 100°С [J. Org. Chem. 1971, 36, 284-294]. еозинофільна пневмонія та синдром PIE (легенеНаприклад, якщо треба одержати заміщені дивого інфільтрату з еозинофілією), кропивна лихозоразоли згідно з формулою Іb, у яких R2, R3 та манка, виразковий коліт, хвороба Крона та проліR4 = карбамат, тіокарбамат, то відповідний дизоферативні захворювання шкіри, такі як псоріаз та разол загальної формули І піддають реакції з відкератоз. повідними ізоціанатами або ізотіоціанатами у приПриклад 3 сутності відповідної основи, в оптимальному Застосування дизоразолів таких як, наприваріанті - триетиламіну, піридину, гідриду натрію, клад, дизоразол Е1, як активних сполук у готових металоалкоголяту, NaOH у воді або карбонату медикаментах, які мають імуномодулюючу дію, калію, і у відповідному розчиннику, наприклад, для лікування імунних та аутоімунних захворюдихлорометані, діетиловому етері, ацетонітрилі, вань. До таких захворювань можуть належати, NN-диметилформаміді, або сумішах розчинників, наприклад, запалення суглобів, такі як артрит та таких як суміші діоксан-вода або THF-вода, при ревматоїдний артрит та інші артритичні захворютемпературі від 0 до 100°С [DE2040175. Rocz. вання, такі як ревматоїдний спондиліт та остеоарChem. 1972, 46, 717; Tetrahedron Lett. 1993, 34, трит. Інші можливості застосування полягають у 3745]. лікуванні пацієнтів, які страждають від сепсису, Або, якщо треба одержати заміщені дизоразосептичного шоку, грам-негативного сепсису, синдли згідно з формулою Іа, у яких R2, R3 та R4 = рому токсичного шоку, синдрому дихальної недоалкілкарбоніл або алкоксикарбоніл, то відповідний статності, астми та інших хронічних легеневих задизоразол загальної формули І піддають реакції з хворювань, захворювань резорбції кісток або 11 79480 12 реакцій відторгнення трансплантатів або інших окремі речовини або в комбінації з іншими цитотоаутоімунних захворювань, таких як червоний вовксичними речовинами, такими як, наприклад, пакчак, розсіяний склероз, гломерулонефрит та уве їт, літаксел, доцетаксел, вінкристин, віндезин, циспінсулінозалежний цукровий діабет та хронічна делатин, карбоплатин, доксорубіцин, іфосфамід, мієлінізація. циклофосфамід, 5-FU, метотрексат, або в комбіПриклад 4 нації з імуномодуляторами або антитілами, зокреЗастосування дизоразолів, таких як, наприма, в комбінації з інгібіторами трансдукції сигналу, клад, дизоразол Е1, як активних сполук у готових такими як, наприклад, Herceptin, Glivec або Iressa. медикаментах, які можуть бути застосовані для Приклад 5 терапевтичного лікування інфекцій, таких як вірусКомпозиції для парентерального введення дині інфекції та паразитичні інфекції, наприклад, для зоразолів, таких як, наприклад, дизоразол Е1, мотерапевтичного лікування малярії, пов'язаної з жуть бути у формі окремих дозованих одиниць, інфекцією лихоманки, пов'язаного з інфекцією м'я таких як, наприклад, ампули або флакони. В оптизового болю, ВІЛ-інфекцій (СНІД) та кахексії. мальному варіанті застосовують розчини активної Виготовлення сполуки, в оптимальному варіанті - водні розчини, Для введення сполук згідно з винаходом перезокрема, ізотонічні розчини або, в альтернативновагу віддають композиціям, призначеним для паму варіанті - суспензії. Ці ін'єкційні форми роблять рентерального, крізьшкірного, локального, інгалядоступними як готові до вживання композиції або ційного та інтраназального введення. приготовляють лише безпосередньо перед викоВиготовлення, фасування та запечатування комристанням шляхом змішування активної сполуки, позицій здійснюють у традиційних антимікробних і наприклад, ліофілізату, у відповідному разі, з інантисептичних умовах. шими твердими носіями, з потрібним розчинником Додатково до принаймні однієї складової згідабо суспендуючим агентом. но з винаходом фармацевтичні форми, залежно Приклад 6 від застосовуваної фармацевтичної форми, неКомпозиції для інтраназального введення диобов'язково містять наповнювачі, до яких, крім зоразолів, таких як, наприклад, дизоразол Ε1, моінших, належать, розчинники, прискорювачі розчижуть бути у формі водних або олійних розчинів нення, солюбілізатори, емульгатори, зволожуючі або у формі водних або олійних суспензій. Вони засоби, протиспінювачі, гелеутворювальні агенти, також можуть бути у формі ліофілізатів, які пригозагусники, буфери, солетворні агенти, консервантовляють перед використанням, застосовуючи ти, антиоксиданти, барвники, речовини для кореквідповідний розчинник або суспендуючий агент. ції смаку та запаху. Вибір наповнювачів, які мають Біологічна дія сполук згідно з винаходом бути застосовані, та їх кількість залежить від вибПриклад 7 Антипроліферативна дія на різні раної фармацевтичної форми і пристосовується клітинні лінії пухлин до композицій, відомих спеціалістам у даній галузі. Сполуки згідно з винаходом досліджували на Медикаменти згідно з винаходом вводять у їх антипроліферативну активність у випробуванні формі, придатній для введення у шкіру, крізьшкірпроліферації на старих клітинних лініях пухлин но у формі розчину, суспензії, емульсії, піни, мазі, [D.A. Scuderio et al. Cancer Res. 1988, 48, 4827пасти або пластиру; через слизову оболонку носа, 4833]. Застосоване випробування визначає активназально у формі крапель, мазі або аерозолю; ність клітинної дегідрогенази й дозволяє визначичерез бронхіальний та альвеолярний епітелій, ти життєздатність клітин та, опосередковано, кільпульмонально або шляхом інгаляції у формі аерокість клітин. Клітинними лініями, які золю або інгалятора; через кон'юнктиву, кон'юнквикористовували для прикладу, були клітинна лінія тивально у формі очних крапель, очної мазі, очних цервікальної карциноми людини KB/HeLa (ATCC таблеток, ламел або очних примочок; в артерію, CCL17), клітинна лінія аденокарциноми яєчника внутрішньоартеріально у формі ін'єкції; у вену, SKOV-3 (ATCC HTB77), клітинна лінія гліобластовнутрішньовенно у формі ін'єкції або інфузії, нами людини SF-268 (NCI 503138), клітинна лінія вколовенно у формі ін'єкції або інфузії; у шкіру, карциноми легенів NCI-H460 (NCI 503473) та клівнутрішньошкірно у формі ін'єкції або імплантату; тинна лінія аденокарциноми товстої кишки людини під шкіру, підшкірно у формі ін'єкції або імплантаRKOP27. ту; у м'язи, внутрішньом'язово у формі ін'єкції або Цитотоксичну або інгібуючу ріст активність імплантату; у черевну порожнину, внутрішньочеописаних сполук, а також контрольних сполук, поревинно у формі ін'єкції або інфузії. казано в таблиці 1. Результати показують дуже У протипухлинній терапії сполуки загальної ефективне інгібування проліферації вибраної кліформули І згідно з винаходом застосовують як тинні лінії пухлин речовинами згідно з винаходом. 13 79480 14 Таблиця 1 Інгібування проліферації речовинами згідно з винаходом у ХТТвипробуванні цитотоксичності на клітинних лініях пухлин людини Приклад Дизоразол Е1 Дизоразол D1 Дизоразол А1 Паклітаксел Віндезин KВ/Неlа 0,00005 0,00015 0,00015 0,01 0,002 ХТТ аналіз проліферації, EC50 у [мкг/мл] SKOV3 SF-268 NCI-H460 0,000016 0,00012 0,00003 0,0001 0,00022 0,00015 0,0002 0,00027 0,00015 0,01 0,01 0,01 0,002 0,005 0,006 Приклад 8 Антипроліферативна дія на клітинні лінії пухлин MDR Для подальшої характеризації речовини згідно з винаходом досліджували на резистентних до багатьох медикаментів клітинних лініях (MDR) порівняно з нерезистентними клітинними лініями дикого типу. Досліджуваними клітинними лініями є клітинна лінія гострої мієлоїдної лейкемії LT12 та резистентна лінія LT12/mdr. Крім того, як випробувальні системи використовували клітинну лінію миші Р388 (викликане метилхолантреном лімфоїдне новоутворення) та доксорубіцин-резистентні Р388. Результати у зведеній формі показано нижче в таблиці 2: Таблиця 2 Інгібіторна дія дизоразолу Е1 та контрольних речовин у ХТТ випробуванні проліферації на нерезистентні та резистентні клітинні лінії пухлин ХТТ аналіз проліферації, ЕС50 у [мкг/мл] Речовина LT12 LT12MDR Р388 P388ADR Дизоразол E1 0,0001 0,004 0,0004 0,001 Паклітаксел 0,005 0,340 0,035 >3,16 Віндезин 0,0009 0,222 0,009 0,94 Дизоразол Е1 демонструє дуже ефективну інгібіторну дію на всі випробувані клітинні лінії, тоді як у випадках з класичними інгібіторами тубуліну, такими як паклітаксел або вінкристин, виявляли значно знижену дію та перехресну резистентність до клітинних ліній MDR1. Приклад 9 Інгібування полімеризації тубулін у Речовини випробували в in-vitro випробуванні інгібування полімеризації b-тубуліну великої рогатої худоби [D.M. Bollag et al. Cancer Res. 1995, 55, 2325-2333]. У цьому випробуванні застосовують тубулін, очищений шляхом циклів полімеризації та деполімеризації, і його полімеризують шляхом додавання GTP та нагрівання. Показники ЕС 50 інгібування полімеризації b-тубулін у з 30% зв'язаними білками (МАР) представлено у таблиці 3. RKOP27 0,00006 0,0003 0,00025 Таблиця 3 Інгібування полімеризації b-тубуліну за допомогою 30% МАР Рез ультати показують, що дизоразоли Е1 та D1 інгібують полімеризацію тубуліну в низьких концентраціях Речовини ЕС50 у [мкг/мл] з 30% МАР Дизоразол Ε1 1,50 Дизоразол D1 2,50 Дизоразол А1 4,8 Віндезин 0,40 експерименти: n=2 Приклад 10 Аналіз клітинного циклу Клітинний цикл включає розвиток клітини від однієї генерації клітин до наступної. Під час спокійної фази (GO) та передсинтетичної фази (G1) клітина має диплоїдний набір хромосом (2с). У фазі синтезу (S) кількість ДНК збільшується шляхом реплікації. S-фаза завершується досягненням премітотичної фази (G2M), у якій клітина має комплемент редуплікованих хромосом (4с) і подвійний вміст ДНК. У наступній, перехідній фазі мітозу (Μ) відбувається рівномірний розподіл редуплікованих хромосом серед двох дочірніх клітин, які потім у кожному з випадків також демонструють вміст диплоїдної ДНК і перебувають у G01-фазі, щоб клітинний цикл міг розпочатися знову. Для аналізу клітинного циклу клітини KB/HeLa обробляли випробуваними речовинами в різних концентраціях (0,1-1000нМ) протягом 24 годин при 37°С. Відсоткова пропорція клітин, блокованих у фазі G2/M клітинного циклу після обробки контрольними речовинами або вибраними випробуваними речовинами, показана нижче у таблиці 4. Результати оцінювали, застосовуючи спеціальну програму для аналізу (ModFitÔ ). 15 79480 16 призводять до смертності. Таблиця 4 Фігура: експеримент з in-vivo обробкою дизоразолом Е1 ксенотрансплантата пухлини NCIКонцентрація, при якій H460 50% клітин блокуються у фазі G2/M Модель миші без вилочкової залози Дизоразол El (D-42805): 0,5мг/кг; внутрішньовенно: день 0, 7; 8 випадків смертності (день 11, Приклад ЕС50 у [нМ] (50% клітин у G2/M) 12, 13) Дизоразол Е1 1,6 Дизоразол El (D-42805): 0,1мг/кг; внутрішньоПаклітаксел 46 венно: день 0, 7,14; без випадків смертності Віндезин 3,0 Дизоразол El (D-42805): 0,05мг/кг; вн утрішньовенно: день 0, 7, 14; без випадків смертності Сполуки згідно з винаходом мають найвищу Контроль: розчин розсолу 0,9% концентрації, активність порівняно з контрольними сполуками. який містить 3,3% DMSO, 10мл/кг; n=8 тваЗокрема, дизоразол Е1 інгібує клітинний цикл у рин/групу фазі G2/M при надзвичайно низьких концентраціПриклад 12 AMES-тест (тест на канцерогенях. ність за частотою мутацій) Приклад 11 In vivo результати Для оцінки можливих побічних ефектів дизоΙn-νι νο активність сполук згідно з винаходом разол Е1 досліджували на мутагенність шляхом випробували на моделях ксенотрансплантатів у аналізу коливань на мутантних штамах ТА98 та ТА людини та мишей. 100 бактерії Salmonella typhimurium у трьох концеУ терапевтичному експерименті, який здійснтраціях (2,5; 5 та 10мкМ). Дослідження мутагеннювали на мишах без вилочкової залози з ксенотності далі здійснювали у присутності ферменту рансплантатом пухлини NCI-H460, дизоразол Е1, печінки щура S9. введений внутрішньовенно, забезпечував значне Результати показано нижче у таблиці 5: зниження росту пухлини навіть у дозах, які не забезпечують значного зниження маси або навіть Таблиця 5 Дослідження дизоразолу Е1 на мутагенність Сполука Конц. [мкМ] AMES TA98 без S9 AMES TA98 з S9 AMES ТА100 без S9 AMES ТА100 з S9 Дизоразол Е1 10 неактивний неактивний неактивний неактивний Дизоразол Е1 5 неактивний неактивний неактивний неактивний Дизоразол Е1 2,5 неактивний неактивний неактивний неактивний Дизоразол Е1 не виявляє впливу в описаних умовах випробування у ви щезазначених концентраціях, і, таким чином, є неактивним у AMESтесті. Приклад 13 Вплив на біосинтез білка та непроліферативні клітини Для оцінки можливих побічних ефектів досліджували вплив дизоразолу Е1 на непроліферативні клітини та на біосинтез білка (таблиця 6). Таблиця 6 Вплив дизоразолу Е1 на непроліферативні клітини та на біосинтез білка Речовина Конц. [мкМ] Дизоразол Е1 1 Клітини, що вижили, первинні гепатоцити людиСинтез білка2 ни1 В середньому, % від контролю В середньому, % від контролю 119,6 95,9 1 ) Випробували, застосовуючи alamarBlue, первинні гепатоцити людини, n=3; ) Випробували шляхом включення 14С-метіоніну, клітин гепатоцелюлярної карциноми людини (HepG2), n=2; 2 Результати в таблиці 6 демонструють, що дизоразол Е1 не має негативного впливу ні на біоси нтез білка, ні на виживаність непроліферативних клітин. 17 Комп’ютерна в ерстка О. Гапоненко 79480 Підписне 18 Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601