Спосіб екстрагування ліпідних фракцій з матеріалу морських та прісноводних тварин (варіанти), екстракт ліпідів та ліпідна фракція

1. Спосіб екстрагування ліпідних фракцій з матеріалу морських та прісноводних тварин, який включає етапи: а) внесення матеріалу з морських та прісноводних тварин у кетонний розчинник, переважно ацетон, для досягнення екстрагування розчинної ліпідної фракції з матеріалу морських та прісноводних тварин; б) розділення рідкої та твердої речовини; в) виділення першої, багатої на ліпіди фракції, з рідкої речовини, одержаної на етапі (б) шляхом випаровування розчинника, наявного у ній; г) внесення згаданої твердої речовини в органічний розчинник, вибраний з групи органічних розчинників, яка включає спирти, бажано етанол, ізопропанол або трет-бутанол та складні ефіри оцтової кислоти, переважно етилацетат, для досягнення екстрагування розчинної ліпідної залишкової фракції з матеріалу морської та прісноводної тварини; д) розділення рідкої та твердої речовини; е) виділення другої, багатої на ліпіди фракції шляхом випаровування розчинника з рідкої речовини, одержаної на етапі (д); ж) виділення твердої речовини. 2. Спосіб за п. 1, в якому під час етапу (а) розчинник та тваринний матеріал гомогенізують. 3. Спосіб за п. 1, в якому під час етапу (г) розчинник та тверду речовину гомогенізують. 4. Спосіб за будь-яким з пп. 1 - 3, в якому етапи (б) та (г) проводять у атмосфері інертного газу. 2 (19) 1 3 75029 4 26. Екстракт ліпідів криля, який відрізняється в) виділення багатої на ліпіди фракції з рідкої речовини шляхом випаровування розчинника, наявтим, що вміст каротиноїду у астаксантині станоного у ній; вить принаймні 75 мкг/г і, переважно, принаймні 90 за рахунок чого одержують ліпідну фракцію, яка мкг/г екстракту криля, а вміст каротиноїду у кантамістить астаксантин і кантаксантин. ксантині становить принаймні 250 мкг/г і, переваж16. Спосіб екстрагування ліпідної фракції з матеріно, принаймні 270 мкг/г екстракту криля. алу морської та прісноводної тварини, вибраного з 27. Спосіб екстрагування ліпідів за будь-яким з пп. зоопланктону та побічних продуктів одержання 1-14, в якому тверду речовину етапу (б) та/або (д) рибного філе, бажано нутрощів, який включає етавиділяють, а одержана речовина складається з пи: дегідратованого залишку, що містить активні фера) внесення тваринного матеріалу у розчинну сументи. міш, яка включає ацетон та етанол, для досягнен28. Спосіб екстрагування ліпідів за будь-яким з пп. ня екстрагування розчинної ліпідної фракції з ма15-25, в якому тверду речовину етапу (б) виділятеріалу морської та прісноводної тварини; ють, а одержана речовина складається з дегідраб) розділення рідкої та твердої речовини; тованого залишку, що містить активні ферменти. в) виділення багатої на ліпіди фракції з рідкої ре29. Спосіб екстрагування ліпідних фракцій з матечовини шляхом випаровування розчинника, наявріалу морських та прісноводних тварин, який ного у ній; включає етапи: за рахунок чого одержують ліпідну фракцію. а) внесення матеріалу з морських та прісноводних 17. Спосіб за п. 15 або 16, в якому тваринним матварин у кетонний розчинник, переважно ацетон, теріалом є криль. для досягнення екстрагування розчинної ліпідної 18. Спосіб за п. 15 або 16, в якому тваринним мафракції з матеріалу морських та прісноводних тватеріалом є Calanus. рин; 19. Спосіб за будь-яким з пп. 15 - 18, в якому під б) розділення рідкої та твердої речовини; час етапу (а) матеріал з тварини гомогенізують. в) виділення першої, багатої на ліпіди фракції, з 20. Спосіб за будь-яким з пп. 15 - 19, в якому етапи рідкої речовини, одержаної на етапі (б) шляхом (б) та (г) проводять у атмосфері інертного газу. випаровування розчинника, наявного у ній; 21. Спосіб за будь-яким з пп. 15 - 20, в якому етап г) внесення твердої речовини в органічний розчин(б) проводять за одним з методів, вибраних з фіник, вибраний з групи органічних розчинників, яка льтрації, центрифугування та седиментації. включає спирти, бажано етанол, ізопропанол або 22. Спосіб за будь-яким з пп. 15 - 21, в якому етап трет-бутанол та складні ефіри оцтової кислоти, (в) проводять за одним з методів, вибраних з вибажано етилацетат для досягнення екстрагування паровування у вакуумі, одноразового випаровурозчинної ліпідної залишкової фракції, з матеріавання та розпилювального сушіння. лу морської та прісноводної тварини; 23. Спосіб за будь-яким з пп. 15 - 22, в якому після д) розділення рідкої та твердої речовини; етапу (б) та перед етапом (в) спосіб додатково е) виділення другої, багатої на ліпіди фракції шлявключає проміжний етап промивання твердої рехом випаровування розчинника з рідкої речовини, човини розчинником та додавання одержаного одержаної на етапі (д); промивного розчину до рідкої речовини етапу (б). за рахунок чого одержують ліпідні фракції. 24. Спосіб за будь-яким з пп. 15 - 23, в якому пе30. Спосіб екстрагування ліпідів за п. 29, в якому ред етапом (а) матеріал з морської та прісноводтверду речовину етапу (б) та/або (д) виділяють, а ної тварини подрібнюють до середнього розміру одержана речовина складається з дегідратованого частинок 5 мм або менше. залишку, що містить активні ферменти. 25. Спосіб за будь-яким з пп. 15 - 23, в якому етапи 31. Ліпідна фракція, одержана згідно з будь-яким з (а) та (б) проводять при температурі розчинника пунктів 1-25, 27 та 28-30. приблизно 5 °С або менше. Цей винахід стосується екстрагування ліпідних фракцій з морських та прісноводних тварин, таких як: криль, Calanus, риба та морські ссавці. Особливо винахід стосується удосконаленого способу екстрагування ліпідних фракцій за допомогою дегідратації розчинниками і відновлення твердого залишку, багатого на активні ферменти. Ліпідні фракції, одержані з таких морських та прісноводних тварин як: криль, Calanus, риба та морські ссавці мають різноманітні призначення: Медичне призначення Жири морських та прісноводних тварин та їх фракції містять різні терапевтичні агенти. Наприклад, відомо, що жири морських та прісноводних тварин мають протизапальні властивості. Також відомо, що жири морських та прісноводних тварин сприяють зменшенню випадків серцево-судинних захворювань. Деякі жири таких тварин також приглушують розвиток певних форм вовчака та ниркових захворювань. Криль можна використовувати як джерело ферментів для хірургічного оброблення виразок та ран, або для покращення травлення. Жири морських та прісноводних тварин також містять різні антиоксиданти, які можуть мати потенційні терапевтичні властивості. Нутрицевтичне призначення Беручи до уваги позитивний вплив омега-3жирних кислот, жири, екстраговані з криля, Calanus та риби, можна використовувати як добавки для дієти. Такі жирні кислоти є основними для 5 75029 6 належного розвитку мозку та очей. Жири морських ня з використанням хлороформу та метанолу. Цей та прісноводних тварин також мають великий спосіб є комерційно непридатним через токсичвміст жиророзчинних вітамінів A, D, Ε та каротиноність використовуваних розчинників. їдів. Проте, відомі способи або повністю комерційКосметичне призначення но непридатні, або дають низький кількісний вихід. Різні жири морських та прісноводних тварин Таким чином, метою цього винаходу є покращення використовують для отримання зволожувальних способу екстрагування жирів морських і прісновокремів. дних тварин, який дозволив би одержувати корисні Розведення риби ліпідні фракції та окремо виділяти корисний білок, Серед ліпідів, які містяться в крилі, Calanas та на який багатий твердий залишок, що містить акрибі, високу концентрацію мають жирні кислоти тивні ферменти. 20:5 (ейкозапентаєнова кислота) та 22:6 (декозаlнші цілі та подальший об'єм застосування дагексаєнова кислота). Такі жирні кислоти є суттєвиного винаходу стануть очевидними з детального ми поживними речовинами, корисними для годуопису, наведеного нижче. Проте, слід розуміти, що вання риби. Крім того, такі поживні речовини цей детальний опис, який вказує на переважні вапереносять в дієтичний раціон людини за рахунок ріанти реалізації винаходу, наданий лише для ілютого, що споживають рибу, яку вирощували на страції, оскільки у межах концепції винаходу різні такій дієті. зміни та модифікації стануть очевидними для фаКорм для тварин хівців. Дієтичний корм для тварин, багатий на омегаФіг.1. Газорідинна хроматографія жирних кис3-жирні кислоти, може підвищувати рівень ненасилот сухого криля (хлороформметанол). чених жирних кислот і зменшувати рівень холестеФіг.2. Газорідинна хроматографія жирних кисрину м'яса. Таку властивість кислот вже застосолот сухого криля (ацетон). вували у птахівництві з метою поліпшення якості Фіг.3. Газорідинна хроматографія жирних кисяєць. лот мороженого криля (ацетон). Відомі різні способи екстрагування жирів морФіг.4. Газорідинна хроматографія жирних кисських та прісноводних тварин. Наприклад, відомо, лот мороженого криля (етанол). що риб'ячий жир екстрагують за допомогою оргаФіг.5. Газорідинна хроматографія жирних киснічних розчинників, таких як гексан та етанол. Вілот мороженого криля (т-бутанол). домо також, що вміст жиру у м'язових тканинах Фіг.6. Газорідинна хроматографія жирних кисриби визначають за допомогою таких розчинників лот мороженого криля (етилацетат). як ацетон. Фіг.7. Тонкошарова хроматографія нейтральПатент США 4,331,695 описує спосіб викорисних ліпідів виду Calanus та M.norvegica. тання зріджених розчинників таких як: пропан, буФіг.8. Тонкошарова хроматографія нейтральтан, гексан, що мають газоподібний стан при кімних ліпідів виду Е.расifiса. натній температурі. Екстрагування проводять з Фіг.9. Тонкошарова хроматографія нейтральподрібнених рослин або дрібно розділених тваних ліпідів виду M.schmitti. ринних продуктів, при температурі бажано від 15 Фіг.10. Тонкошарова хроматографія нейтральдо 80°С. Далі, під високим тиском та при темпераних ліпідів виду G.graleus. турі від 50 до 200°С виділені жири осаджують. Фіг.11. Тонкошарова хроматографія нейтральПроте, гексан виявляється слабким розчинником них ліпідів морського ангела. для екстрагуванняя морських тварин типу криля. Фіг.12. Тонкошарова хроматографія фосфоліКрім того, застосування високої температури на підів виду Calanus та M.norvegica. етапі осідання негативно впливає на ліпіди. Фіг.13. Тонкошарова хроматографія фосфоліПатент Канади 2,115,571 описує спосіб видіпідів виду Е.расifiса. лення жирів з різних видів бурих та червоних воФіг.14. Тонкошарова хроматографія фосфолідоростей. Спосіб передбачає, наприклад, екстрапідів виду M.schmitti. цію Сокслет (Soxhlet) протягом 40 годин з Фіг.15. Тонкошарова хроматографія фосфолівикористанням майже чистого етанолу. підів виду G.galeus. Патент США 5,006,281 описує спосіб екстрагуФіг.16. Тонкошарова хроматографія фосфолівання жиру з таких морських та прісноводних твапідів морського ангела. рин, як риба. Спочатку морську і прісноводну тваФіг.17. Вплив об'єму ацетону на ліпідну екстрину обробляють антиоксидантною сполукою, далі ракцію (E.pacifica). розділяють та ценрифугують для того, щоб віддіФіг.18. Вплив інкубаційного періоду в ацетоні лити жирну фазу від водної та твердої. Потім за на ліпідну екстракцію (E.pacifica). допомогою антиоксиданта жирну фазу очищають Фіг.19. Вплив об'єму етанолу на ліпідну екствід небажаного запаху та смаку. ракцію (E.pacifica). Патент Канади 1,098,900 описує спосіб екстраФіг.20. Вплив інкубаційного періоду в етанолі гування жиру з криля. Спосіб включає емульгуванна ліпідну екстракцію (Т.raschii). ня свіжого або розмороженого криля у водному Перш ніж докладно описувати даний винахід, середовищі. Жирову фракцію виділяють центрислід зрозуміти, що в цій заявці він не обмежується фугуванням. деталями способу, описаними в ній. Винахід допу[Фольх (Folch) в статті, яка була опублікована скає інші варіанти та можливість застосування у 1957році, в J. biot. Chem. 226: 497-509 "A simple різними шляхами. Слід також зрозуміти, що фраmethod for fhe isolаtion аnd purifiсаtion of total lipids зеологія та термінологія, що використовуються from аnimal tissues"] пропонує спосіб екстрагувантут, вживаються з метою опису, а не обмеження. 7 75029 8 Спосіб відповідно до винаходу включає сушок не обов'язково промивають чистим ацетоном, спендування свіжозібраного матеріалу морських бажано об'ємом удвічі більшим від початкового та прісноводних тварин в ацетоні. Ліпіди екстрагуоб'єму матеріалу, щоб виділити ще більше ліпідів. ють за допомогою такого кетону як ацетон. Такий Об'єднані фільтрати випаровують під зниженим спосіб забезпечує швидку дегідратацію тканини тиском. Також не обов'язково застосовувати однотварини та переміщення ліпідної фракції до розразове випаровування або розпилювальне сушінчинника. Сухий залишок є цінним продуктом, баганя. Залишок води, одержаний внаслідок випаровутим на активні ферменти. вання, при низькій температурі залишають для У переважному варіанті екстрагування прововідокремлення від жирової фази (фракція l). дять послідовним обробленням ацетоном та спирТверду речовину, зібрану на фільтрі, суспентом. Перевагу віддають таким спиртам як ізопродують та екстрагують таким спиртом як етанол, панол і т-бутанол. Спирт також може бути ізопропанол, т-бутанол або, за бажанням, етилазамінений складним ефіром оцтової кислоти, тацетатом, бажано об'ємом удвічі більшим від почаким як етилацетат. Ця процедура веде до утвоткового об'єму матеріалу. Фільтрат випаровують, рення двох ліпідних фракцій та сухого залишку, залишаючи другу фракцію ліпідів (позначають як багатого на протеїн та активні ферменти. Виділенфракцію ll). ня всіх ліпідів може бути порівняно зі способом Хоча період екстрагування не є вирішальним, [Фольха та інш. (Foich) (1957)]. Такий спосіб вибуло виявлено, що при температурі нижчій ніж пробовували на крилі, Calanus, рибі та тканинах 5°С, достатньо приблизно 30 хвилин часу екстраакули. гування. Несподівано було виявлено, що екстрагування Температура органічних розчинників, за виняз послідовними етапами оброблення дає кращий тком т-бутанолу, і температура зразка не є вирівихід при екстрагуванні ліпідів, ніж екстрагування шальними параметрами, але бажано, щоб вона системою одного розчинника. Екстрагування з була найнижчою. Проте, у випадку т-бутанолу, послідовним використанням двох розчинників, який є твердим при кімнатній температурі, важлипочинаючи з такого кетона як ацетон, є особливо во перед використанням підігріти його та негайно корисним, оскільки ацетон, по суті, дегідратує ткапровести екстрагування при температурі 25°С. нину тварини. Перебування тканини тварини у Приклади для порівняння дегідратованому вигляді значно полегшує спосіб Щоб порівняти ефективність способу екстраекстрагування іншим розчинником, спиртом або гування, застосовували класичний спосіб з викотаким складним ефіром оцтової кислоти, як етиларистанням хлороформу та метанолу на крилі цетат. [Фольх та інші. 1957]. Цей спосіб пов'язаний з виУ випадку з таким зоопланктоном, як криль та значенням ефективності способу екстрагування. Calanus, а також у випадку з рибними нутрощами, Ще одне порівняння було зроблене за допомогою які є побічним продуктом приготування філе, було способу, де в якості розчинника для екстрагування помічено, що достатньо лише екстрагування ацевикористовують гексан. Відновлення ліпідів визнатоном, щоб отримати можливість прибуткового чали суспендуванням ліпідних фракцій в малих виділення ліпідних фракцій та окреме виділення об'ємах їх початкових розчинників та вимірювансухого твердого продукту, багатого на білок, вклюням гравіметрією малих аліквотних проб після вичаючи активні ферменти. паровування. Загальний спосіб екстрагування згідно з даним Для всіх наведених тут прикладів спосіб згідно винаходом буде описуватися далі. Вихідний матез даним винаходом, що включає екстрагування ріал, що складається із свіжозібраного та, бажано ацетоном та послідовне екстрагування другим тонко подрібненого, матеріалу з морських та прісрозчинником (наприклад етилацетатом), дає напіноводних тварин, екстрагують ацетоном протягом впрозорий жир, який має більш привабливі зовніприблизно двох годин і бажано протягом ночі. шній вигляд та властивості ніж жир, що був одерПроте, час екстрагування не є вирішальним факжаний класичним способом Фольха (1957). тором щодо виходу ліпідного екстракту. Щоб проаналізувати ліпідну композицію, Щоб полегшити екстрагування, бажано вико780мкг кожного екстракту завантажували на силіристовувати частинки діаметром меншим, ніж 5мм. кагелеві пластинки та фракціонували тонкошароЕкстрагування бажано проводити в інертній атмовою хроматографією ТШХ [Боєр (Воеуеr) та інші. сфері та при температурі близько 5°С або нижче. 1962] за допомогою таких розчинників. Нейтральні Початок екстрагування бажано проводити при ліпіди: гексан, етиловий ефір, оцтова кислота, збовтуванні протягом 10-40 хвилин, краще 20 хви(90:10:1 об./об.) та фосфоліпіди: хлороформ, мелин. Хоча час екстрагування не є вирішальним танол, вода (80:25:2 об./об.). Аналіз композиції фактором, було виявлено, що двогодинне екстражирної кислоти Е.Расifiса проводили газорідинною гування в об'ємному співвідношенні 6:1 ацетону і хроматографією, ГРХ [Боєр та інші. 1962], із внематеріалу морських та прісноводних тварин є найсенням деяких змін в початкову методику: 2 годикращим. ни при температурі 65°С замість 1 години при темСолюбілізовані ліпідні фракції відокремлюють пературі 80°С, три промивання гексаном замість від твердого матеріалу звичайним способом, який двох, та без промивання водою. включає, наприклад, фільтрацію, центрифугування Щоб позбавитись слідів органічних розчинниабо седиментацію. Бажано використовувати фільків, ліпідні фракції l та ll нагрівають до температутрацію. ри приблизно 125°С протягом приблизно 15 хвиПісля розділення на фільтрі, стійкому до оргалин в інертному середовищі. нічних розчинників (метал, скло або папір), залиЖир аналізували згідно American Oil Chemist's 9 75029 10 Society (AOCS). Для аналізу екстрагованих ліпідів Таблиця 3 показує вихід ліпідів з М.Norvegvca. спирались на наступні критерії: сапоніфікація, йоПроцентне співвідношення ліпідів (3,67%) можна дні числа Війса (Wijs iodine indexes) та рівні легкопорівняти з процентним співвідношенням, отрималетких речовин. Вміст холестерину також визнаним з Ε.расifiса (3,11%), приведеним у Таблиці 2. чали способом Пламмера (Plummer) 1987. Такі Коливання пов'язані з харчуванням або з часом самі та інші аналізи були проведені незалежною (порою року) збору, які є різними для цих двох вилабораторією під керівництвом професора Robert дів. Ackman (Canadian institute of Fisheries Technoiogy, Таблиця 4 показує вплив подрібнення на ефеDal Tech Dathousie University, Halifax, Nova Scotia, ктивність екстрагування ліпідів М.Norvegica. Такі Canada). Сюди входять: йодне число Війса, перокекстрагування проводили в оптимальних умовах, сидне та анізидинове числа, склад ліпідної фракщо показує певну перевагу цієї процедури над ції, композиція жирної кислоти, вільна жирна кискласичною (4,46% проти 3,30%). З таблиці також лота FAME, холестерин, токоферол, увесь видно, що подрібнення може бути важливим фактрансретинол, холекальциферол, астаксантин та тором у випадку, коли види виявляються дуже кантаксантин складові. великими (4,46% проти 3,53%). Таблиця 1 показує, що у порівнянні з класичТаблиця 5 свідчить про екстрагування ліпідів з ним способом Фольха (1957), більше ліпідів з сухоCalanus. Була одержана значна кількість ліпідів. го криля отримують шляхом екстрагування ацетоДеякі зміни у композиції виду Calanus можуть поном, а потім етанолом. яснити коливання між дослідами 1 та 2 (8,22% та Таблиця 2 показує результати екстрагування 10,90% ваги сирої тканини). ліпідів з замороженого криля з Тихого Океану, виТаблиці 6-8 свідчать про загальну кількість ліду Euphausia расifiса. Відбираючи 80% вмісту вопідів, екстрагованих з тканин риби. Спосіб згідно з ди, вміст ліпідів можна порівняти з сухим крилем, даним винаходом, був проведений на скумбрії, як це представлено у таблиці 1. Ізопропанол, тфорелі та оселедці. Спосіб застосовували на пебутанол та етилацетат в якості розчинників для риферійних тканинах (переважно м'язах) та нутдругого екстрагування, забезпечують не такий рощах. Переважно, даний спосіб дозволив би значний вихід, ніж етанол, але необов'язково отримувати корисні ліпідні фракції частин риби, менш ефективний у відновленні ліпідів, оскільки які, зазвичай, викидають після видалення її філейетанол несе більше домішок, ніж ізопропанол, тної частини. Тканини риби, які не використовуютьбутанол або етилацетат. Тому їх також можна вися після її оброблення для споживання, могли б користовувати в якості другого розчинника після зберігатися в ацетоні, а також з них можуть бути ацетону. Коливання між результатами екстрагуекстраговані ліпіди відповідно з даним винаходом, вання ацетоном зумовлені розподілом води і жиру. хоча спосіб Фольха [1957] дає змогу відновити На такий розподіл впливає кількість залишкового значно більше ліпідів, ніж заявлений спосіб. l дійсацетону у водяно-жировому розчині після того, як но, невелика кількість ліпідів скумбрії (0,52% з нутацетон випаровується. Ця кількість ацетону змінюрощів та 1,45% з тканин) була екстрагована споється від одного досліду до іншого тому, що сиссобом Фольха після першого екстрагування тема випаровування, яку застосовують у малому ацетоном та етанолом, як описано в даному винамасштабі, - менш репродуктивна (у промисловому ході. Порівняльні екстрагування, за допомогою масштабі етап випаровування буде оптимізовано). способу описаного в даному винаході, проводили Також випробовували прості розчинники з метою паралельно зі способом Фольга на форелі. Проте екстрагування загальної кількості ліпідів криля. З спосіб Фольха, застосований на оселедці, дає змоцього видно, що етилацетат (1,37% об'єму екстрагу одержати найвищий рівень відновлення ліпідів. гування), як і гексан (0,23% об'єму екстрагування), Проте слід зазначити, що спосіб Фольха не є поганими розчинниками, порівняно з ацетоном можна застосовувати для відновлення ліпідів у (1,86% об'єму екстрагування, і навіть більший комерційних цілях (через токсичність). об'єм, при ефективній системі випаровування ацеУ Таблицях 9-11 показано результати екстратону). гування ліпідів з тканин печінки акули. Значної Однією з головних переваг цієї процедури є відмінності у результатах між методиками в межах вилучення бактерій з екстрактів (ліпідна фракція виду не існує. та твердий, багатий на білок матеріал). Дійсно, Таблиця 13 показує риси характерні для фразразки Ε.Расifса, культивовані у різних співвіднокції І (ацетон) та фракції ІІ (спирт і аетилацетат) шеннях ацетону при температурі 4°С протягом 112 жиру криля (E.pacifica). По-перше, індекс сапоніфіднів, були інокульовані у середовище нуклеїнової кації фракції І (130,6) вказує на те, що ця фракція містить жирні кислоти з довшими ланцюжками на кислоти, що містить 0,3% Bacto телячої витяжки, відміну від фракції ІІ (185,7). Йодне число Війса 0,5% Bacto пептону та 1,5% Bacto агару (Difco фракції І вказує на те, що така фракція містить Laboratories, Detroit, USA), далі їх культивували високий рівень поліненасичених жирних кислот, на при кімнатній температурі, або при температурі відміну від оливкової олії, індекс якої 81,1. Це по4°С протягом 18 днів. При співвідношенні 1 об'єм яснює, чому фракція І є рідкою при кімнатній темацетону на 1 грам криля значного розвитку бактепературі. Добре відомо, що ненасичені жирні кисрій не спостерігали. При більш високих пропорціях лоти мають точку плавлення нижчу, ніж точка ацетону (2 та 5 об'ємів) росту бактерій не було плавлення їх насичених гомологів. Такі самі сповзагалі, що свідчить про те, що ацетон зберігає стереження були зроблені щодо фракції ІІ, йодне зразки криля. Ацетон відомий як ефективний бакчисло якої -127,2. Композиція жирної кислоти, потерицидний та противірусний агент (Гудмен казаної у Таблиці 14, підтримує ці йодні числа: (Goodman) та інш. 1980). 11 75029 12 фракція І має більший відсоток (30,24%) поліненаможна побачити високі пропорції 20:5 та 22:6 жирсичених жирних кислот (пентаєни + гексаєни) і так них кислот (характеристика жирів морських та прісамо фракція ІІ (22,98%). Нарешті, Таблиця 12 сноводних тварин), які показані у вигляді двох чіттакож показує, що фракція і містить 10,0% леткої ких піків. речовини та вологи після випаровування розчинКоливання у діаграмах нейтральних ліпідів від ника. Щодо фракції ІІ, то після такої процедури, одного виду до іншого (Фігури 7-11) зумовлені різвона має інший показник - 6,8%. Щоб позбавитися ницею у джерелах харчування. У межах виду слідів розчинника, слід підігріти (приблизно до (Е.Расifiс, наприклад) немає значної різниці між 125°С протягом 15 хвилин) жир під азотом. діаграмами ліпідів, одержаних різними способами Результати щодо жиру криля, які були одерекстрагування. Що стосується фосфоліпідів (Фігужані за способом згідно даного винаходу (фракція ри 12 -16), то тут можна спостерігати протилежну І екстрагована ацетоном та фракція ІІ екстраговакартину: коливання у даному випадку обумовлені на етилацетатом), показані у Таблицях 12, 13, 14, різними способами екстрагування ліпідів, оскільки 15, 16 та 17. Проте слід зазначити, що у Таблиці ті самі види не ведуть до однакової ліпідної діаг17 вміст каротиноїдів був досить високим, як покарами. Ліпіди, взяті з виду акул (екстраговані згадазали вимірювання для двох каротиноїдів, а саме, ним способом) та жиру печінки тріски, наявної у астаксантину та кантаксантину. Дійсно, подвійні продажу (зразки наявні у аптеках Uniprix, Province аналізи виявили від 92 до 124мкг/г ліпідної фракції of Québec, Canada), переважно складаються з для астаксантину, та від 262 до 734мкг/r ліпідної нейтральних ліпідів, протилежних фосфоліпідам. фракції для кантаксантину. Таким чином, стосовно На Фігурах 17 та 18 відповідно, показано вплив даного винаходу можна сказати, що екстракт криоб'єму розчинника та інкубаційного часу на ефекля містить астаксантину щонайменше 75мкг/г і тивність екстрагування ацетоном ліпідів Ε.Расifiс. переважно принаймні 90мкг/г ліпідної фракції. У Співвідношення 1:6 (ваг./об.) приводило до оптивипадку кантаксантину, щонайменше 250мкг/г і мального виходу при майже повному екстрагуванбажано щонайменше 270мкг/г ліпідної фракції. ні після двох годин. На другому етапі екстрагуванНизьке число пероксиду та анізидину є переважня було проведено експеримент з етанолом. Об'єм ним, що обумовлено наявністю високого рівня цього розчинника не є вирішальним фактором, звичайних антиоксидантів (астаксантину та кантаоскільки такий самий вихід одержували різними ксантину). Такі композиції вказують на позитивні об'ємами етанолу (Фігура 19), проте інкубаційний фармацевтичні та косметичні властивості екстракчас при використанні етанолу повинен становити ту криля, а високий рівень каротиноїдів вказує на не менше 30 хвилин, як вказують результати на чудові характеристики трансдермального перенеФігурі 20. сення. Таким чином, екстракт криля є хорошим Один з винахідників, Dr. Adrien Beaudoin, засобом для трансдермального перенесення меприймав різні ліпідні фракції криля. Побічної дії дикаментів. виявлено не було. Таблиця 18 показує найкращий спосіб екстраХоча вищезазначений винахід було описано, гування ліпідів з тканин морських та прісноводних дотримуючись особливої форми, фахівці зрозумітварин згідно даного винаходу. ють, що його можна змінювати та удосконалювати Таблиця 19 показує, що ферментативну актирізними шляхами. Тому краще усвідомити, що не вність твердої фракції підтримують завдяки спосослід обмежувати об'єм даного винаходу за винятбу відповідно до даного винаходу. Звичайно, ком термінів формули винаходу. вплив ферментативної активності твердого залишОтже, залишок криля, одержаний після екстраку криля, отриманого після послідовного екстрагугування ацетоном та етилацетатом, містить активвання ацетоном та етилацетатом, припинився. ний протеолітичний фермент. Протеолітичну актиПротеолітичну активність вимірювали вивільненвність вимірювали вивільненням аміногруп за ням аміногруп за допомогою спектрофотометричдопомогою спектрофотометричного аналізу та з ного аналізу та з використанням овикористанням о-фтальдіальдегіду в якості реагептальдіальдегіду в якості реагента. Концентрацію нта. Концентрацію білка визначали способом Бребілка визначали способом Бредфорда (Bradford). дфорда. Розчинні білки екстрагували водою та додавали до Джерелом ферменту був залишок, одержаний 10% концентрату лактосироваткового протеїну, після екстрагування ліпідів ацетоном та етилацеякий одержували ультрафільтрацією. Наприкінці татом. Розчинні білки екстрагували водою та доінкубації при температурі 37°С у 50мМ буферного давали до 10% концентрату лактосироваткового розчину фосфату калію додавали трихлорооцтову протеїну, який одержували ультрафільтрацією. кислоту і вміст NH3 - групи вимірювали у відстояНаприкінці інкубації при температурі 37°С до ному шарі рідини, згідно способу Черча (Church). 50мМ буферного розчину фосфату калію додава[1983, J Dairy Sсi 66: 1219-1227]. ли трихлорооцтову кислоту, а вміст NН3 - групи Фігури 1-6 показують хроматограми композиції вимірювали у відстояному шарі рідини, згідно спожирної кислоти ліпідів Ε.Расifiса. На кожній з них собу Черча та інш. 1983. 13 75029 14 Таблиця 1 Екстрагування ліпідів сухого криля (Ε.Расifiсa) № досліду 1 2 Спосіб ацетон а) етанол в) " 3 " 4 " 5 6 Bихід (%) 8,00 7,60 19,70 6,90 8,15 11,20 6,80 13,60 Загальний вихід (%) Значення (%) ± допустима похибка 15,60 26,60 19,35 20,40 20,49±3,95 хлор: МеОН с) 15,50 14,90 15,20±0,30 Визначення після трьох вимірювань (коливання