Експрес-метод визначення кількісного вмісту фосфоліпідів у негідратованих оліях і фосфатидних концентратах

Експрес-метод визначення кількісного вмісту фосфоліпідів у негідратованих оліях і фосфа тидних концентратах, який включає підготовку досліджуваного зразка, побудову калібрувального графіка та визначення оптичної густини досліджуваного зразка з використанням олії або фосфатидного концентрату з відомим вмістом фосфоліпідів, який відрізняється тим, що зразок рослинної негідратованої олії або фосфа тидного концентрату витримують у силіконовій бані протягом 2 годин при 200 °С, вимірюють його оптичну густину по довжині хвилі 670 нм і визначають кількість фосфоліпідів залежно від отриманого значення оптичної густини по вже побудованому градуйованому графіку. (19) (21) a200700973 (22) 30.01.2007 (24) 25.01.2008 (72) ДЕМИДОВ ІГОР МИКОЛАЙОВИЧ, U A, КРАМАРЕНКО АН АСТАСІЯ ОЛЕКС АНДРІВН А, U A (73) УКРАЇНСЬКИЙ НАУКОВО-ДОСЛІДНИЙ ІНСТИТУТ ОЛІЙ ТА ЖИРІВ УКРАЇНСЬКОЇ АКАДЕМІЇ АГРАРНИХ Н АУК, U A (56) RU C1 2170428, 10.07.2001. SU A1 1800348, 07.03.1993. RU C1 2103681, 27.01.1998. UA A 68748, 15.08.2004. UA A 70870, 15.10.2004. ГОСТ 7824-80 Масла растительные. Методы определения фосфорсодержащих веществ. 3 81735 800°С впродовж однієї години, розчинення залишку після спалювання, перенос отриманого розчину в мірну колбу місткістю 100 см 3, додавання молібденового реагенту, нагрівання на киплячій бані протягом 30 хв для розвитку фарбування, охолодження до кімнатної температури, доведення розчину в мірній колбі до мітки дистильованою водою, визначення оптичної густини розчинів й розрахунок вмісту фосфоліпідів на основі каліброваної кривої по спеціальній формулі [ГОСТ 7824-80 Масла растительные. Методы определения фосфорсодержащих веществ]. До недоліків цього способу можна віднести тривалість його здійснення (8-10 годин), необхідність застосування великої кількості хімічних реагентів, хімічного посуду й приладів. Всі відомі методи володіють рядом істотних недоліків: вимагають високої кваліфікації лаборанта, відрізняються тривалістю, шкідливістю для здоров'я, вимагають великих працевтрат, дорогих реактивів. Всі ці недоліки усуває запропонований метод. В основі винаходу лежить задача спрощення й прискорення визначення вмісту фосфоліпідів у оліях і фосфатидних концентратах. Вона вирішується шляхом побудови градуйованого графіка в координатах кількість фосфоліпідів значення оптичної густини з використанням зразків олії або фосфатидного концентрату з відомим вмістом фосфоліпідів і відрізняється тим, що зразок з рослинною негідратованою олією або фосфа тидним концентратом поміщають у силіконову баню на 2 години при температурі 200°С, вимірюють його оптичну густину і визначають кількість фосфоліпідів в залежності від отриманого значення оптичної густини по вже побудованому градуйованому графіку. У результаті використання запропонованої методики знижується тривалість проведення аналізу, істотно знижуються працевтрати по проведенню аналізу і його собівартість (за рахунок відмови від використання реактивів). Актуальність проблеми, що розв'язується визначається високою затребуваністю оперативних методів аналізу вмісту фосфоліпідів у оліях і фосфатидних концентратах. Метод полягає у фіксуванні зміни оптичної густини фосфоліпідів при їх термообробці. При термообробці фосфоліпідів відбувається нагромадження т.зв. коричневих пігментів, які утворюються в результаті взаємодії вільних вуглеводів або продуктів розпаду складних вуглеводів з аміногрупами фосфоліпідів. Для побудови градуйованого графіка беруться наважки фосфатидного концентрату з відомою кількістю фосфоліпідів, до них додається по 10 см 3 рафінованої дезодорованої олії, наважки містять в силіконову баню й знаходяться в ній впродовж 2 годин при температурі 200°С. Потім виміряється оптична густина зразків на електрофотоколориметрі відносно того ж зразка соняшникового фосфатидного концентрату з рафінованою дезодорованою олією, але який не підвергався термообробці й будується 4 градуйований графік. Графік має вигляд прямої. Виміри оптичної густини ведуться при довжині хвилі 670 нм. Утримання зразка в силіконовій бані більш ніж дві години не сприяє підвищенню точності виміру, а менш чим дві години, сприяє збільшенню погрішності виміру. При підтримці температури більше 200°С точність виміру не підвищується, а зниження температури до значень менше 200°С приводить до зростання погрішності виміру. Для проведення експрес-методу використовують стандартне обладнання електрофотоколориметр, силіконова баня й стандартний хімічний посуд. На рис. представлен градуйований графік, у якому на осі ординат відкладається оптична густина, а на осі абсцис - відповідна їй кількість фосфоліпідів у зразках (графік побудований з використанням зразків соняшникового фосфа тидного концентрата). Виконання експрес-методу. Побудова градуйованого графіка. Формула розрахунку кількості фосфоліпідів при використанні градуйованого графіка: Вміст фосфоліпідів у пробі (Х1), який наноситься на вісь Х градуйованого графіка: Х1=m 1*ω1 /(m 1+m 0); де m 1 - наважка олії або фосфатидного концентрату з відомим вмістом фосфоліпідів, г; m 0 - наважка рафінованої дезодорованої олії, г; ω1 - концентрація фосфоліпідів у наважці олії або фосфатидного концентрата, % у перерахуванні на стеаролеолецитин. Кількість фосфоліпідів (Х2) у зразку негідратованої олії або фосфатидного концентрата (Х2), що досліджується, визначається по формулі: Х2=m 2*ω2 /(m 2+m 0); де m 2 - наважка зразка, що досліджується, г; m 0 - наважка рафінованої дезодорованої олії, г; ω2 - кількість фосфоліпідів у зразку, % у перерахуванні на стеаролеолецитин, по градуйованому графіку. Проведення аналізу Приклад 1 Негідратовану соняшникову олію в кількості 10 см 3 містять в силіконову баню на 2 години при 200°С, потім вимірюють її оптичну густин у щодо тієї ж негідратованої соняшникової олії, але яка не підвергалась термообробці. Кількість фосфоліпідів визначають в залежності від отриманого значення оптичної густини за допомогою побудованого градуйованого графіка. Експрес-методика передбачає можливість роботи з вже побудованим градуйованим графіком. Результати аналізу приведені в таблиці. Приклад 2 Всі дії про проведенню аналізу аналогічні прикладу 1, тільки використовують соєву негідратовану олію. Результати аналізу приведені в таблиці. 5 81735 6 Приклад 3 Всі дії про проведенню аналізу аналогічні прикладу 1, тільки використовують ріпакову негідратовану олію. Результати аналізу приведені в таблиці. Приклад 4. Беруть наважку соняшникового фосфатидного концентрата в кількості 0,1 г, додають до неї 10 см 3 рафінованої дезодорованої олії, містять зразок в силіконову баню на 2 години при 200°С, потім вимірюють його оптичну густину щодо того ж зразка соняшникового фосфатидного концентрату з рафінованою дезодорованою олією, але який не підвергався термообробці. Кількість фосфоліпідів визначають в залежності від отриманого значення оптичної густини за допомогою побудованого градуйованого графіка. Результати аналізу приведені в таблиці. Як видно з таблиці, запропонована методика дозволяє визначати кількісний вміст фосфоліпідів як у негідратованих оліях, так і у фосфатидних концентратах, у той час, як існуючі методики дозволяють визначати кількості фосфоліпідів або тільки в оліях [прототип ГОСТ 7824-80 Колориметричний метод) або у фосфатидних концентратах (ГОСТ 7824-80 Ваговий метод, ТУ СОУ 15.4-37-212:2004]. Таким чином, застосування даної методики дозволяє значно скоротити тривалість визначення кількості фосфоліпідів, зменшити трудомісткість виконання, його собівартість. Метод не потребує використання реактивів, високої кваліфікації лаборанта, може використовуватись у великому діапазоні вмісту фосфоліпідів. Головна відмінність запропонованої експрес-методики - простота визначення. Таблиця Порівняльні дані по кількісному вмісту фосфоліпідів у негідратованих оліях і фосфатидних концентратах № 1 2 3 4 5 Найменування зразка Соняшниковий фосфа тидний концентрат Соєвий фосфатидний концентрат Соняшникова олія негідратована Соєва олія негідратована Ріпакова олія негідратована Масова частка фосфоліпідів, % у перерахуванні на стеаролеолецитин ГОСТ 7824-80 ГОСТ 7824-80 ТУ СОУ 15.4Запропонована колориметричний ваговий метод 37-212:2004 методика метод 57,9 57,8 73,3 72,2 56,7 72,0 0,26 0,27 0,48 0,32 0,48 0,33