Спосіб одержання ферментного препарату з глутамінтрансферазною активністю

Спосіб одержання ферментного препарату з глутамінтрансферазною активністю, що включає культивування мікроорганізмів класу актиноміцетів на поживному середовищі, яке містить крохмаль, 3 24388 трансглутамінази. Умови біосинтезу ферменту були отримані шляхом оптимізації. Трансглутамінази являються ферментами, які каталізують реакцію ацільного переносу 7кapбoкciaмiднoй групи залишку глутаміну в пептидному ланцюгу. Трансглутамінази утворюють внутрішньомолекулярні чи міжмолекулярні 6-(gGlu)-Lys поперечні зв'язки, де б-аміногрупа залишку лізину в білку служить як рецептор ацильній групі. Якщо як рецептор ацильної групи служить вода, трансглутамінази каталізують дезамінірування залишків глутаміна з утворенням залишків глутаміновой кислоти. Продукти желірування, одержувані з використанням трансглутаміназ, застосовуються в якості йогуртів, желе, сирів, гелевих косметичних засобів і т.д., включаючи звичайні гелеві харчові продукти і гелеві косметичні засоби. Крім того, продукти желірування можуть бути отримані в нагрітому стані, вони є термостабільні і тому також можуть бути використані в широкому діапазоні, наприклад, як матеріали для мікрокапсул, носіїв для іммобілізації ферментів і т.д. Трансглутаміназу застосовують у люби х білкових системах для покращення фізичних властивостей харчових продуктів, а також в якості загусника та гелеутворювача. Додавання її до зернових продуктів дозволяє отримати високоякісні вироби навіть при використанні муки із зниженим вмістом клейковини. Також може використовуватись в якості присмаку, покращуючи смак і запах, а також збільшуючи строк зберігання готових блюд. Застосування трансглутамінази в м'ясній промисловості дозволяє отримувати вироби із заданою пружністю, соковитістю, а також отримувати реструкторизовані вироби. Також ефективне застосування цього ферменту в молочній промисловості та рибопереробній. Спосіб здійснюють наступним чином. Спочатку проводили культивування мікроорганізму Streptomyces mobaraensis на рідкому Комп’ютерна в ерстка Д. Шев ерун 4 поживному середовищі з таким складом: поліпептон, розчинний крохмаль, К2НРО4, MgSO4 та дріжджовий екстракт. Термін культивування - 2-4 доби, з постійним аеруванням при температурі 2535°С. Потім проводили центрифугування та фільтрування культуральної рідини. Це обумовлено тим, що при культивуванні на рідкому поживному середовищі трансглутаміназа, розчинена в культуральній рідини, є екзоферментом і може бути вилучена з фільтрату культуральної рідини шляхом відділення твердих компонентів. Для вимірювання активності мікробіологічної трансглутамінази проводили реакцію з використанням в якості субстратів бензилоксикарбоніл-Lглутамінилгліцину і гідроксиламіну. В результаті реакції отримали g-моногідроксамову кислоту Lглутамінової кислоти, яка в присутності трихлороцтової кислоти утворює пофарбовану комплексну сполуку з хлорним залізом. Потім вимірювали поглинання при Х = 525нм і визначали кількість гідроксамовой кислоти по каліброваній кривій для обчислення активності. Активність ферменту виражали в міжнародних одиницях активності. Одиниця активності - це кількість ферменту, який за одну хвилину утворює 1 мкмоль гидроксамової кислоти. Приклад. Streptomyces mobaraensis з ВКМ Ас-928 висівали на 50см 3 поживного середовища (рН = 7) з таким складом: поліпептон - 2,0%; розчинний крохмаль - 2,0%; K2HPO4 - 0,2%; MgSO4 - 0,1%; дріжджовий екстракт - 0,2%. Культивування проводили протягом 24 годин при 30°С. Отриману посівну культур у вносили в 500см 3 середи (рН=7) з таким же складом, з послідуючим культивуванням при 30°С протягом 3 діб. Після центрифугування протягом 15 хвилин при 6000 обертів на хвилину та фільтруванні отримали 462,5см 3 культурального розчину, активність дорівнювала 0,25 ед/см 3. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601