Спосіб вдосконалення визначення інгібувальних речовин у сирому коров’ячому молоці з індикатором резазурином

Реферат: Спосіб вдосконалення визначення інгібувальних речовин у сирому коров'ячому молоці з 3 індикатором резазурином включає використання 10,0-10,2 см молока, підігрітого на водяній бані за температури 85-90 °C та охолодження його до температури 43-45 °C. Використовують 3 робочу тест-культуру Streptoccocus thermophilus у кількості 0,4-0,5 см та витримують на водяній бані упродовж 1 год. 30 хв -1 год. 40 хв за температури 43-44 °C. Потім у пробірку 3 вносять 0,5-0,6 см розчину резазурину натрієвої солі з масовою концентрацією 0,1 % за температури 20-21 °C, перемішуючи триразовим перевертанням і витримуючи на водяній бані упродовж 10-11 хвилин за температури 43-44 °C, і в подальшому оцінюють інтенсивність забарвлення в пробірці. UA 81820 U (12) UA 81820 U UA 81820 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до сільського господарства, зокрема до ветеринарної медицини, і може бути використана для визначення інгібувальних речовин у сирому коров'ячому молоці у виробничих лабораторіях на потужностях з переробки молока, в державних лабораторіях ветеринарної медицини, на пунктах збору сирого коров'ячого молока, на суб'єктах господарювання по отриманню молока (фермах) та в лабораторіях ветеринарно-санітарної експертизи на агропродовольчих ринках. За результатами цього метода можна отримати кількісні показники при оцінці безпеки сирого коров'ячого молока. Аналогом корисної моделі є метод визначення бактеріального обсіменіння сирого коров'ячого молока [1], в якому використовують робочий розчин резазурину натрієвої солі в 3 3 кількості 1 см і 10 см досліджуваного сирого коров'ячого молока і витримують в редуктазнику за температури (37±1) ºC упродовж 1,0-1,30 год. По довготривалості зміни забарвлення оцінюють бактеріальне обсіменіння молока. Недоліком даного методу є те, що він громіздкий, довготривалий, а також метод дає похибку у визначеннях від 15 до 20 %. Прототипом корисної моделі є метод визначення інгібувальних речовин (антибіотиків, формаліну, пероксиду водню тощо) у сирому коров'ячому молоці за допомогою органічного барвника резазурина натрієвої солі [2], який відновлюється при розвитку в молоці чутливих до інгібувальних речовин мікроорганізмів виду Streptoccocus thermophilus. Недоліком даного методу є те, що розчин суміші для аналізу готується у великій кількості, низької концентрації і нестійкі. Крім цього даний метод довготривалий і дає похибку у 10-15 % під час проведення аналізу. В основу даної корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб вдосконалення визначення інгібувальних речовин в сирому коров'ячому молоці з індикатором резазурином шляхом зміни концентрації та кількості робочого розчину резазурину натрієвої солі, температури та часу проведення дослідження, що забезпечить достовірність результатів при визначенні інгібувальних речовин в сирому коров'ячому молоці. 3 Задача вирішується тим, що в стерильну пробірку наливають 10,0-10,2 см досліджуваного сирого коров'ячого молока і прогрівають на водяній бані за температури 85-90 ºC, потім вміст 3 пробірки охолоджують до 43-45 ºC і стерильною піпеткою вносять у пробірку 0,4-0,5 см робочої тест-культури Streptoccocus thermophilus, уміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують упродовж 1 год. 30 хв-1 год., 40 хв на водяній бані за температури 3 43-44 ºC. Потім у пробірку вносять 0,5-0,6 см розчину резазурину натрієвої солі з масовою концентрацією 0,1 % за температури 20-21 ºC, уміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують на водяній бані упродовж 10-11 хвилин за температури 43-44 ºC та в подальшому оцінюють забарвлення в пробірці. Етапи вирішення даної задачі наведено у нижчезазначених прикладах. 3 Приклад 1. Для розробки методу в стерильну пробірку наливають 8,0-8,2 см досліджуваного сирого коров'ячого молока і прогрівають на водяній бані за температури 70-75 ºC, потім вміст пробірки охолоджують до 41-42 ºC і стерильною піпеткою вносять у пробірку 0,33 0,4 см робочої тест-культури Streptoccocus thermophilus. Уміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують упродовж 2 год.-2 год. 10 хв на водяній бані за 3 температури 38-39 ºC. Потім у пробірку вносять 1,0-1,1 см розчину резазурину натрієвої солі з масовою концентрацією 0,05 % за температури 18-20 ºC, знову уміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують на водяній бані упродовж 15-16 хвилин за температури 38-39 ºC та в подальшому оцінюють забарвлення в пробірці. За відсутності інгібувальних речовин - досліджуване молоко буде рожевим або білим; за наявності інгібувальних речовин - синьо-фіолетовим або фіолетовим. 3 Приклад 2. Для розробки методу в стерильну пробірку наливають 9,0-9,2 см досліджуваного сирого коров'ячого молока і прогрівають на водяній бані за температури 80-85 ºC, потім вміст пробірки охолоджують до 40-41 ºC і стерильною піпеткою вносять у пробірку 0,53 0,6 см робочої тест-культури Streptoccocus thermophilus. Уміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують упродовж 2 год. 20 хв-2 год. 30 хв на водяній бані за 3 температури 40-41 ºC. Потім у пробірку вносять 1,5-1,6 см розчину резазурину натрієвої солі з масовою концентрацією 0,1 % за температури 22-23 ºC, знову уміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують на водяній бані упродовж 13-14 хвилин за температури 40-41 ºC та в подальшому оцінюють забарвлення в пробірці. За відсутності інгібувальних речовин - досліджуване молоко буде рожевим або білим; за наявності інгібувальних речовин - синьо-фіолетовим або фіолетовим. 3 Приклад 3. Для розробки методу в стерильну пробірку наливають 10,0-10,2 см досліджуваного сирого коров'ячого молока і прогрівають на водяній бані за температури 85-90 ºC, потім вміст пробірки охолоджують до 43-45 ºC і стерильною піпеткою вносять у пробірку 0,4 1 UA 81820 U 3 5 10 0,5 см робочої тест-культури Streptoccocus thermophilus. Уміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують упродовж 1 год. 30 хв-1 год. 40 хв на водяній бані за 3 температури 43-44 ºC. Потім у пробірку вносять 0,5-0,6 см розчину резазурину натрієвої солі з масовою концентрацією 0,1 % за температури 20-21 ºC, знову уміст пробірки перемішують триразовим перевертанням і витримують на водяній бані упродовж 10-11 хвилин за температури 43-44 ºC та в подальшому оцінюють забарвлення в пробірці. За відсутності інгібувальних речовин - досліджуване молоко буде рожевим або білим; за наявності інгібувальних речовин - синьо-фіолетовим або фіолетовим. Порівняльна оцінка результатів випробування вищезазначених способів вдосконалення визначення інгібувальних речовин у сирому коров'ячому молоці з індикатором резазурином до прототипу наведені в таблиці 1. Таблиця 1 Порівняння способів вдосконалення визначення інгібувальних речовин у сирому коров'ячому молоці до прототипу Приклади № Показники, що порівнюються Прототип п/п 1 2 3 1 2 3 4 5 6 Складові методу: 10,0 8,0-8,2 9,0-9,2 10,0-10,2 3 Проба молока, см 1 Температура водяної бані, °C 85-90 70-75 80-85 85-90 Охолодження проби 43-45 41-42 40-41 43-45 молока, °C Додавання робочої тесткультури Streptoccocus 0,3 0,3-0,4 0,3-0,4 0,3-0,4 3 thermophilus, см Кількість перемішувань умісту 3 рази 3 рази 3 рази 3 рази 2 пробірки Експозиція на водяній бані, 2 год.-2 год. 2 год. 20 хв-2 год. 1 год. 30 хв-1 2 год. хв., год. 10 хв 30 хв год. 40 хв Температура на водяній 42-43 38-39 40-41 43-44 бані, °C Додавання робочого розчину резазурину натрієвої солі 1,0 1,0-1,1 1,5-1,6 0,5-0,6 3 кількість, см 0,05 0,05 0,1 0,1 3 концентрація, % Температура розчину, °C 18-20 18-20 22-23 20-21 Кількість перемішувань умісту 2 рази 3 рази 3 рази 3 рази пробірки Температура на водяній бані, 42-43 38-39 40-41 43-44 4 ºC Експозиція на водяній бані, хв 15 15-16 13-14 10-11 Тривалість визначення 2 год. 30 хв-3 2 год. 30 хв-3 2 год. 50 хв-3 год. 2 год.-2 год. 5 досліду, год. год. 10 хв год. 10 хв 20хв 10 хв Стабільність показників 6 визначення інгібувальних 85,8 65,2 63,3 97,5 речовин в молоці, % % співвідношення результатів досліджень до визначення 7 89,0-90,5 76,3-77,1 78,0-79,5 94,2-95,5 бактеріального обсіменіння молока % співвідношення результатів 8 досліджень до визначення 87,5-89,5 74,6-75,5 77,4-78,0 96,0-97,1 ферменту пероксидази 15 Дані таблиці 1 свідчать, що більш достовірні дані по стабільності показників визначення інгібувальних речовин в сирому коров'ячому молоці - 97,5 % були отримані при застосуванні 2 UA 81820 U 5 10 способу за прикладом № 3 в порівнянні до прототипу. Також більш достовірні дані в порівнянні до результатів досліджень по визначенню бактеріального обсіменіння молока - у 94,2-95,5 % [1] та до результатів досліджень по визначенню ферменту пероксидази в молоці - у 96,0-97,1 % [3] були отримані при застосуванні методу за прикладом № 3. Використовуючи метод за прикладом № 3, ми визначили інгібувальні речовини у сирому коров'ячому молоці з індикатором резазурином на 38 пробах сирого коров'ячого молока. Попередньо досліджувані проби молока досліджували експресними хімічними методами на наявність формаліну, пероксиду водню, хлору, соди та пеніциліну [4]. Із 38 досліджуваних проб молока у 12 проб - були відсутні інгібувальні речовини; у 5 пробах молока а виявили наявність формаліну; у 6 пробах - наявність пероксиду водню; у 8 пробах - наявність соди; у 4 пробах наявність хлорки і у 3 пробах молока - наявність пеніциліну. Результати наведені в таблиці 2. Таблиця 2 Оцінка результатів при визначенні інгібувальних речовин в сирому коров'ячому молоці за розробленим методом № п/п 1. 2. 3. 4. 5 6. 15 20 25 30 35 Досліджувані проби молока Молока Молоко Молоко Молоко Молоко Молоко Кількість проб 12 5 6 8 4 3 Наявність інгібіторів за експресними хімічними методами відсутні формалін пероксид водню сода хлорка пеніцилін Оцінка розробленого методу визначення інгібіторів за прикладом № 3 Колір білий з рожевим відтінком Колір синьо-фіолетовий Колір фіолетовий Колір синьо-фіолетовий Колір синьо-фіолетовий Колір фіолетовий Проведеними дослідженнями визначено, що найбільш стабільний колір при визначенні наявних в молоці інгібувальних речовин (формаліну, пероксиду водню, соди, хлорка, пеніцилін) - від синьо-фіолетового до фіолетового та відсутності інгібувальних речовин - від білого до рожевого був за розробленим методом за прикладом № 3. Крім цього даний метод є ефективний та скорочує термін проведення дослідження, а його результати дають достовірні якісні показники за кольором при визначенні різних інгібувальних речовин у молоці. Метод за прикладом № 3 нами пропонується як якісний спосіб вдосконалення визначення інгібувальних речовин в сирому коров'ячому молоці з індикатором резазурином поряд з іншими методами визначення якості молока (визначення бактеріального обсіменіння молока, визначення ферменту пероксидази, визначення вміст кількості соматичних клітин [5]). Даний спосіб має перевагу перед існуючими методами визначення якості молока в тому, що результати мають високу достовірність в оцінці кольору при визначенні інгібувальних речовин в сирому коров'ячому молоці. Джерела інформації: 1. ГОСТ 9225-84 Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа. - М.: Госстандарт СССР, 1986.-16 с. (Межгосударственный стандарт). 2. ГОСТ 23454-79 Молоко. Методы определения ингибирующих веществ. - М.: Госкомитет по стандартам СССР, 1981.-14 с. (Межгосударственный стандарт). 3. ГОСТ 3623-73 Молоко. Методы определения пастеризации. - М.: Госкомитет по стандартам СССР, 1973.-12 с. (Межгосударственный стандарт). 4. ДСТУ 3662-97 Молоко коров'яче незбиране. Вимоги при закупівлі. - К.: Держстандарт, 1997.-8 с. (Національний стандарт України). 5. ГОСТ 23453-90 Молоко. Методы определения количества соматических клеток. - М.: Госкомитет по стандартам СССР, 1990.-6 с. (Межгосударственный стандарт). ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 40 45 Спосіб вдосконалення визначення інгібувальних речовин у сирому коров'ячому молоці з 3 індикатором резазурином, що включає використання 10,0-10,2 см молока, підігрітого на водяній бані за температури 85-90 °C та охолодження його до температури 43-45 °C, який відрізняється тим, що використовують робочу тест-культуру Streptoccocus thermophilus у 3 кількості 0,4-0,5 см та витримують на водяній бані упродовж 1 год. 30 хв -1 год. 40 хв за 3 температури 43-44 °C, потім у пробірку вносять 0,5-0,6 см розчину резазурину натрієвої солі з 3 UA 81820 U масовою концентрацією 0,1 % за температури 20-21 °C, перемішуючи триразовим перевертанням і витримуючи на водяній бані упродовж 10-11 хвилин за температури 43-44 °C, і в подальшому оцінюють інтенсивність забарвлення в пробірці. Комп’ютерна верстка І. Мироненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4