Спосіб визначення справжності коньяку

Спектрофотометричний спосіб визначення справжності коньяку, що передбачає відбір проби і взаємодію її з хімічним реагентом, який відрізняється тим, що спочатку відбирають холосту пробу 3 83810 хроматографічні профілі порівнюють по характерним органічним сполукам, ідентифікованим за допомогою доступних комерційних бібліотек масспектрів. Це рішення обране прототипом. Загальне між прототипом і заявленим винаходом полягає в наступному: 1) відбір проби; 2) взаємодія проби з хімічним реагентом. Але, спосіб, запропонований у прототипі, передбачає попереднє екстракційне виділення поліфенольних сполук за допомогою органічних розчинників (гексана й ефіру), розподіл їх на капілярних колонках і введення в хромато-масспектрометр. Таким чином, у процесі виконання аналізу необхідно використовува ти токсичні органічні розчинники, робота з якими небажана. Методика вимагає спеціальних нерухомих фаз середньої й малої полярності для розподілу поліфенольних сполук і складного, дорогого обладнання, спорядженого комп'ютерними системами й банком даних. Це значно ускладнює процес визначення справжності коньяків. В основу винаходу поставлено задачу створити спосіб, в якому за рахунок використання біологічної активності поліфенольних сполук в процесі окислення нікотинамідаденіндинуклеотиду відновленого (НАД·Н2) фериціанідом калію [К3Fе(СN)6] в фосфа тному буфері, забезпечити спрощення аналізу і підвищення точності визначення справжності коньяку. Поставлена задача вирішена в способі визначення справжності коньяку, що передбачає відбір проби і взаємодію з хімічним реагентом тим, що спочатку відбирають пробу контрольного зразка, додають до неї [К3Fе(СN)6], буферний розчин і НАД·Н2 та вимірюють оптичну густину при l=325нм, через 2 хвилини повторно вимірюють оптичну густину контрольного зразка при тій же довжині хвилі, після цього відбирають пробу дослідного зразка, додають до неї [К3Fе(СN)6] і НАД·H2 та вимірюють оптичну щільність при l=325нм, через 2 хвилини повторно вимірюють оптичну густину при тій же довжині хвилі, після чого розраховують різницю оптичних густин контрольної та дослідної проб і визначають біологічну активність контрольної та дослідної проб, по величині якої роблять висновок про справжність коньяку. Новим у винаході, що заявляється, є використання реакції окислювання нікотинамідаденіндинуклеотиду відновленого НАД·Н2 фериціанідом калію в фосфа тному буферному розчині в присутності поліфенольних сполук, які каталізують реакцію і виявляються невід'ємною складовою натуральних коньяків. Модель електронотранспортної активності поліфенольних сполук наведена нижче. K4 Fe(CN)6 K 3Fe(CN)6 поліфенольні сполуки відновлені НАД·H2 поліфенольні сполуки окислені НАД 4 Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, і досягненням технічного результату полягає у наступному. Спрощення виконання аналізу при визначенні справжності коньяків стало можливим завдяки використанню біологічної активності як критерію оцінки справжності коньяків. Оцінка біологічної активності різних природних органічних сполук, здатних до окислювально-відновних перетворень, може бути проведена з використанням методики, запропонованої в [Gan E.V. Electron transfer properties of melanin. Arch. Biochem. and Biologhys. // 1976, 173, С. 666-672]. У цьому випадку біологічно активна речовина виступає в якості електронотранспортної й каталізує реакцію окислювання нікотинамідаденіндинуклеотиду відновленого (НАД·Н 2) фериціанідом калію. Біологічна активність коньяків визначається наявністю різних поліфенольних сполук в них [Скурихин И.М. Химия коньячного производства. М.: Пищевая промышленность. // 1968, - 383с.]. Одним з критеріїв оцінки біологічної активності коньяків є здатність поліфенольних сполук, які вміщуються в них, до електронотранспортної активності в системі НАД·H2 К3Fе(СN)6. Визначення біологічної активності проводили з використанням системи й методики для класу природних поліфенольних сполук: нікотинамідаденіндинуклеотид відновлений (НАД·Н2) фериціанід калію (К3Fе(СN)6) в фосфатному буферному розчині при pH 7,5. Біологічну активність розраховували по відношенню швидкості окислення НАД·Н 2/Н АД в контрольній спробі і у дослідних зразках коньяків, розбавлених 1:10 при l=325нм. Швидкість окислення визначали по зменшенню оптичної густини розчинів (ДА) через 2 хвилини. Біологічну активність розраховували по формулі: DA досл. ´ К БА = DAконтр . де К - коефіцієнт розведення. Приклад. Проводили визначення справжності коньяку марки "Шустов", три роки витримки, з партії, заарештованої як фальсифікат. Зразок передано Одеським НДІ судови х експертиз. Пробу контрольного зразку коньяку було закуплено на Одеському коньячному заводі марки "Шустов", строк витримки - 3 роки. В пробірку піпеткою вмістили 3мл фосфатного буферного розчину з pH 7,5, 3мл водного розчину [К3Fе(СN)6] з концентрацією 1·10-3моль/л, 1мл контрольної проби коньяку (розведеного 1:10) і 1мл водного розчину НАД·Н 2 з концентрацією 1·10-3 моль/л. Суміш швидко перемішали і виміряли оптичну густину розчину при l=325нм. Через 2 хвилини повторно виміряли оптичну густину при тій же довжині хвилі і розраховували DA - зменшення оптичної густини у часі. Після цього приготували холосту пробу. В пробірку вмістили 3 мл фосфатного буферного розчину з pH 7,5, 3мл водного розчину [К3 Fe(СN)6] з концентрацією 1·10-3моль/л, 1мл дистильованої води і 1мл водного розчину НАД·Н 2 з концентраці 5 83810 єю 1·10-3моль/л. Суміш перемішали і виміряли оптичну густину двічі при l=325нм і розраховували DAконтр. пр. - зменшення оптичної густини у часі. Далі визначали біологічну активність по формулі DA контр. пр. БАконтр . пр. = DA хол. пр. , де К - коефіцієнт розведення, DAхол.пр. - зменшення оптичної густини у часі холостої проби. 0,135 ´ 10 БАконтр . пр. = = 90,0 0,015 Після цього відбирали пробу дослідного зразка і проводили аналіз аналогічно тому, як проводили аналіз контрольного зразка. На підставі одержаних даних визначили біологічну активність дослідного зразка по вищенаведеній формулі D A досл. зр. ´ К 0,015´ 10 БА досл. зр. = = = 10 DA хол. пр. 0,015 Аналіз трьох зразків - коньяку "Юбилейный" (Шустов), коньячного спирту й фальсифікату коньяку марки "Шустов" (3 зірочки) показав, що біологі 6 чна активність для цих зразків становила відповідно 160; 40; 10. Отримані дані корелюють за вмістом поліфенольних сполук у досліджуваних зразках. Крім того, було проведене визначення біологічної активності більше 50 зразків коньяків. Знайдено повну кореляцію її зі строком їхньої витримки, у той же час кореляції по величині оптичної густини розчинів коньяків при довжині хвилі l=280нм і строком їхньої витримки не спостерігалося. Результати дослідження деяких найбільш часто вживаних марок коньяку представлені в таблиці. Як видно з таблиці, коньяки високої якості мають біологічну активність у діапазоні 150-170, коньяки зі строком витримки 3-5 років характеризуються більш низькими значеннями біологічної активності (90-110). І, нарешті, фальсифікати мають низьку величину біологічної активності - від 10 до 50. Таким чином, застосування величини біологічної активності в якості критерію оцінки справжності коньяку дозволяє значно спростити проведення аналізу та підвищити точність. Таблиця Оптична густина при l=280нм і біологічна активність коньяків різних марок і виробників Найменування коньяків Коньячний спирт Коньяк 3 зірочки "Шустов" "Десна" Розливний 1 Розливний 2 "Чайка" "Аркадия"(фальсифікат) "Юбилейный" (фальсифікат) "Юбилейный" Шустов "Таврия" Славутич" "Дніпро" "Золотой Дюк" (фальсифікат) Коньяк 3 зірочки "Шустов" фальсифікат "Белый аист" "Белый аист" (фальсифікат) Кишинэу" (фальсифікат) "Праздничный" КС "Martel" V.S.O.P. "Henessy" X.O. "DVIN" Витримка згідно Оптична густина l=280нм Біологічна активність, ДСТУ, роки умовних одиниць розбавл.1/50 Україна 0,52 40 3 0,74 90 4 0,70 100 0,83 90 0,4 50 6-7 0,90 120 Більше 10 0,63 15 Більше 10 0,79 30 Більше 11 0,76 160 8-9 150 8-10 0,64 146 10 і більше 0,64 140 0,73 40 Молдова 3-5 3-5 10-12 12 і більше Франція 10-12 10-17 Вірменія 10 і більше 0,15 10 0,69 0,30 0,65 0,63 110 15 50 161 0,65 0,73 156 170 150 7 Комп’ютерна в ерстка В. Клюкін 83810 8 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601