Спосіб одержання пива

1. Спосіб одержання пива, в якому на стадії безперервного бродіння сусло, що містить цукри, які зброджують, спочатку піддають бродінню з використанням іммобілізованих дріжджів, який відрізняється тим, що іммобілізовані дріжджі являють собою клітини флокулентних дріжджів, іммобілізованих шля хом самоагрегації, бродіння здійснюють C2 2 (19) 1 3 84536 4 останні роки в даній області, свідчать про значний гранули). При такій ферментній обробці в системі інтерес до методу іммобілізації в пивоварній проіммобілізованих клітин відбувається утворення мисловості. У цілому ряді оглядів [Enari, 1995; ефіру ацетату, яке аналогічне його утворенню при Iserentant, 1995; Masschelein, 1997; Mensour та ін., загальноприйнятому періодичному процесі бро1997; Stewart, 1996; Virkajarvi та Linko, 1999], придіння, що на одну стадію коротше при одержанні свячених загальному стану пивоварної промислопродукту відповідної якості. вості, обговорювалася можлива революційна роль В даний час дослідницька група з Sapporo методу іммобілізації в області виробництва пива. сфокусувала свою увагу на розробці ферментера Крім груп дослідників, перерахованих у розділах з псевдозрідженим шаром, у якому використову3.1-3.5 даного опису, у дослідженні і розробці меються хітозанові гранули, який працює в періодичтодів іммобілізації клітин для застосування в пивоному режимі з підживленням. Ця система пророварстві брали участь багато організацій. Компанія била протягом 75 днів без яких-небудь серйозних Miller Brewing [Duncombe та ін., 1996; Tata та ін., проблем і отримане пиво мало якість, аналогічну 1999] з США, провела ряд попередніх досліджень продукту, що надходить до продажу. Було встаноз використанням випробувальної установки Meura влено, що нефлокулентний штам був істотно Delta, a також біореактора з псевдозрідженим шабільш ефективним, ніж флокулентний штам ром, який постачається фірмою Schott Engineering. [Maeba та ін., 2000; Umemoto та ін., 1998]. Фірма Coors Brewing також провела попередні На конгресі EBC, що відбувся в Маастрихті в експерименти з використанням системи Meura 1997, були представлені два інших підходи для Delta. відновлення діацетилу. Дослідники з Франції Словацький технічний університет разом з фі[Dulieu та ін., 1997] запропонували застосовувати рмою Heineken досліджували застосування кальінкапсульовану a-ацетолактатдекарбоксилазу для ційпектатного гелю в системі з аерацією (ерліфтній швидкого перетворення a-ацетолактату в ацетоїн. системі) для виробництва пива [Domeny, 1996]. В Фірма Meura Delta опублікувала попередні резульостанні роки група дослідників із Словацького техтати вивчення застосування алюмосилікату цеолінічного університету опублікувала кілька статей, ту як каталізатора для «холодного» і безпосередщо стосуються проведеного ними дослідження нього перетворення ацетолактату в ацетоїн [Smogrovicova та ін., 1997; Smogrovicova і Domeny, [Andries та ін., 1997]. Якщо такі методи обробки 1999]. Фірма Guinness вперше досліджувала завиявляться ефективними і прийнятними для спостосування різних абсорбуючих носіїв для іммобіживача, то більш дешеві альтернативні системи лізації і наступного бродіння в біореакторі з псевдозрівання, запропоновані фірмою Cultor та Alfa дозрідженим шаром [Donnelly, 1998]. У 1999 році Laval, стануть реальними. Donnelly із співробітниками опублікували статтю, у Інше дослідження, яке не має промислового якій описана кінетика метаболізму цукру в біореакзначення, в області іммобілізації для цілей виробторі з псевдозрідженим шаром [Donnely та ін., ництва пива було проведено Сінгапурським інсти1999]. У їхній експериментальній установці застотутом стандартів і промислових досліджень совували пористі скляні гранули типу Siran як носій (Singapore Institute of Standards and Industrial для здійснення іммобілізації дріжджів верхнього Research), у якому вивчали застосування нитковибродіння. Фірма Guinness увійшла до складу дних альгінатних гелевих часток у реакторі з псевImmocon Consortium, що зазначено в розділі 2.2.5. дозрідженим шаром, при цьому було встановлено, Фірми Holsten Brauerei AG та Lurgi AG, обидві що вони є більш кращими, ніж альгінатні гранули з Німеччини, спільно розробили і запустили в ро[Que, 1993]. Mafra із співробітниками з університеботу пілотну установку для безперервного виробту Universidade do Minho (Португалія) обговорюваництва безалкогольного пива [Dziondziak, 1995]. ли застосування суперфлокулентного штаму дріжДля бродіння використовували гранули з альгінату джів для безперервного процесу дозрівання пива кальцію, які знаходяться в одноконтурному фер[Mafra та ін., 1997]. Ця ж група дослідників опубліментері з псевдозрідженим шаром (130л), при кувала також роботу, у якій описане застосування цьому для вилучення спирту з пива використовустворених ними флокулентних дріжджів в ерліфтвали колону із сітчастими піддонами (7 сітчастих ному біореакторі для одержання етанолу [Vicente піддонів). Загальний час одержання продукту за та ін., 1999; Domingues та ін., 2000]. допомогою цього процесу становив 8,5год. В останні роки дослідники в різних академічГрупа з дослідницької лабораторії Sapporo них інститутах проводили вивчення застосування Breweries Ltd. Brewing Research Laboratories, Япоіммобілізації для виробництва пива [Argiriou та ін., нія, вивчала застосування іммобілізованих клітин 1996; Bardi та ін., 1996; Cashin, 1996; MoIl і для основного бродіння при виробництві пива в Duteurtre, 1996; Nedovic та ін., 1996а; Nedovic та реакторі з псевдозрідженим шаром. При цих доін., 1996b; Norton та ін., 1995; Scott та ін., 1995; слідженнях як матриці використовували гелеві Wackerbauer та ін., 1996а; Wackerbauer та ін., гранули з полівінілового спирту [Shindo та 1996b]. Група дослідників з Китаю [Chao та ін., Kamimur, 1990], Са-альгінатні гелеві гранули 1990; Yuan, 1987; Zhang та ін., 1988], Росії [Shindo та ін., 1994а], гелеві волокна з двошаро[Kolpachki та ін., 1980; Sinitsyn та ін., 1986] і Чехосвим покриттям [Shindo та ін., 1994b] і гелеві хітозаловаччини [Chladek та ін., 1989; Curin та ін., 1987; нові гранули [Shindo та ін., 1994с]. В останньому Polednikova та ін., 1981] також розробляли технодослідженні здійснювали безперервний процес логію, засновану на використанні іммобілізованих бродіння сусла, обробленого глюкоамілазою, у клітин, і опублікували результати в 1980-х роках. біореакторі з робочим об'ємом 1л, у якому знахоНа початку досліджень, на яких основано дадилося 25об.% гранул ChitopearlÒ тип II (хітозанові ний винахід, були розглянуті численні публікації. 5 84536 6 Вони включають: 1999. [Abbott В J., Immobilized cells. In: Annual Büytükgüngör H., Stability of Lactobacillus Reports on Fermenation Processes, під ред. Perlman bulgaricus immobilized in kappa-carrageenan gels. D., New York: вид-во Academic Press, 2,1978: с.91. Journal of Chemical Technology and Biotechnology 53, 1992, с.173. Anon. 1994. MaturexÒ L. Novo Nordiskpubication. Chahal P.S. Fluorosensor controlled fed-batch B 560c-GB. production of Cyclosporin-A from Beauveria nivea. Anon. 1996. Table Curve 2D. User's Manual, JandelScientific. Ph.D. Thesis. University of Western Ontario, 1992. Chisti M.Y. Airlift bioreactors. Лондон, вид-во Anon. 1997. Alfa Laval Brewery Systems. Elsevier Applied Science, 1989. Brewers' Guardian 126: 26. Chisti Y., Moo-Young M. Improve the Anon. 1998. Digox 5 Operating Manual. Dr. performance of airlift reactors. Chemical Engineering Theidigpublication. Aquilla T. The biochemistry of yeast: debunking Progress 6,1993, с.38. Cho G.H., Choi C.Y., Choi Y.D., Han M.H. the myth of yeast respiration and putting oxygen in its Ethanol production by immobilised yeast and its proper place. Brewing Techniques 50, 1997. carbon dioxide gas effects in a packed bed reactor. Aschengreen N.H., Jepsen S. Use of acetolactate Journal of Chemical Technology and Biotechnology decarboxylase in brewing fermentations. Proceedings of the 22nd Convention of the Institute of Brewing 32,1982, с.959. Coutts M.W. Britain Patent No. 872391, 1956. (Australia and New Zealand Section), Мельбурн 80, Curin J., Pardonova B., Polednikova M., Sedova 1992. H., Kahler M. Beer production with immobilized yeast. Atkinson B. Immobilised cells, their application European Brewing Convention Congress, Madrid and potential. B: Process engineering aspects of immobilized cell systems. Під ред. Webb C, Black 433, 1987. Dale C.J., Hough J.S., Young T.W. G.M, Atkinson B., Manchester: Institution of Chemical Freactionation of high and low molecular weight Engineers 3,1986. components from wort and beer by adsorption Audet P., Paquin C, Lacroix C. Immobilized chromatography using the gel Sephadex LH20. growing lactic acid bacteria with kappa-carrageenan locust bean gel. Applied Microbiology and Journal of the Institute of Brewing 92(5), 1986, с.457. Daoud I.S., Searle B.A. Yeast vitality and Biotechnology 29, 1988, с.11. fermentation performance. Monograph - XII European Austin G.D., Watson R.W.J., Nordstrom P.A., Brewery Convention - Symposium on Brewers' Yeast, D'Amore T. An on-line capacitance biomass monitor Helsinki, 1986, с.108. and its correlation with viable biomass. MBAA Technical Quarterly 31, 1994, с.85. de Backer L., Willaert R.G., Baron G.V. Modelling of immobilized bioprocesses. B: Immobilized Living Axcell B.C., O'Connor-Сох E.S.C. The concept of Cell Systems Modelling and Experimental Methods, yeast vitality - an alternative approach. Proceedings під ред. Willaert R. G., Baron G. V. і de Backer L., of Convention of the Institute of Brewing (Asia Pacific Toronto: вид-во John Wiley and Sons, 1996, с.47. Sect.). Singapore 24, 1996, c.64. Axelsson A., Sisak C, Westrin B.A., Szajani B. de Beer D., Van den Heuvel J.C., Ottengraaf S.P.P. Microelectrode measurements of the activity Diffusion characteristics of a swelling gel and its distribution in nitrifying bacterial aggregates. Applied consequences for bioreactor performance. The Environmental Microbiology 59, 1993, с.573. Chemical Engineering Journal 55, 1994, B35. Debourg A., Laurent M., Goossens E., Bailey J.E., Ollis D.F. Biochemical Engineering Fundamentals. New York: вид-во McGraw-Hill, Inc., Borremans E., Van De Winkel L., Masschelein CA. Wort aldehyde reduction potential in free and 1986. immobilized yeast systems. Journal of the American Bancel S., Hu W. Confocal laser scanning Society of Brewing Chemists 52, 1994, с.100. microscopy examination of cell distribution in Dillenhofer W., Ronn D. Secondary fermentation macroporous microcarriers. Biotechnology Progress 12,1996, с.398. of beer with immobilized yeast. Brauwelt International 14, 1996, с.344. Barker M.G, Smart K.A. Morphological changes Doran P.M., Bailey J.E. Effects of hydro xyurea on associated with the cellular aging of a brewing yeast immobilized and suspended yeast fermentation rates strain. Journal of the American Society of Brewing and cell cycle operation. Biotechnology and Chemists 54(2), 1996, с.121. Bejar P., Casas C, Godia F., Sola C. The Bioengineering 28, 1986a, с.1814. Doran P.M., Bailey J.E. Effects of immobilization influence of physical properties on the operation of a on growth, fermentation properties, and three-phase fluidized-bed fermenter with yeast cells macromolecular composition of Saccharomyces immobilized in calcium alginate. Applied Biochemistry cerevisiae attached to gelatin. Biotechnology and and Biotechnology 34, 1992, с.467. Bickerstaff G.F. Immobilization of enzymes and Bioengineering 28, 1986b, с.73. dos Santos V.A.P.M, Bruijnse M., Tramper J., cells. B: Immobilization of Enzymes and Cells, під Wijffels R.H. The magic-bead concept: an integrated ред. Bickerstaff G. F., New Jersey, U.S.A., вид-во approach to nitrogen removal with co-immobilized Humana Press, Inc. 1, 1997. micro-organisms. Applied Microbiology and Birnbaum S., Pendleton R., Larson P., Mosbach K. Covalent stabilization of alginate gel for the Biotechnology 45, 1996, с.447. Driessen W., Habets L., Vereijken T. Novel entrapment of living whole cells. Biotechnology anaerobic and aerobic process to meet strict effluent Letters 3, 1981, с.393. plant design requirements. Proceedings of the Budac D., Margartis A. Personal communication, 7 84536 8 Institute of Brewing (Asia Pacific Section), Окленд Hardwick W.A. Handbook of Brewing. Нью-Йорк, 148, 1997. вид-во Marcel Dekker, Inc., 1995. Dulieu C, Boivin P., Dautzenberg H., Poncelet D. Hayat M.A. Basic Electron Microscopy Immobilized enzyme system to avoid diacetyl Techniques. Торонто, вид-во van Nostrand Reinhold formation: a new tool to accelerate beer maturation. Co., 1972, с.96. International Workshop on Bioencapsulation, ПотсHeijnen J.J., van Loosdrecht M.C M., Mulder R., дам 22, 1996. Weltevrede R., Mulder A. Development and scale-up Dunbar J., Campbell S.L., Banks DJ., Warren of an aerobic biofilm air-lift suspension reactor. Water D.R. Metabolic aspects of a commercial continuous Science and Technology 27, 1993, с.253. fermentation system. Proceedings of the Convention Higbie R. The role of absorption of a pure gas of the Institute of Brewing, Брисбан 151, 1988. into a still liquid during short periods of exposure. Estapé D., Godia F., Solá C. Determination of Transactions of the American Institute of Chemical glucose and ethanol effective diffusion coefficients in Engineers 31, 1935, с.365. Ca-alginate gel. Enzyme and Microbial Technology Hines A.L,. Maddox R.N. Mass Transfer 14, 1992, с.396. Fundamentals and Applications. США, вид-во Evans H.A.V., Cleary P. Direct Measurement of Prentice-Hall, Inc., 1985. Yeast and Bacterial Viability. Hinfray C, Jouenne T., Junter G. Ethanol Journal of the Institute of Brewing 91, 1985, с.73. production from glucose by free and agar-entrapped Fan L.-S. Gas-Liquid-Solid Fluidization batch cultures of Saccharomyces cerevisiae at Engineering. Бостон, вид-во Butterworths, 1989. different oxygenation levels. Biotechnology Letters Fernandez E. Nuclear magnetic resonance 16, 1994, с.1107. spectroscopy and imaging. B: Immobilized Living Cell Hoekstra S.F. Wort composition, a review of Systems: Modelling and Experimental Methods. Тоknown and unknown facts. Proceedings of the ронто, вид-во John Wiley and Sons, розділ 6, 1996. European Brewery Convention, Ніцца, 1975, с.465. García A.I., García L.A., Día z M. Prediction of Hooijmans СМ., Ras C, Luyben K.Ch.A.M. ester production in industrial beer fermentation. Determination of oxygen profiles in biocatalyst Enzyme and Microbial Technology 16(1), 1994, с.66. particles by means of a combined polarographic Geankoplis C.J. Transport Processes and Unit oxygen microsensor. Enzyme and Microbial Operations. Нью-Джерсі, вид-во Prentice Hall P.T.R, Technology 12, 1990, с.178. 1993. Hough J.S., Briggs D.E., Stevens R., Young T.W. Gee D.A., Ramirez W.F. A flavour model for beer Metabolism of wort by yeast. B: Malting and Brewing fermentation. Journal of the Institute of Brewing 100, Science Volume 2 Hopped Wort and Beer, під ред. 1994, с.321. Hough J. S., Briggs D. E., Stevens R. і Young T. W., Geiger K.H., Compton J., канадський патент No. Лондон, Великобританія, вид-во Chapman and 545867, 1957. Hall., 1982, с.566. Gekas V.C. Artificial membranes as carriers for Hüsken L.E., Tramper J., Wijffels R. Growth and the immobilization of biocatalysts. Enzyme and eruption of gel-entrapped microcolonies. B: Progress Microbial Technology 8, 1986, с.450. in Biotechnology 11, Immobilized Cells: Basics and Gift E.A., Park H.J., Paradis G.A., Demain A.L., Applications, під ред. Wijffels R.H., Buitelaar R.M.., Weaver J.C. FACS-based isolation of slowly growing Bucke C, Tramper J., Амстердам, вид-во Elsevier cells: double encapsulation of yeast in gel Science, 1996, с.336. microdrops. Nature Biotechnology 14, 1996, с.884. Hutter KJ. Flow-cytometric analyses for Gikas P., Livingston A.G. Use of ATP to assessment of fermentative ability of various yeasts. characterize biomass viability in freely suspended and Brauwelt International 1, 1996, с.52. immobilized cell bioreactors. Biotechnology and Hwang S.-J., Fan L.-S. Some design Bioengineering 42, 1993, с.1337. consideration of a draft tube gas-liquid-solid spouted Gikas P., Livingston A.G. Viability of immobilised bed. The Chemical Engineering Journal 33, 1986, cells: use of specific ATP le vels and oxygen uptake с.49. rates. Progress in Biotechnolgy 11, Immobilized Cells: Imai T. Recent advances in the determination of Basics and Applications, Noordwijkerhout 11, 1996, yeast vitality. Proceedings of the Congress of the с.264. Institute of Brewing (Asia Pacific Section), Сінгапур Gilson CD., Thomas A. Ethanol production by 24,1996, с.60. alginate immobilised yeast in a fluidised bed Inloes D.S., Taylor D.P., Cohen S.N., Michaels bioreactor. Journal of Chemical Technology and A.S., Robertson CR. Ethanol production by Biotechnology 62, 1995, с.38. Saccharomyces cerevisiae immobilized in hollow-fiber Gódia F., Casa C, Castellano В., Solá C. membrane bioreactirs. Applied and Environmental Immobilized cells: behavior of carrageenan entrapped Microbiology 46, 1983, с.264. yeast during continuous ethanol fermentation. Applied Inoue T. Possibilities opened by "new Microbology and Biotechnology 26, 1987, с.342. biotechnology" and application of immobilized yeast Gopal CV., Hammond J.R.M. Application of to beer brewing. Reports of the Research Laboratory immobilized yeasts for fermenting beer. Brewing and ofKirin Brewery Co., Ltd., 1987, с.7. Distilling International 24, 1993, с.72. Inoue, T. A review of diacetyl control technology. Hannoun B.J.M., Stephanopoulos G. Diffusion Proceedings of the 22nd Convention of the Institute of coefficients of glucose and ethanol in cell-free and Brewing (Australia and New Zealand Section), Мельcell-occupied calcium alginate membranes. бурн, 1992, с.76. Biotechnology and Bioengineering 28, 1986, с.829. Jepsen S. Using ALDC to speed up fermentation. 9 84536 10 Brewers' Guardian., 1993, с.55. Lentini A. A re view of the various methods Jones M., Pierce J.S. Absorption of amino acids available for monitoring the physiological status of from wort by yeasts. Journal of the Institute of yeast: yeast viability and vitality. Ferment 6, 1993, Brewing 70, 1964, с.307. с.321. Jones R.P., Greenfield P.F. A review of yeast Lentini A., Takis S., Hawthorne D.B., Kavanagh ionic nutrition - Part I: growth and fermentation Т.Е. The influence of trub on fermentation and flavour requirements. Process Biochemistry 19(2), 1984, development. Proceedings of the 23 Convention of с.48. the Institute of Brewing (Asia Pacific Section), Сідней, Jones R.P., Pamment N., Greenfield P.F. Alcohol 1994, 89. fermentation by yeast - the effect of environmental Leudeking R. Fermentation process kinetics, y: and other variables. Process Biochemistry 16(3), Biochemical and Biological Engineering, під ред. 1981, с.42. Blakebrough N., Лондон, вид-во Academic Press, Kara B.V., David I., Searle B.A. Assessment of Inc., 1967, с.203. yeast quality. Proceedings of the Congress of the Leudeking R., Piret E.L. A kinetic study of the European Brewery Convention, Мадрид, 21, 1987, lactic acid fermentation. Journal of Biochemical and с.409. Microbiolial Technology and Engineering 1, 1959, Karamanev D.G. Model of the biofilm structure of с.393. Thiobacillus ferrooxidans. Journal of Biotechnology Lewandowski Z., Altobelli A., Fukushima E. NMR 10, 1991, с.51. and microelectrode studies of hydrodynamics and Karel S.F., Libicki S.B., Robertson CR. The kinetics in biofilms. Biotechnology Progress 9, 1993, immobilization of whole cells: engineering principles. с.40. Chemical Engineering Science 40, 1985, с.1321. Lewandowski Z., Stoodley P., Altobelli S. Kasten F.H. Introduction to fluorescent probes: Experimental and conceptual studies on mass properties, history and applications. B: Fluorescent transport in biofilms. Water Science Technology 31, and Luminescent Probes for Biological Activity, під 1995, c.153. ред. Mason W. T. Лондон, Великобританія, вид-во Lewis M., Young T. Brewing. Лондон, вид-во Academic Press Limited, 1993, с.12. Chapman and Hall, 1995. Klopper WJ. Wort composition, a survey. Li J., Humphrey A.E. Use of fluorometry for European Brewery Convention Monograph 1. Wort monitoring and control of a bioreactor. Biotechnology Symposium, Зейст, 1974, с.8. and Bioengineering 37, 1991, с.1043. Korgel B.A., Rotem A., Monbouquette H.G. Lim H.-S., Han B.-K., Kim J.-H., Peshwa M.V, Hu Effective diffusivity of galactose in calcium alginate W.-S. Spatial distribution of mammalian cells grown gels containing immobilized Zymomonas mobilis. on macroporous microcarriers with improved Biotechnology Progress 8, 1992, с.111. attachment kinetics. Biotechnology Progress 8, 1992, Kreger-Van Rij N. The Yeasts: A Ta xonomic с.486. Study. Амстердам, вид-во Elsevier Science Linko M., Virkajarvi I., Pohjala N. Effect of Publishers B.V., 1984. flocculation characteristics on immobilized yeast Kronlöf J., Virkajärvi I. Main fermentation with performance. European Brewery Convention Brewing immobilized yeast - pilot scale. Proceedings of the Science Group, Берлін, 1996, с.102. European Brewery Convention Brewing Science Lloyd D., Moran CA., Suller M.T.E., Dinsdale Group, Берлін, 1996, с.94. M.G. Flow cytometric monitoring of rhodamine 123 Kunze W. Technology Brewing and Malting. Берand a cyanine dye uptake by yeast during cider лін, вид-во VLB, 1996. fermentation. Journal of Institute of Brewing 102, Kuriyama H., Ishibashi H., Umeda I.M.T., 1996, с.251. Kobayashi H. Control of yeast flocculation activity in Lundberg P., Kuchel P.W. Diffusion of solutes in continuous ethanol fermentation. Journal of Chemical agarose and alginate gels: 1H and 23Na PFGSE and 23 Engineering Japan 26(4), 1993, c.429. Na TQF NMR studies. Magnetic Resonance in Kurosawa H., Matsamura M., Tanaka H. Oxygen Medicine 37, 1997, с.44. diffusivity in gel beads containing viable cells. Margaritis A., te Bokkel D.W., El Kashab M. Biotechnology and Bioengineering 34, 1989, с.926. Repeated batch fermentation of ethanol using Kurosawa H., Tanaka H. Ad vances in immobilized cells of Saccharomyces cerevisiae in a immobilized cell culture: development of a cofluidized bioreactor system. B: Biological Research on immobilized mixed culture system of aerobic and Industrial Yeasts, під ред. Stewart G.G., Russell I., anaerobic micro-organisms. Process Biochemistry Klein R.D., Hiebsch R.R., Боку Ратон, вид-во CRC International 25, 1990, с.189. Press, 1987, с.121. Kurtzman CP., Fell J.W. The Yeasts, A Margaritis A., Wallace J.B. The use of Taxonomic Study, 2-е вид., Амстердам, вид-во immobilized cells of Zymomonas mobilis in a novel Elsevier, 1998, с.361. fluidized bioreactor to produce ethanol. Biotechnology Kyung K.H., Gerhardt P. Continuous production and Bioengineering Symposium, 1982, с.147. of ethanol by yeast "immobilized" in a membraneMargaritis A., Wilke CR. The rotorfermentor. Part contained fermentor. Biotechnology and 1: description of the apparatus, power requirements, Bioengineering 26, 1984, с.252. and mass transfer characteristics. Biotechnology and Lee S.S., Robinson F.M., Wang H.Y. Rapid Bioengineering 20, 1978a, c.709. determination of yeast viability. Biotechnology and Margaritis A., Wilke CR. The rotorfermentor. Part Bioengineering Symposium No. 11, Гатлінгбург, II: application to ethanol fermentation. Biotechnology США, 1981, с.641. and Bioengineering 20, 1978b, с.727. 11 84536 12 Marrs W.M. The stability of carrageenans to Nakanishi K., Murayama H., Nagara A., Mitsui S. processing. B: Gums and Stabilizers for the Food Beer brewing using an immobilized yeast bioreactor Industry 9, Кембрідж, вид-во Royal Society of system. Bioprocess Technology 16, 1993, с.275. Chemistry, 218, 1998, с.345. Nakanishi K., Onaka T., Inoue T. A new Martens F.B., Egberts G.T.C., Kempers J., immobilized yeast reactor system for rapid production Robles de Medina M.H.L., Welton H.G. European of beer. Reports of the Research Laboratory of Kirin Brewing Convention Monograph XII, Symposium on Brewing Company, 1986, с.13. Brewing Yeast, Хельсінкі, 1986, с.339. Nakatani K., Takahashi Т., Nagami K., Kumada Masschelein C.A. Yeast metabolism and beer J. Kinetic study of vicinal diketones in brewing (I) flavour. Proceedings of the Third Aviemore formation of total vicinal diketones. MBAA Technical Conference on Malting, Brewing and Distilling, 1990, Quarterly 21(2), 1984a, с.73. с.103. Nakatani K., Takahashi T., Nagami K., Kumada Masschelein CA., Carlier A., RamosJ. Kinetic study of vicinal diketones in brewing (II) Jeunehomme C, Abe I. The effect of immobilization theoretical aspect for the formation of total vicinal on yeast physiology and beer quality in continuous diketones. MBAA Technical Quarterly 21(4), 1984b, and discontinuous systems. Proceedings of the 20th с.175. European Brewery Convention Congress, Хельсінкі, Nakatani K., Fukui N., Nagami K., Nishigaki M. 1985, с.339. Kinetic analysis of ester formation during beer Masschelein CA., Ramos-Jeunehomme C. The fermentation. Journal of the American Society of potential of alginate immobilized yeast in brewery Brewing Chemists 49(4), 1991, с.152. fermentations. Institute of Brewing Central and Narzib L., Miedaner H., Graf P., Eichhorn P., Southern African Section Proceedings of the 1st Lustig S. Technological approach to improve flavour Scientific and Technical Convention, Йоганесбург, stability. MBAA Technical Quarterly 30, 1993, с.48. 1985, с.392. Nava Saucedo J.E., Roisin C, Barbotin J.-N. Masschelein CA., Vandenbussche J. Current Complexity and heterogeneity of microenvironments outlook and future perspectives for immobilized yeast in immobilized systems. Progress in Biotechnology technology in the brewing industry. Brewers' Guardian 11, Immobilized Cells: Basics and Applications, 28(4), 1999, с.35. Noordwijkerhout, 1996, с.39. Masters B.R., Thaer A.A. Real-time scanning slit Nedovic A.N., Vunjak-Novakovc G., Leskosekconfocal microscopy of the in vivo human cornea. Cukalovic I., Cutkovic M. A study on considerably Applied Optics 33, 1994, с.695. accelerated fermentation of beer using an airlift Meilgaard M. Prediction of flavor differences bioreactor with calcium alginate entrapped yeast between beers from their chemical composition, cells. Fifth World Congress of Chemical Engineering Brygmesteren, 1982, c.5. 2, 1996, с.474. Mensour N., Margaritis A., Briens CL., Pilkington Neufeld R. J., Poncelet D. J., Norton S.D. H., Russell I. Application of immobilized yeast cells in Application for Canadian Patent No. 2133789, 1996. the brewing industry. B: Progress in Biotechnology Norton S., D'Amore T. Physiological effects of 11, Immobilized Cells: Basics and Applications під yeast cell immobilization: applications for brewing. ред. Wijffels R.H., Buitelaar R.M., Виске С, Tramper Enzyme andMicrobial Technology 16, 1994, с.365. J., Амстердам, вид-во Elsevier Science, 1996, Norton S., Watson K., D'Amore T. Ethanol с.661. tolerance of immobilized brewer's yeast cells. Applied Mensour N., Margaritis A., Briens C.L., Pilkington Microbiology and Biotechnology 43, 1995, c.18. H., Russell I. New Developments in the Brewing O'Connor-Сох E., Mochaba F.M., Lodolo E.J., Industry Using Immobilized Yeast Cell Bioreactor Majara M., Axcell B. Meth ylene blue staining: use at Systems. Journal of the Institute of Brewing 103, your own risk. MBAA Technical Quarterly 34(1), 1997, 1997, с.363. с.306. Merchant F.J.A. Diffusivity Characteristics of O'Reilly A.M., Scott J.A. Defined coimmobilization Glucose in Alginate Immobilization Matrices. Докторof mixed microorganism cultures. Enzyme and ська дисертація. Університет Західного Онтаріо Microbial Technology 17, 1995, с.636. (University of Western Ontario), 1986. Okazaki M., Hamada T., Fujji H., Mizobe A., Merchant F.J.A, Margaritis A., Wallace J.B. A Matsuzawa S. Development of poly(vinyl alcohol) novel technique for measuring solute diffusivities in hydrogel for waste water cleaning. I. Study of entrapment matrices used in immobilization. poly(vinyl alcohol) gel as a carrier for immobilizing Biotechnology and Bioengineering 30, 1987, с.936. organisms. Journal of Applied Polymer Science 58, Mochaba F.M. A no vel and practical yeast vitality 1995, с.2235. method based on magnesium ion release. Journal of Oldshue J.Y., Herbst N.R. A Guide to Fluid the Institute of Brewing 103, 1997, с.99. Mi xing. Нью-Йорк, вид-во Lightnin, 1992. Mochaba F., O'Connor-Сох E.S.C., Axcell B.C. Opekarova M., Sigler K. Acidification power: Practical procedures to measure yeast viability and indicator of metabolic activity and autolytics changes vitality prior to pitching. Journal of the American in Saccharomyces cerevisiae (yeast). Folia Society of Brewing Chemists 56(1), 1998, c.1. Microbiologia 27, 1982, с.395. Muhr A.H., Blanshard J.M.V. Diffusion in gels. Æyaas J., Storro I., Svendsen H., Levine D.W. Polymer 23, 1982, с.1012. The effective diffusion coefficient and the distribution Mulder M.H.V., Smolders CA. Continuous ethanol constant for small molecules in calcium-alginate gel production controlled by membrane processes. beads. Biotechnology and Bioengineering 47, 1995, Process Biochemistry 21, 1986, с.35. с.492. 13 84536 14 Paiva T.C.B., Sato S., Visconti A.E.S., Castro Shindo S., Sahara H., Koshino S. Suppression of L.A.B. Continuous alcoholic fermentation process in a alpha-acetolactate formation in brewing with tower reactor with recycling of flocculating yeast. immobilized yeast. Journal of the Institute of Brewing Applied Biochemistry and Biotechnology 57-58(0), 100, 1994, с.69. 1996, с.55. Smart K.A. The importance of the brewing yeast Pajunen E., Makinen V., Gisler R. Secondary cell wall. Brewers' Guardian 124(4), 1995, с.44. fermentation with immobilized yeast. European Smart K.A. Ageing in brewing yeast. Brewers' Brewery Convention Congress, Мадрид, 1987, с.441. Guardian, 1999, с.19. Parascandola P., de Alteriis E. Pattern of growth Smart K.A., Chambers K.M., Lambert I., Jenkins and respiratory activity of Saccharomyces cerevisiae C. Use of methylene violet procedures to determine (baker's yeast) cells growing entrapped in an yeast viability and vitality. Journal of the American insolubilized gelatin gel. Biotechnology and Applied Society of Brewing Chemists 57(1), 1999, с.18. Biochemistry 23, 1996, с.7. Sharpe F.R. Assessment and control of beer Perry R.H., Green D.W. Perry's Chemical flavour. Journal of the Institute of Brewing 95, 1988, Engineers' Handbook. Нью-Йорк, вид-во McGrawс.301. Hill Book Company, 1984. Stewart G.G. Fermentation - yesterday, today Pilkington P.H., Margaritis A., Mensour N.A. and tomorrow. MBAA Technical Quarterly 14, 1977, Mass transfer characteristics of immobilized cells c.1. used in fermentation processes. Critical Reviews in Stewart G.G., Russell I. The relevance of the Biotechnology 18(2 і 3), 1998a, с.237. flocculation properties of yeast in today's brewing Pilkington P.H., Margaritis A., Mensour N.A., industry. European Brewery Convention Symposium Russell I. Fundamentals of immobilized yeast cells for on Brewers' Yeast, Хельсінкі, 1986, с. 53. continuous beer fermentation: a review. Journal of the Stewart G.G., Lyness A., Younis O. The control Institute of Brewing 104, 1998b, c.19. of ester synthesis during wort fermentation. MBAA Pilkington H., Margaritis A., Mensour N., Sobczak Technical Quarterly 36(1), 1999, с.61. J., Hancock L, Russell I. Kappa-carrageenan gel Takahashi S. і Kimura Y. Effect of main immobilization of lager brewing yeast. Journal of the fermentation parameters on stale flavour. Brauwelt Institute of Brewing 105(6), 1999, с.398. International 14 (3), 1996, с.253. Poison A. Some aspects of diffusion in solution Taylor D.G. Influence of brewhouse practice on and a definition of a colloidal particle. Journal of wort composition. Brewer's Guardian 118(2), Physical and Colloidal Chemistry 54, 1950, с.649. 1989,с.30. Technical Committee and Editorial Committee of Power D.A., McCuen P.J. Manual of BBLÒ Products and Laboratory Procedures, 6-е вид. the American Society of Brewing Chemists (ASBC). Methods of Analysis. 8-е вид., Міннесота, вид-во Maryland: Becton Dickinson Microbiology Systems ASBC, 1992. 249, 1988. Uttamlal M., Walt D.R. A fiber-optic carbon Priest F.G., Campbell I. Brewing Microbiology 2-е dioxide sensor for fermentation monitoring. вид., Великобританія, вид-во Chapman and Hall, 1996. Biotechnology 13, 1995, с.597. Venancio A., Teixeira J.A. Characterization of Rees D. A. Polysaccharide gels: a molecular sugar diffusion coefficients in alginate membranes. view. Chemistry and Industry 19, 1972, с.630. Biotechnology Techniques 11, 1997, с.183. Roca E., Camesselle C, Nunez M. Continuous Vilacha C, Uhlig K. The measurement of low ethanolic fermentation by Saccharomyces cerevisiae immobilised in Ca-alginate beads hardened with Al 3+. levels of oxygen in bottled beer. Brauwelt International, 1985, с.70. Biotechnology Letters 9, 1995, с.815. Virkajärvi L, Kronlöf J., Long-term stability of Roukas T. Continuous ethanol production from immobilized yeast columns in primary fermentation. carob pod extract by immobilized Saccharomyces Journal of the American Society of Brewing Chemists cerevisiae in a packed-bed reactor. Journal of Chemical Technology and Biotechnology 59, 1994, 56(2), 1998, с.70. Vi ves C, Casas C, Gòdia F., Solá C. с.387. Determination of the intrinsic fermentation kinetics of Russell I., Stewart G.G. Contribution of yeast and Saccharomyces cerevisiae cells immobilized in immobilization technology to flavour development in calcium alginate beads and observation on their fermented beverages. Food Technology, 1992, с.148. Ryder D.S. The growth process of brewing yeast growth. Applied Microbiology and Biotechnology 38, 1993, с.467. and the biotechnological challenge. MBAA Technical Wada M., Kato J., Chibata I. A new Quarterly 22, 1985, с.124. immobilization of microbial cells. European Journal of Ryu D.D., Kim YJ., Kim J.H. Effect of air Applied Microbiology and Biotechnology 8, 1979, supplement on the performance of continuous ethanol fermentation system. Biotechnology and с.241. Wang H.Y., Lee S.S., Takach Y., Cawthon L. Bioengineering 26, 1984, с.12. Ma ximizing microbial cell loading in immobilized-cell Salmon P.M., Robertson CR. Mass transfer systems. Biotechnology and Bioengineering Symp. limitations in gel beads containing growing No. 12, 1982, с.139. immobilized cells. Journal of Theoretical Biology 125, 1987, с.325. Westrin B.A., Axelsson A. Diffusion in gels containing immobilized cells: a critical review. Schumpe A., Quicker G., Deckwer W.-D. Gas Biotechnology and Bioengineering 38, 1991, с.439. solubilities in microbial culture media. Advances in Wheatcroft R., Lim Y.M., Hawthorne D.B., Clarke Biochemical Engineering 24, 1982, с.1. 15 84536 16 B.J., Kavanagh Т.Е. An assessment of the use of International Brewing Technology Conference, Харspecific oxygen uptake measurements to predict the рогат, 1996b, с.380. fermentaion performance of brewing yeasts. The Andries, M., Van Beveren, P.C., Goffin, O., Institute of Brewing (Australia and New Zealand Rajotte, P. & Masschlein, C.A., 1997b. Practical Section) Proceedings of the Twentieth Convention, Results Using the Meura-Delta Immobilized Yeast Брінсбан, 1988, с.193. Fermentation System. Brewers' Guardian, 26. White F.H., Portno A.D. Continuous fermentation Andries M., Van Beveren P.C, Goffin O., Rajotte by immobilized brewers yeast. Journal of the Institute P. і Masschlein CA., First Results on Semi-Industrial of Brewing 84, 1978, с.228. Continuous Fermentation with the Meura-Delta Wijffels R.H., de Gooijer CD., Schepers A.W., Immobilized Yeast Fermentor. Master Brewers Tramper J. Immobilized-cell growth: diffusion Association of the Americas Technical Quarterly, 34, limitation in expanding micro-colonies. B: Progress in 1997c, c.119. Biotechnology II, Immobilized Cells: Basics and Argiriou T., Kanellaki M., Voliotis S. і Koutinas Applications, під ред. Wijffels R.H., Buitelaar R.M., A.A., Kissiris-Supported Yeast Cells: High Biocatalyic Виске С, Tramper J., Амстердам, вид-во Elsevier Stability and Productivity Improvement by Successive Science, 1996, с.249. Preservatives at 0°С. Journal of Agriculture and Food Wijffels R.H., Englund G., Hunik J.H., Leenen Chemistry, 44, 1996, с.4028. J.T.M., Bakketun А. і ін. Effects of diffusion limitation Audet P. і Lacroix C, Two Phase Dispersion on immobilized nitrifying microorganisms at low Process for the Production of Biopolymer Gel Beads: temperatures. Biotechnology and Bioengineering 45, Effects of Barious Parameters on Bead Size and their 1995, с.1. Distribution. Process Biochemistry, 24, 1989, с.217. Ai vasidis A., Another Look at Immobilized Yeast Axelsson А. і Persson В., Determination of Systems. Cerevisia Belgian Journal of Brewing & Effective Diffusion Coefficients in Calcium Alginate Biotechnology, 21, 1996, с.27. Gel Plates with Varying Yeast Cell Content. Applied Ai vasidis A., Wandrey C, EiIs H.-G. і Katzke, M., Biochemistry and Biotechnology, 18, 1988, с.231. Continuous Fermentation of Alcohol-Free Beer with Bardi E.P., Koutinas A.A., Soupioni M.J. і Immobilized Yeast in Fluidized Bed Reactors. Kanellaki M.E., Immobilization of Yeast on Delignified Proceedings of the European Brewery Convention Cellulosic Material for Low Temperature Brewing. Congress, Лісабон, 1991, с.569. Journal of Agriculture and Food Chemistry, 44, 1996, Aki yama-Jibiki M., Ishibiki Т., Yamashita H. і Eto с.463. M., A Rapid and Simple Assay to Measure Berkman P. D. і Calabrese R. V., Dispersion of Flocculation in Brewer's Yeast. Master Brewers of the Viscous Liquids by Turbulent Flow in a Static Mixer. Americas Technical Quarterly, 34, 1997, с.278. American Institute of Chemical Engineering Journal. Alfa Laval Brewery Systems, Immobilized Yeast 34, 1988, с.602. System Reduces Maturation Time. Brewers' Borremans E., Secondary Fermentation of Beer Guardian, 126, 1997, с.26. with Immobilized Yeast. Cerevisia Belgian Journal of Alfa Laval Brewery Systems, Continuous Brewing & Biotechnology, 22, 1997, с.33. Maturation of Beer with Immobilized Yeast, Company Bower J.L. і Christensen С.М., Disruptive Report, 1996. Technologies: Catching the Wave. Harvard Business Al Taweel A.M. і Walker L.D. Liquid Dispersion in Review, 73, 1995, с.43. Static In-line Mixers. Canadian Journal of Chemical Breitenbucher K. і Mistier M., Fluidized Bed Engineering, 61, 1983, с.527. Fermenters for the Continuous Production of NonAndries M., Derdelinckx G., lone K.G., Delvaux Alcoholic Beer with Open-Pore Sintered Glass F., van Beveren P.C. і Masschelein CA., Zeolites as Carriers. European Brewery Convention Symposium: Catalysts for the Cold and Direct Conversion of Immobilized Yeast Applications in the Brewing Acetolactate into Acetoin. Proceedings of the Industry, Эсро, Фінляндія, 1995, с.77. European Brewery Convention Congress, Маастріхт, Brewers Association of Canada, About Beer And 1997а, постер 48. The Brewing Industry, Оттава, провінція Онтаріо, Andries M., Van Beveren P.C, Goffm O. і 1988. Masschelein CA. Design of a Multi-Purpose Broderick Harold M., The Practical Brewer: A Immobilized Yeast Bioreactor System for Application Manual for the Brewing Industry, 2-е вид., вид-во in the Brewing Process. European Brewery Impressions Inc., Вісконсин, 1979. Convention Symposium: Immobilized Yeast Burns J.A., Journal of the Institute of Brewing, Applications in the Brewing Industry, Ecno, Фінлян43,1937, с.31. дія, 1995, с.134. Calleja G.B. і Johnson B.F., A Comparison of Andries M., Van Beveren P.C, Goffin O. і Quantitative Methods for Measuring Yeast Masschelein CA., Design and Application of an Flocculation. Canadian Journal of Microbiology, 23, Immobilized Loop Bioreactor for Continuous Beer 1977, с.68. Fermentation, у Immobilized Cells: Basics and Carberry J.J., Chemical and Catalytic Reaction Applications, (під ред. R.H. Wijffels, R.M. Buitelaar, Engineering, вид-во McGraw-Hill, 1976. C. Bucke і J. Tramper.), Амстердам, вид-во Elsevier Carberry J.J. і Varma A., Chemical Reaction and Science, 1996a., с.672. Reactor Engineering, вид-во Marcel Dekker Inc., Andries M., Van Beveren P.C, Goffin O., Rajotte Нью-Йорк, 1987. P. I Masschlein CA., Design and Applications of an Cashin M.-M., Comparative Studies of Five Immobilized Loop Bioreactor to the Continuous Porous Supports for Yeast Immobilization by Fermentation of Beer. Proceedings of the 6 th Adsorption/Attachment. Journal of the Institute of 17 84536 18 Brewing, 102, 1996, c.5. Association of the Americas Technical Quarterly, 36, Champagne C.P., Overview: Immobilized Cell 1998, с.183. Technology in Food Processing. Proceedings of the Dulieu C, Boivin P., Malanda M., Dautzenberg H. Bioencapsulation Research Group IV, Квебек, Канаі Poncelet D., Encapsulation of a-Acetolactate да, 1994, с.33. Decarboxylase to Avoid Diacetyl Formation. Chang С.М., Lu W.J., Own K.S. і Hwang, S.J., Proceedings of the European Brewery Convention Comparison of Airlift and Stirred Tank Reactors for Congress, Маастріхт, 1997, постер 44. Immobilized Enzyme Reactions. Process Duncombe D., Bower P., Bromberg S., Fehring Biochemistry, 29, 1994, с.133. J., Lau V. і Tata M., The Contribution of Free Cells in Chao X., Ye G. і Shi S., Kinetic Study of the an Immobilized Yeast System. Journal of the Continuous Fermentative Process of Green Beer American Society of Brewing Chemists, 1996, презеProduction with Immobilized Yeast. Huagong Jixie, нтація у вигляді постера. 17, 1990, с.18. Dziondziak K. і Seiffert Т., Process for the Chibata I., Immobilized Microbial cells with Continuous Production of Alcohol-Free Beer. Polyacrylamide Gel and carrageenan and their Proceedings of the European Brewery Convention Industrial Applications. American Chemical Society Congress, Брюссель, 1995, с.301. Series, 106, 1979, с.187. Enari T.-M., Sta te of the Art of Brewing Research. Chisti M.Y., Airlift Bioreactors, вид-во Elsevier Proceedings of the European Brewery Convention Applied Science, Нью-Йорк, 1991. Congress, Брюссель, 1995, с.1. Chisti Y. і Moo-Young M., Improve the Fix G., Principles of Brewing Science. Brewers Performance of Airlift Reactors. Chemical Publications, USA, 1989. Engineering Progress, 6, 1993, с.38. Fouhy K. і Parkinson G., Brewers Break with Chladek L., Voborsky J., Sima J. і Hosek Z., Tradition. Chemical Engineering, 103, 1996, с.45. Prumysl Potravin, 40, 1989, с.590. Gil G.H., Continuous Ethanol Production in a Сое H.S. і Clevenger G.H., Methods for Two-Stage, Immobilized and Suspended Cell Determining the Capacities of Slime Thickening Bioreactor (Alcohol Dehydrogenase). Докторська Tanks. Transcripst of the American Institute of дисертація, Технологічний інститут Джорджії Mechanical Engineering, 55, 1916, с.356. (Georgia Institute of Technology), 1991. Curin J., Pardonova B., Polednikova M., Sedova Gilliland R.B., The Flocculation Characteristics of H. і Kahler M., Beer Production with Immobilized Brewing Yeasts During Fermentation. Proceedings of Yeast. Proceedings of the European Brewery the European Brewing Convention, 8, 1951, с.35. Convention, Мадрид, 1987, с.433. Groboillot A., D.K. Boadi D. Poncelet і Neufeld Decamps C. і Norton S., New Emulsion Process R.J., Immobilization of Cells for Application in the using Static Mixer for the Production of к-carrageenan Food Industry. Critical Reviews in Biotechnology, 14, Gel Beads. Labatt Breweries of Canada Internal 1994, с.75. Report, 1994. Haikara A., Virkajarvi I., Kronlof J. і Pajunen E., Del Pozo M., Briens C.L. і Wild G., Effect of Microbial Contaminations in Immobilized Yeast Liquid Coalescing Properties on Mass Transfer, Heat Bioreactors for Primary Fermentations. Proceedings Transfer and Hydrodynamics in a Three-Phase of the European Brewery Convention Congress, Fluidized Bed. The Chemical Engineering Journal 55, 1997, с.439. 1994, с.1. Heggart H.M., Margaritis A., Pilkington H., Dillenhofer W. і Ronn D., Alfa Laval/Schott Stewart R.J., Dowhanick T.M. і Russell I., Factors System of Secondary Fermentation with Immobilized Affecting Yeast Viability and Vitality Characteristics: A Yeast. Brewing & Distilling International, 27, 1996a, Review. Master Brewers Association of the Americas с.35. Technical Quarterly, 36, 1999, с.383. Dillenhofer W. і Rorm D., Secondary Heijnen JJ., Mulder A., Enger W. і Hoeks F., Fermentation of Beer With Immobilized Yeast. Review on the Application of Anaerobic Fluidized Bed Brauwelt International, 14, 1996б, с.344. Reactors in Waste-Water Treatment. The Chemical Dillenhoffer W. і Ronn D., Continuous Maturation Engineering Journal, 41, 1989, B 37. of Beer. Beverage World International, 1996y, c.34. Heijnen JJ., Mulder A., Weltevrede R., Hols J. і Domeny Z., Smogrovicova D., Gemeiner P., van Leeuwen H.L.J.M., Large Scale AnaerobicMalovikova А. і Sturdik E., Calcium Pectate Gel to Aerobic Treatment of Complex Industrial WasteImmobilize Yeast for Continuous Beer Production. Water Using Biofilm Reactors. Water Science Proceedings of the Bioencapsulation Research Group Technology, 23, 1991, с.1427. V, Потсдам, Німеччина, 1996, постер 12. Heijnen JJ., Van Loosdrecht M.C.M., Mulder Domingues L., Lima N. і Teixeira J.A., R.W.R. і Mulder A., De velopment and Scale-Up of an Contamination of a High-Cell-Density Continuous Aerobic Biofilm Air-Lift Suspension Reactor. Water Bioreactor. Biotechnology and Bioengineering, 68, Science Technology, 27, 1993, с.253. 2000, с.584. Helm E., Nohr В. і Thorne R.S.W., The Donnelly D., Kinetics of Sugar Metabolism in a Measurement of Yeast Flocculence and its Fluidized Bed Bioreactor for Beer Production. Master Significance in Brewing. Wallerstein Laboratories Brewers Association of the Americas Annual Communications, 16, 1953, с.315. Convention, Мінеаполіс, 1998, постер 8. Horitsu H., Wang M.Y. і Kawai K., A Modified Donnelly D., Bergin J., Gardiner S. і Cahill G., Process for Soy Sauce Fermentation by Immobilized Kinetics of Sugar Metabolism in a Fluidized Bed Yeasts. Agricultural and Biological Chemistry, 55, Bioreactor for Beer Production. Master Brewers 1991, с.269. 19 84536 20 Hryclik Kevin, Gerry Ginter, Jim Helmke і Jim Fermentation with a Two-Stage Packed Bed System Spiers, The How's And Why's of Brewing, Revision Pilot Scale Experiences. European Brewery #2, LBOC, 1987. Convention Symposium: Immobilized Yeast Hunik J.H., Tramper J. і Wijffels R.H., A Strateg y Applications in the Brewing Industry, Еспо, Фінлянto Scale Up Nitrification Processes with Immobilized дія, 1995, с.118. Cells of Nitrosomonas europaea and Nitrobacter Kronlof J. і Virkajarvi I., Main Fermentation with agilis. Bioprocess Engineering, 11, 1994, с.73. Immobilized Yeast - Pilot Scale European Brewery Hwang S.-J. і Fan L.-S., Some Design Convention Brewing Science Group Bulletin, Considerations of a Draft Tube Gas-Liquid-Solid Zoeterwoude, 1996, с.94. Spouted Bed. The Chemical Engineering Journal, 33, Kronlof J., Virkajarvi I., Storgards E.L., 1986, с.49. Londesborough J. і Dymond G., Combined Primary Hyttinen L, Kronlof J. і Hartwall P., Use of Porous and Secondary Fermentation with Immobilized Yeast. Glass at Hartwall Brewery in the Maturation of Beer World Brewing Congress, 2000, постер №56. with Immobilized Yeast. European Brewery Ku W.Y., Fermentation Kinetics for the Convention Symposium: Immobilized Yeast Production of Ethanol by Immobilized Yeast Cells Applications in the Brewing Industry, Еспо, Фінлян(Biomass). Докторська дисертація, The Louisiana дія, 1995, с.55. State University and Agricultural and Mechanical Ibrahim Y.A.A., Briens CL., Margaritis А. і College, 1982. Bergougnou M.A., H ydrodynamic Characteristics of a Kunze W., Technology Brewing and Malting. Three-Phase Inverse Fluidized Bed Column. Journal Вид-во VLB, Берлін, Німеччина, 1999. Kynch GJ., of the American Institute of Chemical Engineering, 42, Transcripts of the Faraday Society, 48, 1952, с.166. 1996, с.1889. Lacroix C, Paquin C. і Arnaud J.P., Batch Inoue Т., Development of a Two-Stage Fermentation with Entrapped Growing Cells of Immobilized Yeast Fermentation System for Lactobacillus casei: Optimization of the Rheological Continuous Beer Brewing. Proceedings of the Properties of the Entrapment Gel Matrix. Applied European Brewery Convention Congress, Брюссель, Microbiology and Biotechnology, 32, 1990, с.403. 1995, с.25. Levenspiel O., Chemical Reaction Engineering., Iserentant D., Beers: Recent Technological вид-во John Wiley & Sons, Нью-Йорк, 1972. Innovations in Brewing. Fermented Beverage Linko M., Virkajarvi I., Pohjala N., Lindborg K., Production, (під ред. A.G.H. Lea і J.R. Piggott) ЛонKronlof J. і Pajunen E., Main Fermentation with дон, вид-во Chapman & Hall, 1995, с.45. Immobilized Yeast - A Breakthrough? Proceedings of Kaplan R.S. і Norton D.P., The Balanced the European Brewery Convention, Маастріхт, 1997, Scorecard. President and Fellows of Harvard College, с.385. вид-во Harvard Business School Press, Масачусетс, Livingston A.G. і Chase H.A., Liquid-Solid Mass США, 1996. Transfer in a Three Phase Draft Tube Fluidized Bed Karamanev D.G., Nagamune T. і Endo I., Reactor. Chemical Engineering Communications, 92, Hydrodynamic and Mass Transfer Study of a Gas1990, с.225. Liquid-Solid Draft Tube Spouted Bed Bioreactor. Livingston A.G. і Zhang S.F., Hydrodynamic Chemical Engineering Science, 47, 1992, c.3581. Behaviour of Three-Phase (Gas-Liquid-Solid) Airlift Karel S.F., Libicki S.B. і Robertson C.R., The Reactors. Chemical Engineering Science, 48, 1993, Immobilization of Whole Cells: Engineering Principles. с.1641. Chemical Engineering Science, 40, 1985, с.1321. Lommi H., Immobilized Yeast for Maturation and Katzbauer B., Narodoslawsky M. і Moser A., Alcohol-Free Beer. Brewing and Distilling Classification System for Immobilization Techniques. International, 21,1990, с.23. Bioprocess Engineering, 12, 1995, с.173. Lommi H., Gronqvist А. і Pajunen E., Immobilized Kennard M. і Janekeh M., Two- and Three-Phase Yeast Reactor Speeds Beer Production. Food Mi xing in a Concentric Draft Tube Gas-Lift Fermentor. Technology, 5, 1990, с.128. Biotechnology and Bioengineering, 38, 1991, с.1261. Lorenzen K., Immobilized Yeast Plants for Kolot F.B., Immobilized Microbial Systems: Alcohol-Free Beer Production and Rapid Maturation. Principles, Techniques and Industrial Applications, Proceedings of the Institute of Brewing Convention, вид-во Robert E. Krieger Publishing Company, ФлоСінгапур, 1996, с.244. ріда, 1988. Maeba H., Umemoto S., Sato M. і Shinotsuka K., Kolpachki A.P., Isaeva V.S., Ka zantsev E.N. і Primary Fermentation with Yeast Immobilized in Fertman G.I., Intensification of Wort Fermentation Porous Chitosan Beads - Pilot Scale Trial. with Immobilized Yeasts. Fermentnaya l Spirtovaya Proceedings of the 26і Convention of the Institute of Promyshlennost, 1980, c.9. Brewing - Asia Pacific Section, 2000, с.82. Krikilion Ph., Andries M., Goffin O., van Beveren Mafra L, Machado Cruz J.M. і Teixeira J.A., Beer P.C. і Masschelein CA., Optimal Matrix and Reactor Maturation in a Continuously Operating Bioreactor Design for High Gravity Fermentation with using a Flocculating Brewer's Yeast Strain. Immobilized Yeast. Proceedings of the European Proceedings of the European Brewery Convention, Brewery Convention Congress, Брюссель, 1995, 1997, с.509. с.419. Maiorella B.L., Fermentative Ethanol Production Kronlof J., Immobilized Yeast in Continuous (Alcohol, Distillation, Economics). Докторська дисерFermentation of Beer, докторська дисертація, VTT тація, Каліфорнійський університет, Берклі, 1983. Publications, 1994, c.167. Margaritis A., A Study of the Rotorfermentor and Kronlof J., Linko M. і Pajunen E., Primary the Kinetics of Ethanol Fermentation. Докторська 21 84536 22 дисертація, Каліфорнійський університет, Берклі, M., A Kinetic Study on Continuous Sake 1975. Fermentation. Hakkokogaku Kaishi, 69, 1991, c.345. Margaritis A. і Bajpai P., Continuous Ethanol McCabe J.T., The Practical Brewer: A Manual for Production from Jerusalem Artichoke Tubers, Part I. the Brewing Industry. Master Brewers Association of Use of Free Cells of Kluyveromyces marxianus. the Americas, USA, 1999. Biotechnology and Bioengineering, 24, 1982a, Mensour, N.A., Margaritis, A., Briens, C.L., с.1473. Pilkington, H. & Russell, I., 1997. New Developments Margaritis А. і Bajpai P., Continuous Ethanol in the Brewing Industry Using Immobilized Yeast Cell Production from Jerusalem Artichoke Tubers, Part II. Bioreactor Systems. Journal of the Institute of Use of Immobilized Cells of Kluyveromyces Brewing, 103, 363. marxianus. Biotechnology and Bioengineering, 24, Mensour N.A., Margaritis A., Briens C.L., 1982b, с.1483. Pilkington H. і Russell, I., Application of Immobilized Margaritis А. і Merchant F., Ad vances in Ethanol Yeast Cells in the Brewing Industry. Immobilized Production Using Immobilized Cell Systems. Critical Cells: Basics and Applications. (під ред. R.H. Wijffels, Reviews in Biotechnology, 1, 1984, с.339. R.M. Buitelaar, C Bucke і J. Tramper) Амстердам, Margaritis А. і Rowe G.E., Ethanol Production вид-во Elsevier Science, 1996, с.661. Using Zymomonas mobilis Immobilized in Different Mensour N., Margaritis A., Briens C.L., Pilkington Carrageenan Gels. Developments in Industrial H. і Russell I., Gas Lift Systems for Immobilized Cell Microbiology, 24, 1983, с.329. Fermentation. European Brewery Convention Margaritis A., te Bokkel D. і El Kashab M., Symposium: Immobilized Yeast Applications in the Repeated Batch Fermentation of Ethanol Using Brewing Industry, Еспо, Фінляндія, 1995, с.125. Immobilized Cells of Saccharomyces cerevisiae in a Mensour N., Margaritis A., Russell I., Briens C.L., Fluidized Bioreactor Systesm. Biological Research on Decamps C. і Norton S., Beer Production with Industrial Yeasts, том І (під ред. G.G. Stewart, I. Immobilized Yeast Cells in a Pilot Plant Scale Airlift Russell, R.D. Klein і R.R. Hiebsch), Боку Ратон, видReactor. Proceedings of the Bioencapsulation во CRC Press, 1987, с.121. Research Group IV, Квебек, Канада, 1994, с.49. Margaritis A. і Wallace J.B., The Use of Middleman S., Drop Size Distributions Produced Immobilized Cells of Zymomonas mobilis in a Novel by Turbulent Pipe Flow of Immiscible Fluids Through Fluidized Bioreactor to Produce Ethanol. Fourth a Static Mixer. Industrial Engineering and Chemical Symposium on Biotechnology in Energy Production Process Design and Development, 13, 1974, с.78. and Conservation, Гатлінбург, Теннесі, 12, 1982, Mieth H.O., Immobilized Yeast Plants for Alcohol с.147. Free Beer Production and Rapid Maturation. Margaritis А. і Wallace J.B., Novel Bioreactor Proceedings of the Institute of Brewing Convention, Systems and their Applications. Bio/Technology, 2, Victoria Falls, 1995, с.166. 1984, с.447. Mistier M., Breitenbücher K. і Jaeger R., Margaritis A. Wilke CR., The Rotorfermentor. Part Continuous Fermentation of Beer with Yeast I: Description of the Apparatus, Power Requirements, Immobilized on Porous Glass Carriers. Brewers and Mass Transfer Characteristics. Biotechnology & Digest, 70, 1995, с.48. Bioengineering, 20, 1978a, с.709. Moll M. і Duteurtre В., Fermentation and Margaritis А. і Wilke CR., The Rotorfermentor: Maturation of Beer with Immobilized Microorganisms. Part II: Application to Ethanol Fermentation. Brauwelt International, 3, 1996, с.248. Biotechnology & Bioengineering, 20, 1978b, с.727. Motai H., Hamada T. і Fukushima Y., Application Masschelein C.A., A Realistic View on the Role of of a Bioreactor System to Soy Sauce Production, in Research in the Brewing Industry Today. Journal of Industrial Application of Immobilized Biocatalysts. (під the Institute of Brewing, 103, 1997, с.103. ред. A. Tanaka, T. Tosa і T. Kobayashi), Нью-Йорк, Masschelein CA., State-of-the-Art and Future вид-во Marcel Dekker, 1993, с.315. Developments in Fermentation. Journal of the Muhr А.Н. і Blanchard M.V., Diffusion in Gels. American Society of Brewing Chemists, 52, 1994, с.1. Polymer, 23, 1982, с.1012. Masschelein CA. і Andries M., The Meura-Delta Mwesigye P.K. і Barford J.P., Transport of Immobilised Yeast Fermenter for the Continuous Sucrose by Saccharomyces cerevisiae. Journal of Production of Beer. Cerevisia Belgian Journal of Fermentation and Bioengineering, 11, 1994, с.687. Brewing & Biotechnology, 21, 1996a, с.28. Nakanishi K., Murayama H., Nagara А. і Mitsui Masschelein C.A. і Andries M., Meura-Delta's S., Beer Brewing Using an Immobilized Yeast Immobilized Yeast Fermenter for Continuous Beer Bioreactor System. B: Industrial Applications of Production. Brewing & Distilling International, 27, Immobilized Biocatalysts. (під ред. A. Tanaka, T. 1996b, с.16. Tosa і T. Kobayashi), Нью-Йорк, вид-во Marcel Masschelein C.A., Andries M., Franken F., Van Dekker, 1993, с.275. de Winkel L. і Van Beveren P.C, The Membrane Loop Nakanishi K., Onaka T., Inoue T. і Kubo S., A Concept: A New Approach for Optimal Oxygen New Immobilized Yeast Reactor System for Rapid Transfer into High Cell Density Pitching Yeast Production of Beer. Proceedings of the 20th Suspensions. Proceedings of the European Brewery European Brewing Convention Congress, Хельсінкі, Convention Congress, Brussels, 1995, c.377. 1985, с.331. Masschelein CA., Ryder D.S. і Simon J-P., Nakatani K., Takahashi Т., Nagami K. і Kumada Immobilized Cell Technology in Beer Production. J., Kinetic Study of Vicinal Diketones in Brewing (I) Critical Reviews in Biotechnology, 14, 1994, с.155. Formation of Total Vicinal Diketones. Master Brewers Matsuura K., Hirotsune M., Nakada F. і Hamachi Association of the Americas Technical Committee, 23 84536 24 21, 1984, с.73. Immobilized Yeast Reactor. MBAA Technical Nedovic V.A., Leskosek-Cukalovic I. і VunjakQuarterly, 26, 1989, с.147. Novaki G., Short-Time Fermentation of Beer in an Pajunen E., Gronqvist A., Simonsen В. і Lommi Immobilization Yeast Air-Lift Bioreactor. Proceedings H., Immobilized Yeast Fermenters for Continuous of the Institute of Brewing Convention, Singapore, Lager Beer Maturation. ALAFACE Annual Meeting, 1996a, с.244. Кіото, 1994, с.13. Nedovic V.A., Vunjak-Novakovic G., LeskosekPajunen E., Ranta В., Andersen K., Lommi H., Cukalovic I. і Cutkovic M., A Stud y on Considerably Viljava T., Bergin J. і Guercia H., Novel Process for Accelerated Fermentation of Beer Using an Airlift Beer Fermentation with Immobilized Yeast Bioreactor with Calcium Alginate Entrapped Yeast Proceedings of the 26 Convention of the Institute of Cells. Proceedings of the 5th World Congress of Brewing, Asia-Pacific Section, 2000a, с.91. Chemical Engineering, San Diego, 1996b, с.474. Pajunen E., Viljava T. і Lommi H., Novel Primary Neufeld RJ., Norton S. і Poncelet D.J.С.М., Fermentation with Immobilzied Yeast System. World Immobilized-Cell Carrageenan Bead Production and Brewing Congress, усне повідомлення, 2000b. a Brewing Process Utilizing Carrageenan Bead Paul F. і Vignais P.M., Photophosphorylation in Immobilized Yeast Cells. Заявка на канадський паBacterial Chromatophores Entrapped in Alginate Gel: тент 2133789, 1994. Improvement of the Physical and Biochemical Nguyen A.L. і Luong J.H.T., Diffusion in kProperties of Gel Beads with Barium as Gel-Inducing Carrageenan Gel Beads. Biotechnology and Agent. Enzyme and Microbial Technology, 2, 1980, Bioengineering, 28, 1986, c.1261. с.281. Nielsen J. і Villadsen J., Bioreactor Modeling. Peach M., Fermenting Faster Pints. New Bioreaction Engineering Principles, вид-во Plenum Scientist, 2058, 1996, с.23. Press, Нью-Йорк, 1994, с.9. Pilkington, P.H, Margaritis, A. & Mensour, N.A., Norton S. і D'Amore Т., Ph ysiological Effects of 1998a. Mass Transfer Characteristics of Immobilized Yeast Cell Immobilization: Applications for Brewing. Cells Used in Fermentation Processes. Critical Enzyme and Microbial Technology, 16, 1994, с.365. Reviews in Biotechnology, 18, 237. Norton S., Neufeld R.J. і Poncelet D.J.C.M., Pilkington P.H., Margaritis A., Mensour N.A. і Immobilized-Cell Carrageenan Bead Production and Russell L, Fundamentals of Immobilized Yeast Cells a Brewing Process Utilizing Carrageenan Bead for Continuous Beer Fermentation: A Review. Journal Immobilized Yeast Cells. Заявка на канадський паof the Institute of Brewing, 104, 1998b, с.19. тент 2133789, 1994. Pilkington H., Margaritis A., Mensour N., Sobczak Norton S., Mensour N., Margaritis A., Briens CL., J., Hancock I. і Russell I., Kappa-Carrageenan Gel Decamps C і Russell I., Pilot Scale Primary Immobilization of Lager Brewing Yeast. Journal of the Fermentation of Beer with a Gaslift Immobilized Yeast Institute of Brewing, 105, 1999, с.398. Reactor. Proceedings of the European Brewing Pirt S.J., Principles of Microbe and Cell Convention, Sub-Committee, Дублін, 1994. Cultivation, вид-во Blackwell Scientific, Оксфорд, Norton S., Watson K. і D'Amore T., Ethanol 1975. Tolerance of Immobilized Brewers' Yeast Cells. Pittner H. і Back W., Continuous Production of Applied Microbiology & Biotechnology, 43, 1995, с.18. Acidified Wort for Alcohol Free Beer Using Nothaft A., The Start-Up of an Immobilized Yeast Immobilized Lactic Acid Bacteria. Master Brewers System for Secondary Fermentation at Brahma. Association of the Americas TechnicalQuarterly, 32, European Brewery Convention Symposium: 1995, c.163. Immobilized Yeast Applications in the Brewing Pittner H., W. Back, W. Swinkels, E. Meersman, Industry, Еспо, Фінляндія, 1995, с.41. B. van Dieren і Lommi H., Continuous Production of Nunokawa Y. і Hirotsune M., Production of Soft Acidified Wort for Alcohol-Free Beer Using Sake by an Immobilized Yeast Reactor System, у Immobilized Lactic Acid Bacteria. Proceedings of the Industrial Application of Immobilized Biocatalysts. (під 24th European Brewing Convention Congress, Осло, ред. A. Tanaka, T. Tosa і Т. Kobayashi), Нью-Йорк, 1993, с.323. вид-во Marcel Dekker, 1993, с.235. Polednikova M., Sedova H. і Kahler M., Pajunen E., The Behaviour of Immobilized Yeast Immobilized Brewing Yeast. Kvasny Prumysl, 27, Cells. Cerevisia Belgian Journal of Brewing & 1981, с.193. Biotechnology, 21, 1996a, с.33. Poncelet D., Lencki R., Beaulieu C, Halle J, P., Pajunen E., Immobilized System in the Brewing Neufeld R. J. і Fournier A., Production of Alginate Industry. Proceedings of the Institute of Brewing Beads by Emulsification/Internal Gelation. Applied Convention, Сінгапур, 1996b, с.38. Microbiology & Biotechnology, 38, 1992, с.39. Pajunen E., Immobilized Yeast Lager Beer Poncelet D., Poncelet de Smet B., Beaulieu C. і Maturation: DEAE-Cellulose at Sinebrychoff. Neufeld R. J., Scale Up of Gel Bead and European Brewery Convention SymposiumMicrocapsule Production in Cell Immobilization, in Immobilized Yeast Applications in the Brewing Fundamentals of Animal Cell Encapsulation and Industry, Еспо, Фінляндія, 1995, с.24. Immobilization, під ред. Goosen M.F.A., вид-во CRC Pajunen E. і Gronqvist A., Immobilized Yeast Press Inc., Боку Ратон, Флоріда, 1993. Fermenters for Continuous Lager Beer Maturation. Prakash A., Briens C.L. і Bergougnou M.A., Mass Proceedings for the Institute of Brewing Convention, Transfer Between Solid Particles and Liquid in a Сідней, 1994, с.101. Three Phase Fluidized Bed. The Canadian Journal of Pajunen E., A. Gronqvist і Lommi H., Continuous Chemical Engineering, 65, 1987, с.228. Secondary Fermentation and Maturation of Beer in an Prasad K.Y. і Ramanujam Т.K., Overall 25 84536 26 Volumetric Mass Transfer Coefficient in a Modified Stewart G.G., Brewing Technology for the Future. Reversed Flow Jet Loop Bioreactor with Low Density The Brewer, 82, 1996, с.348. Particles. Bioprocess Engineering, 12, 1995, с.214. Stewart G.G. і Russell L, Brewer's Yeast. The Pritchett, Price. Culture Shift. Те хас, вид-во Institute of Brewing, England, 2000. Pritchett & Associates, Inc., 1993. Stewart G.G. і Russell I., Yeast Flocculation, у Que F., Using a Thread Type of Alginate Gel Brewing Science, під ред. J.R.A. Pollock, вид-во Particles as Cell-Immobilised Support and Some Academic Press, Нью-Йорк, 1981. Concept of Packed Bed Fermenter Design. Stratford M., Yeast Flocculation: Restructuring Biotechnology Techniques, 7, 1993, с.755. the Theories in Line with Recent Research, Rajotte P., Continuous Fermentation with Cerevisiae Belgium Journal of Biotechnology, 1996, Immobilized Yeast Cells. American Brewer, 76, 1998, с.38. с.42. Sumino Т., Nakamura H. і Mori N., Development Rajotte P., Jumping into the Next Millenium of a High-Efficiency Wastewater Treatment System Canadian Style. American Brewer, 75, 1997, с.42. Using Immobilized Microorganisms, у Industrial Russell I., Norton S., Mensour N., Margaritis А. і Application of Immobilized Biocatalysts. (під ред. A. Briens C, Immobilized Yeast Cells: Applications for Tanaka, T. Tosa і T. Kobayashi), Нью-Йорк, вид-во Brewing. Proceedings of the Institute of Brewing Marcel Dekker, 1993, с.377. Convention, Victoria Falls, 1995, с.159. Tata M., Bower P., Bromberg S., Duncombe D., Ryder D.S. і Masschelein CA., The Growth Fehring J., Lau V., R yder D. і Stassi P. Immobilized Process of Brewing Yeast and the Biotechnological Yeast Bioreactor Systems for Continuous Beer Challenge. Journal of the American Society of Fermentation. Biotechnology Progress, 15, 1999, Brewing Chemists, 43, 1985, с.66. с.105. Satterfield CN., Mass Transfer in Heterogeneous Technical Committee and Editorial Committee of Catalysts, вид-во MIT Press, Кембрідж, 1970. the American Society of Brewing Chemists. Methods Scott J.A., O'Reilly A.M. і Kirkhope S., A Fibrous of Analysis. 8-е вид., Міннесота, вид-во ASBC, Sponge Matrix to Immobilized Yeast for Beverage 1992. Fermentations. Biotechnology Techniques, 9, 1995, Teixera J.M., Teixera J.A., Mota M., Manuela M., с.305. Guerra В., Machado Cruz J.M. і Sa Almeida A.M., Shindo S. і Kamimur M., Immobilization of Yeast The Influence of Cell Wall Composition of a Brewer's with Hollow PVA Gel Beads. Journal of Fermentation Flocculent Lager Yeast on Sedimentation During and Bioengineering, 70, 1990, с.232. Successive Industrial Fermentations. Proceedings of Shindo S., Sahara H. і Koshino S., Suppression the European Brewery Congress, 1991, с.241. Umemoto S., Mitani Y. і Shinotsuka K., Primary of a-Acetolactate Formation in Brewing with Fermentation with Immobilized Yeast in a Fluidized Immobilized Yeast. Journal of the Institute of Brewing, Bed Reactor. Master Brewers Association of the 100, 1994a, с.69. Americas Technical Quarterly, 35, 1998, с.58. Shindo S., Sahara H., Koshino S. і Tanaka H., Van de Winkel L., Design and Optimization of a Control of Diacetyl Precursor [a-acetolactate] Formation During Alcohol Fermentation with Yeast Multipurpose Immobilized Yeast Bioreactor for Brewery Fermentations. Cerevisia Belgian Journal of Cells Immobilized in Alginate Fibers with Double Gel Brewing & Biotechnoloy, 20, 1995, с.77. Layers. Journal of Fermentation and Bioengineering, Van de Winkel L. і De Vuyst L., Immobilized 76, 1993, с.199. Yeast Cell Systems in Today's Breweries and Shindo S, Sahara S, Watanabe N. і Koshino, S., Main Fermentation with Immobilized Yeast Using Tomorrow's . Cerevisia Belgian Journal of Brewing & Biotechnology, 22, 1997, с.27. Fluidized-Bed Reactor. Proceedings of the Institute of Van de Winkel L., McMurrough I., Evers G., Van Brewing Convention, Сідней, 1994b, с.109. Beveren P.C. і Masschelein CA., Pilot-Scale Sinitsyn A.P., Rajnina E.I., Efremov A.B., Evaluation of Silicon Carbide Immobilized Yeast Gracheva I.M. і Gernet M.V., Fermentation of Hydrolysed Mash by Yeasts Immobilized on Systems for Continuous Alcohol-Free Beer Production. European Brewery Convention Borosilicate Carriers. Fermentnaya I Spirtova ya Symposium: Immobilized Yeast Applications in the Promyshlennost, 1986, с.31. Brewing Industry, Еспо, Фінляндія, 1995, с.90. Smogrovicova D. і Domeny Z., Beer Volatile ByVan de Winkel L., P.C. van Beveren і CA. Product Formation at Different Fermentation Temperature using Immobilized Yeasts. Process Masschelein, The Application of an Immobilized Yeast Loop Reactor to the Continuous Production of Biochemistry, 34, 1999, с.785. Alcohol-Free Beer. Proceedings of the 23rd European Smogrovicova D., Domeny Z. Gemeiner P. Brewing Convention Congress, Лісабон, 1991a, Malovikova А. і Sturdik E., Reactors for Continuous с.577. Primary Beer Fermentation using Immobilized Yeast, Biotechnology Techniques, 11, 1997, с.261. Van de Winkel L., P.C. van Be veren, E. Borremans, E. Goosens і CA. Masschelein, High Sodini L, Boquien C.Y., Corrieu G. і Lacroix C, Performance Immobilized Yeast Reactor Design for Use of an Immobilized Cell Bioreactor for the Continuous Beer Fermentation. Proceedings of the Continuous Inoculation of Milk in Fresh Cheese 24th European Brewing Convention Congress, Осло, Manufacturing. Journal of Industrial Microbiology & Biotechnology, 18, 1997, с.56. 1991b, с.307. Van Dieren B., Yeast Metabolism and the Speers R.A. і Ritcey L.L., Towards an Ideal Production of Alcohol-Free Beer. European Brewery Flocculation Assay. Journal of the American Society Convention Symposium: Immobilized Yeast of Brewing Chemists, 1995, с.174. 27 84536 28 Applications in the Brewing Industry, Ecno, ФінлянControl of Sulfite Formation. Applied Biochemistry дія, 1995, с.66. and Biotechnology, 53, 1995d, с.277. Van Iersel M.F.M., Meersman E., Swinkels W., Yamauchi Y., Okamoto T., Murayama H., Nagara Abee T. і Rombouts F.M., Continuous Production of A., Kashihara T., Yoshida M. і Nakanishi K., Rapid Non-Alcohol Beer by Immobilized Yeast at Low Fermentation of Beer Using an Immobilized Yeast Temperature. Journal of Industrial Microbiology, 14, Multistage Bioreactor System: Balance Control of 1995, с.495. Extract and Amino Acid Uptake. Applied Biochemistry Van Loosdrecht M.C M. і Heijnen JJ., Biofilm and Biotechnology, 53, 1995e, с.245. Bioreactors for Waste-Water Treatment. Trends in Yamauchi Y., Okamoto T., Murayama H., Nagara Biotechnology, 11, 1993, с.117. A., Kashihara T., Yoshida M., Yasui T. і Nakanishi K., Vicente A.A., Dluhy M. і Teixeira J.A., Increase of Rapid Fermentation of Beer Using an Immobilized Ethanol Productivity in an Airlift Reactor with a Yeast Multistage Bioreacter System: Control of Minor Modified Draught Tube. The Canadian Journal of Products of Carbohydrate Metabolism. Applied Chemical Engineering, 11, 1999, с.497. Biochemistry and Biotechnology, 53, 1995f, с.261. Virkajarvi I. і Linko M., Immobilization: A Yuan X., Application of Immobilization Technique Revolution in Traditional Brewing. in Brewing Industry. Shipin Kexue, 94, 1987, с.8. Naturwissehschaften, 86, 1999, с.112. Zhang Z., Su E. і Yu J., Studies on Continuous Virkajarvi I. і Kronlof J., Long Term Stability of and Rapid Fermentation of Beer by Immobilized Immobilized Yeast Columns in Main Fermentation. Yeast. Gongye Weishengwu, 18, 1988, с.11]. Journal of the American Society of Brewing Chemists, Даний винахід відноситься до способу вигото56, 1998, с.70. влення спиртних напоїв, що включає стадію безVirkajarvi I. і Pohjala N., Profiting from перервного бродіння, при якій сусло засівають Immobilized Fermentation. Proceedings of the 5th дріжджами та/або щонайменше здійснюють початAviemore Conference on Malting, Brewing and кове бродіння сусла, що містить цукри, які зброDistilling, 1999, с.290. джують. Wackerbauer K., Fitzner M. і Gunther J., Зокрема, у винаході запропонований кращий Technisch-technologische Moglichkeiten mit спосіб, відповідно до якого безперервне бродіння Immobilisierter Hefe. Brauwelt, 136, 1996a, с.2140. здійснюють у біореакторі газліфтного типу з викоWackerbauer K., Fitzner M. і Lopsien M., ристанням флокулентного (і насамперед, що має Untersuchungen mit dem Neuen MPI-Bioreaktorвисоку здатність до флокуляції (високофлокулентSystem. Brauwelt, 136,1996b, с 2250. ного) або суперфлокулентного) штаму дріжджів і Webb C., G.M. Black і B. Atkinson, Process при строгому контролі вмісту кисню. Engineering Aspects of Immobilized Cell System. Відповідно до найбільш кращого варіанта England: The Institution of Chemical Engineers, 1986. здійснення даного винаходу партію «щонайменше Westrin B.A. і A. Axelsson, Diffusion in Gels частково збродженого» продукту, одержаного за Containing Immobilized Cells: A Critical Review. допомогою безперервного процесу, піддають стаBiotechnology and Bioengineering, 38, 1991, с.439. дії періодичної обробки (обробки партій) (яка в Wu W.T., Wu J.Y. і Jong J.Z., Mass Transfer in контексті формули даного винаходу може включаan Airlift Reactor with a Net Draft Tube. ти (але не обмежуючись цим) завершення процесу Biotechnology Progress, 8, 1992, c.465. бродіння, у ході якого вуглеводи, які зброджують, Yamane T., On Approximate Expressions of перетворюються в спирт). Effectiveness Factors for Immobilized Biocatalysts. Даний винахід відноситься до виробництва Journal of Fermentation Technology, 59, 1981, с.375. пива (включаючи, зокрема, світлі види пива, лагеYamauchi Y. і Kashihara, Т., Kirin Immobilized рне пиво і, насамперед, Північно-американські System. European Brewery Convention Symposium: види пива) [див., наприклад, the Essentials of Beer Immobilized Yeast Applications in the Brewing Style - F. Eckhardt]. Industry, Еспо, Фінляндія, 1995а, с.99. Спосіб здійснюють за п.1, відповідно до якого Yamauchi Y., Kashihara T., Mura yama H., безперервну стадію проводять у газліфтному реаNagara A., Okamoto T. і Mawatari M., Scaleup of кторі. Для безперервної стадії, яку використовують Immobilized Yeast Bioreactor for Continuous в різних варіантах здійснення даного винаходу, Fermentation of Beer. Master Brewers Association of переважно застосовують іммобілізовані клітини the Americas Technical Quarterly, 31, 1994, с.90. (на відміну від повністю вільних клітин), і її можна Yamauchi Y., Okamoto T., Murayama H., Kajino здійснювати з використанням обраного носія імK., Amikura T., Hiratsu H., Nagara A., Kamiya T. і мобілізованих або флокулюючих дріжджів. НезваInoue Т., Rapid Maturation of Beer Using an жаючи на вищевикладене краще замість іммобіліImmobilized Yeast Bioreactor. 1. Heat Conversion of зованих на носії клітин використовувати флокулюючі дріжджі, причому для розглянутої цілі a-Acetolactate. Journal of Biotechnology, 38, 1995b, с.101. найбільш кращими є суперфлокулентні дріжджі. Більш докладно кращі варіанти здійснення і Yamauchi Y., Okamoto T., Murayama H., Kajino переваги, пов'язані з безперервними процесами, K., Nagara А. і Noguchi K., Rapid Maturation of Beer представлені в докладному описі даного винаходу. Using an Immobilized Yeast Bioreactor. 2. Balance of У цих процесах застосовують штучні (наприклад, з Total Diacetyl Reduction and Regeneration. Journal of Biotechnology, 38, 1995c, с.109. контрольованим складом) газові суміші, що включають азот, діоксид вуглецю і кисень, а також повіYamauchi Y., Okamoto T., Murayama H., Nagara тря. А. і Kashihara T., Rapid Fermentation of Beer Using Крім того, у даному описі приведені більш доan Immobilized Yeast Multistage Bioreactor System: 29 84536 30 кладні дані, що стосуються стадії обробки з викопоняттям «фігура», що супроводжується певним ристанням витримування партій. Слід зазначити, ідентифікуючим номером, і на креслення, кожний з що у певних варіантах здійснення даного винаходу яких позначений та/або на нього даються посиосновна ціль процесу витримування партій вихолання за допомогою поняття «Фіг.», що супроводить за рамки «завершення» перетворення вугледжується певним ідентифікуючим номером. На цих водів, які зброджують, у спирт (яке суті в будькресленнях може не дотримуватися строга нумеякому випадку можна завершити на безперервній рація проілюстрованих пунктів. стадії обробки). У таких варіантах здійснення осНа приведених кресленнях показано: новною ціллю процесу витримування партій є доНа Фіг.1 - блок-схема процесу для пілотного давання відповідного смаку (або корекція), насамваріанта системи безперервного бродіння, окремі перед з погляду вмісту діацетилу й елементи обладнання якої перераховані в таблиці ацетилальдегіду. 5.1 даного опису. У кращих варіантах здійснення даного винахоНа Фіг.2 - схематичне зображення пілотного ду після стадії безперервної обробки передбачаваріанта газліфтного біореактора з трубою для ється розподіл засіяного дріжджами сусла та/або відсмоктування (GLDT). щонайменше частково збродженого сусла за доНа Фіг.3 - поперечний переріз реактора, предпомогою системи трубопроводів (яка може являти ставленого на Фіг.2, де зазначені положення внутсобою фіксовану систему трубопроводів або ланрішньої труби для відсмоктування і внутрішнього цюг, яку можна вибірково приєднувати або від'єдсепаратора. нувати) між декількома резервуарами, що вміщюНа Фіг.4 - докладне креслення верхньої кришють партію продукту. При серійному процесі ки біореактора, представленого на Фіг.2. розподілу заповнюють один резервуар, потім наНа Фіг.5 - докладне креслення корпусу біореаступний і т.д. У найбільш кращому варіанті продукктора, представленого на Фіг.2. тивність реактора безперервної дії і потужність На Фіг.6 - докладне креслення конічної нижрезервуарів для витримування партій продукту, ньої частини біореактора, представленого на Фіг.2. погоджують один з одним, виходячи з розміру і На Фіг.7 - докладне креслення газової розпикількості реакторів/резервуарів для витримування лювальної труби біореактора, представленого на партій продукту, так щоб швидкості виробництва Фіг.2. У розпилювальній трубі діаметром 1,27см продукту відповідали один одному з погляду пробуло просвердлено в цілому 160 отворів (діаметдуктивності в залежності від часу. В ідеальному ром 0,16см) з відстанями між центрами в подовжваріанті з резервуару, для витримування партії ньому напрямку 0,8см і по окружності 0,6см. продукту, зливають готовий продукт саме в той На Фіг.8 - схема безперервного процесу виромомент часу, коли його варто очищати, повторно бництва гранул з використанням статичних змішуприєднують до трубопроводу і потім заповнюють вачів [заявка на патент 2133789 на ім'я фірми продуктом, одержаним на стадії безперервного Labatt]. бродіння. Ha Фіг.9 - фо тографія скляних гранул Siran®, Ще один об'єкт даного винаходу відноситься що поставляються фірмою Schott Engineering. до регулювання вмісту кисню в суслі/пиві. Це здійНа Фіг.10 - фотографія гранул CeliteÒ з діатоснюють як на безперервній стадії, так і стадії вимової землі, що поставляються фірмою World тримування партій. На безперервній стадії конценMinerals. трація кисню робить різні дії, однак слід зазначити, На Фіг.11 - фотографія гранул з kщо може виявитися доцільно мінімізувати його карагінанового гелю, що виробляються фірмою концентрацію для оптимізації перетворення вищих LabattBrewing Company Limited ("Labatt"). спиртів у важливі з погляду додавання смаку На Фіг.12 - ряд фотографій, на яких представскладні ефіри. У цьому зв'язку слід зазначити, що лені нефлокулентні дріжджі, дріжджі, що утворюна періодичній стадії обробки концентрації вищих ють ланцюжки і флокулентні дріжджі відповідно. Ці спиртів можна зберігати майже без зміни, якщо зображення були одержані за допомогою фокусузастосовувати відповідний строгий контроль вмісючої камери, забезпеченої мікроскопом, при 100ту О2 для регулювання балансу розчинних ефірів, кратному збільшенні. сивушних масел, що додають смак. У цьому зв'язНа Фіг.13 - отримана за допомогою мікроскопа ку може виявитися доцільно здійснювати поперепри 100-кратному збільшенні фотографія штаму дню продувку сусла за допомогою СО2 перед стадріжджів LCC3021 з помірною здатністю до флодією безперервного бродіння. куляції (помірно флокулентний штам). Відповідно до одного з варіантів здійснення На Фіг.14 - отримана за допомогою мікроскопа даного винаходу основною ціллю стадії безперерпри 100-кратному збільшенні фотографія суперфвної обробки є одержання продукту для засіву селокулентного штаму дріжджів LCC290. редовища, що зброджують, яке використовують На Фіг.15 - схематична діаграма процесу одедалі в процесі витримування партій. ржання гранул з каппа-карагінанового гелю з викоДля більшої точності зміст документів, які маристанням статичного змішувача. У статичному ють пріоритет, включений в даний опис як посизмішувачі рідина проходить через змішувач (а не лання у всій їхній повноті, так якби вони були кожзмішувач через рідину), що дає можливість змішуний окремо повністю включені в даний опис. вати рідини, які накачують через трубопроводи. Нижче приведено докладний опис об'єктів даНа Фіг.16 - ще одне схематичне зображення ного винаходу, який складається з двох частин. газліфтної біореакторної системи з трубою для Опис містить та/або в ньому є посилання на відсмоктування, яка призначена для основного графіки, формули, креслення і т.п., що позначені бродіння пива. 31 84536 32 На Фіг.17 - фотографія корпусу діючого газлісередовища після закінчення процесу бродіння. фтного біореактора з трубою для відсмоктування, На відміну від лагерних дріжджів дріжджі для елю схема якого представлена на Фіг.15. піднімаються вгору резервуару для бродіння і тому На Фіг.18 - детальне креслення корпусу діючоїх називають штамом дріжджів верхового бродінго газліфтного біореактора об'ємом 13л (тобто що ня. Здатність дріжджів осаджуватися або піднімамає робочий об'єм 8л) із трубою для відсмоктутися не обов'язково залежить від того, чи є дріжджі вання, схема якого представлена на Фіг.16. лагерними дріжджами або дріжджами для елю, На Фіг.19 - детальне креслення кришки корпуале вона є специфічною для штаму. Лагерні дріжсу біореактора, де показаний: 1 - порт виходу ріджі, як правило, не зброджуються при температудини для датчика кисню; 2 - термокомірка для датрах вище 34°, у той час як дріжджі для елю не мочика температури, з'єднаного з контролером жуть зброджувати мелібіозу. Вчені використовують термостата; 3 - температурний зонд; 4 - порт поці характеристики для того, щоб відрізняти лагерні вернення рідини, яку використовують для датчика штами від дріжджів для елю [McCabe, 1999]. кисню; 5 - порт для інокуляції; 6 - мембранний порт Штам дріжджів Saccharomyces cerevisiae 3021 для зразка, забезпечений кришкою з нержавіючої з помірною флокулюючою здатністю, одержаний з сталі. колекції культур фірми Labatt (Labatt Culture Ha Фіг.20 - схема порту ви ходу рідини для даCollection), застосовували як для бродіння з викотчика кисню, який забезпечений пристроєм для ристанням вільних клітин, що самі утворюють агнаповнення, зануреним у рідку фазу біореактора. регати, так і для бродіння з використанням клітин, На Фіг.21 - детальний опис обладнання і фуніммобілізованих за допомогою каппа-карагінана. У кціональна схема безперервного процесу основнодослідах з використанням суперфлокулентних го бродіння для одержання пива з використанням дріжджів як іммобілізовані дріжджі застосовували системи газліфтного біореактора (див. таблицю варіант штаму LCC3021, а саме штам LCC290. 5.1, де представлений більш детальний опис обЧисті культури дріжджів зберігали в кріогенних ладнання). умовах при -80°С у рефрижераторі в Labatt На Фіг.22 - схематичне зображення механізму Technology Development Department. Перед застогелеутворення карагінану [взято з роботи Rees, суванням взяті за допомогою стерильної петлі 1972]. культури дріжджів попередньо вирощували в аеНа Фіг.23 - схема утилізації компонентів сусла робних умовах при 21°C на пластинах, що містять при основному бродінні з використанням іммобіліPYG-aгap (3,5г пептону, 3,0г екстракту дріжджів, зованих дріжджів. 2,0г KН2РО4, 1,0г MgSO4 ·7Н2О, 1,0г (NH 4)2SO4, На Фіг.24 - фото графія гранул з каппа20,0г глюкози та 20,0г агару, розчинених у дистикарагінанового гелю, що містять іммобілізовані льованій воді до об'єму 1л). Потім виділені колонії лагерні дріжджі, у момент початку бродіння. дріжджів переносили в лабораторні пробірки, що На Фіг.25 - фотогра фія групи клітин лагерних містять 10мл пастеризованого сусла, і інкубували дріжджів, включених у гранулу з каппапри перемішуванні при 21°C протягом 24 годин карагінанового гелю, через два дні після початку Цей інокулят послідовно доводили до об'єму 5л періодичного процесу бродіння, де на окремих шляхом додавання однржаної як зазначено вище клітинах дріжджів видно брунькові перегородки. культури у відповідний об'єм сусла (10мл у 190мл, На Фіг.26 - фотографія зовнішнього краю гра200мл у 800мл і 1л у 4л). Потім інокулят дріжджів нули з каппа-карагінанового гелю, на якій предстапереносили в центрифужні колби і центрифугувавлені клітини лагерних дріжджів через два місяці ли протягом 10хв при 10000об./хв і 4°C. З утворепісля початку безперервного процесу бродіння. них вологих пеллетів дріжджів (30% мас./об.) відНа Фіг.27 - фотографія клітин лагерних дріжбирали необхідну масу дріжджів для всіх джів, які знаходяться в зовнішній області гранули з наступних дослідів з бродіння. каппа-карагінанового гелю, через два місяці після Середовище для бродіння початку безперервного процесу бродіння. Як живильне середовище для всіх дослідів з На Фіг.28 - фотографія клітин лагерних дріжбродіння використовували застосовуване для джів, які знаходяться в центрі гранули з каппапромислового виробництва лагерне сусло пивовакарагінанового гелю, через два місяці після початрної фірми Labatt London. У даному описі вказуку безперервного процесу бродіння. ється питома вага сусла, виражена в градусах На Фіг.29 - фотогра фія всієї гранули з каппаПлато (°P). карагінанового гелю, через шість місяців після Співвідношення між питомою вагою і °P описупочатку безперервного процесу бродіння; у ється формулою 4.1. центрах багатьох зруйнованих гранул є порожнечі. °P=135,997·SG3-630,272·SG2+ (4.1) Частина 1 +1111,14·SG-616,868 Одержання штаму дріжджів та інокуляту Розглянуте в даному описі сусло мало 17,5°P, У розглянутому варіанті здійснення винаходу що відповідає питомій вазі 1,072. бродіння здійснювали з використанням поліплоїдУ таблиці 4.1 представлений типовий профіль них дріжджів із сімейства Saccharomyces cerevisiae вуглеводів цього сусла, визначений методом висо(які називають також Saccharomyces uvarum коефективної рідинної хроматографії (ВЕРХ), опита/або Saccharomyces carlsbergensis). Як правило, саним у розділі 4.7.2. Приблизно 73% вуглеводів у компанії, що займаються пивоварством, викорисцьому суслі мали здатність до зброджування, хоча товують ці дріжджі для низового бродіння при випивні дріжджі, які застосовували в даному досліробництві лагерного пива. Це обумовлено здатнісдженні, не можуть включати більш 27% вуглеводів тю лагерних дріжджів осаджуватися з рідкого з довгим ланцюгом. 33 84536 34 Таблиця 4.1 Типовий склад вуглеводів у суслі, які використовували в дослідах з бродіння. Сусло було зроблено пивоварною компанією Labatt London і мало питому вагу 17,5°P. Фруктоза Глюкоза Мальтоза Мальтотриоза Мальтотетроза Полісахариди Всього Середній вміст (г/л) Коефіцієнт варіації (%) Зброджуємість (%) 3,3 18,0 1,9 16,5 4,3 9,3 87,7 10,1 47,8 25,2 10,8 14,2 6,4 18,3 41,1 9,1 177,2 73,2 Коефіцієнт варіації для більшості проаналізованих субстанцій становив 10-20%. Така варіабельність в основному обумовлена особливостями застосовуваного процесу промислового виробництва, а також варіабельністю характеристик вихідних продуктів, які застосовують при виробництві різних партій пива. Види іммобілізації При роботі над даною докторською дисертацією були вивчені три типи іммобілізації - захоплення, абсорбція і самоагрегація. Для носіїв, які використовували при промисловому виробництві, спочатку приведені дані фірми-постачальника, які потім доповнені даними лабораторного аналізу. В інших розділах представлені фотографії і розподіли досліджених носіїв (якщо це було можливе). Ha пілотному газліфтному біореакторі з трубою для відсмоктування тестували два типи адсорбційних матриць. Фотографії обох зазначених носіїв приведені в даному описі. Від фірми Schott Engineering був одержаний носій у вигляді гранул із спеченого скла, SiranÒ . Вибрані частки мали діаметр 1-2мм, відкриті пори для іммобілізації дріжджів з об'ємом пор 55-60% і розподілом розмірів пор від 60 до 300мкм, які є придатним розміром для клітин дріжджів. Відомо, що такий тип носія є біологічно і хімічно стабільним, його легко очищати, можна використовувати повторно, здійснювати стерилізацію за допомогою пари, він не злипається і не має смаку і тому дозволений для застосування в харчовій промисловості. Від фірми World Minerals of California був одержаний носій у вигляді гранул сферичної форми з діатомової землі. Перевагою цього носія є теплостійкість і хімічна стабільність, механічна міцність і твердість. Діатоміт, який являє собою основний вихідний продукт, широко застосовується в пивоварній промисловості для фільтрації пива. Носій CeliteÒ R-632 був спеціально розроблений для іммобілізації цілих клітин. Постачальником були надані наступні характеристики: Діапазон розмірів:0,595-1,41мм (межа проходження через сито 14/30меш); Середній діаметр пор: 7,0мкм; Загальний об'єм пор: 1,19см /г; Щільність спресованого шару: 0,334кг/м 3; Гранули з каппа-карагінанового гелю, які представляють собою носій, що захоплює, виготовляли в лабораторії пивоварної компанії Labatt Незброджуємість (%) 3,6 23,2 26,8 Brewing Company Ltd. Процес виготовлення описаний у розділі 5.2, а результати, одержані при здійсненні цього процесу виготовлення, представлені в розділі 6.2.1. Шляхом вибору певних штамів дріжджів, здатних до флокуляції, можна здійснювати найбільш просту форму іммобілізації, а саме самоагрегацію. Застосовуваний у промисловості штам лагерних дріжджів LCC3021 має природну здатність до флокуляції і розглядається як штам з помірною здатністю до флокуляції. У процесі зброджування в рідкому середовищі утворюються невеликі згустки дріжджів розміром 0,5-1,0мм. Штам дріжджів LCC290, що являє собою варіант штаму LCC3021 лагерних дріжджів, може утворювати пластівці (флокуляти) більшого розміру (від 1,0 до 5,0мм у залежності від інтенсивності перемішування) і тому його класифікують як суперфлокулентні дріж джі. У даному описі представлені фотографії флокулятів, утворених різними видами дріжджів. Протокол відбору зразків У процесі бродіння було необхідно відбирати зразки із рідини, яку зброджують, через численні інтервали часу. Для здійснення цього від фірми Scandi-brewÒ були одержані стерильні клапани для відбору зразків. Ці клапани виготовлені з нержавіючої сталі і забезпечені камерою (обмеженою верхнім і нижнім портами), у якій можна зберігати етанол для створення асептичних умов. Перед відбором зразка етанол випускали з камери шляхом вилучення заслінки з нижнього зливального отвору. Через камеру пропускали свіжий етанол (75об.%) і потім заслінку поміщали на верхній порт клапана. Після цього натискали на важіль клапана і збирали приблизно 50мл зразка рідини в стерилізований контейнер. Другий зразок відбирали при процесі бродіння з використанням суперфлокулентних дріжджів, так що до підрахунку клітин можна було здійснювати відповідну дефлокуляцію. Після завершення відбору зразка забезпечену клапанами камеру промивали гарячою водою і пероцтовою кислотою і, в кінці етанолом. Заслінку поміщали на нижній зливальний отвір і камеру потім заповнювали етанолом для підготовки до відбору наступного зразка. Метод підрахунку вільних клітин дріжджів і оцінки життєздатності з використанням барвника метиленового синього Спочатку відбирали зразки рідини із середовища, яке зброджують, що містить вільно суспен 35 84536 36 довані клітини дріжджів, за допомогою описаної Підрахунок іммобілізованих клітин дріжджів вище процедури відбору зразків. Для підрахунку гелеві гранули кількості клітин використовували гемацитометр Перед здійсненням підрахунку клітин дріжджів, фірми Hauser Scientific Company з робочим об'захоплених гелем, було необхідно зруйнувати геємом 10-4мл, що був з'єднаний із світловим мікролеву матрицю за допомогою пристрою PolytronÒ скопом. Зразки рідини необхідно було розбавляти (фірма Brinkmann Instruments). Зразок, що містить дистильованою водою для того, щоб загальна кігранули, спочатку пропускали через стерильне лькість клітин дріжджів у полі підрахунку становисито (розмір отворів 500мкм) і потім промивали ла 150-200 клітин. Heggart із співробітниками стерильною водою. У контейнер для зразка вно(1999) описали всі фактори, що впливають на житсили 1мл гелевих гранул із захопленими клітинами тєздатність і характеристики життєздатності дріжі 19мл дистильованої води. Потім застосовували джів. PolytronÒ для фізичного руйнування гелю, у реДля оцінки ступеня життєздатності клітин дрізультаті чого дріжджові клітини вивільнювалися в жджів у зразку використовували метод фарбуванрозчин. Після цього для зразкаіз зруйнованим ня барвником метиленовим синім, описаним Амегелем здійснювали підрахунок клітин і оцінку їхньої риканським товариством хіміків, що працюють у життєздатності відповідно до методів, описаних у пивоварній промисловості (American Society of розділі 5.5.1. Brewing Chemists) (Technical Committee and Моніторинг забруднення Editorial Committee of the ASBC, 1992). Живі клітиПри здійсненні всіх процесів бродіння, резульни залишаються безбарвними при фарбуванні тати яких представлені в даному описі, регулярно метиленовим синім, оскільки вони окислюють його. здійснювали моніторинг забруднення. Програма На відміну від цього загиблі клітини зафарбовумоніторингу передбачала щонайменше щотижнеються в синій колір. При оцінці життєздатності при ву перевірку рідини у ферментерах безперервної готуванні препаратів на основі барвника метиледії об'ємом 50л і сусла в резервуарах для зберенового синього використовували наступні реагенження. Зразки рідини відбирали в асептичних умоти: вах і потім вносили в культуральні планшети, що розчин А: 0,1г метиленового синього в 500мл містять універсальний пивний агар (Universal Beer дистильованої води; Agar) (UBA, фірма Difco Laboratories) і 10мг/л цикрозчин Б: 13,6г KН2РО4 у 500мл дистильованої логексіміда. Потім ці зразки, які тестують, інкубуводи; вали при 28°C протягом періоду часу до 10 днів як розчин В: 2,4г Na2HPO4·12H2O у 100мл дистив аеробних, так і в анаеробних умовах. Необхідні льованої води. анаеробні умови культивування створювали, поПотім готували забуферений по Фінку-Кулесу міщаючи відібрані планшети в посудини, що міс(Fink-Kuhles) розчин метиленового синього шлятять пакет AnaeroGen (фірма Oxoid), що поглинає хом змішування 500мл розчину А з 498,75мл розвесь кисень, який присутній у посудині. Для перечину Б і 1,25мл розчину В, одержуючи кінцеву сувірки того, чи були умови дійсно анаеробними, міш із рН 4,6. застосовували індикаторну смужку (вона стає роУ лабораторній пробірці готували суміш розжевої в присутності кисню). Таким чином, цим споведеної суспензії клітин і метиленового синього і собом можна виявляти бактеріальні забруднення, ретельно перемішували. Після вистоювання цієї якщо вони присутні в рідкому зразку. суміші протягом декількох хвилин (для забезпеДля виявлення дріжджів дикого типу або непичення контакту клітин з барвником), краплю рідини вних дріжджів необхідно використовувати спеціапоміщали між предметним склом і покривним льне живильне середовище, яке не стимулює ріст склом гемацитометра (певний об'єм). Відсоток бактерій та/або пивних дріжджів. Для виявлення живих клітин визначали шляхом підрахунку як жибудь-яких потенційних штамів дикого типу викоривих, так і мертвих клітин у полі підрахунку та настовували пористі планшети, що містять дріжджоступного ділення кількості живих клітин на загальве середовище (YM, фірма Difco Laboratories), ну кількість клітин. доповнене 0,4г/л CuSO4 (інкубація при 25°C протя4.5.2 Підрахунок іммобілізованих клітин дріжгом 7 днів). Інкубація рідкого зразка, висіяного на джів - самоагрегація PYN-aгap (лептонний дріжджовий живильний екстПри використанні клітин дріжджів, що мають ракт, фірма Difco Laboratories), протягом 7 днів при тенденцію утворювати флокуляти, важко точно 37°C дозволяла виявляти пивні дріжджі нелагероцінювати кількість клітин, які присутні у рідкому ного типу. Ріст лагерних дріжджів інгібується при зразку, оскільки клітини мають тенденцію до осатемпературах ви ще 34°C, таким чином, будь-який дження в посудині для відбору зразка. Для одерріст клітин на цих планшетах може служити індижання репрезентативного зразка застосовували катором забруднення дріжджами елевого типу. дефлокулентний агент. У цих експериментах виАналітичні методи користовували 0,5об.% розчин сірчаної кислоти Для всього використаного обладнання були для дестабілізації флокульованих клітин дріжджів, проведені відповідні калібрування відповідно до завдяки чому можна було проводити репрезентастандартних інструкцій, які застосовуються при тивний підрахунок клітин дріжджів. Таку ж процепромисловому виробництві. дур у підрахунку клітин і оцінки життєздатності, що Етанол описана в розділі 4.5.1, застосовували у випадку Концентрацію етанолу в пиві і зразках, відізаміни сірчаної кислоти дистильованою водою, яку браних у процесі бродіння, аналізували за допомовикористовують як розріджувач. гою методу газової хроматографії, описаного в настанові Технічного комітету і Редакційного комі 37 84536 38 тету Американського товариства хіміків-пивоварів туру детектора встановлювали на рівні 120°С. (Technical Committee and the Editorial Committee of Аналіз здійснювали з використанням автоматизоthe American Society of Brewing Chemists) (1992). ваного пристрою типу Hewlett Packard 7694E для Дегазований зразок рідини об'єднували з 5об.%відбору зразків у просторі над рідиною. Кількісну ним ізопропанолом, що використовували як внутоцінку робили шляхом визначення площі піка конрішній стандарт, після чого 0,2мкл цієї суміші внокретного компоненту зразка і зіставлення його з сили в газовий хроматограф (ГХ) типу Perkin Elmer каліброваною величиною для внутрішнього стан8500. Нижче приведені додаткові відомості про дарту, 2,3-гександіону. більш точні параметри ГХ: Для оцінки «загальної» концентрації зазначеПолум'яно-іонізаційний детектор (FID) них сполук спочатку необхідно врівноважувати ці Пристрій для автоматизованого відбору зраззразки при 65°C і потім витримувати їх протягом 30 ків типу Dynatech; хвилин при цій температурі. Така обробка, що пеChromosorb 102, для набивання колонки, розредує аналізу зразка, приводить до перетворення мір часток 80-100меш; a-ацетолактату і a-гідроксибутирату в їхні відповіГаз-носій - гелій, швидкість потоку 20мл/хв; дні дикетони, діацетил і 2,3-бутандіон. Температура інжектора 175°C, температура Складні ефіри і вищі спирти детектора 250°C і температура колонки 185°С, Вміст деяких з найбільш важливих смакових режим ізотермічний. речовин, виявлених у пиві, вимірювали за допомоВуглеводи гою методу газової хроматографії у вільному просКонцентрації глюкози, фруктози, мальтози, торі над рідиною. Вміст ацетальдегіду, етилацетамальтотриози, мальтотетрози, полісахаридів і гліту, ізобутанолу, 1-пропанолу, ізоамілацетату, церину вимірювали за допомогою високоефективізоамілового спирту, етилгексаноату й е тилоктаної рідинної хроматографії (ВЕРХ) з використанноата оцінювали, використовуючи як внутрішній ням системи Spectra-Physics SP8100XR. Для стандарт н-бутанол. Для цього застосовували гарозділення цих вуглеводів при їх злююванні через зовий хроматограф типу Hewlett Packard 5890, систему застосовували катіонообмінну колонку оснащений полум'яно-іонізаційним детектором, (Bio-Rad Aminex HPX-87K) з використанням біфоавтоматичний пристрій типу HP 7994 для відбору сфату калію як рухливу фаз у. Після цього концензразка у вільному просторі над рідиною і капіляртрацію сполук визначали з використанням детекною колонкою типу J&W DB-Wax. Температуру тора показника заломлення для виявлення піків інжектора задавали на рівні 200°С, а температура відповідних сполук. ВЕРХ проводили при протитидетектора становила 220°С. Профіль термостатуску 800фун тів/кв. дюйм, температурі колонки 85°C вання був наступним: 40°С протягом 5хв, градієнт і температурі детектора 40°C. Зразки дегазували і від 40°C до 200°С із швидкістю 10°С/хв, градієнт розбавляли до відповідних концентрацій. Потім у від 200°С до 220°C із швидкістю 50°С/хв і, нарешті, систему вносили шляхом ін'єкції 10мкл зразка при витримування при 220°C протягом 5хв Вводили швидкості потоку 0,6мл/хв. одержаний відповідно до стандарту газоподібний У пивоварній промисловості, як правило, вигелій із швидкістю 30мл/хв (при тиску користовують інший метод оцінки загального вміс28фунтів/кв.дюйм), водень із швидкістю 50мл/хв ту вуглеводів у рідині. Питому вагу рідини, вира(при тиску 25фун тів/кв.дюйм) і повітря із швидкістю жену в градуса х Плато, вимірюють за допомогою 300мл/хв (при тиску 35фунтів/кв.дюйм) на додаток денситометра типу Anton Paar DMA-58. Профільтдо потоку газу-носія, гелію, що вводили із швидкісровані і дегазовані зразки поміщають у спеціальні тю 6,0мл/хв. Повний цикл ГХ для зразка об'ємом скляні U-подібні пробірки, що потім піддають коли1мл становив 40хв. ванням за допомогою електронного пристрою. Інші аналізи Вимірюють частоту коливань рідини і потім по ній При необхідності проводили інші аналітичні визначають питому вагу рідини (г/100г або °P). вимірювання для зразків рідини, яку зброджують, в Слід зазначити, що результати цих вимірів дають процесі дозрівання й упаковування. Аналізи кінцеприблизне значення загальної концентрації вуглевого продукту проводили у відділенні контролю водів у зразку (або питому щільність), оскільки якості фірми Labatt (Labatt Quality Control калібрування здійснюють у водному розчині сахаdepartment) відповідно до стандартів, що діють рози при 20°С, питома вага якої така ж, як й у роздля готового пива. Ці виміри проводили відповідно глянутого сусла. до методів, описаних у настанові Технічного коміБлизькі за будовою дикетони тету і Редакційного комітету Американського товаЗагальні концентрації діацетил(2,3-бутандіону) риства хіміків, що працюють у пивоварній промисі 2,3-пентандіону визначали за допомогою газоволовості (Technical Committee and the Editorial го хроматографа типу Perking Elmer 8310, забезCommittee of the American Society of Brewing печеного електронзахватним детектором. Як газChemists) (1992). Перелік проведених аналізів, а носій використовували 5%-ний метан в аргоні при також короткий опис характеристик цих методів швидкості потоку 1,0мл/хв і зразок пропускали ченаведено в таблиці 4.2. рез колонку типу J & W DB-Wa x. Температуру інжектора підтримували на рівні 105°С, а темпера 39 84536 40 Таблиця 4.2 Аналізи контролю якості і їх опис Перелік Опис Загальна кількість повітря, що виділилося в процесі упаковування; по специфіПовітря кації менше 1мл Рівень карбоксилювання продукту; який визначають у %, по специфікації стаДіоксид вуглецю новить 2,75% Вміст діоксиду сірки в пиві вимірюють за допомогою ГХ; потрібно, щоб він стаДіоксид сірки новив