Штам молочнокислих бактерій streptococcus thermophilus, що забезпечує поліпшену текстуру ферментованих продуктів

1. Штам молочнокислих бактерій Streptococcus thermophilus (ST) з реєстраційним номером DSM 17876 або її мутантний штам, отриманий з використанням депонованого штаму як C2 2 (19) 1 3 продукції, де проблему являє шкідливий вплив бактерійних вірусів. Як можна бачити в наведених нижче робочих прикладах, описуваний тут новий штам Streptococcus thermophilus (ST) з реєстраційним номером DSM 17876 (який тут також називається СНСС8833) дає поліпшену текстуру (що вимірюється як напруження зсуву) в порівнянні з наявними в продажу відповідними штамами ST, які вважаються штамами з високою текстуруючою здатністю і в цей час використовуються в молочній промисловості. Описуваний тут новий штам DSM 17876 ST не включає специфічних конкретних epsгенів, описаних в заявці WO2004/085607 A2 (Rhodia Chimie) (що визначаються PCR-аналізом (ПЛР, полімеразно-ланцюгова реакція) - дані не наведені). Далі, як ілюстровано в прикладі 2, штам Streptococcus thermophilus CHCC8833 має перевагу в тому, що він стійкий до великого числа бактерійних вірусів, які присутні в молочних продуктах. Відповідно цьому, перший аспект винаходу стосується молочнокислої бактерії Streptococcus thermophilus (ST) з реєстраційним номером DSM 17876 або її мутанта, в якої мутантний штам виходить з використанням депонованого штаму як початкового матеріалу, і в якій мутант зберігає або ще більш поліпшує текстуруючі властивості штаму DSM 17876. Другий аспект винаходу стосується заквашувальної композиції, що включає бактерію першого аспекту. Третій аспект винаходу стосується способу отримання продовольства або харчового продукту, що включає додання заквашувальної композиції згідно з другим аспектом до початкового матеріалу харчового або кормового продукту і витримування, таким чином, заквашеного початкового матеріалу в умовах, при яких бактерія є метаболічно активною. Варіант виконання даного винаходу описаний нижче тільки як приклад. На ілюстрації: Фіг.1: Результат, що показує поліпшену текстуру (Напруження зсуву) молока, ферментованого новим ST-штамом, в порівнянні з тими, що є в продажу ST-штамами, які розглядаються як штами з високою текстуруючою здатністю. Штами описані в прикладі 2. Текстура кількісно оцінюється шляхом визначення напруження зсуву, виміряного в Паскалях [Па] з використанням реометра, як описано в прикладі 1. Стовпчик зображає 1×S.E. (стандартне відхилення). Новий штам Streptococcus thermophilus Зразок нового штаму Streptococcus thermophilus (ST) CHCC8833 був депонований в DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH - «ТОВ Німецька Колекція Мікроорганізмів і Клітинних Культур») під інвентарним номером DSM 17876 з датою депонування 11 січня 2006 року. Депонування було проведене згідно з умовами Будапештського договору про Міжнародне Визнання Депонування Мікроорганізмів для Цілей Патентної Процедури. Перший аспект винаходу стосується описаного тут нового штаму або його мутанту. 93542 4 Фахівцеві буде зрозуміло, що шляхом застосування депонованого штаму як початкового матеріалу кваліфікований читач може звичайним порядком за допомогою загальноприйнятих методик мутагенезу або технології повторного виділення отримати подальші мутанти або їх похідні, які зберігають тут відповідні описувані ознаки і переваги. Відповідно цьому, термін «його мутант» в першому аспекті стосується мутантних штамів, отриманих з використанням депонованого штаму як початкового матеріалу. Оскільки молоко і умови в молочних господарствах, загалом, є нестерильними, бактеріофаги являють собою серйозну загрозу у виробництві молочних продуктів. Бактерійні віруси заражають молочнокислі бактерії і вибухоподібно розмножуються, приводячи до загибелі клітин і, як наслідок, до недостатнього скисання і збою у виробництві. Особливо, в сучасній молочній промисловості, яка застосовує дуже великомасштабні ємності, зараження бактерійними вірусами пов'язане з дуже істотними грошовими втратами. Таким чином, промисловість постійно намагається розробити нові культури, стійкі до бактерійних вірусів. Як ілюстровано в прикладі 1 і 2, штам Streptococcus thermophilus CHCC8833 (DSM 17876) не тільки забезпечує несподівано високу текстуру, але і несподівано СНСС8833, на відміну від інших штамів з високою текстуруючою здатністю, був стійким до всіх перевірених бактерійних вірусів. Бактерійна культура для отримання кисломолочних продуктів, що містить молочнокислу бактерію (LAB), як та, що описується тут. Молочнокисла бактерія (LAB), як та, що описується тут, придатна як бактерійна культура для отримання кисломолочних продуктів у виробництві продовольства або харчових продуктів. Типово, така композиція бактерійної культури для отримання кисломолочних продуктів включає бактерії в концентрованому вигляді, в тому числі заморожені, висушені або ліофілізовані концентрати, що звичайно мають концентрацію життєздатних клітин, яка варіюється в діапазоні від 104 до 1012 cfu (КУЕ, колонієутворюючих одиниць) на грам композиції, що включає, щонайменше, 104 КУЕ на грам композиції, такої як, щонайменше, 105 КУЕ/г, наприклад, щонайменше, 106 КУЕ/г, такої як, щонайменше, 107 КУЕ/г, наприклад, щонайменше, 108 КУЕ/г, такої як, щонайменше, 109 КУЕ/г, наприклад, щонайменше, 1010 КУЕ/г, такої як, щонайменше, 1011 КУЕ/м. Композиція може містити як подальші компоненти кріопротектори і/або загальновживані добавки, в тому числі поживні речовини, такі як дріжджові екстракти, цукор і вітаміни. Оскільки у виробничому застосуванні ферментативних процесів за допомогою молочнокислих бактерій є нормальним вживання змішаних культур молочнокислих бактерій, в деяких варіантах здійснення композиція включає множину штамів або, що належать до одного виду, або, що належать до різних видів. Типовий приклад такої застосовної комбінації молочнокислих бактерій в заквашувальній композиції являє собою суміш виду Leuconostoc і одного або більше підвидів 5 Lactococcus, такі як Lactococcus lactis підвид lactis, Lactococcus lactis підвид cremoris або Lactococcus lactis підвид lactis biovar. diacetylactis. Спосіб приготування продовольства або харчового продукту Як викладено вище, аспект винаходу стосується способу приготування продовольства або харчового продукту, що включає додання заквашувальної композиції, як описаної тут, до початкового матеріалу харчового або кормового продукту і витримування, таким чином, заквашеного початкового матеріалу в умовах, в яких молочнокисла бактерія є метаболічно активною. Застосовні для харчових продуктів початкові матеріали включають будь-який матеріал, який загальноприйнятим чином зазнає впливу молочнокислих бактерій в стадії ферментації, такій як молоко, рослинні матеріали, м'ясні продукти, фруктові соки, виноградне сусло, тісто і збите рідке тісто. Ферментовані продукти, які виходять згідно з способом, включають, як типові приклади, молочні продукти, такі як ферментоване молоко, йогурт, сир, в тому числі молоді сири з м'якою вершковою текстурою або моцарела, і сколотини. Для подальших прикладів і подробиць відносно описуваних тут ферментованих харчових продуктів наводиться посилання на оглядову статтю авторів Broadbent et al. (J. dairy Sci., тому 86: cтop. 407-423), де відповідні ферментовані харчові продукти описані в розділах з назвами «Застосування в Йогурті і Ферментованих Молочних Продуктах» і «Застосування в Сирі Моцарела». У подальших варіантах здійснення матеріал субстрату являє собою початковий матеріал для тваринного корму, такого як силос, наприклад, трава, зерновий матеріал, горох, люцерна або бадилля цукрового буряка, де бактерійними культурами заквашуються кормові культури для силосування, щоб забезпечити їх консервування, або багаті білками тваринні відходи, такі як відходи з боєн і підприємств переробки риби, також з метою консервування цих відходів, призначеній для харчування тварин. Приклади Приклад 1: СНСС8833 - поліпшена текстура ферментованого молока Штами: СНСС8833 новий штам DSM 17876 ST, як описаний тут. Контрольні штами: див. приклад 2. Всі штами є комерційними штамами, які загалом вважаються штамами з високою текстуруючою здатністю. Ферментація молока Заморожений концентрат ST-штамів використали для заквашування 200 мл відновленого молока із вмістом сухої речовини 9,5%, яке було піддане тепловій обробці при температурі 99°С протягом 15 хвилин в періодичному процесі. Заморожені концентрати СНСС8833 типово виявляють кількість клітин між 1×109 і 1×1010 КУЕ/м. Міра заквашування становила 1 г концентрату на 10 л молока, тим самим, між 1×105 і 1×106 КУЕ/мл молока. Інкубацію проводили при температурі 37°С 93542 6 доти, поки величина рН не досягла 4,55, за який час сталася коагуляція молока. Потім ферментоване молоко охолодили до температури 5°С Аналіз текстури ферментованого молока Через день після інкубації ферментоване молоко довели до температури 13°С і обережно перемісили з допомогою палички, оснащеної просвердленим диском, до досягнення однорідності зразка^ Реологічні властивості зразка оцінювали реометром (StressTech, фірма Reologica Instruments, Швеція), оснащеним С25коаксіальною вимірювальною системою. Вискозиметричне випробування проводили при швидкостях зсуву, тих, що варіюються від 0,27 до 300 сек-1 в 21 стадії. Швидкості зсуву підвищували і потім знижували і записували висхідні і низхідні криві напруження зсуву (Паскалів, Па) і уявної в'язкості (Па.сек). Часи затримки і інтеграції становили 5 сек і 10 сек, відповідно. Для подальшого аналізу було вибране значення напруження зсуву 300 сек-1. Результати і висновки Ферментовані молочні продукти, інкубовані з концентратами штамів Streptococcus thermophilus, які в цей час застосовуються в молочній промисловості (контрольні штами), показали меншу в'язкість (менші значення напруження зсуву) в порівнянні із зразками, отриманими з СНСС8833 (див. Фіг.1). Приклад 2: СНСС8833 - профіль стійкості до бактерійних вірусів Бактерійні штами: СНСС2389: штам Streptococcus thermophilus ST143, що є в продажу від фірми Chr. Hansen A/S як продукт F-DVS ST143, матеріал №200144. СНСС2389 і СНСС3534 (автори Hassan et al., 2003) являють собою різні ізоляти одного і того самого штаму. СНСС3021: штам Streptococcus thermophilus ST10255, що є в продажу від фірми Chr. Hansen A/S як продукт F-DVS ST-BODY-2, матеріал №623155. СНСС3541: штам Streptococcus thermophilus· ST20, що є в продажу від фірми Chr. Hansen A/S як продукт F-DVS ST20X,. матеріал №501696. СНСС4239: штам Streptococcus thermophilus ST4239, що є в продажу від фірми Chr. Hansen A/S в змішаній культурі F-DVS ABY-4, матеріал №675175. СНСС5086: штам Streptococcus thermophilus 5086, що є в продажу від фірми Chr. Hansen A/S в змішаній культурі F-DVS YF-LX701, матеріал №660656. СНСС5389: штам Streptococcus thermophilus 5389, що є в продажу від фірми Chr. Hansen A/S в змішаній культурі F-DVS ABY-4, матеріал №675175. CHCC5581: штам Streptococcus thermophilus TA40, що є в продажу від фірми Danisco A/S. СНСС8833: штам Streptococcus thermophilus DSM 17876. Випробування стійкості до бактерійних вірусів Чутливість до бактерійних вірусів вищезазначених комерційних штамів з високою текстуруючою здатністю порівнювали шляхом краплинного 7 випробування на тест-панелі з бактерійними вірусами, що включають 43 окремих фагових ізоляти. Краплинне випробування являє собою спосіб агарової аплікації для підрахунку кількості бактеріофагів в зразку. Спосіб включає посів випробуваного штаму на чашках Петрі за допомогою м'якого верхнього шару агару на поверхні агарової пластинки (нижній агар). Різні розбавлення вільних від клітин фагових ізолятів потім наносять у вигляді крапель на верхній шар агару. Окремі фаги будуть атакувати бактерійну клітину і відтворюватися, виділяючи фагові частинки, які атакують і лізують найближчі до них бактерії, приводячи до чистих зон (бляшок, негативних колоній), оточених непрозорою ділянкою зростаючої культури, див. Adams, Bacteriophages. Видавництво Interscience Publishers, Inc., New York. Метод Коротко, 10 мкл фагового лізату (Бляшкоутворюючі одиниці (PFU) приблизно 109/мл) наносили нерозбавленими і в 1:100-розбавленні на випробуваний бактерійний штам (штам-хазяїн) і інкубували при температурі 37°С протягом ночі. Використаний агар являв собою агар М17 (Oxoid CM785) плюс 2% лактози, по суті приготований згідно з рекомендаціями постачальника (фірма Oxoid Ltd., Basingstoke, Hampshire, Великобританія). Чисту зону при 1:100-розбавленні або окремі бляшки розглядали як зумовлені фаговою атакою і як показові. Результати і висновки Результати краплинного випробування полягали в тому, що штами СНСС2389, СНСС3021, СНСС3534, СНСС3541, СНСС4239 і СНСС5086 виявили себе як чутливі відносно бактерійних вірусів. Раніше було показано, що штам СНСС5381 чутливий до фатів. Цікаво, що не було виявлено бактерійних вірусів, які атакували штам СНСС8833. Депоновані Мікроорганізми [Експертне рішення] Відносно Правила 13bis.6 (PCT, Договір про патентну співпрацю), заявник запитує «експертне рішення» для зразків мікроорганізму, згаданого в даному патенті, на всіх територіях, де таке рішення може бути застосовним. Зокрема, дана заява стосується: ЄВРОПА Відносно тих вказівок, в яких Європейський Патент вимагає, щоб зразок депонованого мікроорганізму був наданий до публікації згадки про надання Європейського патенту або до дати, при якій заявка була відхилена або відкликана або мається намір щодо відкликання, тільки передачею такого зразка експерту, вказаному особою, що запитує зразок, і схваленою або і) Заявником і/або іі) Європейським Патентним Відомством, хто б не запитав. (Правило 28(4) і 28(5) ЕРС (Європейська Угода про Патенти)). КАНАДА Заявник просить, щоб або до того, як буде виданий Канадський патент на основі заявки, або заявка буде відхилена, або вона залишається без руху і вже більше не є предметом відновлення, 93542 8 або вона відкликається, тільки Керівник Патентного Відомства вповноважує представлення зразка депонованого біологічного матеріалу, позначеного в заявці, незалежному експерту, призначеному Керівником, заявник повинен письмовою заявою інформувати Міжнародне Бюро відповідним чином до завершення технічних приготувань для публікації міжнародної заявки. НОРВЕГІЯ Заявник цим просить, що до того, як заявка буде опублікована для загального ознайомлення (Норвезьким Патентним Відомством), або Норвезьким Патентним Відомством буде прийняте остаточне рішення без опублікування для загального ознайомлення, представлення зразка повинне бути зроблене тільки експерту, кваліфікованому в цій галузі технології. Прохання про цю дію повинне бути направлене заявником в Норвезьке Патентне Відомство не пізніше, ніж до моменту, коли заявка буде представлена для загального ознайомлення згідно з Розділами 22 і 33(3) Норвезького Патентного Закону. Якщо таке прохання було направлене заявником, будь-який запит, зроблений третьою стороною для представлення зразка, повинен показувати залучення експерта. Цей експерт може бути будь-якою особою, внесеною в список визнаних експертів, складений Норвезьким Патентним Відомством, або будь-якою особою, схваленою заявником в індивідуальному порядку. АВСТРАЛІЯ Заявник цим повідомляє, що представлення зразка мікроорганізму повинне бути зроблене тільки перед видачею патенту або до закінчення терміну дії, відхилення або відкликання заявки особі, яка є кваліфікованим одержувачем, не зацікавленим у винаході (Положення 3.25(3) Австралійського Регламенту Порядку Видачі Патентів). ФІНЛЯНДІЯ Заявник цим просить, що до того, як заявка буде опублікована для загального ознайомлення (Національною Радою по Патентах і Регламентах), або Національною Радою по Патентах і Регламентах буде прийняте остаточне рішення без опублікування для загального ознайомлення, представлення зразка повинне бути зроблене тільки експерту, кваліфікованому в цій галузі технології. ВЕЛИКОБРИТАНІЯ Заявник цим просить, щоб представлення зразка мікроорганізму було зроблене тільки експерту. Прохання зробити це повинне бути направлене заявником в Міжнародне Бюро перед завершенням технічних приготувань для міжнародної публікації заявки. ДАНІЯ Заявник цим просить, що до того, як заявка буде опублікована для загального ознайомлення (Датським Патентним Відомством), або Датським Патентним Відомством буде прийняте остаточне рішення без опублікування для загального ознайомлення, представлення зразка повинне бути зроблене тільки експерту, кваліфікованому в цій галузі технології. Прохання про цю дію повинне бути направлене заявником в Датське Патентне Відомство не пізніше, ніж до моменту, коли заявка буде представлена для загального ознайомлення 9 згідно з Розділами 22 і 33(3) Датського Патентного Закону. Якщо таке прохання було направлене заявником, будь-який запит, зроблений третьою стороною для представлення зразка, повинен показувати залучення експерта. Цей експерт може бути будь-якою особою, внесеною в список визнаних експертів, складений Датським Патентним Відомством, або будь-якою особою від заявника в індивідуальному порядку. ШВЕЦІЯ Заявник цим просить, що до того, як заявка буде опублікована для загального ознайомлення (Шведським Патентним Відомством), або Шведським Патентним Відомством буде прийнято остаточне рішення без опублікування для загального ознайомлення, представлення зразка повинне бути зроблене тільки експерту, кваліфікованому в цій галузі технології. Прохання про цю дію повинне бути направлене заявником в Міжнародне Бюро до закінчення 16 місяців від дати пріоритету (переважно, на Формі PCT/RO/134, приведеній в додатку Ζ Тому І Керівництва для Заявника РСТ). Якщо таке прохання було направлене заявником, будь-який запит, зроблений третьою стороною для представлення зразка, повинен показувати залучення експерта. Цей експерт може бути будь-якою особою, внесеною в список визнаних експертів, складений Шведським Патентним Відомством, або будь-якою особою, схваленою заявником в індивідуальному порядку. НІДЕРЛАНДИ Заявник цим просить, що до дати видачі патенту Нідерландів або до дати, при якій заявка відхиляється або відкликається або втрачає силу, мікроорганізм повинен бути наданий в розпорядження, як указано в пункті 3 IF(1) Патентних Правил, тільки представленням зразка експерту. Прохання про цю дію повинне бути направлене заявником у Відомство з охорони промислової власності Нідерландів до дати, при якій заявка буде опублікована для загального ознайомлення згідно з Розділом 22С або Розділом 25 Патентного Закону Королівства Нідерланди, яка б з двох дат ні наступила першою. ІСЛАНДІЯ Заявник цим просить, що до видачі патенту або остаточного рішення, винесеного Патентним 93542 10 Відомством Ісландії відносно заявки, яке не має результатом прохання про цю дію, прохання повинне бути направлене заявником в Патентне ВідомствоІсландії не пізніше за момент, коли заявка буде опублікована для загального ознайомлення згідно з Розділами 22 і 33(3) Патентного Закону Ісландії. Якщо таке прохання було направлене заявником, будь-який запит, зроблений третьою стороною для представлення зразка, повинен показувати залучення експерта. Цей експерт може бути будь-якою особою, внесеною в список визнаних експертів, складений Патентним Відомством Ісландії, або будь-якою особою від заявника в індивідуальному порядку. СІНГАПУР Заявник цим просить, що представлення зразка мікроорганізму повинне бути зроблене тільки експерту. СЛОВЕНІЯ Заявник цим просить, що представлення зразків третій стороні має місце на умовах, що ця сторона: (а) має право вимагати, щоб зразок мікроорганізму був зроблений доступним; (b) зобов'язана пересвідчитися, що заявник не санкціонує доступу до зразка депонованого мікроорганізму будь-якій третій стороні до закінчення передбаченого періоду дійсності патенту. ШВЕЙЦАРІЯ Заявник цим просить, що представлення зразків третій стороні має місце на умовах, що ця сторона вказує депонуючій установі свою назву і адресу для мети інформування депозитора і гарантує: (а) не надавати депоновану культуру або її похідну третій стороні; (b) не використовувати культуру поза сферою застосування закону; (с) у разі суперечки, представлення доказу, що зобов'язання згідно з пунктами (а) і (b) не були порушені. КОЛИШНЯ ЮГОСЛАВСЬКА РЕСПУБЛІКА МАКЕДОНІЯ Заявник цим просить, що представлення зразків третій стороні має місце на умовах, що ця сторона: (а) має право вимагати, щоб зразок мікроорганізму був зроблений доступним; (b) зобов'язана пересвідчитися, що заявник не санкціонує доступ до зразка депонованого мікроорганізму будь-якій третій стороні до закінчення визначеного періоду дійсності патенту. 11 Комп’ютерна верстка А. Рябко 93542 Підписне 12 Тираж 23 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601