Спосіб отримання ферментного препарату із рослинної сировини

1. Спосіб отримання ферментного препарату з рослинної сировини, що включає обробку біомаси рослинної сировини в рідкому середовищі на основі каталітичного процесу, відділення твердого залишку з наступним концентруванням препарату з рідкого середовища, який відрізняється тим, що формують білково-вуглеводне рідке середовище і здійснюють безперервний каталіз біомаси в рідкому середовищі в присутності індукторів у вигляді щонайменше одного мікроорганізму, супернатанта його культури, його метаболіту, продукту мікробного походження або їхньої комбінації. U 2 (19) 1 3 руйнування структури рослинних компонентів. Крім того, рідке середовище, у якому виділяють ферментний препарат, є винятково рідка маса самої рослини, а її готування ведуть на основі винятково аутокаталітичного процесу, шляхом зброження біомаси з рослинної сировини без присутності індукторів, що обмежує ферментну активність препарату і його комплексний вплив на організм внаслідок обмеження структури ферментного препарату, оскільки ферменти, що складаються з одного поліпептидного ланцюга, мають один активний центр. В основу даної корисної моделі покладена задача шляхом використання інтегральної взаємодії збагаченого рідкого культурального середовища, складу рослинної сировини і властивостей окремих його компонентів, а також розробки параметрів процесу його одержання створити новий спосіб отримання комплексного ферментного кисломолочного препарату з пектолітичною активністю з рослинної сировини для підвищення резистентності організму людини і тварини. Технічним результатом даної корисної моделі є комбінування переваг рідкого культурального середовища, збагаченого індукторами у вигляді щонайменше одного мікроорганізму, супернатанта його культури, його метаболіту, продукту мікробного походження або їхньої комбінації, зокрема у вигляді молочно-кислих бактерій, з потенціалом рослинних пептидів, у результаті чого створюють новий ферментний препарат з могутнім синергетичним впливом на організм людини або тварини, здатний істотно підвищити його резистентність, що може застосовуватися в лікувально-профілактичній практиці у випадках, якщо захворювання обумовлені порушеннями на рівні клітин організму через зменшення вироблення ферментів, фосфоліпідів, вітамінів і інших біологічно активних речовин самим організмом. Препарат далі може використовуватися у фармацевтичній або дієтичній харчовій промисловості. Поставлена задача вирішується тим, що, у способі отримання ферментного препарату з рослинної сировини, що включає обробку біомаси рослинної сировини в рідкому середовищі на основі каталітичного процесу, відділення твердого залишку з наступним концентруванням препарату з рідкого середовища, формують відмінне від прототипу білково-вуглеводне рідке середовище і здійснюють безперервний каталіз біомаси в підготовленому рідкому середовищі в присутності індукторів у вигляді щонайменше одного мікроорганізму, супернатанта його культури, його метаболіту, продукту мікробного походження або їхньої комбінації. При цьому каталіз біомаси в рідкому середовищі здійснюють при температурі не вище 80°C, рН3-6 протягом не менш 2-х тижнів. Білково-вуглеводне рідке середовище формують як у присутності молочно-кислих бактерій, що належать до групи Lactobacillus, або групи Bifidobacterium, або групи Lactococcus, або їхньої довільної комбінації, так і в присутності 28104 4 L.Bulgaricus, у присутності щонайменше одного пробіотика з бацил, причому молочнокислі бактерії переважно вибирають із групи Lacidophilis, L.johnsonii, L.gasseri, L.casei, L.paracasei або L.reuteri, як людського, так і тваринного походження. Як рослинну сировину у способі використовують свіжі або висушені частини рослин, сік рослин, концентрат соку рослин або їхню довільну комбінацію. Оскільки структуруючим елементом клітинної стінки рослин є пектин, а пектолітичні ферменти також природно присутні в рослинах, то в процесі каталізу біомаси в сформованому рідкому середовищі в присутності індукторів у ній наявні і пектолітичні ферменти і їхній субстрат (пектин). Під дією каталітичного процесу, що здійснюється при температурі не вище 80°С, рН3-6, протягом не менш 2 тижнів, відбувається перетворення колоїдної структури, що формують білки, ферменти і полісахариди рослини, у поліпептид, що будучи збагачений амінокислотними складовими індукованого мікроорганізмами білково-вуглеводного рідкого середовища, формує складний фермент, виділення якого дає можливість одержати комплексний ферментний препарат. Молочно-кислі бактерії, використовувані в цій корисній моделі, переважно належать до групи Lactobacillus, або групі Bifidobacterium, або групі Lactococcus, і переважно, їх вибирають із групи Lacidophilis, L.johnsonii, L.gasseri, L.casei, L.paracasei або L.reuteri, як людського, так і тваринного походження. Крім того, процес отримання препарату включає культивування мікроорганізмів (не менш 2 тижнів при температурі не вище 80°С), відділення культуральної рідини від біомаси рослинної сировини, виділення ферменту з культуральної рідини. Відповідно до даної корисної моделі пептид, виділений з рослинної сировини в процесі каталізу, входить складовою частиною в структуру поліпептиду, синтезованого в рідкому середовищі в присутності молочнокислих бактерій, причому такий поліпептид може бути як ендогенним, так і екзогенним стосовно бактерії. Природа поліпептиду не має вирішального значення за умови, що пептид, виділений з рослинної сировини, залишається доступним для імунної й іншої систем організму. Як джерела пептидів, виділених з рослинної сировини, використовують переважно чистотіл (Chelidonium majus L.), шкірку банана, подорожник великий, зелені плоди каштана, зелені плоди горіха і т.п. Амінокислотна послідовність необов'язково цілком відповідає послідовності природного білка, однак будь-яка пептидна послідовність, що має подібну амінокислотну послідовність і можливо тривимірну структуру, що і вихідний пептид або отриманий на його основі поліпептид, забезпечує ті ж результати, тобто індукує підвищення резистентності організму, впливаючи на імунну систему, стимулюючи клітки мононуклеарної 5 фагоцитуючої системи, впливаючи на інші обмінні процеси в організмі, що відбуваються на клітинному рівні. Спосіб отримання комплексного ферментного препарату з рослинної сировини, що заявляється, включає готування білково-вуглеводного рідкого середовища шляхом уведення біомаси рослини в рідке середовище, формоване в присутності індукторів у виді щонайменше одного мікроорганізму, супернатанта його культури, його метаболіту, продукту мікробного походження або їхньої комбінації, обробку біомаси рослинної сировини в рідкому середовищі на основі каталітичного процесу, відділення твердого залишку з наступним концентруванням препарату. Білково-вуглеводне рідке середовище формують як у присутності молочно-кислих бактерій, що належать до групи Lactobacillus, або групи Bifidobacterium, або групи Lactococcus, або їхньої довільної комбінації, так і в присутності L.Bulgaricus, у присутності щонайменше одного пробіотика з бацил, причому молочно-кислі бактерії переважно вибирають із групи Lacidophilis, L.johnsonii, L.gasseri, L.casei, L.paracasei або L.reuteri, як людського, так і тваринного походження. У способі в якості рослинної сировини використовують свіжі або висушені частини рослин, сік рослин, концентрат соку рослин або їхню довільну комбінацію. Знайдені експериментальним шляхом оптимальні умови виділення комплексного ферментного препарату з рослинної сировини відповідають оптимальним умовам дії пектолітичних ферментів і ферментів, що продукуються у білково-вуглеводному середовищі молочно-кислими бактеріями і їх похідними: температура не вище 80°С, рН3-6, термін не менш 2 тижнів. Спосіб здійснюється таким чином. Попередньо готують білково-вуглеводне рідке середовище. Для цього беруть молочну сироватку, або водний розчин сироватки, або водний розчин сметани, або формують інше білково-вуглеводне рідке середовище, вносячи в нього щонайменше один з індукторів у вигляді щонайменше одного мікроорганізму, супернатанта його культури, його метаболіту, продукту мікробного походження або їхньої комбінації. Для цієї мети використовують переважно як молочно-кислі бактерії, що належать до групи Lactobacillus, або групи Bifidobacterium, або групи Lactococcus, або їхня довільна комбінація, так і L.Bulgaricus, щонайменше один пробіотик з бацил, причому молочно-кислі бактерії переважно вибирають із групи Lacidophilis, L.johnsonii, L.gasseri, L.casei, L.paracasei або L.reuteri, як людського, так і тваринного походження. Потім беруть вимиту свіжу або висушену рослинну сировину, і занурюють у підготовлене рідке середовище. Можна використовувати також сік рослин, концентрат соку рослин. Можна використовувати їхню довільну комбінацію. Для кращого зброджування можна додати цукор або цукрозамінник. 28104 6 Після внесення складових компонентів здійснюють безперервний каталіз отриманої біомаси з рН3-6 протягом не менш 2-х тижнів, для цього суміш залишають у теплому місці при температурі не вище 50-80°С для сквашування протягом 4-6 годин, після чого переносять у темне місце. Потім відокремлюють твердий залишок від культуральної рідини. Виділення ферменту можна робити шляхом осадження ферменту з культуральної рідини (при цьому витрата органічного розчинника може бути 4:1 до обсягу культуральної рідини або витрата, наприклад, сульфату амонію до 700кг на одну тонну культуральної рідини) або можна здійснювати концентрування препарату з рідкого середовища відомими методами, наприклад, вакуумконденсаційним сушінням при 60°С до сухого залишку 20%-40% вологості. Маса, що утворилася, містить комплексний ферментний препарат, виділений з рослинної сировини в присутності індукторів. Пропонований спосіб виділення ферментного препарату з рослинної сировини дозволяє одержувати активні комплексні ферментні препарати за технологією, що може бути реалізована на існуючому устаткуванні. Застосування отриманих препаратів у промисловості можна здійснювати відповідно до виявлених ними активностями ферментів, наприклад, з метою отримання продуктів лікувально-профілактичного призначення, а також з розширеним діапазоном лікувальнопрофілактичної дії, для масового харчування, для дієтичного харчування й ін. Отримані комплексні ферментні препарати можна застосовувати перорально або нозально. Зовнішнє застосування препарату показало також позитивні результати. Застосування отриманого заявленим способом ферментного препарату в лікувальнопрофілактичних цілях є ефективним способом профілактики дисбіозів, що протікають без якихнебудь клінічних симптомів і не потребують лікувань, а також способом зменшення або попередження запальних процесів, зв'язаних з бактеріально опосередкованим захворюванням або LTA/LPS-опосередкованими порушеннями в шлунково-кишковому тракті, легенях, слизових оболонках очей, вух і порожнини рота в людини або у тварин. При застосуванні отриманого ферментного препарату на основі щонайменше однієї молочнокислої бактерії, супернатанта її культури, її метаболіту, продукту мікробного походження спостерігався стимулюючий його вплив на активність клітин перитонеального екссудату. При усмоктуванні продукту в кишечнику відзначена активація перитонеальных макрофагів, стимулювання клітин мононуклеарної фагоцитуючої системи. Крім того, отриманий комплексний ферментний препарат підвищує резистентність організму людини або тварини, зокрема шляхом модулювання імунної системи в результаті 7 продукування цитокинів, що беруть участь у регуляції імунної системи. Ферментний препарат не запускає продукцію таких протизапальних цитокинів, як IL-8, TNF-a, MCP-1 і GM-CSF, а замість цього промотирує продукцію цитокинів, що придушують запалення, наприклад TGF-p, утягуючи їх у важливі процеси, що стосуються підтримки кишкового імунного гомеостазу і цілісності епітеліального бар'єра. Нездатність людського Ig у комплексі з антигенами активувати комплемент, має важливе значення в підтримці цілісності поверхонь слизової. У результаті запобігаються локальні запальні реакції, що включають приплив лейкоцитів і виділення імунологічних ефекторів, що підсилюють проникність мембран слизових за рахунок ушкодження тканин. Крім цього, у результаті реалізації механізму імунної ексклюзії Ig здатний обмежувати додаткову абсорбцію антигенів-свідків і тим самим припиняти анафілактичні реакції, під дією антитіл Ig і Ig ізотипів. Ферментний препарат потенціює також продукцію IFN-гама під впливом Т-клітин. Підвищенню резистентності організму сприяє також лікувально-профілактичний вплив отриманих ферментних препаратів на умовнопатогенні мікроорганізми. Вплив виділених заявленим способом ферментів на умовно-патогенні мікроорганізми проаналізовано з урахуванням наявності в їхній основі індукторів у вигляді бактерій групи Bifidobacterium. Виявлено, що ферменти, виділені в їх присутності, в основному придушують ріст гемолізинпродукуючих кишкових паличок і коагулазопозитивних стафілококів, а ферменти, в основі яких відсутні ці бактерії, придушують ріст грибів роду Candida і протея. Пероральне введення пробіотиків з бацил істотно впливає на протікання інфекційного процесу поза шлунково-кишковим трактом, що підвищує резистентність організму людини і тварини. 28104 8