Антраніламіди як інгібітори тирозинкінази kdr та flt, проміжні сполуки для їх одержання, фармацевтичний препарат та застосування сполук для одержання лікувального засобу

1. Антраніламіди загальної формули I 2 C2 1 3 77396 4 R 3 , R 4 , R 5 та R 6 означають водень, галоген 6. Сполуки загальної формули I за будь-яким з або одно- або багатозаміщений галогеном С 1 пп. 1-3, які відрізняються тим, що вони вхоC 6 алкіл, дять до складу фармацевтичного препарату, R 7 означає водень, який проявляє інгібуючу дію на тирозинкінази R 9 означає водень, KDR і FLT та призначений для ентерального, а також їх ізомери та солі. парентерального та перорального введення. 2. Сполуки загальної формули I за п. 1, 7. Застосування сполук загальної формули I у якій за будь-яким з пп. 1-3 для одержання відповіD означає С-R 3 , дного лікувального засобу, призначеного для E означає С-R 4 та лікування пухлин, псоріазу, артриту, такого як решта замісників мають визначені вище знаревматоїдний артрит, гемангіоми, ангіофіброчення, ми, очних хвороб, таких як діабетична ретиноа також їх ізомери і солі. патія, неоваскулярна глаукома, захворювань 3. Сполуки загальної формули I за п. 1 або 2, нирок, таких як гломерулонефрит, діабетична у якій нефропатія, злоякісний нефросклероз, тромR 1 означає необов'язково одно- або багатозабозна мікроангіопатія, відторгнення транспламіщений галогеном і/або трифторметилом фентатів і гломерулопатія, фіброзних захворюніл або ізохінолініл, вань, таких як цироз печінки, захворювань, R 2 означає незаміщений піперидиніл, неопов’язаних із проліферацією мезангіальних бов’язково заміщений С1клітин, артеріосклерозу та пошкоджень нервоC 6 алкілендіоксигрупою циклогексил або оксової тканини, для запобігання утворенню асцициклогексил, ту та для пригнічення набряків, зумовлених D означає С-R 3 , фактором VEGF. E означає С-R 4 та 8. Фармацевтичний препарат, що проявляє решта замісників мають визначені вище знаінгібуючу дію на тирозинкінази KDR і FLT, який чення, містить щонайменше одну сполуку за будьа також їх ізомери та солі. яким з пп. 1-3. 4. Сполука за будь-яким з пп. 1-3, яка призна9. Проміжні сполуки - метиловий ефір 2-((4,4чена для застосування як активний компонент етилендіоку складі фармацевтичного препарату, що місси)циклогексилметиламіно)бензойної кислоти, тить інертні носії, який проявляє інгібуючу дію етиловий ефір N-бензилпіперидин-4на тирозинкінази KDR і FLT. карбонової кислоти та ангідрид N5. Сполуки загальної формули I за будь-яким з циклогексилметилізатової кислоти для одерпп. 1-3, які відрізняються тим, що вони являжання сполук загальної формули I. ють собою інгібітори тирозинкінази KDR і FLT. Даний винахід стосується заміщених антраніламідів та їх застосування як лікувальних засобів для лікування захворювань, зумовлених персистувальним ангіогенезом, а також проміжних продуктів для одержання вказаних антраніламідів. Персистувальний ангіогенез може бути причиною різних захворювань, таких як псоріаз, артрит, такий як ревматоїдний артрит, гемангіома, ангіофіброма, очні хвороби, такі як діабетична ретинопатія, неоваскулярна глаукома, захворювання нирок, такі як гломерулонефрит, діабетична нефропатія, злоякісний нефросклероз, тромбозна мікроангіопатія, відторгнення трансплантатів і гломерулопатія, фіброзні захворювання, такі як цироз печінки, захворювання, пов'язані з проліферацією мезангіальних клітин, і артеріосклероз, або може привести до прогресування цих захворювань. Завдяки прямому або непрямому інгібуванню VEGF-рецептора (VEGF - васкулярний ендотоліальний фактор росту) створюється можливість для лікування подібних захворювань, так само як і інших індукованих VEGF проявів патологічного ангіогенезу і факторів, які сприяють проникності судин, таких як васкуляризація пухлин. Так, наприклад, відомо, що завдяки розчинним рецеп торам і антитілам до VEGF вдається пригнічувати ріст пухлин. Персистувальний ангіогенез індукується фактором VEGF, медіатором чого є його рецептор. Необхідною умовою для прояву фактором VEGF цієї дії є його зв'язування з рецептором і ініціювання фосфорилювання тирозином. При створенні винаходу було встановлено, що сполуки загальної формули І у якій А означає групу =NR7, W означає кисень, сірку, два атоми водню або групу =NR8, Ζ означає зв'язок, групу =NR10 або =N-, розгалужений або прямоланцюговий С1-С12алкіл або групу 5 m, n і о означають 0-3, Ra, Rb, Rc, Rd, Re і Rf означають незалежно один від одного водень, фтор, С1-С4алкіл або групу =NR11 і/або Ra і/або Rb можуть утворювати з Rc і/або Rd або Rc з Re і/або Rf зв'язок, або два замісники з числа Ra-Rf можуть утворювати місток до R1 або до R7 з числом С-атомів аж до 3, R1 означає необов'язково одно- або багатозаміщений галогеном, гідроксигрупою, С 1С6алкілоксигрупою, аралкілоксигрупою, С 1С6алкілом і/або заміщеним NR12R13 розгалуженим або прямоланцюговим С1-С12алкілом або С2С12алкенілом; або необов'язково одно- або багатозаміщеним галогеном, гідроксигрупою, С1С6алкілоксигрупою, С1-С6алкілом і/або заміщеним NR12R13 С3-С10циклоалкілом або С 3С10циклоалкенілом; або необов'язково одно- або багатозаміщеним галогеном, гідроксигрупою, С1С6алкілоксигрупою, аралкілоксигрупою, С 1С6алкілом і/або одно- або багатозаміщеним галогеном С1-С6алкілом арил або гетарил, X означає С1-С6алкіл, R2 означає незаміщені або необов'язково одно- або багатозаміщені галогеном, С1-С6алкілом, С1-С6алкоксигрупою, С1-С6ацилом, аміногрупою, С1-С6карбоксіалкіламіногрупою і/або гідроксигрупою С3-С10аліцикли, аліциклічні кетони або неароматичні гетероцикли і D означає N або C-R3, Ε означає N або C-R4, F означає N або C-R5 і G означає N або C-R6, при цьому R3, R4, R5 і R6 означають водень, галоген або незаміщені або необов'язково одно- або багатозаміщені галогеном С1-С6алкоксигрупу, С1-С6алкіл, С1-С6карбоксіалкіл, R7 означає водень або С1-С6алкіл або з Ra-Rf утворює місток від Ζ або до R1 з числом членів кільця аж до 3, R8, R9, R10 і R11 означають водень або С1С6алкіл, R12 і R13 означають водень, С1-С6алкіл або утворюють кільце, яке може містити ще один гетероатом, а також їх ізомери і солі можуть пригнічувати фосфорилювання тирозином, відповідно персистувальний ангіогенез і запобігати тим самим росту і поширенню пухлин. Якщо R7 утворює місток до R1, то утворюються гетероцикли, з якими сконденсований R1. Як приклади можна назвати: 77396 6 Якщо Ra, Rb, Rc, Rd, Re і Rf представляють собою незалежно один від одного водень або С1С4алкіл, то Ζ утворює алкільний ланцюг. Якщо Ra і/або Rb утворюють з Rc і/або Rd або Rc і/або Rd з Re і/або Rf зв'язок, то Ζ представляє собою алкенільний або алкінільний ланцюг. Якщо Ra-Rf утворюють місток між собою, то Ζ представляє собою циклоалкільну або циклоалкенільну групу. Якщо два замісники з групи Ra-Rf утворюють місток до R з числом С-атомів аж до 3, то Ζ разом з R1 представляють собою сконденсоване з бензольним або гетероарильним ядром (Аr) циклоалкіл. Як приклади можна назвати: Якщо один із замісників Ra-Rf утворює місток до R7, то утворюється азотний гетероцикл, який може бути відділений від R1 відповідною групою. Як приклади можна назвати: Під алкілом мається на увазі відповідно прямоланцюговий або розгалужений алкільний радикал, такий, наприклад, як метил, етил, пропіл, ізопропіл, бутил, ізобутил, втор-бутил, пентил, ізопентил або гексил, гептил, октил, ноніл, децил, ундецил і додецил. Під циклоалкілом маються на увазі моноциклічні алкільні кільця, такі як циклопропіл, циклобутил, циклопентил, циклогексил або циклогептил, 7 77396 8 циклооктил, циклононіл і циклодецил, а також бірозчинність, а також N-метилглюкамін, диметилгциклічні або трициклічні кільця, такі, наприклад, як люкамін, етилглюкамін, лізин, 1,6-гексадіамін, етаадамантаніл. ноламін, глюкозамін, саркозин, серинол, трисгідроПід аліциклічними кетонами маються на увазі ксиметиламінометан, амінопропандіол, основа моноциклічні кетони, такі як циклопропанон, цикСовака, 1-аміно-2,3,4-бутантриол. лобутанон, циклопентанон, циклогексанон, циклоПри наявності ж лужної функціональної групи гептанон, а також їх оксими, при цьому місце припридатні для застосування фізіологічно прийнятні єднання може змінюватися. солі органічних і неорганічних кислот, таких як соПід циклоалкенілом мається на увазі відповідляна кислота, сірчана кислота, фосфорна кислота, но циклобутеніл, циклопентеніл, циклогексеніл, лимонна кислота, винна кислота, фумарова кислоциклогептеніл, циклооктеніл, циклононеніл або та й ін. циклодеценіл, при цьому приєднання може відбуДо переважних сполук належать такі сполуки ватися як за подвійним зв'язком, так і за одинарзагальної формули І, у якій ним зв'язком. А означає групу =NR7, Аліциклічні алкіл, алкенільні сполуки, а також W означає кисень, сірку, два атоми водню або кетони можуть бути відповідно одно- або багатокгрупу =NR8, ратно заміщені галогеном, гідроксигрупою, С1Ζ означає зв'язок, С4алкоксигрупою або С1-С4алкілом. R1 означає необов'язково одно- або багатозаПід галогеном мається на увазі відповідно міщений галогеном, гідроксигрупою, С 1фтор, хлор, бром або йод. С6алкілоксигрупою, аралкілоксигрупою, С 1Алкенільні замісники є відповідно прямоланС6алкілом і/або заміщеним NR12R13 розгалуженим цюговими або розгалуженими і містять від 2 до 6, або прямоланцюговим С1-С12алкілом або С2переважно від 2 до 4 С-атомів. Як приклади можна С12алкенілом; або необов'язково одно- або баганазвати наступні: вініл, пропен-1-іл, пропен-2-іл, тозаміщеним галогеном, гідроксигрупою, С1бут-1-ен-1-іл, бут-1-ен-2-іл, бут-2-ен-1-іл, бут-2-енС6алкілоксигрупою, С1-С6алкілом і/або заміщеним 2-іл, 2-метилпроп-2-ен-1-іл, 2-метилпроп-1-ен-1-іл, NR12R13 С3-С10циклоалкілом або С 3бут-1-ен-3-іл, бут-3-ен-1-іл, аліл. С10циклоалкенілом; або необов'язково одно- або Арильний радикал має від 6 до 12 атомів вугбагатозаміщеним галогеном, гідроксигрупою, С1лецю, як приклади можна назвати нафтил, біфеніл С6алкілоксигрупою, аралкілоксигрупою, С1і насамперед феніл. С6алкілом і/або одно- або багатозаміщеним галоГетероарильний радикал може бути відповідгеном С1-С6алкілом арил або гетарил, но сконденсований з бензольним ядром. Як прикX означає С1-С6алкіл, 2 лади можна назвати такі 5-членні гетероароматиR означає незаміщені або необов'язково одчні сполуки, як тіофен, фуран, оксазол, тіазол, но- або багатозаміщені галогеном, С1-С6алкілом, імідазол, піразол і бензопохідні, і такі 6-членні геС1-С6алкоксигрупою, С1-С6ацилом, аміногрупою, тероароматичні сполуки, як піридин, піримідин, С1-С6карбоксіалкіламіногрупою і/або гідроксигрутриазин, хінолін, ізохінолін і бензопохідні. пою С3-С10аліцикли, аліциклічні кетони або неароАрильний і гетероарильний радикали можуть матичні гетероцикли і бути відповідно одно-, дво- або трикратно або ідеD означає N або C-R3, нтично по-різному заміщені гідроксигрупою, галоΕ означає N або C-R4, геном, С1-С4алкоксигрупою, С1-С4алкілом або одF означає N або C-R5 і но- або багатократно заміщеним галогеном С1G означає N або C-R6, при цьому С4алкілом. R3, R4, R5 і R6 означають водень, галоген або Під неароматичними гетероциклами маються незаміщені або необов'язково одно- або багатозана увазі 4-8-членні гетероцикли, які містять один міщені галогеном С1-С6алкоксигрупу, С1-С6алкіл, або декілька гетероатомів, таких як азот, кисень С1-С6карбоксіалкіл, або сірка. Як 4-членні цикли можна назвати серед R7 означає водень або С1-С6алкіл, інших оксетан і азетидин. Як 5-членні цикли можна R8 і R9 означають водень або С1-С6алкіл і назвати, наприклад, тетрагідрофуран, тетрагідроR12 і R13 означають водень, С1-С6алкіл або тіофен, піролін, піролідин, оксазолідин та імідазоутворюють кільце, яке може містити ще один гетелідин. Як 6-членні цикли можна назвати серед інроатом, ших тетрагідропіран, дигідропіран, а також їх ізомери і солі. тетрагідротіопіран, піперидин, дигідропіридин і Найбільш цінними, як було встановлено, є такі гексагідропіримідин. Як 7-членні цикли можна насполуки загальної формули І, у якій звати, наприклад, гексагідрооксепін, гексагідроаА означає групу =NR7, зепін, гексагідродіазепін і гексагідротієпін. W означає кисень, Неароматичні гетероцикли можуть бути відпоΖ означає зв'язок, відно заміщені гідроксигрупою, оксогрупою, галоR1 означає необов'язково одно- або багатозагеном, С1-С4алкоксигрупою, С1-С4алкілом або одміщений галогеном, гідроксигрупою, С 1но- або багатократно заміщеним галогеном С1С6алкілоксигрупою, аралкілоксигрупою, С 1С4алкілом. С6алкілом і/або заміщеним NR12R13 розгалуженим При наявності кислотної функціональної групи або прямоланцюговим С1-С12алкілом або С2придатними як солі для застосування з вищевкаС12алкенілом; або необов'язково одно- або багазаною метою є фізіологічно прийнятні солі органітозаміщеним галогеном, гідроксигрупою, С1чних і неорганічних основ, такі, наприклад, як солі С6алкілоксигрупою, С1-С6алкілом і/або заміщеним лужних і лужноземельних металів, що мають гарну NR12R13 С3-С10циклоалкілом або С 3 9 77396 10 С10циклоалкенілом; або необов'язково одно- або луки загальної формули І, у якій багатозаміщеним галогеном, гідроксигрупою, С1А означає групу =NR7, С6алкілоксигрупою, аралкілоксигрупою, С 1W означає кисень, С6алкілом і/або одно- або багатозаміщеним галоΖ означає зв'язок, геном С1-С6алкілом арил або гетарил, R1 означає необов'язково одно- або багатозаX означає С1-С6алкіл, міщений галогеном і/або трифторметилом феніл R2 означає незаміщені або необов'язково одабо ізохінолініл, но- або багатозаміщені галогеном, С1-С6алкілом, X означає С1-С6алкіл, С1-С6алкоксигрупою, С1-С6ацилом, аміногрупою, R2 означає незаміщені або необов'язково одС1-С6карбоксіалкіламіногрупою і/або гідроксигруно- або багато заміщені галогеном, С1-С6алкілом, пою С3-С10аліцикли, аліциклічні кетони або неароС1-С6алкоксикарбонілом, С1матичні гетероцикли і С6алкілендіоксигрупою або фенілом циклогексил, D означає N або C-R3, піперидиніл або оксоциклогексил і Ε означає N або C-R4, D означає C-R3, 5 F означає N або C-R і Ε означає C-R4, 6 G означає N або C-R , при цьому F означає C-R5 і 3 4 5 6 R , R , R і R означають водень, галоген або G означає C-R6, при цьому незаміщені або необов'язково одно- або багатозаR3, R4, R5 і R6 означають водень і міщені галогеном С1-С6алкоксигрупу, С1-С6алкіл, R7 і R9 означають водень, а також їх ізомери і С1-С6карбоксіалкіл, солі. R7 означає водень або С1-С6алкіл, Запропоновані у винаході сполуки перешкоR9 означає водень або С1-С6алкіл і джають фосфорилюванню, тобто вони здатні сеR12 і R13 означають водень, С1-С6алкіл або лективно інгібувати певні тирозинкінази, пригнічуутворюють кільце, яке може містити ще один гетеючи тим самим можливість виникнення роатом, персистувального ангіогенезу. Завдяки цьому вдаа також їх ізомери і солі. ється також запобігти, наприклад, росту та пошиОсобливий інтерес представляють також такі ренню пухлин. сполуки загальної формули І, у якій Сполуки загальної формули І за винаходом міА означає групу =NR7, стять також можливі таутомерні форми і включаW означає кисень, ють Е- або Z-ізомери або, при наявності хіральноΖ означає зв'язок, го центра, також рацемати і енантіомери. R1 означає необов'язково одно- або багатозаСполуки формули І, так само як і їх фізіологічні міщений галогеном, гідроксигрупою, С 1прийнятні солі завдяки своїй інгібувальній активС6алкілоксигрупою, аралкілоксигрупою, С1ності у відношенні фосфорилювання VEGFС6алкілом і/або заміщеним NR12R13 розгалуженим рецептора можуть застосовуватися як лікувальні або прямоланцюговим С1-С12алкілом або С2засоби. Особливості механізму їх дії дозволяють С12алкенілом; або необов'язково одно- або багазастосовувати запропоновані сполуки для лікувантозаміщеним галогеном, гідроксигрупою, С1ня захворювань, причиною яких є персистувальС6алкілоксигрупою, С1-С6алкілом і/або заміщеним ний ангіогенез або розвитку яких він сприяє. NR12R13 С3-С10циклоалкілом або С3 Оскільки сполуки формули І, як було встановС10циклоалкенілом; або необов'язково одно- або лено, є інгібіторами тирозинкінази KDR і FLT, вони багатозаміщеним галогеном, гідроксигрупою, С1придатні насамперед для лікування таких захвоС6алкілоксигрупою, аралкілоксигрупою, С 1рювань, які зумовлені ініційованим VEGFС6алкілом і/або одно- або багатозаміщеним галорецептором персистувальним ангіогенезом або геном С1-С6алкілом арил або гетарил, підвищенням проникності судин або розвитку яких X означає С1-С6балкіл, ці фактори сприяють. R2 означає незаміщені або необов'язково одОб'єктом даного винаходу є також застосуванно- або багатозаміщені галогеном, С1-С6алкілом, ня сполук за винаходом як інгібіторів тирозинкінази С1-С6алкоксигрупою, С1-С6ацилом, аміногрупою, KDR і FLT. С1-С6карбоксіалкіламіногрупою і/або гідроксигруОб'єктом даного винаходу відповідно до цього пою С3-С10аліцикли, аліциклічні кетони або неароє також лікувальні засоби, призначені для лікуванматичні гетероцикли і ня пухлин, відповідно застосування таких лікуваD означає C-R3, льних засобів. Ε означає C-R4, Запропоновані сполуки можуть застосовуватиF означає C-R5 і ся або індивідуально, або в складі відповідної G означає C-R6, при цьому композиції як лікувальні засоби для лікування псоR3, R4, R5 і R6 означають водень, галоген або ріазу, артриту, такого як ревматоїдний артрит, генезаміщені або необов'язково одно- або багатозамангіоми, ангіофіброми, очних хвороб, таких як міщені галогеном С1-С6алкоксигрупу, С1-С6алкіл, діабетична ретинопатія, неоваскулярна глаукома, С1-С6карбоксіалкіл, захворювань нирок, таких як гломерулонефрит, R7 означає водень або С1-С6алкіл, діабетична нефропатія, злоякісний нефросклероз, R9 означає водень або С1-С6алкіл і тромбозна мікроангіопатія, відторгнення транспR12 і R13 означають водень, С1-С6алкіл або лантатів і гломерулопатія, фіброзних захворюутворюють кільце, яке може містити ще один гетевань, таких як цироз печінки, захворювань, пов'яроатом, а також їх ізомери і солі. заних із проліферацією мезангіальних клітин, Найбільший інтерес представляють такі споартеріосклерозу і пошкоджень нервової тканини. 11 77396 12 В останньому випадку, тобто при лікуванні добавок. пошкоджень нервової тканини, за допомогою споДозування активних речовин можна змінювати лук за винаходом вдається запобігти швидкому залежно від методики введення, віку і ваги пацієнрубцюванню в місцях пошкоджень, тобто запобігата, типу та ступеня тяжкості захворювання, для ється утворенню рубців до того моменту, коли акякого призначене дане лікування, і тому подібних сони знову відновлять зв'язок між собою. Тим сафакторів. Добова доза складає від 0,5 до 1000мг, мим, як очевидно, можна полегшити відновлення переважно від 50 до 200мг, причому її можна ввозв'язків між нервовими клітинами. дити у вигляді разової дози або ж призначати з Крім того, завдяки запропонованим у винаході розрахунку на 2 або більше прийомів на день. сполукам вдається пригнічувати утворення в паціОписані вище композиції і лікувальні форми єнтів асциту. Так само можна успішно попереджатакож є об'єктом даного винаходу. ти появу набряків, зумовлених фактором VEGF. Процес одержання запропонованих у винаході Такі лікувальні засоби, їх композиції та їх засполук здійснюють за відомими методами. Так, стосування також є об'єктом даного винаходу. наприклад, сполуки формули І можна одержувати Винахід стосується також застосування сполук завдяки тому, що загальної формули І для одержання відповідного а) у сполуці формули II лікувального засобу, призначеного для лікування пухлин, псоріазу, артриту, такого як ревматоїдний артрит, гемангіоми, ангїофіброми, очних хвороб, таких як діабетична ретинопатія, неоваскулярна глаукома, захворювань нирок, таких як гломерулонефрит, діабетична нефропатія, злоякісний нефросклероз, тромбозна мікроангіопатія, відторгнення трансплантатів і гломерулопатія, фіброзних захворювань, таких як цироз печінки, захворювань, пов'язаних із проліферацією мезангіальних у якій D-G мають вказані вище значення, а А клітин, артеріосклерозу й пошкоджень нервової представляє собою OR13, де R13 означає водень, тканини. С1-С4алкіл або С1-С4ацил, спочатку алкілують амін Крім того, за допомогою сполук за винаходом і потім СОА переводять у амід або NH2 переводять вдається, як вказувалося вище, пригнічувати утвоу галоген, А переводять в амід і галоген переворення в пацієнтів асциту, а також запобігти появі дять у відповідний амін, а також при необхідності набряків, зумовлених фактором VEGF. відщепляють захисну групу, ацилюють амін або Для застосування сполук формули І як лікувавідновлюють кетон, який перетворюють в оксим льних засобів з них виготовляють відповідний фаабо за рахунок розширення циклу переводять у рмацевтичний препарат, який містить у своєму амід або лактон, або складі поряд з активною речовиною для ентеральб) у сполуці формули III ного або парентерального введення придатні для таких цілей фармацевтичні, органічні або неорганічні інертні носії, такі, наприклад, як вода, желатин, гуміарабік, лактоза, крохмаль, стеарат магнію, тальк, олії рослинного походження, поліалкіленгліколі і т.п. Фармацевтичні препарати можуть бути представлені у твердій формі, наприклад у вигляді таблеток, драже, супозиторіїв, капсул, або в рідкій формі, наприклад у вигляді розчинів, суспензій або емульсій. При необхідності вони містять, крім того, допоміжні речовини, такі як консерванти, стабіліу якій D-G мають вказані вище значення, а А затори, змочувачі або емульгатори, солі для регупредставляє собою галоген або OR13, де R13 може ляції осмотичного тиску або буфери. означати водень, (нижч.) алкіл або ацил, СОА пеДля парентерального застосування придатні реводять в амід, нітрогрупу відновлюють до аміну і насамперед ін'єкційні розчини або суспензії, зокпотім алкілують, або рема водні розчини активних сполук у полігідроксів) у сполуці формули IV етоксилованій рициновій олії. Як системи-носії можуть використовуватися поверхнево-активні допоміжні речовини, такі як солі жовчних кислот або фосфоліпіди тваринного або рослинного походження та їх суміші, а також ліпосоми або їх компоненти. Для перорального застосування придатні насамперед таблетки, драже або капсули з тальком і/або вуглеводневим носієм або зв'язуючим, таким, наприклад, як лактоза, кукурудзяний або картопу якій D-G мають вказані вище значення, К ляний крохмаль. Препарати можна призначати й у означає гідроксигрупу або галоген, а А представрідкій формі, наприклад, у вигляді настойки, у яку ляє собою галоген або OR13, де R13 може означати необов'язково додають підсолоджувальну речовиводень, (нижч.) алкіл або ацил, К переводять в ну, або за необхідності одну або декілька смакових 13 77396 14 амін, СОА переводять у амід або, якщо К означає Відновлення нітрогрупи проводять у полярних гідроксигрупу, переводять у галоген і потім продорозчинниках при кімнатній або підвищеній темпевжують працювати за описаною вище методикою, ратурі. Як каталізатори відновлення придатні меабо тали, такі як нікель Ренея, або каталізатори на г) сполуку формули V спочатку алкілують і пооснові благородних металів, таких як паладій або тім ангідрид переводять в амід. платина, а також гідроксид паладію, необов'язково нанесені на відповідні носії. Замість водню відомим способом можна використовувати також, наприклад, форміат амонію, циклогексен або гідразин. В однаковій мірі можливо застосування і таких відновників, як хлорид олова(ll) або хлорид титана(lll), і комплексних гідридів металів, необов'язково в присутності солей важких металів. Як відновник прийнятно також залізо. Реакцію в цих випадках проводять у присутності кислоти, такої, наприклад, як оцтова кислота, або хлориду амоПослідовність проведення вказаних операцій у нію, необов'язково з додаванням розчинника, таковсіх випадках можна змінювати. го, наприклад, як вода, метанол, залізо/аміак і т.п. Необхідний амід утворюють за відомими з ліПри значній тривалості реакції в цьому варіанті тератури методами. Так, наприклад, при утворенні може початися ацилювання аміногрупи. аміду можна виходити з відповідного складного Якщо передбачається алкілування аміногрупи, ефіру. Цей ефір згідно із [Journ. Org. Chem. стор. то амін можна піддавати відновному алкілуванню з 8414 (1995)] піддають взаємодії з триметилалюмівикористанням у цих цілях альдегідів або кетонів, нієм і відповідним аміном у розчинниках, таких як при цьому працюють у присутності відновника, толуол, при температурах в інтервалі від 0°С до такого, наприклад, як ціаноборогідрид натрію, у температури кипіння використовуваного розчиннивідповідному інертному розчиннику, такому, нака. При наявності в молекулі двох складноефірних приклад, як етанол, при температурах в інтервалі груп обидві ці групи переводять у той самий амід. від 0°С до температури кипіння розчинника. Якщо При використанні замість складного ефіру нітвиходити з первинної аміногрупи, то реакцію при рилів в аналогічних умовах одержують амідини. необхідності можна послідовно здійснювати взаєДля утворення амідів можуть застосовуватися модією з двома різними карбонільними сполуками, також усі методи, відомі з хімії пептидів. Так, зокз одержанням у результаті змішаних похідних [лірема, відповідну кислоту можна піддавати в апротература: наприклад, Verardo і ін., Synthesis, тонних полярних розчинниках, таких, наприклад, стор.121 (1993); Synthesis, стор.447 (1991); як диметилформамід, з використанням активоваKawaguchi, Synthesis, стор.701 (1985); Micovic і ін., ного похідного кислоти, що одержують, наприклад, Synthesis, стор.1043 (1991)]. за допомогою гідроксибензотриазолу і карбодііміВідповідно до іншого варіанта може виявитися ду, такого як діізопропілкарбодіімід, або ж за додоцільним спочатку утворювати шифову основу помогою попередньо утворених реагентів, таких, взаємодією альдегіду з аміном у розчинниках, танаприклад, як ГАТУ [Chem. Comm. стор. 201 ких як етанол або метанол, необов'язково з дода(1994)] або БТУ, при температурах в інтервалі від ванням допоміжних речовин, таких як льодяна 0°С до температури кипіння розчинника взаємодії оцтова кислота, і лише після цього додавати відз аміном. Поряд з таким підходом для утворення новник, такий, наприклад, як ціаноборогідрид напотрібного аміду можна застосовувати також метрію. тод, у якому використовують змішаний ангідрид Алкілування можна здійснювати також взаєкислоти, хлорангідрид кислоти, імідазолід або модією відповідно до варіанта Міцонубо зі спиртом азид. У реакціях з використанням хлорангідриду у присутності, наприклад, трифенілфосфіну й ефіпереважний як розчинник диметилацетамід, при ру азодикарбонової кислоти. В іншому варіанті цьому працюють в інтервалі температур від кімнаалкілування аміногрупи можна здійснювати за дотної до температури кипіння розчинника, переважпомогою алкілувальних агентів, таких як галогеніно при 80-100°С. ди, тозилати, мезилати або трифлати. Як розчинЯкщо передбачається введення в молекулу ріники придатні серед інших полярні розчинники, зних амідних груп, то, наприклад, другу складноетакі як етанол, тетрагідрофуран, ацетонітрил або фірну групу вводять у молекулу після утворення диметилформамід. Доцільним може виявитися першої амідної групи і потім проводять амідувандодавання допоміжної основи, такої як триетиланя, або при наявності в молекулі однієї групи у мін, триетилендіамінопіридин або карбонат калію. вигляді складного ефіру, а іншої у вигляді кислоти Оскільки для вільної аміногрупи існує небезпеобидві ці групи амідують послідовно за допомогою ка подвійного алкілування, може виявитися доцірізних методів. льним використовувати в такому випадку ангідрид Тіоаміди можна одержувати з антраніламідів ізатової кислоти. За допомогою основ, таких як взаємодією з дифосфадитіанами згідно із [Bull. гідрид натрію або карбонат цезію, у розчинниках, Soc. Chim. Belg. 87, стор.229 (1978)] або взаємодітаких як тетрагідрофуран або диметилформамід, єю з пентасульфідом фосфору в розчинниках, при температурах в інтервалі від кімнатної до темтаких як піридин, або взагалі без використання ператури кипіння розчинника, переважно при 60°С, розчинників при температурах в інтервалі від 0 до вказаний ангідрид можна переводити в аніон, який 200°С. потім піддають взаємодії з алкілувальним агентом. 15 77396 16 Відщеплення ефірної групи проводять за вістор.59-62 (1996)] шляхом діазотування в присутдомими з літератури методами. При цьому і при ності HF x піридину і наступною варкою, необов'янаявності в молекулі декількох груп можливо селезково в присутності джерела іонів фториду, такого, ктивне відщеплення. У цих випадках ефір обробнаприклад, як фторид тетрабутиламонію. ляють, наприклад, трибромідом бору в розчинниВідщеплення кетальних захисних груп здійсках, таких як дихлорметан, при температурах в нюють за відомою методикою, наприклад взаємоінтервалі від -100°С до температури кипіння роздією в розчиннику, такому як етанол або ацетон, з чинника, переважно при -78°С. Разом з тим ефір водною кислотою, переважно з 4н. соляною кисломожна відщеплювати також за допомогою тіометою, при температурах в інтервалі від кімнатної до тилату натрію в розчинниках, таких як диметилфотемператури кипіння розчинника. рмамід. Температура може знаходитися в інтертрет-Бутоксикарбонільну групу відщеплюють валі від кімнатної до температури кипіння відомим способом, а саме, взаємодією в розчинрозчинника, переважно працювати при 150°С. У нику, такому як тетрагідрофуран, діоксан або етавипадку бензилових ефірів їх відщеплення провонол, з кислотою, такою, наприклад, як 1н. соляна дять також з використанням сильних кислот, таких, кислота, при температурах в інтервалі від кімнатнаприклад, як трифтороцтова кислота, при темпеної до температури кипіння розчинника. Можливий ратурах в інтервалі від кімнатної до температури і інший варіант: відщеплювати трет-БОК-групу за кипіння. допомогою сильних кислот, таких як трифтороцтоРеакцію з перетворення гідроксигрупи, яка ва кислота, при температурах в інтервалі від -20°С знаходиться в орто- або пара-положенні відносно до температури кипіння, переважно при кімнатній азоту 6-членного гетероарилу, у галоген можна температурі. Використання розчинника, такого як здійснювати взаємодією з галогенангідридами метиленхлорид, не є обов'язковою умовою, однак неорганічних кислот, такими, наприклад, як оксихможе виявитися доцільним. лорид фосфору, необов'язково в інертному розВідновлення кетону здійснюють відомим спочиннику, при температурах аж до температури собом з використанням з цією метою комплексного кипіння використовуваного розчинника або галогегідриду металу, такого, наприклад, як борогідрид нангідриду кислоти. натрію або борогідрид літію, у розчинниках, таких Заміщення галогену, тозилату, трифлату або як етанол, тетрагідрофуран або діетиловий ефір, нонафлату, що знаходяться в орто- або парапри температурах в інтервалі від 0°С до темпераположенні відносно азоту 6-членної гетероароматури кипіння розчинника. тичної сполуки, переважно здійснювати взаємодіАцилювання аміну здійснюють відомим спосоєю з відповідним аміном в інертних розчинниках, бом, а саме, або за допомогою методів, описаних таких, наприклад, як ксилол, або в полярних розвище при утворенні амідів, або взаємодією з актичинниках, таких як N-метилпіролідон або диметивованими похідними кислот, такими, наприклад, як лацетамід, при температурах в інтервалі від 60 до хлорангідрид або ангідрид відповідної кислоти, у 170°С. Можливий й інший підхід: нагрівання без розчинниках, таких як метиленхлорид, ацетонітрил використання розчинника. Доцільним при цьому або тетрагідрофуран, необов'язково в присутності може виявитися додавання допоміжної основи, основ, таких як триетиламін. Доцільним може витакої як карбонат калію або карбонат цезію, або явитися додавання каталітичних кількостей димедодавання міді і/або оксиду міді. При неактивоватиламінопіридину. них галогенах або трифлатах можливо згідно із Перетворення циклічного кетону (за рахунок [Journ. Org. Chem., стор.1158 (2000)] введення розширення циклу) у відповідний лактон, у якого амінового фрагмента в присутності паладієвого на одну ланку більше, ніж у вихідного циклічного каталізатора. Як основа служить переважно треткетону, можна здійснювати окисленням за реакцібутилат натрію, а як допоміжний ліганд - біфенілєю Байера-Віллігера, для проведення якої існує фосфін. Вводити галогени хлор, бром або йод за цілий ряд варіантів, описаних у літературі. Так, допомогою аміногрупи можна, наприклад, і за реанаприклад, кетон можна піддавати взаємодії з кцією Зандмейера, а саме, взаємодією утворених надкислотою, такий як м-хлорнадбензойна кислоза допомогою нітритів як проміжних продуктів сота, або з монопероксифталатом магнію в розчинлей діазонію з хлоридом міді(І) або бромідом міниках, таких, наприклад, як метиленхлорид. Можді(І) у присутності відповідної кислоти, такої як лива також реакція з використанням пероксиду соляна кислота або бромистоводнева кислота, водню в мурашиній кислоті або перборату натрію в або з йодидом калію. трифтороцтовій кислоті. Якщо використовують ефір органічної азотисПеретворення циклічного кетону (за рахунок тої кислоти, то галогени можна вводити, наприрозширення циклу) у відповідний лактам, у якого клад, додаванням метиленйодиду або тетрабромна одну ланку більше, ніж у вихідного циклічного метану у відповідному розчиннику, такому як кетону, можна здійснювати відомим способом, а диметилформамід. Видаляти аміногрупу можна саме, утворювати за реакцією Шмідта лактам з або взаємодією з ефіром органічної азотистої кисаліциклічного кетону або піддавати оксим перетлоти в тетрагідрофурані, або шляхом діазотування воренню відповідно до перегрупування Бекмана. і відновної варки солі діазонію, наприклад, з фосДля проведення обох реакцій також існує цілий фористою кислотою, необов'язково з додаванням ряд описаних у літературі варіантів. Так, зокрема, оксиду міді(І). при здійсненні реакції Шмідта кетон піддають взаФтор можна вводити, наприклад, за реакцією ємодії з азидом натрію в сильних кислотах, таких Бальца-Шимана з використанням тетрафторбораяк концентрована соляна кислота, сірчана кислоту діазонію або згідно із [Journ. Fluor. Chem. 76, та, трифтороцтова кислота або метансульфонова 17 77396 18 кислота, без використання розчинників або в розчинниках, таких як ацетонітрил, хлороформ або метиленхлорид. При проведенні перегрупування Бекмана оксим відповідної карбонільної сполуки піддають взаємодії з кислотами, такими як поліфосфорна кислота або з її триметилсиліловим ефіром, або з монтморилонітом, просоченим кислотами Л'юіса, такими як три йодид алюмінію або хлорид заліза(lll), без використання розчинників або у розчинниках, таких як ацетонітрил, при підвищеній температурі. В іншому варіанті можна одержувати також мезилат або тозилат оксиму і потім обробляти їх основами, такими як водний їдкий натрій, або кислотами Л'юіса, такими як діетилалюмінійхлорид. Оксими утворюють за відомою методикою взаємодією з гідроксиламінгідрохлоридом у розчинниках, таких як етанол, необов'язково з додаванням основ, таких як піридин, ацетат натрію або водний їдкий натрій, при температурах аж до температури кипіння розчинника. Суміші ізомерів за допомогою звичайних методів, таких, наприклад, як кристалізація, хроматографія будь-якого виду або утворення солей, можна розділяти на енантіомери, відповідно на E/ZПримітка: ізомери. БОК означає "трет-бутоксикарбоніл". Процес одержання солей здійснюють відомим Приклад 2 способом, а саме, розчин сполуки формули І зміАмід N-(ізохінолін-3-іл)-2-(4шують з еквівалентною кількістю або з надлишком оксоциклогексилметиламіно)бензойної кислоти відповідних основи або кислоти, необов'язково в 100мг (0,24ммоля) аміду N-(ізохінолін-3-іл)-2розчиненому вигляді, після чого утворений осад ((4,4відділяють або ж розчин піддають звичайній в таетилендіокси)циклогексилметиламіно)бензойної ких випадках переробці. кислоти попередньо поміщають у 15мл ацетону і Нижче одержання запропонованих у винаході змішують з 1мл 4н. соляної кислоти, після чого сполук більш докладно пояснюється на прикладах, протягом 3год перемішують при кімнатній темпеякі не обмежують обсяг винаходу. ратурі. Потім осад відокремлюють вакуумПриклад 1 фільтрацією. Залишок розчиняють в ефірі оцтової Амід N-(ізохінолін-3-іл)-2-((4,4кислоти і струшують з 1н. їдким натрієм. Нерозетилендіокси)циклогексилметиламіно)бензойної чинний залишок відокремлюють вакуумкислоти фільтрацією й оцтовоефірну фазу сушать, фільт144мг (1ммоль) 3-аміноізохіноліну змішують у рують і концентрують. З відділеного вакуум10мл абсолютного толуолу в атмосфері аргону і фільтрацією залишку і залишку від упарювання без доступу вологи при 4°С з 0,5мл 2-молярного оцтовоефірної фази одержують 66мг (73% від терозчину триметилалюмінію в толуолі і протягом орії) аміду N-(ізохінолін-3-іл)-2-(415хв перемішують при цій температурі. Потім дооксоциклогексилметиламіно) бензойної кислоти з дають 240мг (0,92ммоля) метилового ефіру 2температурою плавлення 147,7°С. ((4,4Приклад 3 етилендіокси)циклогексилметиламіно)бензойної Амід N-(індазол-5-іл)-2-(тетрагідропіран-4кислоти і нагрівають протягом 2год до температуіл)метиламінобензойної кислоти ри ванни 120°С. Потім суміш змішують з 30мл роз235мг (1ммоль) 2-(тетрагідропіран-4веденого розчину гідрокарбонату натрію і тричі іл)метиламінобензойної кислоти змішують у 10мл струшують із приблизно 30мл ефіру оцтової кисдиметилформаміду з 266мг (2ммоля) 5лоти. Об'єднану органічну фазу промивають воаміноіндазолу. До цього розчину в атмосфері ардою, сушать, фільтрують і концентрують. Залишок гону і без доступу вологи додають 253мг хроматографують на силікагелі з використанням (2,5ммоля) N-метилморфоліну і 456мг (1,2ммоля) як елюенту суміші гексан/ефір оцтової кислоти в гексафторфосфату О-(7-азабензотриазол-1-іл)співвідношенні 1:1. У результаті одержують 151мг 1,1,3,3-тетраметилуронію. Після 3-годинного пе(39,3% від теорії) аміду N-(ізохінолін-3-іл)-2-((4,4ремішування при кімнатній температурі суміш конетилендіокси)циклогексилметиламіно)бензойної центрують під вакуумом, розчиняють за допомокислоти з температурою плавлення 176,7°С. гою розведеного розчину гідрокарбонату натрію і Аналогічно до описаної в прикладі 1 методики тричі екстрагують ефіром оцтової кислоти порціяодержують наступні сполуки формули: ми по 30мл. Об'єднану органічну фазу промивають водою, сушать, фільтрують і концентрують. Залишок розмішують в ефірі оцтової кислоти і відокремлюють вакуум-фільтрацією. Фільтрат концентру 19 77396 20 ють і залишок хроматографують на силікагелі з водою, сушать, фільтрують і концентрують. Заливикористанням як елюенту суміші метиленхлошок хроматографують на силікагелі з використанрид/етанол у співвідношенні 10:1. У результаті ням як елюенту суміші гексан/ефір оцтової кислоти одержують 124мг (35% від теорії) аміду Мв співвідношенні 8:2. У результаті одержують (індазол-5-іл)-2-(тетрагідропіран-4251мг (27,2% від теорії) метилового ефіру 2-((4,4іл)метиламінобензойної кислоти з температурою етилендіокси)циклогексилметиламіно)бензойної плавлення 173,6°С. кислоти. Приклад 4 За аналогічною методикою одержують також Амід N-(3-трифторметилфеніл)-2наступні сполуки: (гщклогексилметиламіно)нікотинової кислоти метиловий ефір 6-фтор-2-(тетрагідропіран-4259мг (1ммоль) етилового ефіру 2іл)метиламінобензойної кислоти, (циклогексилметиламіно)нікотинової кислоти зміметиловий ефір 2-(тетрагідропіран-4шують у 5мл N-метилпіролідону з 161мг (1ммоль) іл)метиламінобензойної кислоти і 3-трифторметиланіліну і протягом 3год нагрівають метиловий ефір 2-(1-бензилпіперидин-4до температури ванни 150°С. Потім розчинник іл)метиламінобензойної кислоти. видаляють під вакуумом і залишок хроматографуВ. Етиловий ефір N-бензилпіперидин-4ють на силікагелі з використанням як елюенту сукарбонової кислоти міші циклогексан/ефір оцтової кислоти в співвід1г (6,4ммоля) етилового ефіру піперидин-4ношенні 1:1. У результаті одержують 100мг аміду карбонової кислоти змішують у 10мл абсолютного N-(3-трифторметилфеніл)-2етанолу з 0,75мл (6,4ммоля) бензилхлориду і 1,52г (циклогексилметиламіно)нікотинової кислоти (11ммолів) карбонату калію, після чого суміш проНижче на прикладах більш докладно пояснютягом 30год перемішують при кімнатній темперається одержання проміжних продуктів, які переватурі. Потім розподіляють в ефірі оцтової кисложно можуть використовуватися для одержання ти/воді. Об'єднану органічну фазу промивають сполук за винаходом. водою, сушать, фільтрують і концентрують. ЗалиОдержання проміжних продуктів шок хроматографують на силікагелі з використанЕтил-4,4ням як елюенту суміші гексан/ефір оцтової кислоти (етилендіокси)циклогексанкарбоксилат одержують в співвідношенні 1:1. У результаті одержують за методикою, описаною в [Journ. Org. Chem. 62, 991мг (64% від теорії) етилового ефіру Мстор.5288 (1997)]. бензилпіперидин-4-карбонової кислоти. А. 4,4-(етилендіокси)циклогексанкарбальдегід Г. Етиловий ефір 2214мг (1ммоль) етил-4,4(циклогексилметиламіно)нікотинової кислоти (етилендіокси)циклогексанкарбоксилату охоло391мг (2ммоля) гідрохлориду етилового ефіру джують у 15мл толуолу в атмосфері аргону і без 2-карбоксіетилімінооцтової кислоти [одержання доступу вологи до -78°С і по краплях змішують з згідно із Het. 1996, 43(9), (1981)] змішують у 5мл 0,85мг 1,2-молярного розчину диізобутилалюмінійетанолу з 226мг (2ммоля) циклогексилметиламіну. гідриду (ДІБАГ) у толуолі. Після 15-хвилинного Після закінчення 10хв починається помутніння. перемішування при цій температурі домішують Потім додають 0,48мл (2ммоля) діетилацетату приблизно 10мл насиченого розчину хлориду амомалонового альдегіду і суміш протягом 4год нагрінію. Органічну фазу відокремлюють, промивають вають зі зворотним холодильником. Далі суміш насиченим розчином кухонної солі, сушать, фільтконцентрують і залишок хроматографують на силірують і концентрують. У результаті одержують кагелі з використанням як елюенту суміші гек148мг (85% від теорії) 4,4сан/ефір оцтової кислоти в співвідношенні 1:1. У (етилендіокси)циклогексанкарбальдегіду. результаті одержують 150мг етилового ефіру 2За аналогічною методикою одержують також (циклогексилметиламіно)нікотинової кислоти. наступні сполуки: Д. Ангідрид N-циклогексилметилізатової кистетрагідропіраніл-4-карбальдегід, лоти N-бензилпіперидин-4-карбальдегід і 815мг (5ммолів) ангідриду ізатової кислоти роN-БОК-4-формілпіперидин зчиняють у 15мл Ν,Ν-диметилацетаміду й в атмо[одержання згідно із Org. Prep. Proc. Int. 32, 96, сфері захисного газу і без доступу вологи змішу2000]. ють з 220мг (5,5ммоля) гідриду натрію (60%-на Б. Метиловий ефір 2-((4,4дисперсія в мінеральному маслі). Далі протягом етилендюкси)циклогексилметиламіно) бензойної 1год нагрівають до 60°С. Після охолодження докислоти дають 885мг (5ммолів) циклогексилметилброміду і 334мг (2,21ммоля) метилового ефіру антранісуміш протягом 4год нагрівають до 60°С. Потім лової кислоти розчиняють у 18,4мл абсолютного розбавляють водою до об'єму 60мл і тричі струтолуолу і змішують з 600мг (3,53ммоля) 4,4шують з ефіром оцтової кислоти. Об'єднану орга(етилендіокси)циклогексанкарбальдегіду і 0,18мл нічну фазу промивають водою, сушать, фільтрульодяної оцтової кислоти. Потім суміш протягом ють і концентрують. Залишок центрифугують на 24год перемішують при кімнатній температурі, силікагелі з використанням як елюенту суміші гекзмішують з 22мг (3,53ммоля) ціаноборогідриду сан/ефір оцтової кислоти в співвідношенні 1:1. У натрію і повторно перемішують протягом 24год результаті одержують 300мг ангідриду Nпри кімнатній температурі. Далі суміш змішують з циклогексилметилізатової кислоти. розведеним розчином гідрокарбонату натрію і триЯкщо одержання певних проміжних продуктів у чі струшують з ефіром оцтової кислоти порціями заявці не описано, то мається на увазі, що ці спопо 30мл. Об'єднану органічну фазу промивають луки відомі або можуть бути отримані аналогічно 21 77396 22 до відомих сполук або за описаними у даній заявці 10мкМ оксид натрійванадію. методами. Приклад застосування 1 Вищеописані проміжні сполуки придатні наПригнічення активності кінази KDR і FLT-1 у самперед для одержання запропонованих антраприсутності сполук за винаходом ніламідів. Тим самим ці проміжні сполуки також є У титраційний мікропланшет, що звужується об'єктом даного винаходу. на кінцях, (без зв'язування протеїну) додають Як вказувалося вище, ці проміжні сполуки час10мкл живильної суміші (вихідний розчин А об'єтково самі мають активність і завдяки цьому також мом 10мкл АТФ + 25мкКі g-33Р-АТФ (приблизно можуть застосовуватися для одержання відповід2,5мкл вихідного розчину Б) + вихідний розчин В ного лікувального засобу, призначеного для ліку30мкл полі(Glu4Туr) + 1,21мл розчинника субстравання пухлин, псоріазу, артриту, такого як ревматів), 10мкл розчину інгібітору (сполуки відповідно тоїдний артрит, гемангіоми, ангіофіброми, очних до розведень, як контроль служить 3%-ний розчин хвороб, таких як діабетична ретинопатія, неовасДМСО в розчиннику субстратів) і 10мкл розчину кулярна глаукома, захворювань нирок, таких як ферменту (11,25мкг вихідного розчину ферменту гломерулонефрит, діабетична нефропатія, злоякі(кінази KDR або FLT-1), розведеного при 4°С в сний нефросклероз, тромбозна мікроангіопатія, 1,25мл розчину ферменту). Вказані інгредієнти відторгнення трансплантатів і гломерулопатія, ретельно перемішують і протягом 10хв інкубують фіброзних захворювань, таких як цироз печінки, при кімнатній температурі. Потім додають 10мкл захворювань, пов'язаних із проліферацією мезанстоп-розчину (250мМ ЕДТК, рН 7,0), перемішують і гіальних клітин, артеріосклерозу й пошкоджень 10мкл розчину переносять на фосфоцелюлозний нервової тканини. фільтр типу Ρ 81, після чого декілька разів промиКрім того, за допомогою проміжних сполук за вають у 0,1-молярній фосфорній кислоті. Фільтрувинаходом вдається пригнічувати також утворення вальний папір сушать, покривають шаром Meltilex і в пацієнтів асциту. В однаковій мірі можна з їх доза допомогою мікролічильника бета-частинок випомогою попереджати появу набряків, зумовлених мірюють радіоактивність. фактором VEGF. ІС50-значення представляють собою величини, Нижче на прикладах застосування, які не обвизначені за концентрацією інгібітору, необхідною межують обсяг винаходу, більш докладно поясдля пригнічення вбудовування фосфату на 50% нюються біологічна дія запропонованих сполук та від його вбудовування за відсутності інгібітору, за їх застосування. винятком контрольного значення, отриманого в Розчини, які використовувалися в дослідах результаті сліпого досліду (реакція, припинена за Вихідні розчини: допомогою ЕДТК). вихідний розчин А: 3мМ АТФ у воді, рН 7,0 (Результати інгібування кінази ІС50 У мкМ пред70°С), ставлені в нижченаведеній таблиці: вихідний розчин Б: g-33Р-АТФ 1 мКі/100мкл, вихідний розчин В: полі(Glu4Туr) 10мг/мл у воПриклад № VEGFR І (FLT) VEGFR II (KDR) ді. 1.1 0,05 Розчини для розведень: 2.0 0,02 розчинники субстратів: 10мМ ДТТ, 10мМ хлорид марганцю, 100мМ хлорид магнію, розчин ферменту: 120мМ трис/НСІ, рН 7,5, Комп’ютерна верстка О. Гапоненко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601