Спосіб визначення жирно-кислотного складу в молоці та молочній продукції методом газової хроматографії

Реферат: Спосіб визначення активності жирно-кислотного складу у молоці та молочній продукції, при цьому для дослідження беруть 0,5 л рідкого та 0,5 кг твердого підготовленого зразку, екстрагують н-гексаном з подальшим випаровуванням, потім проводять відбирання 60 мг жиру 3 з точністю 0,1 мг, додають 4 см н-гексану та 200 мкл метилового розчину гідроксиду калію, струшують 30 с, додають 1 г сірчанокислого моногідрату, інтенсивно струшують для гідролізу гідроксиду калію з подальшим відбиранням верхнього шару та розведенням н-гексаном і хроматографуванням з використанням полум'яно-іонізаційного детектора. UA 108767 U (12) UA 108767 U UA 108767 U 5 10 15 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема до біохімії та токсикології, і може бути використана в роботі науково-виробничих лабораторій. Спосіб не має зареєстрованих аналогів в Україні. Задачею корисної моделі є розробка універсального та швидкого способу визначення жирно-кислотного складу (масляної, капронової, каприлової, капринової, деценової, лауринової, міристинової, міристолеїнової, пальмітинової, пальмітолеінової, стеаринової, олеїнової, лінолевої, ліноленової, арахісової, бегенової кислот) у продукції тваринного походження, суттєве скорочення часу на пробопідготовку, зменшення витрат реактивів, посуду, зниження собівартості способу. Процедурний підхід до ідентифікації жирно-кислотного складу включає наступні елементи: для дослідження беруть 0,5 л рідкого та 0,5 кг твердого підготовленого зразку екстрагують нгексаном з подальшим випаровуванням, потім проводять відбирання 60 мг жиру з точністю 3 0,1 мг, додають 4 см н-гексану та 200 мкл метилового розчину гідроксиду калію, струшують 30 с, додають 1 г сірчанокислого моногідрату, інтенсивно струшують для гідролізу гідроксиду калію з подальшим відбиранням верхнього шару та розведенням н-гексаном і хроматографуванням з використанням полум'яно-іонізаційного детектора. Конфігурація газового хроматографа Varian CP 3800: генератор водню, автосамплер, інжектор, термостат колонок, полум'яно-іонізаційний детектор готують, згідно з інструкцією з експлуатації приладу, та задають робочі параметри. 20 Таблиця 1 Конфігурація та режим роботи Конфігурація Газовий хроматограф Колонка Температура інжектора Температура колонки Температура детектора Об'єм інжекції Режим введення проби Потік Градієнт (рухома фаза) Режим роботи Varian CP 3800 Agilent J&W GC Coloumns Select Fame 100m x 0,25 mm x 0,25μm Front 1177 Split/Splitless 260 °C програмована 260 °C 1 мкл автоматичний N2-29 ml/min, H2-30 ml/min, Air-300 ml/min Азот з чистотою 99,9999 % Таблиця 2 Програмований температурний режим Початок°С/хв… Початкова 5 50 50 Температура, °C 140 240 200 100 Час/хв. 5 12 1 1 Загальний час, хв. 5,00 37,00 38,00 41,80 Таблиця 3 Час виходу, нормальний діапазон кислот для молочного жиру та кількість жирних кислот в сертифікованому референтному матеріалі Назва кислоти Масляна Капронова Каприлова Капринова Лауринова Час виходу, хв 9,5 10,00 11,00 12,70 15,14 1 Норма для молочного жиру, % 2,0-4,2 1,5-3,0 1,0-2,0 2,0-3,5 2,0-4,0 Кількість, % 2,4 1,7 1,6 3,2 3,5 UA 108767 U Продовження таблиці 3 Назва кислоти Час виходу, хв Міристинова Міристолеїнова Пальмітинова Пальмітолеїнова Стеаринова Олеїнова Лінолева Ліноленова Арахінова Бегенова 5 18,05 19,10 21,00 21,76 23,75 24,22 25,40 26,75 27,10 27,50 Норма для молочного жиру, % 8,0-13,0 0,6-1,5 22,0-33,0 1,5-2,0 9,0-13,0 22,0-32,0 3,0-5,5 до 1,5 до 1,3 до 0,1 Кількість, % 13 0,6 30 1,6 12 22 3 0,5 0,08 0,05 Час виходу жирних кислот залежить від швидкості потоку, типу колонки та температурного режиму. Умови виконання вимірювань підлягають перевірці і, при потребі, корегуванню: - при переході на інший хроматограф; - при заміні колонок; - після ремонту вузлів хроматографа, що впливають на чутливість детектора. Хроматограф градуюють по градуювальних розчинах жирних кислот. 10 Таблиця 4 Оцінка придатності методу Назва кислоти Масляна Капронова Каприлова Капринова Лауринова Міристинова Міристолеїнова Пальмітинова Пальмітолеїнова Стеаринова Олеїнова Лінолева Ліноленова Арахінова Бегенова 15 Кількість, % 2,4 1,7 1,6 3,2 3,5 13 0,6 30 1,6 12 22 3 0,5 0,08 0,05 Збіжність, Sr, Відтворюваність, SR, % % 7,5 8,3 7,6 8,0 4,6 4,6 4,9 8,9 5,5 5,7 2,5 3,1 6,2 12,1 0,5 4,6 2,3 5,8 2,8 4,2 1,1 1,2 2,7 6,9 7,6 14,2 11,1 11,3 10,3 10,7 Невизначенність вимірювань, U(p) 0,39 0,26 0,14 0,54 0,38 0,79 0,13 2,72 0,18 0,98 0,53 0,41 0,13 0,016 0,01 Дані наведені в таблиці 4 та 5 свідчать про те, що методика розроблена в ДНДІЛДВСЕ придатна для всіх видів молочних продуктів, даний спосіб є досить чутливим, щоб детектувати дані жирні кислоти. Наша методика дозволяє за досить короткий проміжок часу дослідити зразок та одночасно виявити жирні кислоти в молочних продуктах, що значно економить час, реактиви. 2 UA 108767 U Таблиця 5Участь у міжлабораторних порівняльних дослідженнях (програма Вет-Тест) 1/2015 Найменування матеріалу Молочний жир 2/2015 Молочний жир 1/2016 Молочний жир № програми 5 10 15 20 25 30 Показник Масляна кислота Пальмітинова кислота Стеаринова кислота Приписане значення, % 2,4 Результат дослідження, % 2,23 29,7 29,9 1,1 11,6 11,4 -0,7 Z-індекс -0,4 Результати отримані нами під час дослідження референтного матеріалу, є вірогідними і знаходяться в межах приписаного значення. Отже, відпрацьована нами методика виявлення жирних кислот в молочній продукції не поступається методикам, які використовуються в лабораторіях Європейської спільноти. Джерела інформації: 1. Commission Decision (2002/657/EC) of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and interpretation of results, O.J. Europ. Comm. L 221, 8-36. 2. ДСТУ 4834:2007 Молоко та молочні продукти. Правила приймання, відбору та підготовки проб до контролю. 3. Настанова з оцінювання невизначеності вимірювання результатів кількісних випробувань. Технічний звіт EUROLAB № 1/2006// Пер. з англ. Київ, Евролаб-Україна, 2008. 4. COMMISSION REGULATION (EC) № 2074/2005 °F 5 December 2005 laying down implementing measures for certain products under Regulation (EC) № 853/2004 °F the European Parliament and of the Council and for the organisation of official controls under Regulation (EC) № 854/2004 °F the European Parliament and of the Council and Regulation (EC) № 882/2004 °F the European Parliament and of the Council, derogating from Regulation (EC) № 852/2004 °F the European Parliament and of the Council and amending Regulations (EC) № 853/2004 and (EC) № 854/2004 5. GB 5413.27-2010 Determination of fatty acids in foods for infants and young children, milk and milk products ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб визначення активності жирно-кислотного складу у молоці та молочній продукції, при цьому для дослідження беруть 0,5 л рідкого та 0,5 кг твердого підготовленого зразку екстрагують н-гексаном з подальшим випаровуванням, потім проводять відбирання 60 мг жиру з 3 точністю 0,1 мг, додають 4 см н-гексану та 200 мкл метилового розчину гідроксиду калію, струшують 30 с, додають 1 г сірчанокислого моногідрату, інтенсивно струшують для гідролізу гідроксиду калію з подальшим відбиранням верхнього шару та розведенням н-гексаном і хроматографуванням з використанням полум'яно-іонізаційного детектора. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3