Спосіб визначення інтенсивності пігментоутворення у бактерій

Спосіб визначення інтенсивності пігментоутворення у бактерій, що включає 3 49812 4 бактерій, та прогнозування здатності розмноження Спосіб здійснюють таким чином: перед досліджуваних бактерій. вирощуванням бактерій на поживному середовищі Ознаками, спільними з прототипом, є: в термостаті впродовж 24-48 годин їх - вирощування бактерій на поживному розподіляють на контрольний та дослідний зразки, середовищі в термостаті; виконують зображення культури шляхом - фотографування культури бактерій при фотографування зразків культур бактерій при заданому освітленні та передачі цифрового заданому освітленні та передачу цифрового зображення на комп'ютер; зображення на комп'ютер в програму Adobe - визначення відтінку для кожного первинного Photoshop, після чого за допомогою пакета кольору; програм СІЕ Lab визначають відтінки для кожного - порівняння кольору вирощених бактерій. первинного кольору, порівнюють колір вирощених Недоліками найближчого аналогу є те, що він культур бактерій, зумовлений інтенсивністю не дозволяє кількісно оцінювати інтенсивність пігментоутворюючої активності бактерій пігментоутворення бактерій, тому що дослідного та контрольного зразків, і за різницею запропонований у цьому рішенні час між кольорами визначають зміну Eab культивування і нарощування біомаси колоній інтенсивності пігментоутворення. бактерій спрямований лише на ідентифікацію Спосіб дозволяє встановлювати та бактерій за оптичною щільністю середовища, а моделювати вплив різних чинників на бактерії, і за саме протягом 5-6 годин пігмент не встигає їх допомогою оцінювати екологічний стан довкілля. синтезуватися, що не дозволяє досліджувати Цифрове зображення об'єкта дослідження пігментсинтезуючу активність бактерій. Також він отримують таким чином. Цифрову камеру не дозволяє оцінювати ступінь впливу закріплюють на штативі на висоті 25-30 см від екстремального чинника і передбачає створення об'єкта зйомки. Вмикають цифрову камеру в додаткового стресу для культури бактерій, а саме режимі «Макрозйомка», та роблять декілька (5-7) дія світла та обробка барвниками. Для здійснення знімків з інтервалом 30-40 с, щоб дати вийти способу необхідна наявність спеціальної складної пристрою із зарядним зв'язком (ПЗЗ) матриці установки для дослідження бактерій. фотокамери на стабільний режим роботи. Після В основу способу поставлено задачу цього встановлюють баланс цифрової фотокамери розробити спосіб визначення інтенсивності (ЦФК) за допомогою ручного методу. Для цього у пігментоутворення у бактерій, який шляхом режимі камери «Встановити баланс білого» вирощування їх на поживному середовищі, їх роблять знімок білого аркушу паперу. Це потрібно фотографування та переводу зображення для подальшої вірної передачі кольору об'єктів досліджуваного об'єкта в програму Adobe зйомки цифровою камерою за даних умов Photoshop, за допомогою пакета програм СІЕ Lab освітлення. Фокусну відстань та час експозиції шляхом оцінки кольору цифрового зображення також встановлюють вручну і тому усі важливі дозволяє встановлювати інтенсивність показники зйомки (баланс білого, фокусна пігментоутворення бактерій. відстань, час експозиції) однакові для всіх об'єктів Для встановлення інтенсивності зйомки. Після проведення вищевказаних операцій пігментоутворення за даним способом необхідна здійснюють знімки колоній бактерій на поверхні наявність лише цифрової фотокамери та живильного середовища у чашках Петрі. комп'ютера. Константність освітлення можна досягнути за Суттєвими ознаками способу є: допомогою спрямованого освітлювача з розсіяним - вирощування впродовж 24-48 годин світлом та вбудованого в камеру спалаху. Знімки у контрольного та дослідного зразків бактерій на форматі JPEG (формат Об'єднаної групи експертів поживних середовищах у термостаті; з фотографії), кольоровий профіль: червоний, - фотографування зразків бактерій при зелений, блакитний (RGB), розрядністю 8 біт, заданому освітленні та передачі цифрових оцінювали на персональному комп'ютері за зображень на комп'ютер; допомогою графічного редактора PIXEL, - визначення відтінку для кожного первинного безкоштовна демо-версія якого доступна для кольору; завантаження у мережі Інтернет за електронною - порівняння кольору вирощених культур адресою: бактерій, який зумовлений пігментсинтезуючою http//www.kanzalsberger.com/pixel/?page_id=12. Для активністю бактерій; усунення незначного цифрового шуму в визначення змін інтенсивності зображенні можна використовувати фільтр пігментоутворення у бактерій дослідного зразка в «Розмивання за Гаусом» з параметром «Радіус», порівнянні з контролем в умовних одиницях. що дорівнює 20 пікселям. Отримують параметри Відмінними від найближчого аналогу ознаками кожного з трьох каналів: L - яскравість; а способу є наявність: величина червоно-зеленої складової; b - величина - вирощування бактерій впродовж 24-48 годин; жовто-синьої складової (Lab). Дані можна - порівняння кольору вирощених культур отримувати у 10 довільних точках зображення бактерій, який зумовлений пігментсинтезуючою колонії бактерій. Розраховують середній показник активністю бактерій; для кожного з каналів. Порівняння кольору визначення змін інтенсивності здійснюють з використанням формули кольорової пігментоутворення у бактерій дослідного зразка в відмінності, яка дозволяє за показниками каналів порівнянні з контролем в умовних одиницях. кольорової моделі СІЕ (кольорова модель 5 49812 6 Міжнародної комісії з освітлення) Lab чисельно Потім посівний матеріал засівали суцільним виразити відмінності між двома кольорами, та за газоном 18-годинною колекційною пігментоутворюючою культурою Serratia різницею між кольорами Eab дослідного та marcescens до чашок Петрі із застиглим контрольного зразків визначають в умовних середовищем МПА (м'ясопептонним агаром). одиницях інтенсивність пігментоутворюючої Дослідні зразки інкубували протягом 48 годин у активності бактерій. термостаті при температурі 35 °С в першому На фіг. зображено культури бактерій Serratia випадку та при температурі 38 °С у другому marcescens дослідного та контрольного зразків: випадку у двох повторностях. Контролем де 1 - зразки культивування бактерій при слугувала культура пігментсинтезуючої бактерії температурі 28 °С у двох повторностях (контроль); Serratia marcescens, яка була вирощена на 2 - зразки культивування бактерій при твердому поживному середовищі МПА в чашках температурі 35 °С у двох повторностях; Петрі та інкубована протягом 48 годин в 3 - зразок культивування бактерій при термостаті при температурі 28 °С. температурі 38 °С. Далі проводили порівняння інтенсивності Приклад конкретного виконання: пігментоутворення у вирощених культурах Екстремальним (стресовим) чинником, що бактерій контрольної колонії з колоніями бактерій, впливав на дослідну тест-культуру бактерій, що зазнали впливу екстремального слугував температурний. температурного чинника фіг. 1. Тест-об'єктами були пігментсинтезуючі Результати цього дослідження наведено у бактерії Serratia marcescens з колекції відділу таблиці 1. Інтенсивність пігментоутворення в мікробіології очищення води Інституту колоїдної культурі Serratia marcescens у досліді (вплив хімії та хімії води НАН України. підвищених температур 35 °С та 38 °С) та контролі Тверде живильне середовище (28 °С) суттєво відрізнялася, при чому різниця між м'ясопептонний агар (МПА) готували в чашках кольорами dE для температури 35 °С складала Петрі. 19,6 одиниць, а для температури 38 °С - 21,0 одиниць. Таблиця 1 Оцінка інтенсивності пігментоутворення у тест-культурі Температура 28 °С 35 °С 38 °С Показники каналів кольорової моделі СІЕ Lab L а b Serratia marcescens 141 54 45 172 134 86 175 140 83 За результатами експерименту можна зробити висновок, що з підвищенням температури інтенсивність пігментоутворення у бактерій знижується. Запропонований спосіб дозволяє шляхом вирощування впродовж 24-48 годин контрольного та дослідного зразків бактерій на поживних середовищах у термостаті і фотографування dE Термін інкубації Контроль 19.6 21.0 48 годин 48 годин 48 годин зразків бактерій при заданому освітленні та передачі цифрових зображень на комп'ютер в програму Adobe Photoshop здійснювати оцінку кольору цифрового зображення за допомогою пакета програм СІЕ Lab, встановлювати інтенсивність пігментоутворення бактерій та визначати зміни інтенсивності їх пігментоутворення. 7 Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков 49812 8 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601