Композиція з екстрактом з плодів шипшини та спосіб одержання екстракту з плодів шипшини

Реферат: Винахід належить композиції, що містить протизапальний рослинний екстракт з плодів шипшини разом з гідролізатом колагену та способу одержання сухого екстракту з плодів шипшини, який включає стадії екстракції оболонок плодів шипшини водою або сумішшю води і аж до 50 ваг. % етанолу для одержання простого екстракту, очищення одержаного екстракту і сушіння екстракту. Винахід належить також екстракту, одержаному за вище вказаним способом та застосуванню екстракту. UA 102678 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Даний винахід стосується композицій з екстрактами плодів шипшини і способу одержання екстрактів плодів шипшини. Передумови винаходу Все більше людей уражені артрозами (стирання суглоба, остеоартрит, артроз). Це захворювання належить до ревматичної сфери і відбувається в багатьох випадках, і передусім, в гострій фазі, з хворобливими запаленнями. Причиною болів є руйнування суглобового хряща. До пошкодження хряща можуть приводити різні чинники. Крім пошкоджень внаслідок травм, перевантажень або природжених недоліків суглобів до найважливіших причин належать порушення обміну речовин, гіподинамія, а також неправильне харчування. Початковою точкою кожного артрозу є порушення в оболонці хряща, так зване "пошкодження хряща". Часто це пошкодження спочатку обмежене лише маленькою поверхнею в декілька квадратних сантиметрів. Крім того, воно поки ще поверхневе. Услід за цим в рентгенівському знімку з'являються перші ущільнення кістки. При цьому завжди мова йде про дільниці кістки, які знаходяться безпосередньо під хворим хрящем. Ці додаткові зміни в кістці є вирішальним симптомом ранньої стадії артрозу. Без цих змін кістки має місце тільки "пошкодження хряща", а не "артроз". Тому артроз завжди означає пошкодження хряща із змінами кістки. Для уражених пацієнтів артроз означає хворобливе, хронічне захворювання, яке заподіює їм шкоду майже при всіх видах діяльності. Наслідком цього є болі, загострення запалення, ущільнення і деформацій, а також нерухомості суглобів. Для кожного суглоба і кожної стадії масштаб і вияв цих процесів можуть дуже сильно розрізнюватися. Свобода руху сильно ускладнена. У пошуках полегшення багато які пацієнти вдаються до медикаментів, що є у вільному продажу або медикаментів, що відпускаються тільки по рецепту, піддають себе тривалій фізіотерапії або навіть оперуються. Однак все це лікування часто приносить їм тільки короткострокове полегшення болів. У більшості випадків пошкодження хряща нестримно розповсюджується, так що болі збільшуються, і обмеження руху загострюється. Запалення (Inflammatio) є характерною відповіддю біологічної тканини на зовнішнє або внутрішньо погашене подразнення, з функцією усунути збудник пошкодження або виправити його дію. Запалення може існувати в обмеженій ділянці або як системна запальна реакція. У даному прикладі артрит представлений сильним больовим чинником артрозу. Всі п'ять симптомів запалення (почервоніння, гіпертермія, припухлість, біль і обмежені функції) можуть бути констатовані при артриті в більшості випадків протягом хронічної течії хвороби. Так, часто виникає почервоніння і гіпертермія, які також являють собою короткий попереджувальний сигнал загострення запалення, що почалося, до якого швидко підключається фаза болю. Припухлість при вже розширеному суглобі часто навряд чи відчувається. Обмеження функцій тоді розглядають як наслідок болів, в яскраво виражених формах як наслідок неправильного положення. Таким чином, для пацієнтів є два шляхи боротися із зумовленими пошкодженням хряща запаленнями і для того, щоб поліпшити больову ситуацію і тугорухомість суглобів: Перший шлях полягає в підтримуючому самовідновленні організму за допомогою захищаючих хрящ речовин. У торгівлі для цього є харчові добавки з гідролізатом колагену для здорових і працездатних суглобів, які збільшують суглобний колаген або сприяють його новоутворенню. У публікації Orthopadische Praxis (2005, 10, 41: 565-568) Dr. S. Oesser описує вплив фрагментів колагену на новий синтез і деградацію позаклітинних матриць хряща. Гідролізат колагену, що використовується в цій публікації і в прикладах цієї заявки, належить до колагену типу 1. Він стимулююче діє на утворення колагену типу 2, а також на біосинтез перицелюлярного (оточуючого клітину) протеоглікану. Колаген типу 2 з часткою близько 70 % є в кількісному відношенні найважливішим елементом (хряща суглоба) і створює передумови для еластичності і міцності при розтягненні. Дослідження Dr. Roland W. Moskowitz в Semin Arthritis Rheum (2000, 30:87-99) приводить до висновку, що денна доза в 10 г гідролізату колагену веде до істотного зменшення болів у пацієнтів, хворих на артрит. Далі, в торгівлі є препарати з амінсульфатом глюкози (денна доза 0,75 г - 1,5 г) і/або хондроітинсульфатом (денна доза 0,4 г - 0,8 г), які також характеризуються захищаючою хрящ дією. Публікація Л.Л. Brief, J. Am. Acad. Orthop.Surg. (2001, 9: 71-78) підтверджує відповідний результат. Другий шлях полягає в придушенні запалення або скороченні медіаторів запалення. Ці медіатори, наприклад, цитокіни, є відповідальними за різку захисну реакцію. Природною реакцією організму для придушення запалення є виділення кортикоїдів. Звідси виходить, що треба синтезувати похідні кортизолу і робити їх комерційно доступними як 1 UA 102678 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 протизапальні медикаменти. Преднізолон і дексаметазон сьогодні як сильно діючі ліки є останнім порятунком. Однак тривале лікування приводить до сильних побічних дій, як атрофічні смуги шкіри, атрофія м'язів, зміни в картині крові або цукровий діабет типу 2. Засобами, вибраними для тривалого лікування, в цей час є нестероїдні антиревматичні засоби (НСАР) (NSAR) і інгібітори СОХ-2. Однак диклофенак, ібупрофен, індометацин і оксикам також володіють потенційною побічною дією, яка тягнеться від хвороб шлунково-кишкового тракту через виразку шлунка аж до ураження печінки або нирок. У галузі лікування природними чинниками в багатьох культурах вже багато сотень років назад використовували лікарські рослини, які звичайно характеризуються хорошою сумісністю. До класичних визнаних фітотерапевтичних засобів належать, крім інших, кольник {Phyteuma L). У той час як принцип дії, наприклад, кори верби може бути пояснений саліцином, інші рослини ще інтенсивно досліджують. У цей час разючим чином плоди шипшини як класичної харчової рослини особливо відмічаються як сильний протизапальний засіб. Плоди шипшини є плодами, що збираються, які містять багато дрібних горішків. М'якуш плодів, зібраних пізньою осінню, утворюється з м'ясистого квітколожа, є кисло-солодким і багатим на вітаміни, особливо на вітамін С (аскорбінова кислота), а також на вітаміни А, В1 і В2. Традиційно плоди шипшини приймають для заміщення вітаміну С при простудних захворюваннях і грипозних інфекціях. Вітамін С також грає важливу роль при новоутворенні колагену в хрящі суглобів і є необхідним для збереження кісток і опорної тканини. У патенті СІЛА 6024960 описаний зв'язок високого вмісту вітаміну С з протизапальною дією композицій з плодів шипшини. У патенті США 6485752 В1 захищена комбінація концентрату плодів шипшини з риб'ячим жиром, яка розрахована на високий вміст вітаміну С в екстракті і ненасичені жирні кислоти в риб'ячому жирі. Згідно з повідомленням, може бути досягнуте поліпшення рухливості і хороше самопочуття завдяки прийому порошку з плодів шипшини. Група дослідників під керівництвом проф. Dr. Kharazmi в університеті Копенгагена досліджувала 2004 ефекти порошку з плодів шипшини при артрозі суглобів і виділила шляхом "комплексного методу фракціонування" частку галактоліпіду. Галактоліпід «GOPO®» був запатентований в комплексі зі способом одержання порошку з плодів шипшини (європейський патент ЕР 1071439). Змогли довести іп-vitro, що цей галактоліпід перешкоджає міграції поліморфно-ядерних лейкоцитів і in-vivo знижує концентрацію С-реактивного білка (CRP) в сироватці. У клінічному випробуванні значення CRP вже через 10 днів знижувалося в середньому до 39 %. Контрольоване плацебо перехресне дослідження проводили з 112 хворими артрозом пацієнтами, при цьому досліджували денну дозу 5 грамів порошку з плодів шипшини (LitoZin®). Дослідження показало істотне полегшення ранкової скутості у 66 % учасників експерименту після тримісячного прийому порошку з плодів шипшини. Крім того, змогли скоротити приблизно на половину споживання анальгетиків як опіоїден, трамадол, парацетамол або НСАР (NSAR) при дієтотерапії за допомогою порошку з плодів шипшини. Порошок з плодів шипшини, що застосовується в продукті LitoZin®, стандартизований по речовині, що містить 175 мільйонних частин (ррт) (активної речовини), і при зовнішньому розгляді може бути описаний як неоднорідний. Він випресовується з непостійним розподілом частинок по розмірах в різних партіях (грубі частинки від 20 % між 0,50,7 мм до дрібних частинок від 40 % між 0,05-0,2 мм). Систематичний огляд C.Chrubasik et al, Phytotherapy Research (2006, 20: 1 3) об'єднує клінічні дані по порошках з плодів шипшини. Порошки з плодів шипшини, що використовуються, є погано охарактеризованими або стандартизованими. Кількості, що застосовуються, аж до 10 г внаслідок малої концентрації біологічно активної речовини дуже великі. Тому є потреба в охарактеризованих і/або стандартизованих продуктах з плодів шипшини, які володіють високою активністю на одиницю ваги. Задача даного винаходу складається в наданні добре сумісного, протизапального засобу, особливо для лікування суглобового нездужання і захворювань. Задача вирішується за допомогою композиції, що містить протизапальний рослинний екстракт з плодів шипшини разом із захищаючою хрящ речовиною. Докладний опис винаходу Мета винаходу полягала в розробці екстракту з харчової рослини, що мав використовується для боротьби або попередження запальних реакцій. Переважно мова йде про композицію екстракту, яку під час або після процесу сушіння комбінують із захищаючою хрящ сухою допоміжною речовиною. Крім того, повинен бути розроблений екстракт, який ефективний без дуже термолабільних (як галактоліпіди), що володіють значною побічною дією (як саліцилати), чутливих до окислення (як аскорбінова кислота) або чисто ліпофільних (як тритерпенові кислоти) компонентів. 2 UA 102678 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Принцип дії екстрактів плодів шипшини можна охарактеризувати таким чином. "Залучені" за допомогою цитокінів лейкоцити беруть участь в запальному процесі. Несподівано змогли встановити, що екстракт плодів шипшини згідно з винаходом скорочує виділення цитокінів, так що менше лейкоцитів мігрує в ділянку запалення і тим самим менше збитку наноситься хрящовій тканині. Але хрящова тканина ушкоджується також через утворення вільних радикалів з процесу запалення. Несподівано було встановлено, що екстракт плодів шипшини згідно з винаходом, незалежно від природного вмісту в ньому аскорбінової кислоти, також скорочує це утворення вільних радикалів. Таким чином, екстракт плодів шипшини згідно з винаходом ослабляє запальні реакції в суглобах або зовсім придушує їх. Внаслідок цього пошкодження і руйнування хряща (при)зупиняється і пом'якшуються біль, а також поліпшується рухливість. Винахід описує одержання і застосування екстракту з плодів шипшини, а також його комбінацію із захищаючими хрящ речовинами як гідролізат колагену, глюкозамін і/або хондроітинсульфат для збереження здоров'я і/або скорочення симптомів при скаргах на ревматичні болі, окремо при хронічних запаленнях суглобів, як ревматоїдні артрити, а також схожих скаргах. Особливо переважна форма виконання складається в застосуванні захищаючої хрящ речовини як безпосередньої сухої допоміжної речовини для екстракту плодів шипшини. В одній переважній формі виконання використовують екстракт з плодів шипшини, що виготовляється за допомогою способу одержання сухого екстракту з плодів шипшини за допомогою наступних стадій: a) екстракція плодів шипшини (Rosa canina) водою або сумішшю води і аж до 50 ваг. % етанолу для одержання простого екстракту, b) очищення одержаного простого екстракту за допомогою щонайменше однієї стадії як: b1) ензиматична ферментація, b2) фільтрування через мембранний фільтр, c) сушіння екстракту. Можуть бути використані оболонки плодів шипшини або оболонки і кісточки плодів шипшини. Переважно як лікарська сировина використовують плоди дикої троянди Cynosbatum DAB або Cynobastum sine semine. Несподівано вдалося розробити екстракт, який в одній формі виконання заздалегідь оброблений за допомогою ферменту. Збагачення активного початку в іншій формі виконання було, крім того, досягнуте способом селективного фільтрування через мембранний фільтр. Обробка ферментом і фільтрування через мембранний фільтр також можуть бути комбіновані. Сушіння під вакуумом в діапазоні температур до 80 °C несподівано не впливало негативним чином на активність. Для ферментативної обробки як активно діючі використали гідролітичні ферменти, особливо глікозидази. Іншими придатними ферментами є целюлази, як, наприклад, геміцелюлази, особливо ксиланази. Особливо ферментами, що переважно використовуються, є пектинази. Фільтрування через мембранний фільтр є способом фільтрації, при якому фільтрують через мембрану, і також можуть бути відділені найдрібніші частинки. Переважно фільтрування через мембранний фільтр проводять як ультрафільтрацію, причому речовини можуть бути відділені завдяки розмірам їх молекул, і пермеат (розчин, що проходить через мембрану) використовують далі. Придатні пропускні розміри для мембран становлять 1 кДа - 500 кДа, більш переважно 10 кДа - 300 кДа, особливо - 100 кДа. Синергічний ефект в зменшенні болів і тривалості вияву симптомів змогли спостерігати за допомогою підтримки сил самовідновлення регенерації хряща. Застосування знаходить екстракт з плодів шипшини з виду Rosa canina. Переважний екстракт не містить слідів галактоліпіду «GOPO®»', що виявляються, а також характеризується тільки залишковим вмістом саліцилатів. Вміст ліпофільних пентациклічних тритерпенових кислот також мінімальний. Доказ залежної від дози протизапальної дії приведений в дослідженні, в якому інгібування "висипання" медіаторів запалення, індуковане ліпополісахаридами (JinC)(LPS), вимірювали на моноцитах людини. Це були нарізно цитокіни інтерлейкін-1(3 (IL-1), інтерлейкін-6 (IL-6), простагландин Е2 (PGE2), а також фактор некрозу пухлини-альфа (TNF-). PGE2 є "головним простагландином", який спричиняє за собою запальний процес. Він підвищує проникність судин (опухання тканин), бере участь у виникненні почервоніння і посилює біль (який викликається іншими запальними речовинами як брадикінін або гистамін), оскільки він сенсибілізує больові нервові закінчення. 3 UA 102678 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 У дослідженні приведений доказ, що водні екстракти згідно з винаходом, що не містять GOPO®, у великій міри вільні від саліцилатів і з мінімумом псевдосапоніну виявили дуже хорошу протизапальну дію. Якщо за допомогою речовини, що використовується, яка захищає хрящ, як гідролізат колагену, глюкозамін або хондроітинсульфат, сприяти новоутворенню колагену суглобів, то таким чином можна підтримувати самолікування пошкоджень хряща, а наслідки, такі як артрози, таким чином можуть бути скорочені. В одній формі виконання змогли розробити чисто водний, але, проте, активний екстракт плодів шипшини, який за достовірними джерелами обходиться без чутливих до тепла і світла сполук групи галактоліпідів, практично не містить володіючих значною побічною дією саліцилатів, а також не містить сполук класу ліпофільних псевдосапонінів. Ці протизапальні ефекти згідно з винаходом можуть бути комбіновані з тими, що захищають хрящ і сприяючими регенерації компонентами гідролізату колагену, глюкозаміну або хондроітинсульфату. Наступною переважною формою виконання є комбінація екстракту згідно з винаходом з ефективним для остеоартриту гідролізатом колагену, а також добавкою Са в формі пірувату кальцію. Можливе застосування як харчової добавки і в збалансованих дієтах; цільовою групою є пацієнти з хронічними запаленнями суглобів, для скорочення кількостей, що використовуються НСАР (NSAR), а також рекордсмени великого спорту, для прискореної регенерації в реабілітаційній фазі після травми суглобів і перевантаження міжхребетних дисків. Наступним об'єктом винаходу є композиція, що містить протизапально діючий рослинний екстракт разом із захищаючою хрящ речовиною. Придатними протизапальними рослинними екстрактами є екстракти таких рослин, як польовий хвощ, африканська слива, амарант (щириця), дудник, арніка, окопник, васильки, пливун, черемша, дзвоник, огіркова трава, кропива, ожина (малина), броколі, гречка, кульбаба (жовтець), стручковий перець, куркума, гарбузові, запашна фіалка, вероніка, вербена, тирлич, естрагон, евкаліпт, галгант, гвоздика, снить, золотарник, бузина, імбир, ромашка, настурція, кардамон, вишня, коріандр, лакриця, лемонграс, липовий цвіт, лавровий лист, мангустан, лабазник, майоран, расторопша плямиста, хрін, меліса, м'ята, піретрум дівочий (помилкові ромашки), маслина, перила, перець, календула, розмарин, шавлія, деревій, іберійка, первоцвіт, селера, гірчиця, верба біла, чебрець, фіалка, зірочник середній, спориш, маренка, кора верби, полин гіркий, icon, кориця, ладанник, цибуля і їх суміші. Відповідні екстракти придатні для лікарських, харчових засобів або харчових добавок для попередження або зменшення симптомів при хронічних запаленнях суглобів, ревматоїдному артриті, артрозі, захворюваннях в ревматичній ділянці, спондиліті, остеоартриті, фіброміалгії або для сприяння при реабілітації після травми суглоба або деформації міжхребетних дисків. Приклади Приклад 1: Вплив екстрагуючого засобу на протизапальний потенціал екстракту дикої троянди (Cynosbati) 1 кг оболонок плодів шипшини (Rosa canina) двічі піддавали екстракції, використовуючи по 6 літрів розчинника, при 50 °C тривалістю 6 годин. Витяги відстоювали протягом ночі, об'єднували і на наступний ранок фільтрували до прозорості. Потім для одержання густого екстракту відганяли розчинник на роторному випарнику і сушили під вакуумом при 50 °C з 50 % мальтодекстрину. Одержаним таким чином екстракти випробовували на їх потенційну активність відносно гальмування типових параметрів запалення як TNF-альфа або типових параметрів болю як PGE2 на моноцитах людини. PGE2 ІС50 [мкг/мл] 450 200 300 450 450 450 >>500 Екстрагуючий засіб 70 % ЕtOН об./об. 45 % ЕtOН об./об. 20 % ЕtOН об./об. Вода Вода ПЕГ 300 Вода-гліцерол Порошок лікарської сировини 50 TNF-альфа ІС20 [мкг/мл] 200 100 325 100 200 300 350 Порошок лікарської сировини дикої троянди Cynosbati характеризується неспецифічним, ледве вимірним інгібуванням PGE2. Навпаки, були екстракти, особливо водні або водно 4 UA 102678 C2 5 10 етанольні екстракти, у яких залежність від дози була вимірна. Середня 50 %-на доза інгібування (ІС50) була вимірна вже від 200 мкг/мл (щонайменше, 5-кратна посилена дія). Далі екстракти при інгібуванні параметра запалення TNF-альфа виявили виразно більш сильну, а також залежну від дози дію. Оскільки порошок лікарської сировини досягав максимально 20 %-ного інгібування, для порівняння приводили значення ІС20. Приклад 2: Очищення за допомогою ферментативної обробки 1 кг оболонок плодів шипшини двічі піддавали екстракції, використовуючи по 6 літрів води при 50 °C. Витяги відстоювали протягом ночі, об'єднували і на наступний ранок фільтрували до прозорості. Після додавання 3 г Ultrazym® на 2 кг сухої речовини ферментували 2 дні при кімнатній температурі. Осад відділяли з розчину за допомогою фільтрації. Надосадову рідину потім відганяли на роторному випарнику до одержання густого екстракту (природний вихід екстракту 29 %) і сушили у вакуумі при 50 °C з 50 % мальтодекстрину. PGE2-IC50 [мкг/мл] ТNF-альфа-ІС20 [мкг/мл] 15 20 25 Водний екстракт 450 100 Ферментований екстракт характеризувався вмістом 10,5 % поліфенолів, навпаки, аскорбінова кислота практично не визначалася (