Спосіб забезпечення текстурувального штаму молочнокислих бактерій, його застосування і композиція на його основі

Реферат: UA 113279 C2 (12) UA 113279 C2 Винахід стосується способу одержання текстурувального штаму молочнокислих бактерій, який є стійким до D-циклосерину і/або антибіотика, який має такий самий механізм дії або таку саму мішень, як D-циклосерин; штамів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) DSM 24019 і DSM 24020; штамів Streptococcus thermophilus DSM 24010 і DSM 24011; композиції, яка містить вказані штами молочнокислих бактерій; молочного продукту, способу виробництва вказаного молочного продукту і застосування вказаних штамів молочнокислих бактерій для отримання вказаного молочного продукту. UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД Даний винахід стосується мутантів молочнокислих бактерій, таких як Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і Streptococcus thermophilus, які виявляють стійкість відносно антибіотика Dциклосерину і/або функціонально еквівалентних антибіотиків, і у яких виявлена підвищена текстура в процесі росту в молоці при збереженні інших властивостей росту батьківського штаму. Крім того, даний винахід стосується культур, таких як ініціюючі культури, в яких містяться такі мутанти, і молочних продуктів, ферментованих даними культурами. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ, ДО ЯКОЇ НАЛЕЖИТЬ ВИНАХІД У харчовій промисловості використовують численні види бактерій, зокрема, молочнокислі бактерії, щоб поліпшувати смак і текстуру продуктів харчування, а також збільшувати термін зберігання цих продуктів харчування. У випадку молочної промисловості молочнокислі бактерії інтенсивно використовують, щоб здійснювати скисання молока (шляхом ферментації), а також для текстурування продукту, в який включаються ці бактерії. У числі молочнокислих бактерій, що використовуються в харчовій промисловості, можна згадати наступні роди: стрептококи (Streptococcus), лактококи (Lactococcus), лактобацили (Lactobacillus), лейконостоки (Leuconostoc), педіококи (Pediococcus) і біфідобактерії (Bifidobacterium). Молочнокислі бактерії виду Streptococcus thermophilus широко використовують індивідуально або в поєднанні з іншими бактеріями, такими як Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), для виробництва продуктів харчування, зокрема, ферментованих продуктів. Ці бактерії включають, зокрема, в композиції ферментів, що використовуються для виробництва ферментованих молочних продуктів, наприклад, йогуртів. Певні бактерії з їх числа грають провідну роль в розвитку текстури ферментованого продукту. Дана характеристика тісно пов'язана з виробництвом полісахаридів. Сучасні тенденції відносно йогуртів являють собою помірний аромат і високу текстуру. У даний час цей досягається шляхом використання культур, які створюють помірний аромат, додавання загусників або білків, які надають бажаної консистенції. Виробникам йогурту потрібна можливість виготовляти йогурт, що має ці властивості, без додавання загущувальних речовин. Це дозволить їм скоротити витрати і спростити опис продукту на етикетці. Один досить привабливий шлях до досягнення цієї мети полягає в тому, щоб використовувати ініціюючу культуру, яка виробляє високий рівень текстури. Щоб задовольнити вимоги промисловості, стало необхідним створення нових текстурувальних штамів молочнокислих бактерій, зокрема, видів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і Streptococcus thermophilus, для текстурування продуктів харчування. Особливо потрібні нові текстурувальні штами Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), які можна використовувати разом з новими текстурувальними штамами Streptococcus thermophilus. Мутанти, стійкі відносно D-циклосерину, описані для ряду різних бактерій, але ніколи не було повідомлень, що ці мутанти можна використовувати для збільшення текстури молочного продукту. Не були описані мутанти ні Streptococcus thermophilus, ні Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus). СУТЬ ВИНАХОДУ Автори даного винаходу несподівано виявили, що група мутантів молочнокислих бактерій, які виявляють стійкість відносно D-циклосерину, виробляє вищі значення напруження зсуву і/або жорсткості гелю, ніж материнський штам, коли ці бактерії використовують для ферментації молока. Автори даного винаходу запропонували спосіб отримання таких текстурувальних штамів молочнокислих бактерій, які виявляють стійкість відносно антибіотика D-циклосерину і/або функціонально еквівалентних антибіотиків, а також вони запропонували нову групу стійких відносно D-циклосерину штамів молочнокислих бактерій видів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і Streptococcus thermophilus з високими текстурувальними властивостями. Відповідно до вищезазначених несподівано виявлених фактів, даний винахід стосується текстурувальних штамів молочнокислих бактерій, таких як Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), і штамів Streptococcus thermophilus, які виявляють стійкість відносно D-циклосерину і/або стійкість відносно функціонально еквівалентного антибіотика, а також способу отримання таких штамів. Крім того, даний винахід стосується культур, таких як ініціюючі культури, що включають мутантів, і молочних продуктів, таких як ферментовані молочні продукти, ферментовані даними культурами. КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ Фіг. 1 представляє профілі скисання (pH залежно від часу) молока при 43C для материнського штаму Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC13995 і двох стійких до D-циклосерину мутантів CHCC13995, що називаються CHCC12944 і CHCC12945. 1 UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Фіг. 2 представляє напруження зсуву (при 300 1/с (Па)) повножирного молока, що містить 2 % сухого знежиреного молока, при 43C для материнського штаму Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC13995 і двох стійких до D-циклосерину мутантів CHCC13995, що називаються CHCC12944 і CHCC12945. Фіг. 3 представляє жорсткість гелю (при 300 1/с (Па)) повножирного молока, що містить 2 % сухого знежиреного молока, при 43C для материнського штаму Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC13995 і двох стійких до D-циклосерину мутантів CHCC13995, що називаються CHCC12944 і CHCC12945. Фіг. 4 представляє напруження зсуву (при 300 1/с (Па)) повножирного молока, що містить 2 % сухого знежиреного молока, при 43C для материнського штаму Streptococcus thermophilus CHCC13994 і двох стійких до D-циклосерину мутантів CHCC13994, що називаються CHCC13235 і CHCC13236. Фіг. 5 представляє жорсткість гелю (при 300 1/с (Па)) повножирного молока, що містить 2 % сухого знежиреного молока, при 43C для материнського штаму Streptococcus thermophilus CHCC13994 і двох стійких до D-циклосерину мутантів CHCC13994, що називаються CHCC13235 і CHCC13236. ДОКЛАДНИЙ ОПИС Визначення При використанні в цьому документі термін "молочнокислі бактерії" означає грампозитивні мікроаерофільні або анаеробні бактерії, які ферментують цукор, і при цьому утворюються кислоти, в тому числі молочна кислота як кислота, що переважно утворюється, оцтова кислота і пропіонова кислота. Найкорисніші для промисловості молочнокислі бактерії знаходяться в загоні лактобактерій (Lactobacillales), який включає види наступних родів: лактококи (Lactococcus), стрептококи (Streptococcus), лактобацили (Lactobacillus), лейконостоки (Leuconostoc), педіококи (Pediococcus), бревібактерії (Brevibacterium), ентерококи (Enterococcus) і пропіонібактерії (Propionibacterium). Крім того, виробляючі молочну кислоту бактерії, що належать до групи суворо анаеробних бактерій, а саме види роду біфідобактерій (Bifidobacterium) звичайно включають в групу молочнокислих бактерії. Їх часто використовують як харчові культури індивідуально або в поєднанні з іншими молочнокислими бактеріями. Молочнокислі бактерії, включаючи бактерії видів лактобацил (Lactobacillus) і термофільних стрептококів (Streptococcus thermophilus), звичайно постачають для молочної промисловості в формі заморожених або ліофілізованих культур для об'ємного ініціювання або в формі, що називається культур прямого посіву (DVS), які призначені для безпосередньої інокуляції в ферментаційний резервуар або бак для виробництва молочного продукту, такого як ферментований молочний продукт. Такі культури називаються загальним терміном "ініціюючі культури" або "ініціатори". Термін "молоко" потрібно розуміти як рідину, що виділяється з молочних залоз будь-яких ссавців, таких як корови, вівці, кози, буйволиці або верблюдиці. У переважному варіанті здійснення молоко являє собою коров'яче молоко. Термін "молоко" також включає розчини, що містять білки і жири, виготовлені з рослинних матеріалів, наприклад, соєве молоко. Термін "молочний субстрат" може являти собою будь-який сирий і/або перероблений молочний матеріал, який можна піддавати ферментації, використовуючи спосіб згідно з даним винаходом. Таким чином, використовувані молочні субстрати включають, але не обмежуються цим, розчини/суспензії будь-якого молока або молокоподібного продукту, що містить білок, такого як суцільне або низькожирне молоко, знежирене молоко, пахта, відновлене сухе молоко, згущене молоко, сухе молоко, молочна сироватка, сироватка із зниженим вмістом білка (пермеат), лактоза, маточний розчин від кристалізації лактози, концентрат білка молочної сироватки або вершків. Зрозуміло, молочний субстрат можна отримувати від будь-якого ссавця, наприклад, він може являти собою практично чисте молоко ссавця або відновлене сухе молоко. Переважно, щонайменше частину білка в молочному субстраті являють собою білки, що містяться в природному молоці, такі як казеїн або білок молочної сироватки. Однак частину білка можуть являти собою білки, які не містяться в природному молоці. Перед ферментацією молочний субстрат можна піддавати гомогенізації і пастеризації, використовуючи способи, відомі в техніці. Термін "гомогенізація" при використанні в цьому документі означає інтенсивне перемішування для отримання розчинної суспензії або емульсії. Якщо гомогенізацію здійснюють перед ферментацією, її можна здійснювати таким чином, щоб розбивати молочний жир на частинки меншого розміру, які більше не виділяються з молока. Це можна здійснювати, пропускаючи молоко при високому тиску через дрібні отвори. 2 UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Термін "пастеризація" при використанні в цьому документі означає обробку молочного субстрату для зменшення або усунення присутності живих організмів, таких як мікроорганізми. Переважно пастеризацію здійснюють витримуванням при певній температурі протягом певного періоду часу. Задана температура звичайно досягається шляхом нагрівання. Температуру і тривалість обробки можна вибирати таким чином, щоб знищувати або інактивувати певні бактерії, такі як шкідливі бактерії. Після цього можна здійснювати стадію швидкого охолоджування. Термін "ферментація" в способах даного винаходу означає перетворення вуглеводів в спирти або кислоти під дією мікроорганізмів. Переважно, ферментація в способах даного винаходу являє собою перетворення лактози в молочну кислоту. Процеси ферментації для використання у виробництві ферментованих молочних продуктів добре відомі, і фахівець в даній галузі техніки знає, яким чином вибрати прийнятні технологічні умови, такі як температура, кисень, кількість і характеристики мікроорганізмів і тривалість процесу. Зрозуміло, умови ферментації вибирають таким чином, щоб забезпечити досягнення мети даного винаходу, тобто отримати молочний продукт в твердій або рідкій формі (ферментований молочний продукт). У контексті даного винаходу йогуртова ініціююча культура являє собою бактеріальну культуру, яка включає щонайменше один штам Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і щонайменше один штам Streptococcus thermophilus. Відповідно до цього, термін "йогурт" означає ферментований молочний продукт, що отримується інокуляцією і ферментацією молока з використанням композиції, що включає штам Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і штам Streptococcus thermophilus. У контексті даного винаходу термін "напруження зсуву" визначає в'язкість. В'язкість (виражена в Па•с) визначається як відношення напруження зсуву (Па) до швидкості зсуву (1/с). Значення напруження стандартно визначається в цьому документі при швидкості зсуву, що дорівнює 300 1/с. Органолептичні експерименти (дані не приведені) показали, що найкраща кореляція між реологічними вимірюваннями і органолептичною в'язкістю (відчуттям в порожнині рота) виявляється, коли використовують в'язкість, виміряну при швидкості зсуву 300 1/с. У контексті даного винаходу термін "функціонально еквівалентний антибіотик" потрібно розуміти як антибіотик, що має такий же механізм дії або таку ж мішень, як D-циклосерин, такий як, наприклад, інші інгібітори D-аланіл-D-аланінлігаз, такі як, наприклад, ванкоміцин (Tytgat і інш., Curr. Med. Chem., 2009 р., т. 16, № 20, с. 2566-2580) і інші інгібітори D-аланінрацемази, такі як, наприклад, O-карбамоїл-D-серин, алафосфін і галоаланіни (Holtje Desk Encyclopedia of Microbiology (Настільна енциклопедія мікробіології), 2004 р., с. 239-258). Термін "стійкий відносно D-циклосерину і/або функціонально еквівалентного антибіотику" в цьому документі означає, що певний бактеріальний штам, що мутував, не знищується або знищується значно повільніше в порівнянні з відповідним штамом, що не мутував, з якого отриманий штам, що мутував, в присутності вказаного антибіотика в культуральному середовищі. Залежно від концентрації сполуки антибіотика в культуральному середовищі, на стійкість можуть також впливати зміни властивостей росту штамів, які мутували, і штамів, які не мутували. Наприклад, низька концентрація антибіотика в культуральному середовищі запобігає або значно пригнічує ріст штамів, які не мутували, не впливаючи при цьому на ріст штамів, які мутували. Штами, що не мутували, які можна використовувати як чутливі еталонні штами для оцінки стійкості, переважно включають штами CHCC13995 і CHCC13994. Приклади 1 і 2 даної заявки ілюструють виділення мутантних штамів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і Streptococcus thermophilus, відповідно, які виявляють стійкість відносно Dциклосерину. На основі способів, представлених в прикладах 1 і 2, фахівець в даній галузі техніки зможе легко вибирати для кожного материнського штаму, який не мутував, кількість Dциклосерину або кількість функціонально еквівалентного антибіотика, яка своєю дією знищує більшість клітин материнського штаму і при цьому не знищує або знищує значно повільніше мутантні штами, стійкі відносно D-циклосерину і/або функціонально еквівалентного антибіотику. У контексті даного винаходу термін "мутант" потрібно розуміти як похідний штам або штам, який можна отримати зі штаму згідно з даним винаходом (або материнського штаму), використовуючи, наприклад, методи генної інженерії, випромінювання і/або хімічну обробку. Мутант може також являти собою спонтанно виникаючий мутант. Виявляється переважним, щоб мутант являв собою функціонально еквівалентний мутант, наприклад, мутант, який має практично однакові або поліпшені властивості (наприклад, такі як в'язкість, жорсткість гелю, покриття порожнини рота, аромат, подальше скисання, швидкість скисання і/або фагостійкість) в порівнянні з материнським штамом. Такий мутант являє собою частину даного винаходу. Зокрема, термін "мутант" стосується штаму, отриманого при впливі на штам згідно з даним 3 UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 винаходом будь-якої мутагенної обробки, що традиційно використовується, в тому числі обробки хімічним мутагеном, таким як етилметансульфонат (EMS) або N-метил-N'-нітро-Nнітрозогуанідин (NTG), або ультрафіолетового випромінювання, або спонтанно виникаючого мутанта. Мутант можна піддавати декільком процедурам мутагенезу (одну процедуру потрібно розуміти як одну стадію мутагенезу, за якою йде стадія перевірки/відбору), але для даного винаходу виявляється переважним здійснення не більше ніж 20, або не більше ніж 10, або не більше ніж 5 процедур (або стадій перевірки/відбору). У переважному для даного винаходу мутанті менше ніж 1 %, менше ніж 0,1, менше ніж 0,01, менше ніж 0,001 % або навіть менше ніж 0,0001 % нуклеотидів в бактеріальному геномі замінені іншими нуклеотидами або видалені в порівнянні з материнським штамом. У контексті даного винаходу термін "варіант" потрібно розуміти як штам, який є функціонально еквівалентним штаму згідно з даним винаходом, наприклад, маючи практично однакові або поліпшені властивості, наприклад, такі як в'язкість, жорсткість гелю, покриття порожнини рота, аромат, подальше скисання, швидкість скисання і/або фагостійкість). Такі варіанти, які можна ідентифікувати, використовуючи відповідні методи дослідження, являють собою частину даного винаходу. Використання означеного і неозначених артиклів і аналогічних допоміжних слів в контексті опису даного винаходу (зокрема, в контексті наступної формули винаходу) потрібно тлумачити як єдине позначення і множинної однини, якщо інша умова не визначена в цьому документі, або якщо це чітко не суперечить контексту. Терміни "що представляє", "що має", "що включає" і "що містить" потрібно тлумачити як не передбачаючі обмеження терміни (тобто, що мають значення "що включає, але не обмежений"), якщо не визначена інша умова. Представлення інтервалів значень в цьому документі призначене просто як спосіб скорочення індивідуального переліку кожного окремого значення, що знаходиться в даному інтервалі, якщо в цьому документі не визначена інша умова, і кожне окреме значення включається в даний опис, як якби воно було індивідуально представлене в цьому документі. Всі способи, описані в цьому документі, можна здійснювати в будь-якому прийнятному порядку, якщо в цьому документі не визначена інша умова, або якщо це чітко не суперечить контексту. Використання в цьому документі будь-яких і всіх прикладів або відповідних виразів (наприклад, "такий як") призначене просто для кращої ілюстрації даного винаходу і не встановлює обмеження відносно об'єму даного винаходу, якщо не визначена інша умова. Жодний вираз в даному описі не треба тлумачити як позначення того, який-небудь не заявлений елемент є суттєвим для практичного здійснення даного винаходу. Здійснення і аспекти даного винаходу D-циклосерин (D-4-аміно-3-ізоксазолідон) являє собою антибіотик, яким інгібуються аланінрацемаза, D-аланіл-D-аланінлігаза, D-аланілаланінсинтаза і D-аланінпермеаза, в результаті чого відбувається лізис клітин. D-аланінрацемаза грає важливу роль в синтезі Dаланіну, невід'ємній частині пептидогліканового шару клітинної оболонки. Мутанти мікобактерій (Mycobacterium), які виявляють стійкість до D-циклосерину, виробляють надлишок D-аланіну шляхом збільшення експресії гена D-аланінрацемази (Caceres і інш., J. Bacteriol., 1997 р., т. 179, с. 5046-5055). Таким чином, автори даного винаходу даного винаходу заявили про можливість виділення спонтанних мутантів штамів молочнокислих бактерій, яким властиве виробництво більшої кількості D-аланіну. Такі мутанти були виділені і охарактеризовані. Фахівець в даній галузі техніки розуміє, що і інші антибіотики, що мають такий же механізм дії або таку ж мішень, як D-циклосерин, можна використовувати індивідуально або в поєднанні з D-циклосерином для виділення мутантів типу, описаного в цьому документі. Таким чином, даний винахід включає також використання таких інших функціонально еквівалентних антибіотиків, таких як інші інгібітори D-аланіл-D-аланінлігаз або D-аланінрацемази. Термін "функціонально еквівалентні антибіотики відносно D-циклосерину" при використанні в цьому документі включає будь-яку сполуку, яка перешкоджає синтезу D-аланіну, перенесенню D-аланіну в клітину, утворенню D-аланіл-D-аланіну з D-аланін або включенню D-аланіл-Dаланіну в складові елементи пептидогліканового полімеру. Такі антибіотики включають, але не обмежуються цим, антибіотики, які інгібують наступні ферменти: D-аланін-рацемаза, D-аланілD-аланінлігаза, D-аланілаланінсинтаза і D-аланінпермеаза. Такі функціонально еквівалентні антибіотики відносно D-циклосерину включають, але не обмежуються цим, ванкоміцин, Oкарбамоїл-D-серин, алафосфін і галоаланіни. Виявлено, що деякі мутанти Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і Streptococcus thermophilus, які виявляють стійкість відносно D-циклосерину, забезпечують збільшену текстуру в процесі росту в молоці в порівнянні з батьківським штамом при збереженні інших властивостей росту батьківського штаму. 4 UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Відповідно до вищезазначених несподівано виявлених фактів, даний винахід в першому аспекті стосується способу отримання текстурувального штаму молочнокислих бактерій, причому вказаний спосіб включає: a) забезпечення материнського штаму молочнокислих бактерій; b) виділення мутанта материнського штаму, який виявляє стійкість відносно D-циклосерину і/або функціонально еквівалентного антибіотику відносно D-циклосерину; і c) вибір мутанта, якщо він виробляє кращу текстуру, що визначається по збільшенню напруження зсуву і/або по збільшенню жорсткості гелю в процесі росту в молоці, ніж материнський штам, в результаті чого отримується текстурувальний штам молочнокислих бактерій. Таким чином, перший аспект стосується способу отримання мутанта молочнокислих бактерій, який забезпечує збільшення напруження зсуву і/або жорсткості гелю в процесі росту в молоці, причому вказаний спосіб включає: a) забезпечення материнського штаму молочнокислих бактерій; b) виділення мутанта материнського штаму, який виявляє стійкість відносно D-циклосерину і/або функціонально еквівалентного антибіотику відносно D-циклосерину; і c) вибір мутанта, якщо він виробляє кращу текстуру, що визначається по збільшенню напруження зсуву і/або по збільшенню жорсткості гелю в процесі зростання в молоці, ніж материнський штам, в результаті чого отримується мутант молочнокислих бактерій, який забезпечує збільшення напруження зсуву і/або жорсткості гелю в процесі росту в молоці. Виробництво вибраним мутантом більшої текстури в порівнянні з материнськими штамами, що визначається по збільшенню напруження зсуву і/або по збільшенню жорсткості гелю, здійснюється як в повножирному, так і в низькожирному молоці. У переважному варіанті здійснення молоко являє собою коров'яче молоко. Переважно молоко являє собою повножирне коров'яче молоко. У переважному варіанті здійснення материнський штам молочнокислих бактерій являє собою молочнокислі бактерії, вибрані з групи, яку складають Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і Streptococcus thermophilus. Однак частина даного винаходу являє собою також використання інших молочнокислих бактерії, таких як бактерії видів наступних родів: лактококи (Lactococcus), стрептококи (Streptococcus), лактобацили (Lactobacillus), лейконостоки (Leuconostoc), педіококи (Pediococcus), бревібактерії (Brevibacterium), ентерококи (Enterococcus), пропіонібактерії (Propionibacterium) і біфідобактерії (Bifidobacterium). У одному переважному варіанті здійснення мутанти отримують, інкубуючи материнський штам молочнокислих бактерій в об'ємі/на поверхні середовища для вирощування, що містить Dциклосерин і/або функціонально еквівалентний антибіотик відносно D-циклосерину, і виділення мутанта материнського штаму, який не знищує D-циклосерин і/або функціонально еквівалентний антибіотик відносно D-циклосерину, або який знищується значно повільніше, ніж більшість досліджених клітин, які не мутували. Однак даний винахід передбачає інші шляхи, відомі фахівцеві в даній галузі техніки, щоб виділяти мутанти, стійкі до D-циклосерину і/або функціонально еквівалентних антибіотиків відносно D-циклосерину. Відповідно, материнський штам, що використовується в способі згідно з першим аспектом даного винаходу, являє собою штам, який не є стійким (або є менш стійким) до D-циклосерину і/або функціонально еквівалентного антибіотику відносно D-циклосерину. У одному варіанті здійснення мутант може бути спонтанним мутантом, стійким до Dциклосерину і/або функціонально еквівалентного антибіотику відносно D-циклосерину. У ще одному варіанті здійснення даного винаходу спосіб може включати стадію мутагенезу (наприклад, за допомогою хімічної обробки або впливу випромінювання, або за допомогою методів генної інженерії) материнського штаму, наприклад, до або під час стадії b. Таким чином, в одному варіанті здійснення мутант може бути отриманий за допомогою мутагенезу материнського штаму, використовуючи, наприклад, хімічну обробку або вплив випромінювання, або мутант може бути отриманий за допомогою методів генної інженерії. Терміни "текстура" або "відчуття в порожнині рота" означають хімічну і фізичну взаємодію продукту в порожнині рота. Способи визначення текстури молока включають вимірювання напруження зсуву (в'язкість) або жорсткості гелю ферментованого молока, причому вони є легко доступними і відомими в техніці, а також проілюстровані прикладами в цьому документі. Мутант вибирають на стадії с), якщо він виробляє кращу текстуру, що визначається по збільшенню напруження зсуву і/або по збільшенню жорсткості гелю, в ферментованому молоці, ніж материнський штам, при інокуляції в такій же кількості, як материнський штам, наприклад, в 4 кількості, що складає щонайменше 10 клітин на 1 мл. 5 UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 У переважному варіанті здійснення мутант виготовляє в молоці в'язкість, що вимірюється як напруження зсуву зі швидкістю 300 1/с (Па), яка складає щонайменше приблизно на 5 % вище, щонайменше приблизно на 10 % вище, щонайменше приблизно на 15 % вище, щонайменше приблизно на 20 % вище, щонайменше приблизно на 25 % вище, щонайменше приблизно на 30 % вище, щонайменше приблизно на 35 % вище, щонайменше приблизно на 40 % вище, щонайменше приблизно на 50 % вище, ніж в'язкість, що виробляється материнським штамом. У ще одному переважному варіанті здійснення мутант виробляє жорсткість гелю в молоці, яка складає щонайменше приблизно на 5 % вище, щонайменше приблизно на 10 % вище, щонайменше приблизно на 15 % вище, щонайменше приблизно на 20 % вище, щонайменше приблизно на 25 % вище, щонайменше приблизно на 30 % вище, щонайменше приблизно на 35 % вище, щонайменше приблизно на 40 % вище, щонайменше приблизно на 50 % вище, ніж жорсткість гелю, що виробляється материнським штамом. Переважно мутант виробляє в'язкість в повножирному коров'ячому молоці з додаванням 2 % сухого знежиреного молока, яка складає більше ніж приблизно 105 Па при вимірюванні як напруження зсуву зі швидкістю 300 1/с (Па) після 12 годин росту в молоці при 37C з інокуляцією 4 в кількості, що складає щонайменше 10 клітин на 1 мл молока у випадку штамів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), і більше ніж приблизно 75 Па, що вимірюється як напруження зсуву зі швидкістю 300 1/с (Па) після 12 годин росту в молоці при 37C з інокуляцією в кількості, 4 що складає щонайменше 10 клітин на 1 мл молока у випадку штамів Streptococcus thermophilus). У переважному варіанті здійснення мутант виробляє жорсткість гелю в повножирному коров'ячому молоці з додаванням 2 % сухого знежиреного молока, яка складає більше ніж приблизно 80 Па після 12 годин росту в молоці при 37C з інокуляцією в кількості, що складає 4 щонайменше 10 клітин на 1 мл молока у випадку штамів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), і більше ніж приблизно 140 Па після 12 годин росту в молоці при 37C з інокуляцією 4 в кількості, що складає щонайменше 10 клітин на 1 мл молока у випадку штамів Streptococcus thermophilus. У другому аспекті даний винахід стосується штаму молочнокислих бактерій, що отримується способом згідно з першим аспектом даного винаходу. У переважному варіанті здійснення штам молочнокислих бактерій являє собою штам, вибраний з групи, яку складають Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і Streptococcus thermophilus. У ще одному переважному варіанті здійснення штам молочнокислих бактерій виробляє в'язкість в повножирному коров'ячому молоці з додаванням 2 % сухого знежиреного молока, яка складає більше ніж приблизно 105 Па при вимірюванні як напруження зсуву зі швидкістю 300 1/с 4 (Па) після 12 годин росту в молоці при 37C з інокуляцією в кількості, що становить 10 клітин на 1 мл молока у випадку штамів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), і більше ніж приблизно 75 Па при вимірюванні як напруження зсуву зі швидкістю 300 1/с (Па) після 12 годин 4 росту в молоці при 37C з інокуляцією в кількості, що складає щонайменше 10 клітин на 1 мл молока у випадку штамів Streptococcus thermophilus. Переважно, штам молочнокислих бактерій виробляє жорсткість гелю в повножирному коров'ячому молоці з додаванням 2 % сухого знежиреного молока, яка складає більше ніж приблизно 80 Па після 12 годин росту в молоці при 37C з інокуляцією в кількості, що складає 4 щонайменше 10 клітин на 1 мл молока у випадку штамів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), і більше ніж приблизно 140 Па після 12 годин росту в молоці при 37C з інокуляцією 4 в кількості, що складає щонайменше 10 клітин на 1 мл молока у випадку штамів Streptococcus thermophilus. У третьому аспекті даний винахід стосується штаму молочнокислих бактерій, що належить до виду Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), вибраного з групи, яку складають: штам CHCC12944, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24019, штам CHCC12945, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24020, і мутанти і варіанти будь-якого з перерахованих вище штамів. Мутанти і варіанти виявляють характеристики напруження зсуву і/або жорсткості гелю депонованих штамів, з яких вони були зроблені. У четвертому аспекті даний винахід стосується штаму молочнокислих бактерій, що належить до виду Streptococcus thermophilus, вибраного з групи, яку складають: штам CHCC13235, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24010, штам CHCC13236, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24011, і мутанти і варіанти будь-якого з 6 UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 перерахованих вище штамів. Мутанти і варіанти виявляють характеристики напруження зсуву і/або жорсткості гелю депонованих штамів, з яких вони були зроблені. У п'ятому аспекті даний винахід стосується штаму молочнокислих бактерій, що належить до виду Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), стійкого відносно D-циклосерину і/або функціонально еквівалентного антибіотику і що має однакові або поліпшені характеристики напруження зсуву і/або жорсткості гелю в порівнянні зі штамом CHCC12944, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24019, або штамом CHCC12945, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24020. У шостому аспекті даний винахід стосується штаму молочнокислих бактерій, що належить до виду Streptococcus thermophilus, стійкого відносно D-циклосерину і/або функціонально еквівалентного антибіотику і що має однакові або поліпшені характеристики напруження зсуву і/або жорсткості гелю в порівнянні зі штамом CHCC13235, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24010 або штам CHCC13236, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24011. У сьомому аспекті даний винахід стосується композиції, що включає штам молочнокислих бактерій згідно з аспектами 2-6 даного винаходу. У одному варіанті здійснення даного винаходу композиція включає, у вигляді суміші або компонентів комплекту: i) штам, що належить до виду Streptococcus thermophilus згідно з другим, четвертим або шостим аспектом даного винаходу; і ii) штам, що належить до виду Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) згідно з другим, третім або п'ятим аспектом даного винаходу. 9 У одному варіанті здійснення композиція переважно містить щонайменше 10 КУО (колонієутворювальних одиниць) штаму, що належить до виду Lactobacillus delbrueckii (підвид 10 bulgaricus); і щонайменше 10 КУО штаму, що належить до виду Streptococcus thermophilus. У 11 ще одному варіанті здійснення композиція містить щонайменше 10 КУО штаму, що належить 12 до виду Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus); і щонайменше 10 КУО штаму, що належить до виду Streptococcus thermophilus. У одному переважному варіанті здійснення композицію можна переважно використовувати як ініціюючу культуру, і вона знаходиться в замороженій, ліофілізованій або рідкій формі. У восьмому аспекті даний винахід стосується способу виробництва молочного продукту, такого як ферментований молочний продукт, що включає ферментацію молочного субстрату штамом молочнокислих бактерій згідно з будь-яким з аспектів 2-6 даного винаходу або композицією згідно з сьомим аспектом даного винаходу, і в результаті цього отримується молочний продукт. У результаті молочний продукт, виготовлений даним способом, містить штам молочнокислих бактерій згідно з будь-якимз аспектів 2-6 даного винаходу або штами молочнокислих бактерій композиції згідно з сьомим аспектом даного винаходу, відповідно. Згідно з даним способом, молочний субстрат можна ферментувати, використовуючи штам згідно з даним винаходом, такий як штам, що належить до виду Streptococcus thermophilus до, під час, або після ферментації штамом згідно з даним винаходом, таким як штам, що належить до виду Lactobacillus. Крім того, даний спосіб може включати, до, під час і/або після ферментації, введення в молочний субстрат ферменту, такого як фермент, вибраний з групи, яку складають: фермент, здатний зшивати білки, трансглютаміназа, аспарагінова протеаза, хімозин і ренін. У дев'ятому аспекті даний винахід стосується молочного продукту, такого як ферментований молочний продукт (наприклад, йогурт або пахта) або сир (наприклад, свіжий сир сорту pasta filata), що отримується способом згідно з восьмим аспектом даного винаходу. Молочний продукт містить молочнокислі бактерії. Молочний продукт може необов'язково містити інгредієнт, вибраний з групи, яку складають: фруктовий концентрат, сироп, пробіотична бактеріальна культура, фарбувальна речовина, загущувальна речовина, ароматизатор і консервант; і/або його форма необов'язково являє собою продукт типу суміші, продукт типу набору або питний продукт. У десятому аспекті даний винахід стосується молочного продукту, що містить штам молочнокислих бактерій згідно з будь-яким з аспектів 2-6 даного винаходу. У одинадцятому аспекті даний винахід стосується використання штаму молочнокислих бактерій згідно з будь-яким з аспектів 2-6 для виробництва ферментованого молочного продукту. 7 UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 Далі даний винахід проілюстрований наступними необмежувальними прикладами. ПРИКЛАДИ Приклад 1. Використання D-циклосерину для виділення мутантів Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) з поліпшеними реологічними властивостями. Матеріали і методи Штами Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC13995 Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC12944 (стійкий відносно D-циклосерину мутант CHCC13995) Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC12945 (стійкий відносно D-циклосерину мутант CHCC13995) Виділення мутантів Щоб виділити мутанти штаму Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC13995, клітини, отримані при зростанні єдиної колонії, інокулювали в бульйоні MRS, що містить від 50 до 100 мкг/мл D-циклосерину, і вирощували до насичення. Клітки розбавляли і висівали на чашки MRS, і колонії перевіряли в мікролітрових ямках відносно здатності росту в присутності D-циклосерину в інтервалі від 50 до 100 мкг/мл. Як правило, 25 % отриманих в результаті колоній виявляли швидкий ріст в присутності D-циклосерину. Їх вибирали для подальшого дослідження. Вибрані стійких відносно D-циклосерину мутантів додатково очищали і досліджували відносно здатності росту в молоці. Під час даного дослідження спостерігали, що деякі отримані мутанти в даних умовах проводили значно кращу текстуру, ніж батьківський штам. Реологія Реологічний аналіз здійснювали, використовуючи реометр StressTech від фірми ReoLogica Instruments AB (Швеція), після зростання в повножирному коров'ячому молоці з додаванням 2 % сухого знежиреного молока. Результати Два похідні мутанти CHCC13995, позначені CHCC12944 і CHCC12945, проводили значно кращу текстуру, яку відрізняли підвищене напруження зсуву (в'язкість), а також жорсткість гелю, ніж материнський штам. Це було зовсім очевидно при простому перемішуванні ферментованого молока піпеткою. Крім того, спостерігали, що кількість молочної сироватки розрізнялася для різних мутантів, і воно стало одним з параметрів, використаних для вибору мутантів для подальшого дослідження (див. приведену нижче таблицю 1). Вибрані мутанти являли собою ті, які демонстрували низький рівень синерезису: мутант 1 і мутант 11 в представленому нижче прикладі (таблиця 1) являють собою мутанти CHCC12944 і CHCC12945, відповідно. Таблиця 1 Мутант 1 і мутант 11 були вибрані з числа 20 мутантів внаслідок малого об'єму молочної сироватки, що виробляється ними. Пусті графи стосуються мутантів, які не згущували молоко. Два мутанти являють собою CHCC12945 і CHCC12944, відповідно Мутант 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 2 0 мл 4 16 - 17 8 8 10,5 22 - 16 7 5 15 32 11 16 20 Об'єм (мл) молочної сироватки після зростання протягом 24 годин в 100 мл молока категорії В при 43C. Фактичні реологічні дослідження підтверджують спостереження поліпшення консистенції (таблиця 2 і фіг. 2 і 3). Підвищення жорсткості гелю у випадку мутантів CHCC12945 і CHCC12944 складає від 52 % до 59 %. Напруження зсуву також підвищується, але не в такій великій мірі, як жорсткість гелю (таблиця 2 і фіг. 2 і 3). 40 Таблиця 2 Зразок СНСС13995 СНСС12945 СНСС12944 Напруження зсуву при 300 1/с (Па) 99 108,5 108 Жорсткість гелю при 1 Гц (Па) 58,55 93,20 89,05 Поліпшення реологічних властивостей являє собою тільки одну перевагу, але мутанти стають менш привабливими, якщо гіршають інші важливі властивості, такі як скисання. Профіль 8 UA 113279 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 скисання при зростанні в повножирному коров'ячому молоці з додаванням 2 % сухого знежиреного молока при 43 °C є однаковим для вибраних мутантів і для відповідного материнського штаму (фіг. 1). Висновок Стійкі відносно D-циклосерину мутанти Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), описані в цьому документі, можна включати в культуру, таку як ініціююча культура, яка виробляє бажаний високий рівень текстури. Приклад 2. Використання D-циклосерину для виділення мутантів Streoptococcus thermophilus з поліпшеними реологічними властивостями. Матеріали і методи Штами Streptococcus thermophilus CHCC13994 Streptococcus thermophilus CHCC13236 (стійкий відносно D-циклосерину мутант CHCC13994) Streptococcus thermophilus CHCC13235 (стійкий відносно D-циклосерину мутант CHCC13994) Виділення мутантів Для виділення мутантів Streptococcus thermophilus CHCC13994 клітини, отримані при зростанні єдиної колонії, інокулювали в бульйоні M17 з додаванням 2 % лактози, що містить від 50 до 70 мкг/мл D-циклосерину і вирощували до насичення. Клітки розбавляли і висівали на чашки M17 з додаванням 2 % лактози, і колонії збирали і перевіряли в мікролітрових ямках відносно здатності росту в присутності D-циклосерину в інтервалі від 50 до 70 мкг/мл Dциклосерину. Як правило, 25 % отриманих в результаті колоній виявляли швидкий ріст в присутності D-циклосерину. Їх вибирали для подальшого дослідження. Вибрані стійких відносно D-циклосерину мутантів додатково очищали і досліджували відносно здатності зростання в молоці. Під час даного дослідження спостерігали, чи виробляли деякі з мутантів в даних умовах значно кращу текстуру, ніж батьківський штам виробляли. Кількість молочної сироватки також являла собою міру, що показує високу або низьку жорсткість гелю. Реологія Реологічний аналіз здійснювали, використовуючи реометр StressTech від фірми ReoLogica Instruments AB (Швеція), після зростання в повножирному коров'ячому молоці з додаванням 2 % сухого знежиреного молока. Результати Два похідні мутанти CHCC13994, позначені CHCC13235 і CHCC13236, виробляли кращу текстуру, ніж материнський штам. Це було зовсім очевидно при простому перемішуванні ферментованого молока піпеткою. Крім того, спостерігали, що кількість молочної сироватки розрізнялася для різних мутантів, і вона стала одним з параметрів, що використовуються для вибору мутантів для подальшого дослідження (див. приведену нижче таблицю 3). Вибрані мутанти являли собою ті, які демонстрували низький рівень синерезису: мутант 9 і мутант 13 в таблиці 3 демонстрували низький рівень синерезису. Цими мутантами є CHCC13236 і CHCC13235, відповідно. Таблиця 3 Два мутанти (9 і 13) вибрані з числа 20 мутантів Мутант 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 мл 12 20 10 5,5 7 10 7,5 12 7 22 6,5 6,5 7 7,5 6 10 10 5 6 Об'єм (мл) молочної сироватки після зростання протягом 24 годин в 50 мл молока категорії В при 37C. 45 Фактичні реологічні дослідження підтверджують спостереження поліпшення консистенції (фіг. 4 і фіг. 5). Мутант CHCC13236 показав збільшення напруження зсуву на 15 % і збільшення жорсткості гелю на 19 %, в той час як мутант CHCC13235 показав тільки збільшення жорсткості гелю на 23 % (таблиця 4). 9 UA 113279 C2 Таблиця 4 Зразок СНСС13994 СНСС13236 СНСС13235 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Напруження зсуву при 300 1/с (Па) 69,6 79,7 64,9 Жорсткість гелю при 1 Гц (Па) 136,6 162,5 167,3 Що стосується скисання, профіль є однаковим для вибраних мутантів і для відповідного материнського штаму (дані не представлені). Висновок Стійкі відносно D-циклосерину мутанти Streptococcus thermophilus, описані в цьому документі, можна включати в культуру, таку як ініціююча культура, яка виробляє бажаний високий рівень текстури. Приклад 3. Використання стійких відносно D-циклосерину мутантів Streptococcus thermophilus і Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) для приготування ферментованого молочного продукту. Йогурт виготовляли, використовуючи поєднання бактерій видів Streptococcus thermophilus і Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), змішаних в співвідношенні 9:1, які інокулювали в повножирне коров'яче молоко з додаванням 2 % сухого знежиреного молока. Перше поєднання містило батьківські штами CHCC13994 і CHCC13995; друге поєднання містило стійкий відносно D-циклосерину мутант Streptococcus thermophilus CHCC13236 і стійкий відносно D-циклосерину мутант Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC12945, і третє поєднання містило стійкий відносно D-циклосерину мутант Streptococcus thermophilus CHCC13235 і відносно Dциклосерину мутант Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC12945. Порівняння профілів скисання для даних трьох поєднань показало, що поєднання, в яких містилися два мутанти, мали трохи вище значення pH, ніж поєднання батьківських штамів (дані не представлені). Перемішування ложкою продемонструвало, що продукти, виготовлені з використанням стійких відносно D-циклосерину мутантів, виявляли значно вищий опір перемішуванню в порівнянні з продуктом, виготовленим за допомогою батьківських штамів. Крім того, виявилося, що отриманий в результаті йогурт мав більш густу, що нагадує вершки, текстуру і більш свіжий смак згідно з оцінками трьох експертів. ДЕПОНУВАННЯ І ЕКСПЕРТНЕ РІШЕННЯ Штами Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) CHCC12944, CHCC12945 і CHCC13995 депоновані в ТОВ "Німецька колекція мікроорганізмів і культур" (DSMZ GmbH, Німеччина, D38124, Брауншвейг, Інхоффенштрассе, 7B) під реєстраційними номерами DSM 24019, DSM 24020 і DSM 24021, відповідно, 22 вересня 2010 р. Штами Streptococcus thermophilus CHCC13235, CHCC13236, і CHCC13994 депоновані в ТОВ "Німецька колекція мікроорганізмів і культур" (DSMZ GmbH, Німеччина, D-38124, Брауншвейг, Інхоффенштрассе, 7B) під реєстраційними номерами DSM 24010, DSM 24011 і DSM 24012, відповідно, 22 вересня 2010 р. Депонування здійснено згідно з умовами Будапештської угоди про міжнародне визнання депонування мікроорганізмів для цілей процедури видачі патентів. Заявник просить надавати зразок депонованих мікроорганізмів тільки експерту, затвердженому заявником. СПИСОК ЛІТЕРАТУРИ: Tytgat і інш., Curr. Med. Chem., 2009 р., т. 16, № 20, з. 2566-2580. Caceres і інш., J. Bacteriol., 1997 р., т. 179, з. 5046-5055. Holtje, Desk Encyclopedia of Microbiology (Настільна енциклопедія мікробіології), 2004 р., с. 239-258. Вся література, процитована в цьому патентному документі, включається в нього у всій своїй повноті за допомогою відповідного посилання. 50 10 UA 113279 C2 ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1. Спосіб одержання текстурувального штаму молочнокислих бактерій, причому вказаний спосіб включає: a) забезпечення материнського штаму молочнокислих бактерій; b) виділення мутанта вказаного материнського штаму, який виявляє стійкість відносно Dциклосерину і/або антибіотика, який має такий самий механізм дії або таку саму мішень, як Dциклосерин, і інгібує D-аланін-рацемазу, D-аланіл-D-аланінлігазу, D-аланілаланінсинтазу або Dаланінпермеазу; і c) вибір вказаного мутанта, якщо він виробляє кращу текстуру, що визначається по збільшенню напруження зсуву і/або по збільшенню міцності гелю в процесі росту в молоці, ніж материнський штам. 2. Спосіб за п. 1, в якому вказаний мутант вибирають на стадії с), якщо він виробляє напруження зсуву, яке складає щонайменше приблизно на 5 % більше, ніж напруження зсуву, що виробляється материнським штамом. 3. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому вказаний мутант вибирають на стадії с) якщо він виробляє міцність гелю, яка складає щонайменше приблизно на 5 % більше, ніж міцність гелю, що виробляється материнським штамом. 4. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому стадія b) включає інкубацію вказаного материнського штаму молочнокислих бактерій в об'ємі/на поверхні середовища для вирощування, що містить D-циклосерин і/або антибіотик, який має такий самий механізм дії або таку саму мішень, як D-циклосерин, і інгібує D-аланін-рацемазу, D-аланіл-D-аланінлігазу, Dаланілаланінсинтазу або D-аланінпермеазу; і виділення мутанта вказаного материнського штаму, який не знищується D-циклосерином і/або антибіотиком, який має такий самий механізм дії або таку саму мішень, як D-циклосерин, і інгібує D-аланін-рацемазу, D-аланіл-D-аланінлігазу, D-аланілаланінсинтазу або D-аланінпермеазу. 5. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому мутант є спонтанним мутантом. 6. Спосіб за будь-яким з пп. 1-4, який додатково включає мутагенез вказаного материнського штаму до або під час стадії b). 7. Спосіб за будь-яким з попередніх пунктів, в якому вказаний материнський штам молочнокислих бактерії являє собою штам, вибраний з групи, яку складають Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) і Streptococcus thermophilus. 8. Штам молочнокислих бактерій для виробництва молочного продукту, що належить до виду Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus), вибраний з групи, яку складають штам СНСС12944, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24019, штам СНСС12945, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24020. 9. Штам молочнокислих бактерій для виробництва молочного продукту, що належить до виду Streptococcus thermophilus, вибраний з групи, яку складають штам СНСС13235, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24010, штам СНСС13236, який депонований в Німецькій колекції мікроорганізмів і культур під реєстраційним номером DSM 24011. 10. Композиція, яка містить штам молочнокислих бактерій за будь-яким з пп. 8-9. 11. Композиція за п. 10, яка містить у вигляді суміші або компонентів набору: і) штам, що належить до виду Streptococcus thermophilus за п. 9; і іі) штам, що належить до виду Lactobacillus delbrueckii (підвид bulgaricus) за п. 8. 12. Композиція за будь-яким з пп. 10-11, яку можна використовувати як стартову культуру і яка знаходиться в замороженій, ліофілізованій або рідкій формі. 13. Спосіб виробництва молочного продукту, який отримують з використанням штаму за будьяким з пп. 8 або 9, що включає ферментацію молочного субстрату штамом молочнокислих бактерій за будь-яким з пп. 8-9 або композицією за будь-яким з пп. 10-12. 14. Молочний продукт, який отримують з використанням штаму за будь-яким з пп. 8 або 9, що включає штам молочнокислих бактерій за будь-яким з пп. 8-9. 15. Застосування штаму молочнокислих бактерій за будь-яким з пп. 8-9 для виробництва молочного продукту. 16. Застосування штаму молочнокислих бактерій, який одержують способом за п. 1, для збільшення текстури молочного продукту. 11 UA 113279 C2 12 UA 113279 C2 13 UA 113279 C2 Комп’ютерна верстка О. Гергіль Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 14