Спосіб виявлення личинок гельмінтів у м’язах тварин, прісноводної та морської риби

Спосіб виявлення личинок гельмінтів у м'язах тварин, прісноводної та морської риби, який включає відділення м'язової тканини, подрібнення маси 3 ШШС додають подрібнену масу м'язів досліджуваних тварин, витримують цю суміш протягом 5-7 годин при температурі 41-42°С. Після чого осад піддають дослідженню на наявність трихінел за допомогою диференціальної діагностики (Методические указания по лабораторной диагностики трихинеллеза животных, Утв. Департаментом ветеринарии РФ, № 13-7-2/1428 от 28.10.98 г.). Відомий спосіб ідентифікації личинкової стадії Trichinella spiralis в м'язовій тканині тварин за допомогою перетравлення м'язів у ШШС (UA, № 56973, кл. C12Q1/25, А61К39/00, від 15.05.2003, ТОВ "ЛОГО МЕД"). Спосіб включає виготовлення штучного шлункового соку (ШШС) шляхом змішування води, концентрованої соляної кислоти та пепсину, після чого додавання до ШШС подрібненої маси м'язів досліджуваної тварини, витримування цієї суміші, відділення осаду із суміші і дослідження його на наявність трихінел завдяки специфічному барвнику. Основними способами виявлення личинок гельмінтів, а саме анізакід, опісторхів та дифілоботрій в рибі є метод неповного паразитологічного дослідження, компресорна трихінелоскопія м'язів риби та метод перетравлення проб м'язів риби у шлунковому соці. Метод перетравлення ґрунтується на перетравленні подрібнених ножицями м'язів та інших досліджуваних частин риби у штучному шлунковому соці, який готують за прописом (11мл концентрованої соляної кислоти, 7г пепсина, 9г хлориду натрію на 1л води). Перетравлення проводять протягом 3 годин в термостаті при +37°С з періодичним перемішуванням або 1,5-2 год на магнітній мішалці з підігрівом. Осад після перетравлення досліджують на наявність личинок тих чи інших видів гельмінтів. Недоліком цього способу є те, що він потребує складної диференціальної діагностики. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу виявлення личинок гельмінтів у м'язах тварин, прісноводної та морської риби, який включає відділення м'язової тканини, подрібнення маси м'язів, виготовлення штучного шлункового соку (ШШС) шляхом змішування води відповідної кількості та сухої суміші, з оптимально підібраних кількостей пепсину та модифікатора без додавання кислотних розчинів, внесення до ШШС подрібненої маси м'язів досліджуваних тварини, прісноводної та морської риби, витримування цієї суміші, відділення осаду із суміші і дослідження його на наявність личинок гельмінтів. Поставлена задача вирішується наступним чином, відповідно до корисної моделі, виготовлення ШШС проводять шляхом додавання до води відповідного об'єму (0,01-10,0л) з температурою +42±2°С сухого порошку (суміш) відповідної кількості. Суміш в якості основного компоненту містить пепсин з активністю не нижче 1:1000 у кількості відповідно 0,01-100,0г та модифікатор. Дослідження відібраних проб проводять індивідуально від кожної туші тварини, прісноводної та морської риби, чи груповим методом, об'єднуючи зразки проб від кількох туш тварин, прісноводної та морської риби, змішують подрібнену масу (фарш) м'язів 53472 4 досліджуваних тварин, риби з ШШС і витримують 30 хвилин при температурі +42±2°С на магнітній мішалці з підігрівом. Після чого осад збирають і проводять мікроскопічні дослідження на наявність личинок гельмінтів. Заявлений спосіб реалізується наступним чином. Для проведення дослідження на трихінельоз від туш свиней відбирають проби м'язів діафрагми на місці переходу їх у сухожилля, від туш коней м'язів кореня язика та жувальних м'язів. Від промислових тварин відбирають зразки м'язів за такими вимогами: від кабанів - передпліччя або діафрагми; від ведмедів - м'язову частину діафрагми, масетери або язик; від моржів - язик або від борсуків - м'язи ніжок діафрагми. Маса проби м'язів від кожної туші свиней повинна бути не менше 5г, від туші коней та промислових тварин - не менше 10г. Якщо рекомендовані м'язи відсутні, відбирають альтернативні м'язи (м'язову реберну частину діафрагми, м'язи стравоходу, міжреберні, шийні) в кількості 10-20г від туші. Перед дослідженням відібраних проб, шматочки м'язів звільняють від жиру, фасцій, крові і готують фарш на м'ясорубці з діаметром вічок решітки 2-3мм, перекручуючи двічі. Дослідження відібраних проб проводять індивідуально від кожної туші або груповим методом, об'єднуючи зразки проб від кількох туш. Для проведення дослідження риби на гельмінтоз (анізакідоз, опісторхоз та дифілоботріоз) відбирають м'язову тканину з підшкірною жировою клітковиною, яку відділяють від кісток і подрібнюють ножицями або ножем. Відбір проб риби, та продуктів їх переробки проводиться згідно чинних нормативних документів. ШШС готують безпосередньо перед дослідженням. Для цього беруть хімічний стакан з плоским дном об'ємом 0,2-2,0л додають водопровідну воду, підігріту до температури +42±2°С, при перемішуванні висипають суміш з пепсину та допоміжних речовин. У виготовлений ШШС додають фарш м'язів тварин чи риби із розрахунку на 1л штучного шлункового соку 50г фаршу із свіжого та 25г фаршу із мороженого м'яса. Склянку з сумішшю ставлять на магнітну мішалку з підігрівом. Перетравлення проводять при температурі +42±2°С з експозицією 30 хвилин. Закінчення перетравлення визначається візуально, від фаршу повинен залишитися легкий осад бурого кольору. Для виявлення личинок трихінел після закінчення перетравлення, одержаний перевар проціджують через сито з розміром вічок 300-400мкм у розподільчу воронку з краником. Перевар у лійці відстоюють 30 хвилин для осаду личинок, зливають через краник 40мл осаду у мірний стакан який знову відстоюють 15 хвилин. Потім 30мл надосадової рідини обережно зливають, або відбирають піпеткою, а осад виливають у бактеріологічну чашку і досліджують під малим збільшенням мікроскопу (8×10). В позитивних пробах знаходять декапсульовані личинки трихінел. Для виявлення личинок анізакід та дифілоботрій після перетравлення проб суміш відстоюють 5 53472 протягом 15-20хв, надосадкову рідину зливають або відсмоктують гумовою грушею. Для кращого виявлення личинок проби промивають 2-3 рази водою, яку після відстоювання зливають, а осад виливають у бактеріологічну чашку і досліджують під лупою. В позитивних пробах виявляють рухливих личинок гельмінтів, які звільнені від цист. Личинки анізакід мають спіралеподібну, кільцеподібну чи веретеноподібну форму білого, жовтого чи червонувато-коричневого кольору, досягають у довжину до 40мм при товщині тіла 0,40,9мм. Плероцеркоїди дифілоботрій мають вид стерженька черв'якоподібної форми, молочного або білого кольору, помітні неозброєним оком. Головний кінець широкий, хвостовий - тонший. Довжина личинок від декількох міліметрів до 1-2,5см, ширина - до 2-3мм. Під малим збільшенням мікроскопу на головному кінці помітно дві присмоктувальні Комп’ютерна верстка А. Крулевський 6 щілини (ботрії). Для виявлення метацеркаріїв опісторхів після перетравлення проб м'язів одержаний перевар проціджують через сито з розміром вічок 1×1мм та відстоюють 15-20хв. Після відстоювання надосадкову рідину зливають, а осад виливають у бактеріологічну чашку і досліджують під лупою або малим збільшенням мікроскопу. В позитивних пробах виявляють рухливих метацеркаріїв, які звільнені від цист. Метацеркарії опісторхів мають вкрите дрібними шипиками веретеноподібне тіло сірого кольору з добре помітними ротовим і черевним присосками, а в задній частині личинки - великим темним екскреторним міхуром. Розміри личинок 0,200,63×0,12-0,27мм. Пропонований спосіб дозволяє виявити гельмінтози з великою точністю. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601