Спосіб визначення фракцій сульфатованих гексозаміногліканів

Спосіб визначення фракцій сульфатованих гексозаміногліканів в сироватці крові шляхом використання як осаджувача резорхіну, який відрізняє ться тим, що фракціонування проводять 1М розчином натрію хлориду, визначають концентрацію в г/л хондроїтин-4-сульфатів, хондроїтин-6-сульфатів, гепарансульфатів з використанням відповідних стандартних розчинів. Пробірки Речовини Сироватка крові Дистильована вода 0,5% розчину резорхіну Пробірки струшують і витримують при t 25°С 30 хвилин, після чого вимірюють інтенсивність помутніння розчину на фотоелектрокалориметрі з властивостями нефелометра (дозволяє визначати (19) UA (21) u200708505 (22) 24.07.2007 (24) 10.01.2008 (72) ЛЕОНТЬЄВА ФРИДА СОЛОМОНІВН А, U A, ФІЛІПЕНКО ВОЛОДИ МИР АКІМОВИЧ, U A, ТИМОШЕНКО ОЛЬГА ПАВЛІВНА, U A, КАРТАШОВ МИКОЛА ІВАНОВИЧ, UA, КІБКАЛО ДМИТРО ВІКТОРОВИЧ, UA, ТУЛЯКОВ ВЛАДИСЛАВ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, U A, РЯБКОВА ЛЮДМИЛА ПЕТРІВНА, UA (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ПАТОЛОГІЇ ХРЕБТА ТА СУГЛОБІВ ІМ. ПРОФ. Контроль 0,05мл 3,35мл 1,0мл 3 29198 мутність розчину) при довжині хвилі 400нм в кюветі з товщиною робочого шару 5мм. Для визначення хондроїтин-6-сульфатів в дослідну та контрольну пробірки додають по 0,05мл 1М розчину хлориду натрію. Пробірки струшують і витримують при t 25°С 10 хвилин після чого вимірюють інтенсивність помутніння в дослідній та контрольній пробірках на фотоелектрокалориметрі з властивостями нефелометра при довжині хвилі 400нм в кюветі з товщиною робочого шару 5мм. Вираховують різницю в показниках досліду та контролю та за калібрувальною кривою визначають концентрацію хондроїтин-6-сульфату в г/л. Для визначення вмісту хондроїтин-4-сульфатів в дослідну та контрольну пробірки додають по 0,05мл 1М розчину хлориду натрію. Пробірки струшують і витримують при t 25°C 10 хвилин після чого вимірюють інтенсивність помутніння в дослідній та контрольній пробірках на довжині хвилі 400нм в кюветі з товщиною робочого шару 5мм. Вираховують різницю в показниках досліду та контролю та за калібрувальною кривою визначають концентрацію хондроїтин-4-сульфату в г/л. Для визначення гепарансульфату в дослідну та контрольну пробірки додають по 0,05мл 1М розчину хлориду натрію. Пробірки струшують і витримують при t 25°С 10 хвилин після чого вимірюють інтенсивність помутніння в дослідній та контрольній пробірках на фотоелектрокалориметрі довжині хвилі 400нм в кюветі з товщиною робочого шару 5мм. Вираховують різницю в показниках досліду та контролю та за калібрувальною кривою визначають концентрацію гепарансульфату. Для проведення досліджень будують 3 калібрувальних графіки з використанням стандартних розчинів з різним вмістом розчинів (0,2г/л, 0,15г/л, 0,1г/л 0,05г/л, 0,01г/л) хондроїтин6-сульфату, хондроїтин-4-сульфатів та гепарансульфату, для чого при побудові кожного з 3 графіків дослідження проводять в 5 дослідних пробірках і 1 контрольній в які замість сироватки крові вносять стандартні розчини з різним вмістом (0,2г/л, 0,15г/л, 0,1г/л 0,05г/л, 0,01г/л) хондроїтин6-сульфату-1 графік, хондроїтин-4-сульфатів-2 графік та гепарансульфату - 3 графік. Далі дослідження проводяться за вищенаведеною схемою. При дослідженні 20 клінічно здорових людей встановили що вміст хондроїтин-6-сульфату складає 0,06±0,008г/л, хондроїтин-4-сульфатів 0,04±0,006г/л, гепарансульфату 0,025±0,004г/л. Таким чином запропонований спосіб дозволяє визначати вміст в г/л хондроїтин-6-сульфату, хондроїтин-4-сульфатів та гепарансульфату в сироватці крові в нормі та при різних патологічних станах. 4