Поліпшення росту біфідобактерій у кисломолочних продуктах

Реферат: Винахід належить до способу приготування кисломолочного продукту, який включає і) інокуляцію молока a) бактеріями, що належать до штаму Вifidobacterium animalis subspecies lactis і b) бактеріями, що належать до штаму, який підсилює ріст штаму Вifidobacterium animalis subspecies lactis, що вибраний із групи, яка складається зі штамів Lactococcus lactis СНСС4462 (DSM21407), СНСС3912 (DSM21406), штаму Streptococcus thermophilus СНСС7018 (DSM21408) і мутанта або варіанта будь-якого із цих штамів, який є функціональним еквівалентом батьківському штаму, і іі) ферментацію молока. Технічний результат винаходу полягає в поліпшенні росту популяції біфідобактерій у молоці під час ферментації для приготування кисломолочних продуктів (наприклад, йогурту) для того, щоб одержати велику кількість клітин біфідобактерій у готовому продукті. UA 105186 C2 (12) UA 105186 C2 UA 105186 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ВИНАХОДУ Даний винахід належить до поліпшення росту біфідобактерій за допомогою вибраних бактеріальних штамів у кисломолочних продуктах. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ ВИНАХОДУ Молочні продукти і, особливо, подібні до йогурту продукти формують, поза всякими сумнівами, найбільший сегмент ринку пробіотичних продуктів. Молочні продукти є чудовими носіями для доставки корисних пробіотичних бактерій, таких як біфідобактерії, і для введення їх у шлунково-кишковий тракт. Bifidobacterium BB-12® являє собою добре відому бактерію, доступну від Chr. Hansen A/S, Хоршолм, Данія. У випадку BB-12® наявні клінічні докази вказують на те, що необхідна 9 10 щоденна доза щонайменше 10 -10 КУО життєздатних пробіотичних бактерій (куо/КУО є скороченням для клітиноутворюючих одиниць). Таким чином, бажано досягати високий рівень, 8 наприклад, 10 КУО життєздатних клітин пробіотичних бактерій на грам кисломолочного продукту (наприклад, кисломолочного йогуртового продукту). СУТЬ ВИНАХОДУ Проблема, яку необхідно вирішити за допомогою даного винаходу, полягає в тому, щоб запропонувати спосіб для поліпшення росту популяції біфідобактерій у молоці під час процесу ферментації при виробництві кисломолочних продуктів (наприклад, йогурту) для того, щоб одержати велику кількість клітин біфідобактерій у готовому продукті. Рішення основане на несподіваному відкритті авторів даного винаходу, що визначені штами Lactococcus lactis у значній мірі поліпшують ріст біфідобактерій при ферментації молока. При використанні одного з даних штамів кисломолочний продукт, що виходить у результаті, містить 8 більше ніж 10 КУО/г біфідобактерій (безпосередньо після ферментації). Таким чином, немає необхідності додавати додаткові біфідобактерії після закінчення ферментації для того, щоб 8 одержати продукт, наприклад, з 10 КУО/г біфідобактерій. Автори винаходу перевірили ряд різних штамів Lactococcus lactis і знайшли, що штами, які позначаються як Lactococcus lactis CHCC3912 і CHCC4462 і депоновані як DSM21406 і DSM21408, відповідно, у значній мірі поліпшують ріст біфідобактерій під час ферментації молока. У дійсності, деякі інші штами Lactococcus lactis негативно впливають на ріст біфідобактерій. Крім того, автори винаходу відмітили, що штам Streptococcus thermophilus (CHCC7018) має унікальну властивість у тому сенсі, що штам також покращує ріст біфідобактерій. Таким чином, один з аспектів винаходу належить до способу готування кисломолочного 8 продукту, такого як продукт, що містить щонайменше 10 КУО біфідобактерій на грам кисломолочного продукту, де спосіб включає: i) інокуляцію молока культурою (такою як йогуртова культура), яка містить щонайменше один штам Lactococcus lactis, щонайменше один штам Streptococcus thermophilus, щонайменше один штам Bifidobacterium і, необов'язково щонайменше один штам Lactobacillus bulgaricus, де один із зазначених штамів Lactococcus lactis переважно вибраний із групи, яка складається з: штаму Lactococcus lactis CHCC3912 (DSM21406), мутанта CHCC3912 і варіанта CHCC3912; або CHCC4462 (DSM21407), мутанта CHCC4462 і варіанта CHCC4462; ii) ферментацію молока при придатних умовах; і iii) необов'язково, розміщення придатної кількості кисломолочного продукту в прийнятній упаковці. Варіант здійснення, що представляє інтерес, належить до способу готування 8 кисломолочного продукту, що містить щонайменше 10 КУО біфідобактерій на грам кисломолочного продукту, де спосіб включає: i) інокуляцію молока йогуртовою культурою, що містить щонайменше один штам Lactobacillus bulgaricus, щонайменше один штам Streptococcus thermophilus, щонайменше один штам Lactococcus lactis і щонайменше один штам Bifidobacterium, де один із зазначених штамів Lactococcus lactis являє собою один зі штамів Lactococcus lactis CHCC3912 (DSM21406) або CHCC4462 (DSM21407); ii) ферментацію молока при придатних умовах для того, щоб одержати кисломолочний 8 продукт щонайменше з 10 КУО біфідобактерій на грам ферментованого молока; і iii) розміщення придатної кількості кисломолочного продукту в прийнятній упаковці. Також винахід належить до штаму Streptococcus thermophilus CHCC7018 з номером доступу DSM21408 і його мутантів/варіантів і до культури (такої як заквашувальна культура), що містить штам за винаходом, необов'язково, разом з іншим штамом, таким як штам Bifidobacterium 5 12 (наприклад, BB-12®). Композиція, що представляє інтерес, містить і) від 10 до 10 КУО/г BB5 12 12® і ii) від 10 до 10 КУО/г CHCC7018. ДОКЛАДНИЙ ОПИС 1 UA 105186 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Даний винахід у першому аспекті належить до способу готування кисломолочного продукту, що включає: i) інокуляцію молока a) бактеріями, що належать до штаму Bifidobacterium і b) бактеріями, що належать до штаму, вибраному групи, яка складається з: штаму Lactococcus lactis, переважно, штаму, який підсилює ріст штаму Bifidobacterium, такого як штам CHCC4462 (DSM21407), CHCC3912 (DSM21406), штаму Streptococcus thermophilus, переважно, штаму, який підсилює ріст штаму Bifidobacterium, такого як CHCC7018, і мутанта або варіанта будь-якого з даних штамів; ii) ферментацію молока; iii) необов'язково, додавання додаткових мікроорганізмів і/або добавок до ферментованого молока; і iv) необов'язково, упаковку кисломолочного продукту. У переважному в даний момент варіанті здійснення, стадія i) додатково включає інокуляцію молока бактеріями, що належать до виду, вибраному з групи, яка складається з: Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis і Lactobacillus acidophilus. Варіант здійснення способу за винаходом являє собою спосіб, у якому стадія i) містить у собі інокуляцію молока культурою, що містить a) штам Bifidobacterium; b) штам Lactobacillus bulgaricus; c) штам Lactococcus lactis, вибраний із групи, яка складається з: CHCC4462, мутанта CHCC4462, варіанта CHCC4462, CHCC3912, мутанта CHCC3912 і варіанта CHCC3912; і/або штам Streptococcus thermophilus, вибраний із групи, яка складається з: CHCC7018, мутанта CHCC7018 і варіанта CHCC7018. Інший варіант здійснення належить до способу готування кисломолочного продукту, такого 8 як продукт, що містить щонайменше 10 КУО біфідобактерій на грам кисломолочного продукту, де спосіб містить у собі: i) інокуляцію молока культурою (такою як йогуртова культура), що містить щонайменше один штам Lactococcus lactis і щонайменше один штам Bifidobacterium і, необов'язково щонайменше один штам Streptococcus thermophilus і щонайменше один штам Lactobacillus bulgaricus, де один із зазначених штамів Lactococcus lactis вибраний із групи, яка складається зі: штаму Lactococcus lactis CHCC3912 з номером доступу DSM21406, мутанта CHCC3912 і варіанта CHCC3912 або CHCC4462 з номером доступу DSM21407, мутанта CHCC4462 і варіанта CHCC4462; ii) ферментацію молока при придатних умовах; і iii) необов'язково, розміщення придатної кількості кисломолочного продукту в прийнятній упаковці. Ще один варіант здійснення належить до способу готування кисломолочного продукту, що 8 містить щонайменше 10 КУО біфідобактерій на грам кисломолочного продукту, де спосіб включає: i) інокуляцію молока йогуртовою культурою, що містить щонайменше один штам Lactobacillus bulgaricus, щонайменше один штам Streptococcus thermophilus, щонайменше один штам Lactococcus lactis і щонайменше один штам Bifidobacterium, де один із зазначених штамів Lactococcus lactis являє собою штам Lactococcus lactis CHCC3912 з номером доступу DSM21406 або CHCC4462 з номером доступу DSM214077; ii) ферментацію молока при придатних умовах для одержання кисломолочного продукту 8 щонайменше з 10 КУО біфідобактерій на грам ферментованого молока; і iii) розміщення придатної кількості кисломолочного продукту в прийнятній упаковці. У варіанті здійснення спосіб за винаходом додатково включає інокуляцію молока додатковим штамом Streptococcus thermophilus, переважно штамом, покращуючим текстуру, таким як штам, вибраний із групи, яка складається з: ST-BODY-3 (Chr. Hansen A/S, Хоршолм, Данія) і ST8833 (DSM17876). Штам Bifidobacterium переважно належить до видів, вибраних із групи, яка складається з Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium asteroids, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum і Bifidobacterium pseudocatenulatum, і в даний момент переважно, щоб штам Bifidobacterium являв собою штам Bifidobacterium animalis підвиду lactis. Прикладами штамів є штами, вибрані з групи, яка складається з CHCC5445 (BB-12®) з номером доступу DSM15954, CHCC7158 (HN019, депозитарний номер DSM17280), штам Bifidobacterium, депонований як ATCC 27536, штам Bifidobacterium infantis Bbi99 (DSM 13692), BB-420, BI-04, 2 UA 105186 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CHCC2037, LAFTI B-94, DN 173010, STB-2938, R0071, R0175 і BB-46™ (DSM15955) і мутанти/варіанти будь-якого з даних штамів. У придатному варіанті здійснення одержуваний кисломолочний продукт містить 8 щонайменше 10 КУО біфідобактерій на грам кисломолочного продукту наприкінці ферментації 8 і/або кисломолочний продукт містить щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій через 28 днів зберігання при +6°C. Відповідно до важливого варіанта здійснення даного способу молоко на стадії i) інокулюють 5 7 4 6 за допомогою від 10 до 3×10 КУО/г Bifidobacterium і/або за допомогою від 10 до 3,5×10 КУО/г бактерій Streptococcus thermophilus або Lactococcus lactis. Молоко можна інокулювати бактеріальними видами одночасно. Це зручніше виконати, інокулюючи молоко заквашувальною культурою, що містить обидва бактеріальних види. У ще одному варіанті здійснення молоко додатково інокулюють щонайменше одним бактеріальним штамом, таким як штам Lactococcus lactis subs. lactis (наприклад, вибраним із групи, яка складається з Lactococcus lactis subs. lactis DN224; Lactococcus lactis subs. lactis DN223; і штаму або мутанта варіанта будь-якого з даних штамів). В даний момент переважно, щоб даний додатковий організм-помічник являв собою штам Lactococcus lactis subs. lactis, вибраний із групи, яка складається з Lactococcus lactis subs. lactis DN224, Lactococcus lactis subs. lactis DN223. Варто розуміти, що молоко можна інокулювати окремо/послідовно кожним бактеріальним видом, або одночасно двома або більше бактеріальними видами. В даний момент переважно, щоб молоко інокулювали всіма бактеріальними видами в той самий час. Це зручніше виконати, інокулюючи молоко заквашувальною культурою, що містить бактеріальні види. Продукт, одержуваний за допомогою даного способу за винаходом можна визначити як «йогурт», тобто, коли молоко інокулюють і штамом Lactobacillus bulgaricus і штамом Streptococcus thermophilus. Кисломолочний продукт (такий як йогурт) зручно розміщати в герметичній упаковці, що містить 10-5000 мл продукту, такій як від 25 до 3000 мл або від 50 до 1000 мл. Зразкові упаковки можуть містити 10-300 мл, 20-200 мл або 30-100 мл. В другому аспекті винахід належить до культури, що містить: a) бактерії, що належать до штаму Bifidobacterium, такому як CHCC5445 (BB-12®) і b) бактерії, що належать до штаму, вибраному з групи, яка складається з: штаму Lactococcus lactis, переважно, штаму, який підсилює ріст штаму Bifidobacterium, такого як CHCC4462, CHCC3912, і штаму Streptococcus thermophilus, переважно, штаму, який підсилює ріст штаму Bifidobacterium (такого як CHCC7018), або мутанта або варіанта будь-якого з даних штамів. 5 Винахід також належить до культури (такої як заквашувальна культура), що містить від 10 12 5 12 8 12 до 10 КУО/г BB-12® і від 10 до 10 КУО/г CHCC7018 і/або від 10 до 10 КУО/г Lactococcus 5 12 lactis CHCC3912 або CHCC4462. Культура може додатково містити від 10 до 10 КУО/г DN224 або DN223. Додатковий аспект даного винаходу належить до кисломолочного продукту, який одержується за допомогою способу за винаходом, особливо, до кисломолочного продукту, що містить штам Streptococcus thermophilus, вибраний із групи, яка складається з CHCC7018 (DSM21408); мутанта CHCC7018; і варіанта CHCC7018. В даний момент переважно, щоб 3 10 кисломолочний продукт за винаходом містив від 10 до 10 КУО/г штаму Streptococcus thermophilus. Винахід також належить до кисломолочного продукту, що містить бактерії, які належать до штаму, вибраному з групи, яка складається з: CHCC4462 і CHCC3912 і мутанта або варіанта 3 будь-якого з даних штамів. Кисломолочний продукт переважно містить 10 , переважно 5 щонайменше 10 , КУО/г бактеріального штаму. 3 10 Кисломолочний продукт за даним винаходом може додатково містити від 10 до 10 КУО/г 3 10 біфідобактерій і/або від 10 до 10 КУО/г штаму Lactococcus lactis (такого як CHCC3912, CHCC4462, DN224 або DN223). У переважному в даний момент варіанті здійснення 5 7 кисломолочний продукт містить щонайменше 10 , переважно щонайменше 10 , КУО/г 5 7 біфідобактерій і/або щонайменше 10 , переважно щонайменше 10 , КУО/г штаму Lactococcus lactis subs. lactis. У додатковому аспекті даний винахід належить до бактеріального штаму, вибраному з групи, яка складається з CHCC7018, мутанта CHCC7018, варіанта CHCC7018, CHCC4462, мутанта CHCC4462, варіанта CHCC4462, CHCC3912, мутанта CHCC3912 і варіанта CHCC3912. Переважним є штам мутант/варіант, який має одну або декілька (переважно, усі) властивостей первісного штаму, наприклад штам мутанта/варіанта здатний підсилювати ріст штаму 3 UA 105186 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Bifidobacterium (наприклад, BB-12®). Штам може являти собою ізольовану форму, наприклад, яка по суті не містить інші бактеріальні штами. У переважному варіанті здійснення Bifidobacterium є щонайменше однією Bifidobacterium, вибраною з групи, яка складається з Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium asteroids, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium catenulatum, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum і Bifidobacterium pseudocatenulatum. Також можна використовувати суміш, що містить два або більше з даних перерахованих штамів. У переважному варіанті здійснення способу штам Bifidobacterium являє собою штам Bifidobacterium animalis підвиду lactis. Особливо, де штам являє собою штам BB-12® (CHCC5445) Bifidobacterium animalis підвиду lactis, вміщений у банк під номером доступу DSM15954. Інший переважний штам Bifidobacterium animalis підвиду lactis являє собою штам HN019 (також відомий як DR-10™ або HOWARU™). Штам виділений з комерційно доступного продукту молочної дитячої суміші, за назвою Fernleaf DR-10 bifidus, що продавався в Тайвані протягом 2000 р. Він має номер доступу CHCC7158 у колекції культур Hansen і депонований у DSMZ під номером доступу DSM17280. Вимірювання кількості клітин біфідобактерій КУО/г виконують, розраховуючи кількість колонієутворюючих одиниць (КУО) у серійних розведеннях ферментованого продукту за допомогою підрахунку колоній на плашках з агаром, відповідно до стандартних способів у даній галузі. Прийнятне середовище й інкубація приведені нижче: Середовище: MRS (de Man et al. 1960. J. Appl. Bacteriol. 23: 130) без кислот + 1% диклоксацилін (SIGMA D-9016) + 1% цистеїн (MERCK № 2839); і Інкубація: 3 дні при 37°C в анаеробних умовах. Як обговорюється в даному документі використання CHCC3912 або CHCC4462 (і/або 8 CHCC7018) забезпечує можливість одержання більше ніж 10 КУО/г біфідобактерій 8 безпосередньо при рості біфідобактерій під час ферментації. Таким чином щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій на стадії ii) першого аспекту належить до КУО/г біфідобактерій, які одержуються безпосередньо після ферментації. Як показано в демонстраційних прикладах, Bifidobacterium BB-12® має гарну виживаність, коли ростуть разом зі штамом Lactococcus lactis CHCC3912 або CHCC4462 і/або штамом Streptococcus thermophilus CHCC7018. Таким чином, у переважному варіанті здійснення кисломолочний продукт містить 8 щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій після 1 дня зберігання при +6°C, більш переважно 8 щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій через 7 днів зберігання при +6°C, ще переважніше 8 щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій через 14 днів зберігання при +6°C, ще переважніше 8 щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій через 21 день зберігання при +6°C і найбільш переважно 8 щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій через 28 днів зберігання при +6°C. Фахівцям відомі прийнятні умови ферментації для ферментації молока за допомогою бактерій, які належать до даного документа. Прийнятними умовами, наприклад, є умови, де молоко інокулюють бактеріями і ферментують при від 38°C до 43°C при оптимальній величині 40°C, доти поки не досягнуть величини pН від 4,4 до 4,6 (орієнтовно через приблизно 8 годин). Охолодження молока до +6°C зупиняє ферментацію і ріст бактерій, які належать до даного винаходу, таких як біфідобактерії. У переважному варіанті здійснення описаний у даному документі поліпшений ріст 5 7 одержують, інокулюючи від 10 до 3×10 КУО/г Bifidobacterium; і інокулюючи одночасно штам Lactococcus lactis CHCC3912 або CHCC4462 і/або штам Streptococcus thermophilus CHCC7018 у 4 6 концентрації від 10 до 3,5×10 КУО/г. При бажанні, можна додати додаткові бактерії (наприклад, додаткову Bifidobacterium) у деякий цікавлячий момент часу (наприклад, після завершення ферментації). Як відомо фахівцю, усілякі різні кисломолочні продукти можна одержувати, ферментуючи молоко, і їх можна одержувати в рідкому або твердому вигляді. У переважному варіанті здійснення кисломолочний продукт являє собою продукт, вибраний із групи, яка складається з йогурту, питного йогурту, йогурту з порушеним згустком, натурального йогурту, що не перемішується, і подібного до йогурту напою, гіркого молока, кефіру, сметани, невизрівшого сиру і сиру. 8 Ферментоване молоко, яке містить щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій, як описано в даному документі, також можна використовувати як добавку до продуктів, наприклад, додавати 4 UA 105186 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 до інших придатних до вживання в їжу продуктів, таких як звурджений сир, шоколад, соки, м'ясні продукти і порошкоподібне сухе молоко для маленьких дітей. У даному контексті Lactobacillus bulgaricus може являти собою будь-який придатний (наприклад, комерційно доступний) штам Lactobacillus bulgaricus. Як відомо фахівцю, можна інокулювати придатні кількості для того, щоб одержати відповідну кількість Lactobacillus bulgaricus у готовому кисломолочному продукті. У способі за винаходом можна додавати інші бактерії, які представляють інтерес, такі як бактерія-помічник. Такі бактерії можна додавати під час або ферментації після того, як ферментування як таке закінчилося. Приклади таких додаткових бактерій містять у собі бактерію, вибрану з переліку, що складається з Lactococcus і Lactobacillus. Переважними Lactobacillus є штам Lactobacillus acidophilus LA-5® (комерційно доступний від Chr. Hansen A/S, Данія). Як описано в WO98/54337 (Chr. Hansen, виданий охоронний документ EP0985043 B1), молочнокислу бактерію-помічник, у якій порушений її метаболізм пірувату, можна додати під час ферментації для того, щоб одержати множину удосконалень, включаючи збільшення терміну зберігання бактерій. Штами DN224 (депонований як DSM 11037) і DN223 (депонований як DSM 11036), у яких порушений їх метаболізм пірувату, описані як приклади придатних бактеріальних організмів-помічників. Таким чином, у варіанті здійснення даного винаходу, молочнокислий бактеріальний організм-помічник, у якому порушений його метаболізм пірувату, також додають у молоко для того, щоб відбулося ферментування, як описано в даному документі. У переважному варіанті здійснення молочнокислий бактеріальний організм-помічник являє собою бактерію, вибрану з групи, яка складається зі штаму Lactococcus lactis підвиду lactis DN223, депонованого в колекцію під номером доступу DSM 11036 і штаму Lactococcus lactis підвиду lactis DN224 (депонованого під номером DSM 11037). Найбільш переважно, молочнокислий бактеріальний організм-помічник являє собою DN224. Варіант здійснення належить до композиції, такої як культура, що містить: 8 12 i) від 10 до 10 КУО/г BB-12® і 5 12 ii) від 10 до 10 КУО/г CHCC7018, 5 12 iii) від 10 до 10 КУО/г DN224. Депоновані мікроорганізми [ЕКСПЕРТНЕ РІШЕННЯ] Штами Lactococcus lactis CHCC3912, Lactococcus lactis CHCC4462, Lactococcus lactis CHCC2907 і штам Streptococcus thermophilus CHCC7018 минулого вміщені в DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen Gmb, Inhoffenstr. 7B, D-38124 Брауншвейг, Німеччина) під номерами доступу DSM21406, DSM21407, DSM21421 і DSM 21408, відповідно, з датою розміщення 23 квітня 2008 р. Депонування здійснили відповідно до Будапештського договору про міжнародне визнання депонування мікроорганізмів. Автор заявки вимагає, щоб депоновані мікроорганізми були б доступні тільки експертам, затвердженим автором заявки. ВИЗНАЧЕННЯ У контексті даного документа йогуртова заквашувальна культура являє собою бактеріальну культуру, що містить щонайменше один штам Lactobacillus bulgarlcus і щонайменше один штам Streptococcus thermophllus. Відповідно до цього йогурт являє собою кисломолочний продукт, який одержується при інокуляції і ферментації молока з використанням штаму Lactobacillus bulgaricus і штаму Streptococcus thermophilus. У контексті даного документа термін «молоко» містить у собі молоко ссавців або рослини. Прикладами молока є молоко корови (коров'яче молоко), верблюже молоко, буйволове молоко, козяче молоко, овече молоко і соєве молоко. Необов'язково, молоко підкислюють, наприклад, додаючи кислоту (таку як лимонну, оцтову або молочну кислоту), або змішують, наприклад, з водою. Молоко може бути сирим або обробленим, наприклад, фільтрацією, стерилізацією, пастеризацією, гомогенізацією і так далі, або його можна відновити із сухого молока. Важливий приклад «коров'ячого молока» за даним винаходом являє собою пастеризоване молоко корови. Зрозуміло, що молоко може бути підкисленим, змішаним або обробленим до, під час і/або після інокуляції бактеріями. У контексті даного документа термін «розміщення» (прийнятної кількості) ферментованого молока в прийнятній упаковці належить до кінцевого упакування ферментованого молока для одержання продукту, який можна вживати в їжу, наприклад, людиною або групою людей. Прийнятна упаковка може, таким чином, являти собою пляшку або тому подібне, і прийнятна кількість може складати, наприклад, від 10 мл до 5000 мл, але переважно в даний момент, що кількість в упаковці складає від 50 мл до 1000 мл. У контексті даного документа термін «мутант» варто розуміти як штам, отриманий зі штаму за винаходом (або використовуваного у винаході) за допомогою, наприклад, генетичної 5 UA 105186 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 інженерії, радіаційного опромінення і/або хімічної обробки. Переважно, що мутант являє собою функціонально еквівалентний мутант. Переважний мутант штаму за винаходом являє собою мутант, підсилюючого ріст клітин Bifidobacterium у молочному середовищі, наприклад, мутант, який має по суті такі ж або поліпшені властивості, що стимулюють ріст Bifidobacterium, як і батьківський штам. Такий мутант є частиною даного винаходу. Головним чином, термін «мутант» належить до штаму, отриманому при впливі на штам (такий як штам за винаходом) будь-якою загальноприйнятою процедурою, що викликає мутації, включаючи обробку хімічним мутагеном, таким як етанметансульфонат (EMS) або N-метил-N'-нітро-N-нітрогуанідин (NTG), УФ-випромінювання, або до мутанта, який спонтанно вийшов. Мутант може піддаватися впливу декількох обробок, що викликають мутації, (під одиничною процедурою варто розуміти одну стадію, що викликає мутацію, за якою йде стадія скринінгу/відбору), але в даний момент переважно, щоб проводилося не більше ніж 20, або не більше ніж 10, або не більше ніж 5 обробок. У переважного в даний момент мутанта менше ніж 5% або менш ніж 1% або навіть менше ніж 0,1% нуклеотидів у бактеріальному геномі замінений на інший нуклеотид або вилучений у порівнянні з батьківським штамом. У контексті даного документа термін «варіант» варто розуміти як штам, що функціонально еквівалентний батьківському штаму, такому як штам, підсилюючого ріст клітин Bifidobacterium у молочному середовищі. Варіант повинний належати до того самого виду, що і батьківський штам. Наприклад, варіант CHCC7018 варто розуміти як штам Streptococcus thermophilus, що функціонально еквівалентний CHCC7018, такий як штам, підсилюючого ріст клітин Bifidobacterium у молочному середовищі, наприклад, має такі ж або по суті такі ж або поліпшені властивості, що підсилюють ріст Bifidobacterium, як і батьківський штам, і варіант CHCC3912 варто розуміти як штам Lactococcus lactis, що функціонально еквівалентний CHCC3912, наприклад, має такі ж або по суті такі ж або поліпшені властивості, що підсилюють ріст Bifidobacterium, як і батьківський штам. Такі варіанти, які можна визначити, використовуючи відповідні методики скринінгу, є частиною даного винаходу. Використання термінів в однині і подібних символах у контексті опису винаходу (особливо, у контексті формули винаходу, яка йде нижче), варто розглядати, як охоплююче як однину, так і множину, якщо в даному документі не зазначено інакше або вони явно не суперечать контексту. Терміни «який включає», «який має», «який включає у себе» і «містить» необхідно розглядати як допускаючі зміни терміни (тобто, які означають «включаючи як необмежувальні приклади»), якщо не зазначено інакше. Перерахування діапазонів значень у даному документі призначене просто для того, щоб служити як спосіб умовної позначки, що індивідуально позначає кожне окреме значення, що потрапляє в діапазон, якщо в даному документі не зазначено інакше, і кожне окреме значення включене в опис, начебто воно індивідуально перераховане в даному документі. Усі способи, описувані в даному документі, можна здійснити в будь-якому придатному порядку, якщо в даному документі не зазначено інакше або іншим способом явно не суперечить контексту. Використання будь-якого і всіх прикладів, або типового формулювання (наприклад, «такий як»), запропонованих у даному документі, призначене просто для того, щоб краще пояснити винахід і не являє собою обмеження об’єму винаходу, якщо не заявлено інакше. Ніяку мову в описі не слід розглядати як указівку на який-небудь незаявлений елемент як важливий для практики винаходу. ПРИКЛАДИ ПРИКЛАД 1: Поліпшення росту BB-12®, використовуючи різні штами Lactococcus lactis Молочне середовище (9,5% відновлене сухе знежирене молоко, що нагрівається до 99°C протягом 30 сек.) інокулювали культурою 0,01% BB-12® F-DVS і культурою 0,01% Lactococcus 7 F-DVS, приводячи до одержання вихідної концентрації BB-12® 1×10 КУО. Після цього молоко ферментували протягом 16 год. при 40°C і зберігали при 8°C. Аналіз кількості клітин BB-12® проводили через, відповідно, 1, 14, 28 і 45 днів зберігання. 50 ТАБЛИЦЯ 1 Bifidobacterium штам: Lactococcus штам: BB-12® КУО Інокуляція BB-12® КУО день 1: BB-12® КУО день14: BB-12® КУО день 28: BB-12® КУО день 45: BB-12® Відсутній 7 1,010 5 2,010 4 5,710 4 2,010 4 1,010 BB-12® CHCC4462 7 1,010 8 3,010 9 1,510 8 1,210 8 1,310 6 BB-12® CHCC3912 7 1,010 9 1,310 9 1,210 8 6,910 8 7,910 BB-12® CHCC2907 (HB-3) 7 1,010 5 1,010 4 3,510 UA 105186 C2 5 ПРИКЛАД 2: Поліпшення росту BB-12®, використовуючи різні штами Streptococcus thermophilus Молочне середовище (9,5% відновлене сухе знежирене молоко, що нагрівається до 99°C протягом 30 сек.) інокулювали культурою F-DVS 0,01% BB-12® і культурою F-DVS 0,01% 7 Streptococcus thermophilus, приводячи до одержання вихідної концентрації BB-12® 1×10 КУО. Після цього молоко ферментували протягом 16 год. при 40°C і зберігали при 8°C. Аналіз кількості клітин BB-12® проводили через, відповідно, 1, 14, 28 і 45 днів зберігання. ТАБЛИЦЯ 2 Bifidobacterium штам: Streptococcus штам: BB-12® КУО інокуляція BB-12® КУО день 1: BB-12® КУО день14: BB-12® КУО день 28: BB-12® КУО день 45: 10 15 BB-12® Відсутній 7 1,010 5 2,010 4 5,710 4 2,010 4 1,010 BB-12® CHCC7018 7 1,010 7 4,710 7 8,510 7 8,110 7 4,810 BB-12® CHCC6592 7 1,010 7 1,410 7 1,310 6 5,510 6 5,410 BB-12® CHCC4895 7 1,010 6 8,110 6 1,310 ПРИКЛАД 3: Поліпшення росту BB-12®, використовуючи штами Streptococcus thermophilus і Lactococcus lactis Виробництво йогурту проводили відповідно до стандартної процедури одержання 3 літрів йогурту. Свіже молоко (жирність 0,5%), додане до 2% сухого знежиреного молока, 20 хв. піддавали термообробці при 92°C. Молоко охолоджували до 43°C, інокулювали культурою (0,016-0,023%, у залежності від культури) і ферментували до величини pН 4,55. Після цей йогурт перемішували, охолоджували до 25°C і зберігали при 5 градусах C. Результати: ТАБЛИЦЯ 3 Культура 74= нова культура з CHCC3912 68= нова культура з CHCC4462 68 застосовувана при низькій інокуляції ABY-10 BY-700 BB-12 * інокуляція КУО/мл BB-12® BB-12® ріст під BB-12® BB-12® КУО КУО/мл День час КУО/мл День день 42/ ** 1 ферментації 42 інокуляція 7 1,610 7 1,610 6 4,710 1,010 1,010 2,510 6 5,010 6 6,010 8 16 9,110 8 16 8,110 7 19 2,210 7 4,010 7 4,310 8 7 7 9,1 7 8,1 7 8,8 7 4,4 3,5 2,110 7 2,110 * Обчислено відповідно до технічних характеристик продукту ** Ріст під час ферментації обчислюють як КУО в 1 день/КУО інокуляції 20 25 30 Дані являють собою середні значення від 3 повторів виробництва йогурту в масштабі 3 л (68 «низька інокуляція» тільки 2 повтори) Культури порівняння ABY-10 і BY-700 (Chr. Hansen A/S, Хоршолм, Данія), що як відомо, є найкращими культурами здійснення відносно кількості клітин BB-12® у кисломолочному продукті. Склад культури: «68»: культура, що містить BB-12®, CHCC7018, Lactobacillus bulgaricus і CHCC4462 (Lactococcus lactis CHCC4462). «74»: культура, що містить BB-12®, CHCC7018, Lactobacillus bulgaricus і CHCC3912 (Lactococcus lactis CHCC3912). Висновок: CHCC7018, CHCC4462 і CHCC3912 поліпшують ріст Bifidobacterium BB-12® під час 8 ферментації щонайменше до 10 КУО/г у кисломолочних продуктах, як при використанні окремості, так і в комбінації. 7 UA 105186 C2 5 10 15 20 У даному документі описані переважні варіанти здійснення за даним винаходом, включаючи найкращий спосіб, відомий авторам винаходу для виконання винаходу. Зміни даних переважних варіантів здійснення можуть стати очевидними для фахівців у даній галузі при прочитанні попереднього опису. Автори винаходу очікують, що фахівці в даній галузі будуть при необхідності використовувати такі зміни й автори винаходу припускають, що винахід можна здійснити інакше, ніж певним чином описано в даному документі. Таким чином, даний винахід містить у собі всі модифікації й еквіваленти об'єкта, приведеного у формулі винаходу, прикладеної до даного документа, як дозволено діючим законом. Більше того, будь-яка комбінація описаних вище елементів у всіх їх можливих варіантах охоплені винаходом, якщо в даному документі не зазначено інакше або іншим способом явно не суперечать контексту. ПОСИЛАННЯ 1. EP111392B1 2. WO98/54337 (Chr. Hansen) 3. Saxelin M. et al.: The technology of probiotics. Trends in food science і technology, vol. 10, 1991, pages 387-392 4. Martin-Diana A. B. et al.: Development of a fermented gоаt's milk containing пробіотичні бактерії. Int. Dairy J., vol. 13, 2003, pages 827-833 5. US 4588595 A (Okonogi Shigeo (JP) et al) 6. US 2005/031735 Al (Serata Masaki (JP) et al) 7. US 4187321 A (Mada Mitsuo (JP) et al) 8. US 5230912 A (Yajima Masako (JP) et al) Усі посилання, приведені в даному патентному документі тим самим включені в даний документ у повному об’ємі як посилання. 25 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 30 35 40 45 50 55 1. Спосіб приготування кисломолочного продукту, який включає: і) інокуляцію молока a) бактеріями, що належать до штаму Вifidobacterium animalis subspecies lactis, і b) бактеріями, що належать до штаму, який підсилює ріст штаму Вifidobacterium animalis subspecies lactis, що вибраний із групи, яка складається зі штамів Lactococcus lactis СНСС4462 (DSM21407), СНСС3912 (DSM21406), штаму Streptococcus thermophilus СНСС7018 (DSM21408) і мутанта або варіанта будь-якого із цих штамів, який є функціональним еквівалентом батьківському штаму, і іі) ферментацію молока. 2. Спосіб за п. 1, який додатково включає додавання додаткових мікроорганізмів і/або добавок до ферментованого молока. 3. Спосіб за п. 1 або 2, який додатково включає упаковку кисломолочного продукту. 4. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-3, який додатково включає інокуляцію молока бактеріями, які належать до виду, що вибраний з групи, яка складається з Lactobacillus bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis і Lactobacillus acidophilus. 5. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-4, у якому стадія і) включає інокуляцію молока культурою, що містить a) штам Вifidobacterium animalis subspecies lactis, b) штам Lactobacillus bulgaricus, c) штам Lactococcus lactis, вибраний із групи, яка складається з СНСС4462 (DSM21407), СНСС3912 (DSM21406), і/або штам Streptococcus thermophilus СНСС7018 (DSM21408) і мутанта або варіанта будь-якого із цих штамів, який є функціональним еквівалентом батьківському штаму. 6. Спосіб за пунктом 5, у якому штам Вifidobacterium animalis subspecies lactis вибраний із групи, яка складається з СНСС5445 (ВВ-12®, DSM15954), СНСС7158 (DSM17280) і ВВ-46™ (DSM15955). 8 7. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-6, у якому кисломолочний продукт містить щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій через 28 днів зберігання при +6 °C. 8. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-7, у якому молоко на стадії і) інокулюють з використанням від 5 7 4 10 до 3×10 КУО/г Вifidobacterium animalis subspecies lactis і/або з використанням від 10 до 6 3,5×10 КУО/г бактерій Streptococcus thermophilus або Lactococcus lactis. 8 UA 105186 C2 5 10 15 20 9. Спосіб за будь-яким з пунктів 1-8, у якому кисломолочний продукт вміщують у герметичну упаковку, що містить від 10 мл до 5000 мл або від 25 мл до 3000 мл, або від 50 мл до 1000 мл продукту. 10. Кисломолочний продукт, одержуваний способом за будь-яким з пп. 1-9. 8 11. Кисломолочний продукт за п. 10, де продукт містить щонайменше 10 КУО/г біфідобактерій через 28 днів зберігання при +6 °C. 12. Кисломолочний продукт, що містить Вifidobacterium animalis subspecies lactis і бактерії, що належать до штаму, який підсилює ріст штаму Вifidobacterium animalis subspecies lactis, що вибраний із групи, яка складається зі штамів Lactococcus lactis СНСС4462 (DSM21407), СНСС3912 (DSM21406), штаму Streptococcus thermophilus СНСС7018 (DSM21408) і мутанта або варіанта будь-якого із цих штамів, який є функціональним еквівалентом батьківському штаму. 3 13. Кисломолочний продукт за будь-яким з пунктів 10-12, що містить 10 , переважно 5 щонайменше 10 , КУО/г штаму Streptococcus thermophilus. 14. Композиція, що містить: a) бактерії, що належать до штаму Вifidobacterium animalis subspecies lactis, і b) бактерії, що належать до штаму, який підсилює ріст штаму Вifidobacterium animalis subspecies lactis, що вибраний із групи, яка складається зі штамів Lactococcus lactis СНСС4462 (DSM21407), СНСС3912 (DSM21406), штаму Streptococcus thermophilus СНСС7018 (DSM21408) і мутанта або варіанта будь-якого із цих штамів, який є функціональним еквівалентом батьківському штаму. 15. Бактеріальний штам, вибраний із групи, яка складається зі штаму Streptococcus thermophilus СНСС7018 (DSM21408), штамів Lactococcus lactis СНСС4462 (DSM21407), СНСС3912 (DSM21406) і мутанта або варіанта будь-якого із цих штамів, який є функціональним еквівалентом батьківському штаму. 25 Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 9