Спосіб визначення немолочного жиру в молочній продукції з низьким вмістом жиру

1. Спосіб визначення немолочного жиру в молочній продукції з низьким вмістом жиру, що включає зважування наважки аналізованого продукту, омилювання відібраної проби, вилучення неоми 3 94223 інш.) цим способом не можливо. Недоліком даного способу є також необхідність використання великої кількості хімічних реактивів. Задачею винаходу, що пропонується, є розробка способу визначення немолочного жиру в молочній продукції з низьким вмістом жиру (менш 50%). Поставлена задача вирішується тим, що в спосіб хроматографічної ідентифікації молочної продукції з низьким вмістом жиру, який включає зважування наважки аналізуємого продукту, омилювання відібраної проби, вилучення неомильних речовин та відокремлювання стеринів від інших неомильних речовин за допомогою тонкошарової хроматографії, визначення розділених стеринів методом газової хроматографії, вводять додаткову стадію концентрування жиру екстракцією водномолочно-спиртової емульсії гексаново-ефірною сумішшю в співвідношенні 1:1. Крім того на стадії тонкошарової хроматографії розділення використовують розчинники хлороформ - етилацетат у співвідношенні 95:5об%. Кількість зразка, який наносять на тонкошарову пластинку складає від 0,07 мг до 0,15 мг неомильних речовин, що еквівалентно 0,7-1,5 г зразка масложирової продукції. Суть винаходу пояснюється хроматограмами складу стеринової фракції. На фіг. 1 показана хроматограма складу стеринової фракції фальсифікату морозива, на фіг. 2 - хроматограма нефальсифікованого морозива. Приклад Наважка досліджуваного продукту розраховується таким чином, щоб кількість жиру, що концентрується, з неї становило не менш 2,5 г. Зважують наважку продукту, виділяють жирову фазу таким чином: наважку продукту поміщають у конічну колбу на 250 мл, додають дистильовану воду, об'ємом в 2 рази більшим за масу наважки й етиловий спирт, об'ємом в 2 рази меншим наважки проби. Дану суміш нагрівають до температури 40°С перемішують, додають 25 мл диетилового ефіру, закривають колбу скляною кришкою й інтенсивно струшують протягом 1 хв. Потім доливають 25 мл гексану, поміщають в апарат для струшування на 20 хв. Верхній гексаново-ефірний шар зливають у ділильну лійку, а водно-молочну емульсію екстрагують ще двічі тією ж гексаново-ефірною сумішшю, зливаючи верхній шар у ту ж ділильну лійку. Вод 4 но-молочну емульсію кількісно переносять у центрифужні пробірки й центрифугують протягом 20 хв при 5000 об/хв, потім зливають верхній шар у ділильну лійку з гексаново-ефірною сумішшю. У суху конічну колбу на 250 мл, попередньо зважену, виливають шар гексану й ефіру з ділильної лійки й випарюють цю суміш на роторному випарнику при температурі не вище 60°С до повного видалення розчинника. Колбу з жиром зважують. Потім проводять лужний гідроліз отриманої жирової фракції з наступним екстрагуванням неполярним розчинником, виділенням стериновой фракції з неомильних речовин методом тонкошарової хроматографії. Аналізування розділених стеринів проводиться методом газової хроматографії з розділенням на насадних або капілярних колонках в ізотермічному режимі з полум'яно-іонізаційним детектуванням. Ідентифікація здійснюється за часом утримання стеринів у стандартних хроматографічних умовах. Наявність на хроматограмі піка бета-ситостерина говорить про присутність рослинних жирів у продукції. Інші фітостерини додатково підтверджують наявність жирів немолочного походження. Визначення стеринової фракції проводять на газо-рідинному хроматографі, наприклад, "МОД 3700" (Росія). Колонка насадкова OV-101 (Інтертон AW + 5% поліметилсилоксанового каучука, розмір колонки 120 х 3 мм. Температури інжектора 270°С, детектора - 300°С, термостата колонки 240°С (ізотермічний режим). Газ носій - азот, тиск на вході в інжектор 0,034 МПа. При очищенні зразка на пластинках для тонкошарової хроматографії Сорбфил (ПТСХ-АФ-ВУФ) оптимальною є рухлива фаза (РФ) гексанетилацетат (від 65:35 до 60:40 об'ємних %), а також хлороформ-етилацетат (95:5 об%). При використанні РФ з іншим співвідношенням на пластинках неможливо отримати чітке відділення стеринів від метилстеринів, як наслідок отримані результати будуть не достовірні, крім того кількість наносимого зразка на тонкошарову пластинку не повинна перевищувати 0,1 мг неомильних речовин, що еквівалентно 1 г зразка молочної продукції. Нанесення зразків у вигляді окремих крапок також сприяє покращенню результатів розподілу. Типову хроматограму фальсифікату морозива показано на фіг. 1, нефальсифікований продукт має на хроматограмі тільки пік холестерину (фіг. 2) Таблиця 1 Результати розрахунків стеринової фракції морозива Час виходу стеринів, хв 15.26 17.78 19.55 21.03 24.12 Висота, мВ 88,28 4,46 8,63 9,89 32,13 Площа, мВ сек 6357,35 361,15 716,71 965,54 4661,22 Якщо на хроматограмі спостерігають піки з часом утримання, характерним для бетаситостерину, і їхня висота становить більше ніж Концент., мкг/мл 1272 72,22 143,32 193,10 76,44 Назва стеринів Холестерин Брасикастерин Кампастерин Стигмастерин Бета-ситостерин 2% повної шкали, то це підтверджує наявність бета-ситостерину в досліджуваній пробі, тобто підтверджує наявність рослинного жиру в досліджува 5 94223 ному продукті. Наявність на хроматограмі піків інших фітостеринів, а саме кампастерину або сти 6 гмастерину підтверджує цей висновок. Таблиця 2 Приклади використання запропонованого способу з наважками зразка, які наносять на тонкошарову пластину, різними за масою № п/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Маса наважки, г 0,1 0,3 0,5 0,7 0,9 1,1 1,3 1,5 1,7 1,9 2,1 2,3 Вихід, % 66 75 96 99 100 100 100 99 85 74 68 65 Таблиця 3 Приклади використання запропонованого способу № п/п Продукт 1 2 3 4 5 6 Масло вершкове Спред Морозиво Сирки Вершки Молоко Ідентифікація по пікам -ситостерину, брасика-стерину, кампастерину, стигмастерину Запропонований Прототип + + + + + + + + Позитивний ефект запропонованого способу полягає в тому, що: 1) Можливо виявлення фальсифікації молочної продукції з низьким вмістом жиру, шляхом введення прискореної стадії пробопідготовки з концентрування жирової фази продукту; 2) аналіз проводимо з найменшими затратами реактивів та скорочено його тривалість. Джерела інформації: 1. Патент Росії RU 2279071 С2, G01N 33/03, 1 2006. 2. Патент України UA 67 470 С2, G01N 33/03, 1 2007. 3. ГОСТ Р 51471-99 «Жир молочный. Метод обнаружения растительных жиров газожидкостной хроматографией стеринов» 4. ДСТУ ISO 18609-2004 "Жири тваринні й рослинні та олії. Метод визначення вмісту неомильних речовин з використанням екстрагування гексаном" 5. ДСТУ ISO 6799-2002 "Жири та олії тваринні й рослинні. Визначення складу стеринової фракції. Газохроматографічний метод". 7 Комп’ютерна верстка А. Крулевський 94223 8 Підписне Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601