Штам бактерій laсtobacillus acidophilus, що використовується у виробництві заквашувальних культур та функціональних молочних продуктів

Штам бактерій Lactobacillus acidophilus ВКПМ В-7770, що використовується у виробництві заквашувальних культур та функціональних молочних продуктів (Пат России №2060673, А 23 С 9/12, 1996) Застосування бактеріального препарату та кисломолочних продуктів, виготовлених з його використанням, сприяє профілактиці та лікуванню шлунковокишкових захворювань Однак в описі винаходу антагоністичну дію продукту визначено теоретично на підставі результатів, одержаних для чистої культури, що не дозволяє об'єктивно оцінити рівень антагонізму закваскового препарату ВІДОМІ також штами ацидофільних бактерій, що використовуються у виробництві лікувальнопрофілактичних кормових продуктів (збагачена молочна сироватка, ацидокорм, ацидофілін) Застосування таких продуктів сприяє зниженню рівня шлунково-кишкових захворювань серед молодняка сільськогосподарських тварин (ТУ 10 16 УССР 82-89, ТУ 59-79-75) Однак ці мікроорганізми адаптовані до розвитку в травній системі великої рогатої худоби, що обмежує сферу застосування кінцевого продукту Найближчими до штаму, що заявляється, є штами L acidophilm ЕН1, ЕН2, ЕНЗ, ЕН4, N V Ер 317/402, які входять до складу закваски „Наріне" (Пат России №2001578, А 23 С 9/12, 1993) Одержаний з використанням цих штамів кисломолочний продукт застосовується для профілактики та лікування шлунково-кишкових захворювань дітей і хворих любого віку Ці штами мають певний спектр антагоністичної активності і по-різному пригнічують розвиток патогенних і умовно патогенних мікроорганізмів Недоліком цих штамів є відсутність антагоністичної активності до бактерій роду Campilobacter Завданням винаходу є одержання високоактивного штаму L acidophilus, що має широкий спектр О ю 51770 ношенню до Shigella flexnen, Campilobacter sp та антагоністичної активності, високу м ол о коз го рту габактерій роду Bacillus (табл ) чу активність та енергію кислотоутворення в моГенетичні особливості штаму Визначення чулоці і забезпечує підвищення біологічної ЦІННОСТІ тливості до антибіотиків методом дифузії в агар та лікувально-профілактичних властивостей ціпоказало, що штам L acidophilus 7 є стійким до льових продуктів поліміксину, новобюцину, канаміцину, неоміцину Штам L acidophilus 7 був одержаний в результа стрептоміцину таті спрямованої селекції культури, виділеної від здорової дитини Ідентифікований як вид L Штам рекомендується для приготування бакacidophilus за основними морфологічними, культутеріальних препаратів та кисломолочних продуктів ральними і фізюлого-бюхімічними властивостями лікувально-профілактичного призначення Винахід (Краткий определитель бактерий Берги, 1982, Л А пояснюється прикладами використання штаму Банникова Селекция молочнокислых бактерий и Приклад 1 Одержання лабораторної закваски их применение в молочной промышленности, L acidophilus 1975) Штам задепоновано в колекції промислових В ЮОмл стерилізованого молока з температумікроорганізмів ВНДІгенетика і зареєстровано під рою 38°С вносять 1% свіжої чистої культури L номером ВКПМ В-7770 acidophilus 7 і термостатують при вказаній температурі до утворення згустка, після чого охолоджуШтам І acidophilus 7 характеризується такими ють і використовують для приготування пересадоознаками та властивостями чної лабораторної або виробничої закваски Для Культурально-морфолопчні ознаки штаму цього в стерилізоване молоко з температурою Клітини штаму палочковидні, нерухомі, грампози38°С вносять 3% первинної лабораторної закваски тивні Мають різну довжину від 5 до 20мкм, розміі термостатують при цій температурі до утворення щуються у вигляді окремих клітин або ланцюжків згустка протягом 4 - 5год КІЛЬКІСТЬ життєздатних Структура клітин не зерниста Штам росте на поклітин L acidophilus в заквасці складає 5 верхні агару з пдролізованим молоком, створюючи 108КУО/мл пасмовидні колони, глибинні колонії мають форму шматочків вати В рідкій культурі створює калаПриклад 2 Приготування функціонального муть, яка випадає в осад молочного продукту типу ацидофільного молока Фізюлого-бюхімічні властивості штаму Штам є Молоко нормалізують до вмісту жиру 3,2%, факультативним анаеробом Оптимальна темпепастеризують при температурі 86°С із витримкою ратура росту 37 ± 1°С Штам коагулює молоко при 20 хвилин, охолоджують до температури заквашуцій температурі і ПОСІВНІЙ дозі 3% протягом 4 - 5 вання та вносять 1% закваски ацидофільної палигодин Створює однорідний щільний згусток без чки Сквашування ведуть при 38°С протягом 5 - 6 відокремлення сироватки приємного кисломолочгодин до утворення згустка та кислотності 65 ного смаку Нагромадження клітин в молоці скла70°Т КІЛЬКІСТЬацидофільних паличок в продукті дає 2 1 0 - 5 108КУО/мл Гранична кислотність в досягає 2 108КУО/мл Продукт має чистий кисломолоці досягає 265°Т Росте в бульйоні при рН 8,3 молочний смак, однорідну сметаноподібну консисі в молоці із 0,4% фенолу Окрім того, штам стійкий тенцію без розшарування сироватки, проявляє до 2% NaCI і 20% жовчі антагоністичну активність по відношенню до ешерихій, сальмонел, протею, стафілококу, шигел, Ферментує глюкозу, лактозу, сахарозу, малькампілобактеру, клебсієли тозу, не ферментує арабшозу, рамнозу, маніт Штам згортує і відновлює лакмусове молоко, Приклад 3 Приготування бактеріального конне утворює СОг із цитрату та аміак з аргиншу центрату з використанням штаму L acidophilus 7 Антагоністичні властивості штаму АнтагонісДо 70л водопровідної води додають 2,1кг сутичну властивість вивчали методом лунок Як хого знежиреного молока, суміш нагрівають до тест-культури використовували штами патогенних температури 55°С, доводять рН до 6,8, вносять та умовно патогенних мікроорганізмів Інтенсив12г протосубтиліну з активністю 70од та витримуність антагоністичної дії визначали за зоною зають при цій температурі протягом 2,5 годин Після тримки росту відповідної тест-культури біля лунки гідролізу до середовища вносять 700г натрію липісля 24-годинноі інкубації при 37°С Результат моннокислого, 140г натрію оцтовокислого, 12г маоцінювали як позитивний, якщо розмір зони зарганцю сірчанокислого, 1,4л кукурудзяного екстратримки росту був не менше 12мм кту, розведеного водою (1 1), встановлюють рН 7,8 шляхом додавання 30%-ного розчину гідроокису Штам L acidophilus 7 виявляв високу антагонінатрію та стерилізують його при температурі стичну активність до патогенних та умовно пато121 °С протягом ЗО хвилин Активна кислотність генних мікроорганізмів Так, зони пригнічення россередовища після стерилізації - 6,8од, рН Серету склали для Eschenchia coll - 17 - 19мм, довище охолоджують до 38°С, вносять 800мл заStaphilococcus aureus - 18мм, Shigella flexnen - 26 кваски L acidophilus і 1400мл Enterococcus ЗО, Enterobacter sp - 12, Proteus vulgans - 16 - 18, faecium Композицію вирощують при 38°С протяKlebsiella sp - 12 - 19, Pseudomonas aerugmosa гом 12 годин, підтримуюючи рН культуральної рі15 - 25, Salmonella typhymunum - 12 - 14, Yersima дини біля 6,8од періодичним розкисленням водenterocohtica - 22 - 24, Bacillus prodigioswn -18 - 20, ним розчином аміаку В КІНЦІ росту культуральну В rettgen 15 - 16, Campilobacter sp - 24 - 32 Найарідину охолоджують до 15°С, нейтралізують до рН ктивніше штам пригнічував розвиток Shigella 6,8 і ВІДДІЛЯЮТЬ біомасу на суперцентрифузі при flexnen i Campilobacter sp 15000об/хв Одержану біомасу змішують у співвідШтам, що заявляється, вигідно відрізняється ношенні 1 1 з захисним середовищем такого склавід відомих за спектром тест-культур патогенів та ду (в г/л) натрій лимоннокислий - 50, сахароза вищим рівнем антагоністичної активності по від 100, вода - до 1л Суспензію клітин в захисному середовищі розливають в кювети шаром 6мм, заморожують і висушують в сублімаційній сушарці В 1г сухого бактеріального концентрату міс10 10 титься 5 10 клітин L acidophilusTa 5 10 клітин Е faecium Оживлений бактеріальний концетрат 51770 пригнічує ріст кишкової палички, сальмонел, протею, шигел та стафілококів Бактеріальний концентрат використовується в виробництві сухих пробіоз-продуктів "Лактовіт Ф", призначених для лікування та профілактики дисбактерюзів у людей різного віку Таблиця Антагоністична активність ацидофільних паличок по відношенню до патогенних та умовно патогенних мікроорганізмів Тест-культури Eschenchia coll Staphilococcus aureus Shigella flexnen Enterobacter sp Proteus vulgans Klebsiella sp Pseudomonas aerugmosa Salmonella typhimunum Yersima enterocohtica Bacillus prodigiosum Bacillus rettgen Campilobacterjeum Розмір зон затримки росту тест-культур, мм Штами ацидофільних бактерій що заявляється ВІДОМІ 7 ЕН1 ЕН2 ЕНЗ 17-18 14-16 15-16 14 18 15-16 15-18 15 26-30 18 16-17 16 12 16 14-15 19 16-18 17 16 17 12-19 14 13 15 15-25 12 13 12-14 21 -22 20-21 20 22-24 18-20 15-16 24-32 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71 ЕН4 13 15-16 17 16-17 16-17 17 15 20-22